侖伐替尼聯(lián)合氟伐他汀對(duì)小鼠肝癌移植瘤的抑制作用及其機(jī)制

雷 藝，程 旸，林鑫盛，孫朋輝，康 帥，李 成，李建聰，朱 云

(1.南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院感染內(nèi)科肝臟腫瘤中心，廣東 廣州 510515；2.廣州醫(yī)科大學(xué)附屬?gòu)V州市婦女兒童醫(yī)療中心消化科，廣東 廣州 510623；3.南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院PET中心，廣東 廣州 510515)

肝細(xì)胞癌是一種常見(jiàn)的消化系統(tǒng)腫瘤，是全球第4大癌種。我國(guó)是世界上肝癌發(fā)病率最高的國(guó)家。2020年中國(guó)肝癌新發(fā)病例占全球0.45，死亡人數(shù)占全球0.47，位于世界前列[1]。原發(fā)性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)起病隱匿，大部分肝癌患者診斷時(shí)即為中晚期。侖伐替尼是晚期肝癌的一線(xiàn)靶向治療藥物，作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體-1、-2 和 -3(vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR)、成纖維生長(zhǎng)因子受體-1、-2、-3 和 -4(fibroblast growth factor receptor,FGFR)、血小板衍生生長(zhǎng)因子受體 α(platelet-derived growth factor receptor α,PDGFR α)、RET和 KIT，通過(guò)抑制腫瘤細(xì)胞增殖和腫瘤血管生成發(fā)揮抗腫瘤作用[2]。然而，侖伐替尼對(duì)肝癌患者生存期的延長(zhǎng)仍有限，并可導(dǎo)致多種不良反應(yīng)，包括蛋白尿、皮膚、消化系統(tǒng)和心血管毒性。這些不良反應(yīng)導(dǎo)致臨床上部分患者減量或停用。而且，對(duì)侖伐替尼的耐藥性導(dǎo)致HCC進(jìn)展，并已成為改善HCC患者預(yù)后的主要障礙[3]。因此，有必要尋找能與侖伐替尼發(fā)揮協(xié)同治療作用的藥物。

氟伐他汀作為他汀類(lèi)藥物，是臨床常用的降血脂藥物。近期研究發(fā)現(xiàn)，他汀類(lèi)藥物除了具有降低膽固醇的作用外，還可降低淋巴瘤、膠質(zhì)瘤、胰腺癌等細(xì)胞的侵襲能力。他汀類(lèi)藥物也被認(rèn)為具有治療肝癌的潛力[4]。

然而，侖伐替尼聯(lián)合氟伐他汀對(duì)肝癌的治療作用目前未有研究報(bào)道。本研究擬探究侖伐替尼和氟伐他汀在小鼠肝癌皮下瘤模型中是否具有協(xié)同抗腫瘤作用，并進(jìn)一步對(duì)效應(yīng)背后的分子通路進(jìn)行探討。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和實(shí)驗(yàn)材料BALBc-nu裸小鼠由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供；HepG2肝癌細(xì)胞由中國(guó)科學(xué)院上海研究所提供；侖伐替尼購(gòu)于Selleck Chemicals公司(貨號(hào)s1164)；氟伐他汀購(gòu)于美國(guó)Sigma公司(貨號(hào)SML0038)；增殖細(xì)胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)抗體(貨號(hào)ab92552)、Toll樣受體4 ( Toll like receptor 4，TLR4)抗體(貨號(hào)ab22048)購(gòu)于Abcam公司；免疫組化試劑盒購(gòu)于CST公司(貨號(hào)13079)；TUNEL試劑盒購(gòu)于默克公司(貨號(hào)s7101)。

1.2 裸鼠皮下肝移植瘤模型構(gòu)建4～6周齡裸小鼠，雌性，體質(zhì)量(18～22) g，SPF級(jí)條件下飼養(yǎng)。將小鼠隨機(jī)分成空白對(duì)照組(NC組)、氟伐他汀組(FLU組)、侖伐替尼組(LEN組)、侖伐替尼聯(lián)合氟伐他汀組(LEN+FLU組)，每組5只小鼠。小鼠腋窩皮下注射HepG2細(xì)胞懸液(1×105/只)。FLU組小鼠以氟伐他汀溶液灌胃(20 mg·kg-1·d-1)；LEN組小鼠以侖伐替尼溶液灌胃(30 mg·kg-1·d-1)；LEN+FLU組小鼠聯(lián)用氟伐他汀(20 mg·kg-1·d-1)和侖伐替尼(30 mg·kg-1·d-1)；NC組以對(duì)應(yīng)溶劑灌胃。開(kāi)始給藥后每4 d測(cè)量腫瘤組織的大小，計(jì)算腫瘤體積(體積=1/2×長(zhǎng)徑×寬徑2)。于第5周以異戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，將皮下腫瘤組織完整剝離，測(cè)量瘤體體積。取部分組織放于4%中性甲醛中固定24 h，常規(guī)石蠟包埋，以備后續(xù)組織學(xué)檢查；另一部分保存于-80 ℃超低溫冰箱中備用。

1.3 免疫組織化學(xué)法檢測(cè)PCNA、TLR4的表達(dá)將蠟塊切片，脫蠟，采用免疫組織化學(xué)法進(jìn)行染色。一抗(濕盒)4 ℃下孵育過(guò)夜，二抗37 ℃下孵育(濕盒)30 min，二氨基聯(lián)苯胺顯色約15 min，自來(lái)水水洗1次5 min，蘇木精復(fù)染10 min，水洗5 min，封片。顯微鏡下每例隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野，由兩位獨(dú)立研究人員計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞的百分率。

1.4 TUNEL法檢測(cè)裸鼠移植瘤細(xì)胞凋亡切片常規(guī)脫蠟處理后，滴加3%過(guò)氧化物酶阻斷劑，室溫孵育10 min，去離子水洗3次。蛋白酶K 37 ℃孵育30 min(濕盒)，磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline，PBS)沖洗2次。TUNEL反應(yīng)液37 ℃濕盒孵育60 min，以PBS沖洗3次。滴加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗體，37 ℃濕盒孵育30 min，PBS沖洗3次。二氨基聯(lián)苯胺顯色約10 min，PBS沖洗3次。蘇木精復(fù)染、脫水透明、封片。鏡下觀察。胞核中著棕黃色顆粒者為T(mén)UNEL陽(yáng)性細(xì)胞。

1.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)移植瘤組織TLR4 mRNA水平按照TRIzol RNA說(shuō)明書(shū)提取裸小鼠皮下瘤組織RNA，反轉(zhuǎn)錄為cDNA。以cDNA為模板，按照實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒說(shuō)明書(shū)擴(kuò)增TLR4 mRNA。引物序列：TLR4上游5′-TTTGCTGGGGCTCATTCACT-3′，下游5′-CTCGGCACTTAGCACTGTCA-3′。反應(yīng)條件：95 ℃ 3 min，95 ℃ 10 s，60 ℃ 30 s，共40個(gè)循環(huán)，溶解曲線(xiàn)65～95 ℃持續(xù)5 s。

1.6 Western blot法檢測(cè)組織/細(xì)胞蛋白表達(dá)剪取適量小鼠皮下瘤組織，加入RIPA裂解液，剪碎組織(培養(yǎng)細(xì)胞攪動(dòng)均勻)，4 ℃裂解20 min，13 000 r·min-1離心10 min，測(cè)上清蛋白濃度，加入上樣液，煮沸變性。按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行細(xì)胞總蛋白萃取，煮沸變性。蛋白溶液經(jīng)SDS電泳、轉(zhuǎn)膜，5%BSA封閉，GAPDH為總蛋白的內(nèi)參，加一抗4 ℃過(guò)夜。d 2加二抗，孵育45 min后漂洗，Odyssey成像系統(tǒng)掃描成像。

1.7 體外細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)至70%～80%融合度，按照說(shuō)明書(shū)步驟進(jìn)行TLR4-WT或?qū)φ召|(zhì)粒轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染24 h后，分別給予氟伐他汀(1 μmol·L-1)+侖伐替尼(5 μmol·L-1)或?qū)?yīng)溶劑處理48 h，接著給予10 μg·L-1LPS處理24 h。

2 結(jié)果

2.1 聯(lián)合用藥明顯抑制裸鼠肝癌移植瘤的生長(zhǎng)4組小鼠的腫瘤生長(zhǎng)曲線(xiàn)見(jiàn)Fig 1，F(xiàn)LU組的移植瘤體積與NC組無(wú)顯著差異，而LEN組、LEN+FLU組的移植瘤體積明顯小于NC組，且LEN+FLU組的移植瘤體積明顯小于LEN組。聯(lián)合用藥組腫瘤倍增時(shí)間(tumor volume doubling time,TVDT)明顯長(zhǎng)于LEN組，F(xiàn)LU組和NC組。聯(lián)合用藥組的腫瘤延遲生長(zhǎng)時(shí)間(tumor growth delay,TGD)較LEN組長(zhǎng)，見(jiàn)Tab 1。以上結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)劑量的氟伐他汀對(duì)小鼠肝癌移植瘤的生長(zhǎng)無(wú)明顯的抑制作用；而侖伐替尼可在一定程度上抑制肝癌移植瘤的生長(zhǎng)；侖伐替尼聯(lián)合氟伐他汀在抑制裸鼠肝癌移植瘤生長(zhǎng)方面優(yōu)于侖伐替尼單藥。

Fig 1 Tumor growth curve for subcutaneous tumor of mice in various groupsNC：Control group，F(xiàn)LU：Fluvastatin group，LEN：Lenvatinib group,FLU+LEN：Fluvastatin plus Lenvatinib group.*P<0.05 vs NC;#P<0.05 vs LEN.

Tab 1 Comparison of TVDT and TGD among different groups (day,n=5)

2.2 聯(lián)合用藥明顯抑制裸鼠肝癌移植瘤的增殖我們使用免疫組化法檢測(cè)PCNA，檢測(cè)裸鼠移植瘤組織中腫瘤細(xì)胞增殖水平。裸鼠移植瘤組織切片PCNA免疫組織化學(xué)見(jiàn)Fig 2。FLU組腫瘤組織PCNA陽(yáng)性細(xì)胞較NC組無(wú)明顯差異，LEN組、FLU+LEN組腫瘤組織PCNA陽(yáng)性細(xì)胞較NC組顯著降低(P<0.05)，而LEN+FLU組腫瘤組織陽(yáng)性細(xì)胞比例顯著低于LEN組(P<0.05)。結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)劑量的氟伐他汀對(duì)裸鼠肝癌移植瘤的增殖無(wú)明顯抑制作用；侖伐替尼可以抑制肝癌移植瘤的增殖；侖伐替尼聯(lián)合氟伐他汀可以顯著抑制肝癌細(xì)胞的增殖，其效果明顯優(yōu)于侖伐替尼單藥。

Fig 2 Immunohistonchemistry analysis for PCNA expression in tumor tissues of mice(×400)*P<0.05 vs NC;#P<0.05 vs FLU;ΔP<0.05 vs LEN.

2.3 聯(lián)合用藥可以顯著促進(jìn)裸鼠肝癌移植瘤細(xì)胞的凋亡使用TUNEL法檢測(cè)裸鼠肝癌移植瘤的腫瘤細(xì)胞凋亡水平。鏡下觀察，胞核中著棕黃色顆粒的細(xì)胞為T(mén)UNEL陽(yáng)性細(xì)胞，TUNEL檢測(cè)顯示：FLU組與NC組陽(yáng)性細(xì)胞比例無(wú)明顯差異；LEN組細(xì)胞凋亡水平高于NC組(P<0.05)；FLU+LEN組的腫瘤細(xì)胞凋亡水平明顯高于LEN組(P<0.05)，見(jiàn)Fig 3。結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)劑量下的氟伐他汀對(duì)裸鼠肝癌移植瘤細(xì)胞的凋亡無(wú)明顯促進(jìn)作用；侖伐替尼促進(jìn)肝癌細(xì)胞的凋亡；而侖伐替尼聯(lián)合氟伐他汀可以顯著促進(jìn)肝癌細(xì)胞的凋亡，且細(xì)胞凋亡水平明顯高于侖伐替尼單藥。

Fig 3 Apoptosis in subcutaneous tumor tissues of mice(×400)*P<0.05 vs NC;#P<0.05 vs FLU;ΔP<0.05 vs LEN.

2.4 聯(lián)合用藥明顯抑制裸鼠肝癌移植瘤細(xì)胞TLR4的表達(dá)Fig 4為裸鼠肝癌移植瘤組織TLR4的mRNA檢測(cè)結(jié)果，可見(jiàn)，F(xiàn)LU組TLR4mRNA水平較NC組無(wú)顯著差異，而LEN組TLR4mRNA較NC組有明顯上調(diào)，F(xiàn)LU+LEN組TLR4 mRNA水平明顯低于LEN組(P<0.05)。免疫組織化學(xué)結(jié)果與熒光定量PCR結(jié)果相似，如Fig 5所示，F(xiàn)LU組與NC組TLR4陽(yáng)性細(xì)胞比例無(wú)明顯差異，LEN組TLR4陽(yáng)性細(xì)胞較NC組明顯增多，而FLU+LEN組TLR4陽(yáng)性細(xì)胞比例明顯低于LEN組(P<0.05)。以上結(jié)果說(shuō)明，使用侖伐替尼可以上調(diào)TLR4的表達(dá)，而聯(lián)合氟伐他汀后可顯著抑制侖伐替尼引起的TLR4的表達(dá)升高。

Fig 4 TLR4 mRNA level in tumor tissues of mice*P<0.05 vs NC;#P<0.05 vs FLU;△P<0.05 vs LEN.

Fig 5 TLR4 expression in subcutaneous tumor of mice(×400)

2.5 聯(lián)合用藥明顯抑制裸鼠肝癌移植瘤細(xì)胞β-catenin的表達(dá)Western blot法檢測(cè)小鼠移植瘤組織中β-catenin的蛋白表達(dá)水平。檢測(cè)結(jié)果如Fig 6所示，LEN組小鼠組織中β-catenin的表達(dá)較NC和FLU組升高，而FLU+LEN組β-catenin的蛋白表達(dá)水平低于LEN組，見(jiàn)Fig 6。結(jié)果表明，侖伐替尼可以上調(diào)β-catenin的表達(dá)，而聯(lián)合使用氟伐他汀可以抑制這一過(guò)程。

Fig 6 β-catenin expression in subcutaneous tumor tissues of mice

2.6 聯(lián)合用藥通過(guò)抑制TLR4的表達(dá)調(diào)控β-catenin的表達(dá)體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞中，分別轉(zhuǎn)染TLR4-WT質(zhì)粒/對(duì)照質(zhì)粒，給予氟伐他汀+侖伐替尼/對(duì)照溶劑預(yù)處理，之后給予LPS以激活TLR4。培養(yǎng)72 h后Western blot法檢測(cè)肝癌細(xì)胞β-catenin的表達(dá)，同時(shí)檢測(cè)TLR4的表達(dá)。如Fig 7所示，LPS處理后，肝癌細(xì)胞TLR4表達(dá)增強(qiáng)，同時(shí)β-catenin表達(dá)增強(qiáng)(Fig 7，lane 1 vs.lane 2);而氟伐他汀聯(lián)合侖伐替尼可明顯抑制TLR4和β-catenin的表達(dá)(Fig 7，lane 3 vs.lane 2)；在此基礎(chǔ)上，通過(guò)TLR4質(zhì)粒轉(zhuǎn)染提高TLR4的表達(dá)可以反轉(zhuǎn)氟伐他汀聯(lián)合侖伐替尼誘導(dǎo)的β-catenin的表達(dá)下降(Fig 7,lane 4 vs.lane 3)。以上結(jié)果表明，氟伐他汀聯(lián)合侖伐替尼可能通過(guò)抑制TLR4的表達(dá)調(diào)控β-catenin信號(hào)通路。

Fig 7 β-catenin protein expression in treated hepatoma cell lines

3 討論

REFLECT研究奠定了侖伐替尼用于晚期HCC患者一線(xiàn)治療的地位，然而，患者對(duì)HCC的治療反應(yīng)仍有限，在我國(guó)，大約有半數(shù)HCC患者出現(xiàn)對(duì)侖伐耐藥的現(xiàn)象[3]。侖伐替尼的耐藥性是HCC治療中的挑戰(zhàn)，需要探索侖伐替尼聯(lián)合治療以增強(qiáng)對(duì)肝癌的抗腫瘤作用，目前也有多項(xiàng)研究集中在聯(lián)合治療上。氟伐他汀被認(rèn)為具有治療肝癌的潛力[5]。本實(shí)驗(yàn)探索氟伐他汀聯(lián)合侖伐替尼是否能增強(qiáng)侖伐替尼對(duì)小鼠肝癌移植瘤的抑制作用，并進(jìn)一步探討其中的機(jī)制。裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)是進(jìn)行藥物抗腫瘤的經(jīng)典實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)采用4～6周齡雌性裸小鼠，構(gòu)建裸小鼠皮下肝癌移植瘤模型，分別給予氟伐他汀單藥、侖伐替尼單藥、氟伐他汀聯(lián)合侖伐替尼和對(duì)照溶劑。結(jié)果表明，侖伐替尼聯(lián)合氟伐他汀可以顯著抑制小鼠肝癌皮下瘤的生長(zhǎng)，且作用明顯強(qiáng)于侖伐替尼單藥。

本研究選用PCNA和TUNEL兩個(gè)指標(biāo)來(lái)分別檢測(cè)裸鼠肝癌移植瘤中腫瘤細(xì)胞的增殖和凋亡水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，本實(shí)驗(yàn)劑量的侖伐替尼對(duì)肝癌細(xì)胞在裸小鼠體內(nèi)的增殖有抑制作用，并能促進(jìn)肝癌細(xì)胞的凋亡；而本實(shí)驗(yàn)劑量的氟伐他汀對(duì)肝癌細(xì)胞在裸小鼠體內(nèi)的增殖和凋亡無(wú)明顯作用。侖伐替尼聯(lián)合氟伐他汀可以明顯抑制肝癌細(xì)胞的增殖，并顯著促進(jìn)其凋亡，其效果明顯優(yōu)于侖伐替尼單藥治療。

Toll樣受體(TLR)屬于跨膜信號(hào)傳導(dǎo)受體，在免疫細(xì)胞中表達(dá)較高。TLR4是TLR家族的成員，通過(guò)激活多種轉(zhuǎn)錄因子和調(diào)節(jié)下游蛋白如IKB激酶和絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)，誘導(dǎo)IL、IFN、TNF-β和其他炎癥因子的產(chǎn)生。目前，在包括胃癌、結(jié)腸直腸癌和非小細(xì)胞肺癌在內(nèi)的多種腫瘤中都存在TLR4的表達(dá)失衡，并且TLR4的異常高表達(dá)與腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展有關(guān)[6]。TLR4也參與了肝臟疾病的發(fā)生發(fā)展。TLR4/NF-κB 通路參與肝臟缺血再灌注損傷的進(jìn)展[7]。TLR4信號(hào)通路可激活肝星狀細(xì)胞，促進(jìn)肝臟的纖維化。在肝癌中，TLR4也發(fā)揮重要作用[8]。多項(xiàng)研究表明，脂多糖誘導(dǎo)的TLR4信號(hào)通路的激活與原發(fā)性肝癌的發(fā)生有關(guān)，并可以促進(jìn)肝癌的發(fā)展。在乙肝病毒相關(guān)的肝硬化和原發(fā)性肝癌中TLR4的表達(dá)上調(diào)，顯著高于正常肝組織，TLR4通過(guò)激活ERK1/2，并與乙肝病毒x蛋白相互作用，促進(jìn)肝癌進(jìn)展。TLR4在復(fù)發(fā)肝癌患者腫瘤組織中的表達(dá)明顯高于非復(fù)發(fā)肝癌患者，其表達(dá)與肝癌患者的預(yù)后不良相關(guān)。高表達(dá)TLR4者常早期復(fù)發(fā)，生存率低[9]。TLR4的表達(dá)可以促進(jìn)肝癌的增殖、并抑制細(xì)胞凋亡、促進(jìn)肝癌細(xì)胞的上皮細(xì)胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)化[10]。另有研究表明，LPS-TLR4信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)在誘導(dǎo)HCC干性中具有重要作用，TLR4有可能作為肝癌腫瘤干細(xì)胞的標(biāo)記分子。在我們之前的研究中，HCC組織中TLR4的表達(dá)水平顯著高于正常組織[11]，與上述發(fā)現(xiàn)一致。

有研究表明，體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞中使用侖伐替尼可使TLR4顯著上調(diào)[12]。本研究發(fā)現(xiàn)，裸小鼠肝癌皮下瘤模型中，侖伐替尼單藥使用上調(diào)TLR4的表達(dá)，與前述體外實(shí)驗(yàn)的結(jié)果一致。而聯(lián)合侖伐替尼和氟伐他汀可以協(xié)同抑制TLR4的表達(dá)。我們推測(cè)，上調(diào)TLR4的表達(dá)可能是侖伐替尼耐藥的機(jī)制之一。然而，侖伐替尼上調(diào)TLR4表達(dá)的機(jī)制，目前尚無(wú)研究涉及，需要進(jìn)一步探究。

Wnt /β-catenin信號(hào)通路在肝癌中處于活化狀態(tài)，Wnt /β-catenin的異常激活與氧化應(yīng)激代謝和Ras /絲裂原活化蛋白激酶通路有關(guān)，促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖、侵襲、耐藥和進(jìn)展[13]。此外，β-catenin軸可等通過(guò)上調(diào) Oct4、SOX2 和Nanog來(lái)增加HCC細(xì)胞的腫瘤干細(xì)胞特征[14]。β-catenin的核定位可以協(xié)同促進(jìn)耐藥相關(guān)靶基因的表達(dá)[13]。已有研究表明，侖伐替尼以劑量和時(shí)間依賴(lài)性方式上調(diào)肝癌細(xì)胞系β-catenin表達(dá)，這可能是侖伐替尼耐藥的原因之一[15]。我們的小鼠體內(nèi)研究表明，給予侖伐替尼處理后，小鼠腫瘤細(xì)胞β-catenin的表達(dá)上調(diào)，與上述研究結(jié)果一致。但侖伐替尼上調(diào)肝癌β-catenin表達(dá)的具體機(jī)制尚不清楚?？赡艿臐撛跈C(jī)制包括侖伐替尼在轉(zhuǎn)錄水平、翻譯水平或翻譯后修飾的直接調(diào)節(jié)；也可能是通過(guò)侖伐替尼靶向信號(hào)通路(如FGF/FGFR、RET、cKIT等)進(jìn)行間接調(diào)節(jié)[15]。仍需要進(jìn)一步的研究來(lái)探究這些潛在的機(jī)制。

TLR4參與調(diào)控Wnt通路。乳腺癌的體內(nèi)和體外研究表明，TLR4調(diào)控的Akt/GSK3β/β-catenin信號(hào)通路參與了乳腺癌的進(jìn)展[16]。在結(jié)腸癌中，TLR4激活β-catenin，導(dǎo)致腸道腫瘤的發(fā)生和發(fā)展[17]。已有研究表明，TLR4通過(guò)直接激活β-catenin的表達(dá)影響乙肝病毒相關(guān)的肝癌的進(jìn)展[18]。本研究進(jìn)一步探討了侖伐替尼和氟伐他汀聯(lián)用的可能機(jī)制，研究表明，侖伐替尼和氟伐他汀聯(lián)用可以抑制β-catenin的表達(dá)。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)提示，過(guò)表達(dá)TLR4可以反轉(zhuǎn)侖伐替尼和氟伐他汀對(duì)β-catenin的抑制，這進(jìn)一步表明，侖伐替尼聯(lián)合氟伐他汀可能通過(guò)抑制TLR4的表達(dá)來(lái)抑制β-catenin的表達(dá)。

綜上所述，在裸鼠肝癌移植瘤模型中，侖伐替尼聯(lián)合氟伐他汀發(fā)揮了協(xié)同抗腫瘤作用，顯著促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤細(xì)胞增殖，其機(jī)制可能通過(guò)抑制TLR4來(lái)抑制β-catenin信號(hào)通路。