基于BDNF/TrkB/CREB 途徑探討缺氧缺血性新生幼鼠海馬神經(jīng)元凋亡及腦發(fā)育損傷的機(jī)制研究

盧田甜，張 耀，梁 彬，劉 敏，陳秀靈，賈雁平

（1.?？谑袐D幼保健院新生兒科，海南 ?？?570203；2.?？谑腥嗣襻t(yī)院兒科，海南 ?？?570208）

缺氧缺血性腦損傷（hypoxic ischemic brain injury，HIBI）是造成新生兒永久性神經(jīng)系統(tǒng)損傷和死亡的主要原因之一［1］。研究顯示：0.1%～0.2% 的新生兒出現(xiàn)由于圍生期窒息引起的HIBI，死亡率高達(dá)20%，而40%的幸存者出現(xiàn)智力障礙、腦癱、癲癇等嚴(yán)重并發(fā)癥［2］。目前研究報道的HIBI 發(fā)生可能與炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、能量耗竭、鈣離子超載等多種病理生理機(jī)制相關(guān)，但仍未有統(tǒng)一的定論。腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（brain derived neurotrophic factor，BDNF）是一種神經(jīng)營養(yǎng)因子，酪氨酸蛋白激酶B（TrKB）是BDNF 的特異功能受體，二者相互結(jié)合具有促進(jìn)HIBI 后腦組織的修復(fù)及再生的作用［3］。環(huán)磷腺苷效應(yīng)元件結(jié)合蛋白（cAMP-response element binding protein，CREB）可以誘導(dǎo)BDNF 的基因轉(zhuǎn)錄進(jìn)而調(diào)節(jié)其表達(dá)，與HIBI 后神經(jīng)元的再生、修復(fù)等生理過程［4］?；诖耍狙芯恳訦IBI 幼鼠為研究對象，以BDNF/TrkB/CREB 通路為作用靶點(diǎn)，探索其在HIBI 發(fā)病中的作用，為臨床防治HIBI提供參考。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

新生7 日齡Wistar 幼鼠95 只，體重（13.6 ±1.7）g，雌雄各半，由湖北醫(yī)藥學(xué)院實驗動物中心提供，實驗動物合格證號SCXK（鄂）2018-0005。本研究所使用的實驗動物均遵守海南醫(yī)學(xué)院倫理委員會標(biāo)準(zhǔn)，在實驗過程中盡可能使動物在舒適的環(huán)境中完成，手術(shù)麻醉、給藥時嚴(yán)格規(guī)范操作以減輕實驗動物的痛苦，實驗結(jié)束后動物采用安樂死的手段處死，并委托學(xué)校動物管理中心處理所有動物尸體。

1.2 試劑

原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記（TUNEL）檢測試劑盒（美 國Roche 公 司）；2，3，5-氯 化 三 苯 基 四 氮 唑（TTC）試劑盒（美國Sigma 公司）；BDNF、TrkB、CREB 慢病毒載體及空載體（上海吉凱基因化學(xué)技術(shù)有限公司）；BCA 蛋白定量試劑盒、蛋白提取試劑（美國Thermo 公司）；BDNF、TrkB、CREB、β-actin抗體（美國Proteintech 公司）。

1.3 HIBI 模型制備

參照Rice-Vannucci 經(jīng)典方法復(fù)制新生幼鼠HIBI 模型［5］。幼鼠乙醚吸入麻醉，消毒后固定于手術(shù)臺，分離左側(cè)頸總動脈，結(jié)扎兩端，中間剪斷，縫合皮膚，放入裝有母鼠糞便的墊料中2 h，然后置于含92% N2+ 8% O2混合氣體的有機(jī)玻璃箱缺氧處理2 h，記錄幼鼠一般行為。幼鼠出現(xiàn)自發(fā)向左轉(zhuǎn)圈或夾尾尖叫證明模型復(fù)制成功，將幼鼠重新放回籠中母乳喂養(yǎng)。假手術(shù)組僅分離左側(cè)頸總動脈，不進(jìn)行結(jié)扎和缺氧，縫合后放回籠中母乳飼養(yǎng)。

1.4 實驗分組

取10 只假手術(shù)組幼鼠作為對照1 組，另外取10只HIBI 模型幼鼠，檢測幼鼠學(xué)習(xí)記憶能力、腦組織損傷及海馬組織中BDNF、TrkB、CREB 蛋白的表達(dá)。取15 只假手術(shù)組幼鼠作為對照2 組，另外取60只HIBI 模型幼鼠分為陰性對照（NC）組、BDNF 過表達(dá)（LV-BDNF）組、TrkB 過表達(dá)（LV-TrkB）組、CREB 過 表 達(dá)（LV-CREB）組，每 組 15 只。LV-BDNF 組、LV-TrkB 組、LV-CREB 組分別 通過尾靜脈注射滴度為1.7×109TU/mL 的BDNF 慢病毒 載 體5×107TU，滴 度 為2.1×109TU/mL 的TrkB 慢病毒載體1×107TU，滴度為1.4×109TU/mL）的CREB 慢病毒載體5×106TU，NC 組尾靜脈注射滴度為2×109TU/mL 的空慢病毒載體1×106TU；每4 周1 次，連續(xù)2 次，8 周后結(jié)束實驗。檢測幼鼠學(xué)習(xí)記憶能力、腦組織損傷、海馬神經(jīng)元凋亡情況及Bcl-2、Bax、NF-κB 蛋白表達(dá)。

1.5 Y-迷宮測試記憶力和學(xué)習(xí)能力

Y-迷宮是一個底部可以通電的三等臂式反射箱，每臂端有一個信號燈，燈亮?xí)r為此臂安全未通電，另兩臂通電（電壓為50～70 V，強(qiáng)度為能使小鼠產(chǎn)生逃避行為）。實驗時隨機(jī)變更安全區(qū)，電擊幼鼠后以其立即逃避到安全區(qū)為一次正確反應(yīng)，連續(xù)9 次正確反應(yīng)為學(xué)會，每次電擊持續(xù)5 s。記錄幼鼠學(xué)會所進(jìn)行的訓(xùn)練次數(shù)，次數(shù)越少表示學(xué)習(xí)能力越好［6］。電擊實驗結(jié)束24 h 后檢測記憶力，總共進(jìn)行20 次，記憶能力為正確反應(yīng)次數(shù)占總檢測次數(shù)的百分比。

1.6 TTC 染色法測定腦梗死體積

每組隨機(jī)取5 只幼鼠，斷頭處死，取出腦組織，置于0.15 mol/L 磷酸緩沖鹽溶液，4 ℃冷凍5 min，間隔2 mm 冠狀切片，切片浸入5 mL 含1% 的TTC 磷酸鹽緩沖液，37 ℃避光孵育0.5 h，TTC 染色后，紅色表示正常腦組織，白色表示梗死組織，取出腦片，放入10% 福爾馬林中固定，逐層拍照，用Imagepro Plus 圖像分析軟件處理并統(tǒng)計，計算每層梗死面積，乘以層面為腦梗死體積。

1.7 TUNEL 檢測海馬區(qū)神經(jīng)元凋亡水平

每組隨機(jī)取5 只幼鼠斷頭處死，無菌條件分離海馬組織，4% 多聚甲醛固定，乙醇脫水，常規(guī)石蠟包埋，冠狀切片，厚3～5 μm，烤片、脫蠟、乙醇水合，蛋白酶k 消化30 min，PBS 洗滌3 次，加入TUNEL反應(yīng)液，置于37 ℃暗溫盒60 min，蘇木素復(fù)染、乙醇脫水、二甲苯透明封片。每張切片選取5 個不重復(fù)視野，計數(shù)TUNEL 陽性神經(jīng)元，取平均值。

1.8 Western blot 檢測幼鼠海馬組織BDNF、TrkB、CREB、Bcl-2、Bax 及NF-κB 蛋白的表達(dá)

每組隨機(jī)取5 只幼鼠幼仔斷頭處死，低溫下取幼鼠左側(cè)海馬組織，加入RIPA 充分裂解，12 000 r/min 低溫離心15 min，取上清液，用BCA 法測定上清液中蛋白含量，取40 μg 蛋白，加入緩沖液變性，電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉、加入一抗BDNF、TrkB、CREB、Bcl-2、Bax、NF-κB、β-actin，4 ℃孵育過夜，TBST 洗滌，加入二抗，室溫孵育2 h，TBST 洗滌，用ECL化學(xué)發(fā)光試劑顯色后，化學(xué)發(fā)光儀成像。

1.9 統(tǒng)計學(xué)處理

數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析采用SPSS 17.0 軟件包，計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間比較采用t檢驗，多組間差異比較采用單因素方差分析（One-way ANOVA），P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 造模后幼鼠學(xué)習(xí)記憶能力變化

與對照1 組幼鼠比較，HIBI 組幼鼠學(xué)習(xí)能力及記憶力測試正確反應(yīng)率明顯降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 造模后幼鼠學(xué)習(xí)能力及記憶力測試正確反應(yīng)率（%，n=10，±s）Tab 1 Correct response rate of learning ability and memory test in young rats after modeling（%，n=10，±s）

表1 造模后幼鼠學(xué)習(xí)能力及記憶力測試正確反應(yīng)率（%，n=10，±s）Tab 1 Correct response rate of learning ability and memory test in young rats after modeling（%，n=10，±s）

注：與對照1 組比較，#P＜0.01。

組別對照1 組HIBI 組記憶能力68.00±7.02 27.33±5.30#7.638 0.004 tP學(xué)習(xí)能力71.52±8.01 29.66±1.66#9.126 0.000 6

2.2 造模后幼鼠腦組織損傷

與對照1 組比較，HIBI 組幼鼠腦組織梗死體積明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 造模后幼鼠腦組織梗死體積（n=5，±s）Tab 2 Infarct volume of brain tissue in young rats after modeling（n=5，±s）

表2 造模后幼鼠腦組織梗死體積（n=5，±s）Tab 2 Infarct volume of brain tissue in young rats after modeling（n=5，±s）

注：與對照1 組比較，#P＜0.01。

腦組織梗死體積（mm3）0.59±0.03 6.64±0.59#11.719 0.0001組別對照1 組HIBI 組tP

2.3 造模后幼鼠海馬組織BDNF、TrkB、CREB 蛋白表達(dá)

與對照1 組幼鼠比較，HIBI 組幼鼠海馬組織中BDNF、TrkB 明顯升高，CREB 表達(dá)明顯降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表3 造模后幼鼠海馬組織BDNF、TrkB、CREB 蛋白表達(dá)（n=5，±s）Tab 3 Expression of BDNF，TrkB and CREB proteins in the hippocampus of young rats after modeling（n=5，±s）

表3 造模后幼鼠海馬組織BDNF、TrkB、CREB 蛋白表達(dá)（n=5，±s）Tab 3 Expression of BDNF，TrkB and CREB proteins in the hippocampus of young rats after modeling（n=5，±s）

注：與對照1 組比較，#P＜0.01。

組別對照1 組HIBI 組CREB 0.81±0.03 0.38±0.04#8.824 0.002 tP BDNF 0.63±0.03 0.88±0.05#6.682 0.006 TrkB 0.52±0.02 0.78±0.06#5.467 0.004

2.4 調(diào)節(jié)BDNF、TrkB、CREB 表達(dá)對幼鼠學(xué)習(xí)記

憶能力的影響

與對照2 組比較，NC 組幼鼠學(xué)習(xí)及記憶力測試正確反應(yīng)率明顯降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；與NC 組幼鼠比較，LV-BDNF 組、LV-TrkB組、LV-CREB 組幼鼠學(xué)習(xí)及記憶力測試正確反應(yīng)率明顯升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。見表4。

表4 調(diào)節(jié)BDNF、TrkB、CREB 表達(dá)后幼鼠學(xué)習(xí)能力及記憶力測試正確反應(yīng)率（%，n=15，±s）Tab 4 Learning ability and correct response rate of memory test in young rats after regulation of BDNF，TrkB and CREB expression（%，n=15，±s）

表4 調(diào)節(jié)BDNF、TrkB、CREB 表達(dá)后幼鼠學(xué)習(xí)能力及記憶力測試正確反應(yīng)率（%，n=15，±s）Tab 4 Learning ability and correct response rate of memory test in young rats after regulation of BDNF，TrkB and CREB expression（%，n=15，±s）

注：與對照2 組比較，#P＜0.01；與NC 組比較，*P＜0.01。

記憶力69.67±6.40 28.33±4.88#57.33±6.78*48.67±7.43*54.33±6.23*9.987 0.002組別對照2 組NC 組LV-BDNF 組LV-TrkB 組LV-CREB 組FP學(xué)習(xí)能力73.23±7.31 33.01±3.48#62.35±5.29*49.95±4.09*57.44±3.85*11.256 0.0004

2.5 調(diào)節(jié)BDNF、TrkB、CREB 表達(dá)對幼鼠腦組織損傷的影響

與對照2 組比較，NC 組幼鼠腦組織梗死體積顯明顯增加，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；與NC組幼鼠比較，LV-BDNF 組、LV-TrkB 組、LV-CREB組幼鼠腦組織梗死體積明顯減小，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。見表5。

表5 調(diào)節(jié)BDNF、TrkB、CREB 表達(dá)后幼鼠腦組織梗死體積（n=5，±s）Tab 5 Infarct volume in young rat brain tissue after regulation of BDNF，TrkB and CREB expression（n=5，±s）

表5 調(diào)節(jié)BDNF、TrkB、CREB 表達(dá)后幼鼠腦組織梗死體積（n=5，±s）Tab 5 Infarct volume in young rat brain tissue after regulation of BDNF，TrkB and CREB expression（n=5，±s）

注：與對照2 組比較，#P＜0.01；與NC 組比較，*P＜0.01。

腦組織梗死體積（mm3）0.55±0.03 6.68±0.59#1.14±0.15*1.62±0.13*1.24±0.22*13.156 0.003組別對照2 組NC 組LV-BDNF 組LV-TrkB 組LV-CREB 組FP

2.6 調(diào)節(jié)BDNF、TrkB、CREB 表達(dá)對幼鼠海馬神經(jīng)元凋亡的影響

與對照2 組比較，NC 組幼鼠海馬區(qū)TUNEL 陽性細(xì)胞數(shù)明顯增加，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；與NC 組幼鼠比較，LV-BDNF 組、LV-TrkB組、LV-CREB 組幼鼠海馬區(qū)TUNEL 陽性細(xì)胞數(shù)明顯減少，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。見表6和圖1。

表6 調(diào)節(jié)BDNF、TrkB、CREB 表達(dá)后幼鼠海馬組織神經(jīng)元凋亡情況（個，n=5，±s）Tab 6 The apoptosis of hippocampal neurons in young rats after regulation of BDNF，TrkB and CREB expression（n=5，±s）

表6 調(diào)節(jié)BDNF、TrkB、CREB 表達(dá)后幼鼠海馬組織神經(jīng)元凋亡情況（個，n=5，±s）Tab 6 The apoptosis of hippocampal neurons in young rats after regulation of BDNF，TrkB and CREB expression（n=5，±s）

注：與對照2 組比較，#P＜0.01；與NC 組比較，*P＜0.01。

TUNEL 陽性細(xì)胞數(shù)2.40±0.55 116.40±10.57#47.60±5.22*58.80±5.76*51.40±3.05*14.965 0.0008組別對照2 組NC 組LV-BDNF 組LV-TrkB 組LV-CREB 組FP

圖1 調(diào)節(jié)BDNF、TrkB、CREB 表達(dá)后幼鼠海馬組織神經(jīng)元凋亡情況（×100）Fig 1 The apoptosis of hippocampal neurons in young rats after regulation of BDNF，TrkB and CREB expression（×100）

2.7 調(diào)節(jié)BDNF、TrkB、CREB 表達(dá)對幼鼠海馬組織Bcl-2、Bax 及NF-κB 蛋白表達(dá)的影響

與對照2 組比較，NC 組幼鼠海馬組織中促凋亡蛋白Bax、NF-κB 蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)（P＜0.05），而抑凋亡蛋白Bcl-2 蛋白表達(dá)明顯降低（P＜0.05）。與NC 組 比 較，LV-BDNF 組、LV-TrkB 組、LV-CREB組幼鼠海馬組織中Bax、NF-κB 蛋白表達(dá)明顯降低（P＜0.05），Bcl-2 蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)（P＜0.05）。見表7。

表7 調(diào)節(jié)BDNF、TrkB、CREB 表達(dá)后幼鼠海馬組織Bcl-2、Bax及NF-κB 蛋白表達(dá)（n=5，±s）Tab 7 Bcl-2，Bax and NF-κB protein expression in hippocampal tissue of young rats after regulation of BDNF，TrkB and CREB expression（n=5，±s）

表7 調(diào)節(jié)BDNF、TrkB、CREB 表達(dá)后幼鼠海馬組織Bcl-2、Bax及NF-κB 蛋白表達(dá)（n=5，±s）Tab 7 Bcl-2，Bax and NF-κB protein expression in hippocampal tissue of young rats after regulation of BDNF，TrkB and CREB expression（n=5，±s）

注：與對照2 組比較，#P＜0.01；與NC 組比較，*P＜0.01。

組別對照2 組NC 組LV-BDNF 組LV-TrkB 組LV-CREB 組NF-κB 0.91±0.06 2.21±0.11#1.44±0.08*1.36±0.06*1.25±0.07*15.015 0.0002 FP Bcl-2 0.85±0.05 0.25±0.05#0.59±0.05*0.69±0.06*0.61±0.04*9.987 0.005 Bax 0.69±0.04 1.67±0.09#0.95±0.06*0.85±0.08*0.82±0.06*12.365 0.0007

3 討論

大鼠出生時的生理組織狀態(tài)相當(dāng)于人類新生兒的早產(chǎn)階段，但其出生后腦組織的發(fā)育速度比人類新生兒快很多，7 日齡大鼠細(xì)胞增殖分化程度和腦室周圍生發(fā)基質(zhì)情況基本與新生兒相當(dāng)。目前缺血缺氧腦損傷模型的制備方法最經(jīng)典的即為Rice 改良方法，其操作簡單且成功率較高，時間和癥狀程度易掌握且組織病理改變明顯，因此，本實驗選擇7 日齡幼鼠，采用Rice 改良法復(fù)制新生幼鼠HIBI 模型。海馬是HIBI 模型對損傷最敏感的部位，研究顯示，缺血缺氧可造成新生幼鼠海馬區(qū)神經(jīng)元的大量凋亡［7，8］。經(jīng)過TTC 染色發(fā)現(xiàn)模型組幼鼠大腦皮層、海馬等區(qū)域有大片明顯的白色梗死區(qū)域，梗死體積明顯增加，提示實驗?zāi)Ｐ蛷?fù)制成功。有研究報道，HIBI 對幼鼠海馬區(qū)影響較大的是CA1 區(qū)的機(jī)體認(rèn)知和神經(jīng)元功能［9，10］。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)HIBI 幼鼠學(xué)習(xí)能力、記憶能力明顯減弱，與文獻(xiàn)報道一致。綜上可知，HIBI 可以誘導(dǎo)新生幼鼠海馬組織神經(jīng)元凋亡，進(jìn)而促使大鼠學(xué)習(xí)、記憶能力下降。

BDNF 屬神經(jīng)營養(yǎng)因子家族成員，廣泛存在于腦組織，在海馬區(qū)含量較多，可促進(jìn)神經(jīng)元生殖、發(fā)育、分化、再生，增強(qiáng)中樞神經(jīng)的營養(yǎng)支持、保護(hù)及功能的表達(dá)［11］，在缺血缺氧應(yīng)激刺激下，高表達(dá)的BDNF 具有保護(hù)神經(jīng)元的作用。有研究顯示：對HIBI 新生大鼠側(cè)腦室注射BDNF 可以明顯抑制海馬CA1 區(qū) 神經(jīng)元死亡［12］。TrkB 是BDNF 的特異性受體，可以傳遞信號，反應(yīng)性引起細(xì)胞內(nèi)各信號通路的活化，促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞的發(fā)育、損傷后的修復(fù)以及再生［13］。當(dāng)HIBI 發(fā)生后，BDNF、TrkB 蛋白在受損區(qū)高度表達(dá)，二者大量結(jié)合可以促使CREB 的活化，維持神經(jīng)細(xì)胞存活并促進(jìn)其修復(fù)［14，15］。李亞琴等［16］研究顯示，HIBI 小鼠過表達(dá)BDNF 后，腦組織中TrkBmRNA 和蛋白表達(dá)增強(qiáng)，加強(qiáng)神經(jīng)細(xì)胞的修復(fù)作用。CREB 是一種重要的轉(zhuǎn)錄因子核蛋白，能夠通過Ca2+途徑、調(diào)控一些營養(yǎng)因子表達(dá)等調(diào)節(jié)BDNF 的表達(dá)，抑制神經(jīng)元凋亡等［17］。本研究發(fā)現(xiàn)，模型組幼鼠海馬區(qū)CREB 蛋白表達(dá)明顯降低，BDNF、TrkB 蛋白表達(dá)明顯升高。為進(jìn)一步探討其發(fā)生機(jī)制，本研究采用尾靜脈注射BDNF、TrkB、CREB 慢病毒載體的方法對幼鼠進(jìn)行干預(yù)，結(jié)果顯示，過表達(dá)BDNF、TrkB、CREB 后，幼鼠學(xué)習(xí)能力、記憶能力明顯增強(qiáng)，腦組織梗死體積明顯縮小，TUNEL 陽性細(xì)胞數(shù)明顯減少，說明幼鼠神經(jīng)元功能、機(jī)體認(rèn)知功能得到改善。

Bcl-2 是一種重要的抗凋亡基因，研究證實，Bcl-2 表達(dá)下調(diào)會導(dǎo)致細(xì)胞凋亡［18，19］。Rousset 等［20］研究發(fā)現(xiàn)，缺血缺氧可以促進(jìn)Bax 從抗凋亡因子復(fù)合體中釋放出來，從而進(jìn)入線粒體激活細(xì)胞凋亡的發(fā)。NF-κB 是細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中一個重要的免疫應(yīng)答因子，參與調(diào)控細(xì)胞免疫應(yīng)答、細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡等多種細(xì)胞應(yīng)激行為，NF-κB 可以通過調(diào)控抗凋亡因子、凋亡誘導(dǎo)配體等的表達(dá)或信號傳遞，促進(jìn)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。研究發(fā)現(xiàn)，新生大鼠缺血缺氧后，腦部NF-κB 表達(dá)量將會上調(diào)，抑制NF-κB 可以有效降低HIBI 大鼠神經(jīng)元凋亡水平［21］。本研究檢測幼鼠海馬組織中Bcl-2、Bax 及NF-κB 蛋白表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)模型組幼鼠Bax、NF-κB 蛋白表達(dá)明顯升高，Bcl-2 蛋白表達(dá)明顯降低，說明HIBI 能引起海馬組織神經(jīng)細(xì)胞凋亡的發(fā)生，與文獻(xiàn)報道一致；而過表達(dá)BDNF、TrkB、CREB 組幼鼠Bax、NF-κB 蛋白表達(dá)明顯降低，Bcl-2 蛋白表達(dá)明顯升高，表明調(diào)節(jié)BDNF、TrkB、CREB 表達(dá)可能是通過調(diào)節(jié)凋亡蛋白等表達(dá)抑制神經(jīng)細(xì)胞的凋亡，改善模型幼鼠腦組織損傷病變的。

綜上所述，HIBI 模型幼鼠存在BDNF、TrkB、CREB 表達(dá)異常，過表達(dá)BDNF、TrkB、CREB 可以改善幼鼠學(xué)習(xí)記憶能力，修復(fù)腦組織損傷，抑制海馬區(qū)細(xì)胞凋亡，因此，HIBI 的發(fā)生機(jī)制可能與BDNF、TrkB、CREB 途徑有關(guān)。

作者貢獻(xiàn)度說明：

盧田甜：實驗設(shè)計、實驗操作、指標(biāo)檢測，撰寫論文；張耀、梁彬：協(xié)助實驗造模、指標(biāo)檢測；劉敏、陳秀靈：收集數(shù)據(jù)，統(tǒng)計分析；賈雁平：實驗指導(dǎo)、論文修改、審閱。

本文所有作者聲明無任何利益沖突。