基于ISO15189 文件要求的孕酮定量檢測(cè)項(xiàng)目性能驗(yàn)證

鄭綺菡，劉仍新，陳在旺

（1 單縣中心醫(yī)院檢驗(yàn)科 山東 菏澤 274300）

（2 單縣中心醫(yī)院泌尿外科 山東 菏澤 274300）

近年來(lái)，越來(lái)越多的醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室將ISO15189 質(zhì)量管理體系納入檢驗(yàn)科發(fā)展規(guī)劃中來(lái)。檢驗(yàn)方法和程序的分析性能驗(yàn)證作為質(zhì)量管理體系中技術(shù)要素的重要組成部分，在文件《臨床檢驗(yàn)定量測(cè)定項(xiàng)目精密度與正確度性能驗(yàn)證》《臨床實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)項(xiàng)目參考區(qū)間的制定》《臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)常規(guī)項(xiàng)目分析質(zhì)量要求》和《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在臨床化學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用說(shuō)明》中均提出了明確的性能參數(shù)要求和可參考的實(shí)施方案，性能參數(shù)至少應(yīng)包括正確度、精密度、可報(bào)告范圍以及生物參考區(qū)間?，F(xiàn)將孕酮各項(xiàng)性能參數(shù)報(bào)道如下。

1.資料與方法

1.1 樣本來(lái)源

精密度驗(yàn)證所用樣本為貝克曼庫(kù)爾特原裝低值濃度和高值濃度2 種水平的質(zhì)控品；正確度驗(yàn)證所用樣本為衛(wèi)健委室間質(zhì)評(píng)物；可報(bào)告范圍和參考區(qū)間驗(yàn)證所用樣本來(lái)自就診患者和健康查體人群，樣本為新鮮血清，無(wú)脂血、溶血、黃疸等。

1.2 檢測(cè)系統(tǒng)與試劑

檢測(cè)系統(tǒng)為美國(guó)貝克曼DXI800 全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀，檢測(cè)試劑盒及校準(zhǔn)品使用原裝配套，有效期限內(nèi)使用。

1.3 方法

（1）試驗(yàn)前準(zhǔn)備。性能驗(yàn)證試驗(yàn)開(kāi)始前，應(yīng)先進(jìn)行檢測(cè)系統(tǒng)的可靠性評(píng)價(jià)。提前做好檢測(cè)系統(tǒng)的校準(zhǔn)工作，并在試驗(yàn)當(dāng)天保證室內(nèi)質(zhì)控在控，檢測(cè)系統(tǒng)運(yùn)行良好，操作人員熟知標(biāo)準(zhǔn)操作流程及試驗(yàn)方案。（2）精密度驗(yàn)證。精密度指規(guī)定條件下，對(duì)同一或類(lèi)似被測(cè)對(duì)象重復(fù)測(cè)量所得值或測(cè)得值間的一致程度，反映測(cè)量結(jié)果隨機(jī)誤差的大小。如果用標(biāo)準(zhǔn)差（s）和變異系數(shù)（Coefficient of Variation, CV）來(lái)表示，則稱(chēng)為“不精密度”。按照相關(guān)要求，選用低值濃度和高值濃度2 種水平的質(zhì)控品，每天每種濃度重復(fù)檢測(cè)4 次，連續(xù)檢測(cè)5 d，每種濃度質(zhì)控品共可獲得20 組數(shù)據(jù)，并以此計(jì)算各濃度的重復(fù)性精密度和中間精密度。若重復(fù)性精密度不超過(guò)1/4 允許總誤差，中間精密度不超過(guò)1/3 允許總誤差，則驗(yàn)證通過(guò)。允許總誤差（TEa）選用國(guó)家衛(wèi)健委臨檢中心室間質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，孕酮檢測(cè)項(xiàng)目的允許總誤差為25%。（3）正確度驗(yàn)證。正確度指無(wú)限多次重復(fù)測(cè)量的平均值與真值的一致程度，反應(yīng)測(cè)量結(jié)果系統(tǒng)誤差的大小。但在參考物質(zhì)和參考方法難以實(shí)現(xiàn)的情況下，使用臨檢中心的質(zhì)評(píng)物質(zhì)評(píng)估項(xiàng)目的正確度也是可行的替代方法。故試驗(yàn)中選用孕酮最近連續(xù)2 次衛(wèi)健委臨檢中心組織的室間質(zhì)評(píng)測(cè)定數(shù)據(jù)10 組，以及室間質(zhì)評(píng)報(bào)告中提供的靶值，計(jì)算各組數(shù)據(jù)的偏倚值。根據(jù)平均偏倚=|測(cè)定值-靶值|/靶值×100%，計(jì)算平均偏倚。若平均偏倚小于1/2允許總誤差，則驗(yàn)證通過(guò)。（4）可報(bào)告范圍驗(yàn)證。盡量選取接近線性范圍上限的臨床樣本做高值（H）樣本，盡量選取接近線性范圍下限的臨床樣本做低值（L）樣本。然后分別按照5 H、4 H+1 L、3 H+2 L、2 H+3 L、1 H+4 L、5 L 的順序混勻樣本，獲取6 種不同濃度的樣本，并對(duì)每種濃度的樣本重復(fù)做2 遍檢測(cè)。根據(jù)6 組數(shù)據(jù)的平均測(cè)定值和理論值，做線性回歸分析，得出平均測(cè)定值和理論值的線性關(guān)系Y=aX+b，及相關(guān)系數(shù)r。若斜率a 在0.970 ～1.030 范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)r ≥0.975，則驗(yàn)證通過(guò)。（5）生物參考區(qū)間的驗(yàn)證。至少?gòu)谋镜貐⒖既巳褐羞x出20 人（包括剔除離群值后的人數(shù)），按照相關(guān)要求進(jìn)行血液采樣及驗(yàn)證。將20 組測(cè)定結(jié)果與參考區(qū)間的數(shù)值比較，若落在參考區(qū)間以外的測(cè)定值不超過(guò)2 個(gè)，則驗(yàn)證通過(guò)。參考區(qū)間的符合率=驗(yàn)證通過(guò)的組數(shù)/總參考組數(shù)×100%。參考區(qū)間驗(yàn)證時(shí)需按男女分組及生理周期分組實(shí)施，每組參考人數(shù)至少20 人。女性生理周期控制標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)臨床婦產(chǎn)科醫(yī)生建議，最終控制標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表1，安排工作人員能夠精準(zhǔn)采集到符合要求的血液樣本。

表1 孕酮廠家提供的參考區(qū)間及生理周期控制標(biāo)準(zhǔn)

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

利用EXCEL 2003 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析處理。

2.結(jié)果

2.1 精密度驗(yàn)證結(jié)果

2 種水平的質(zhì)控品測(cè)得的重復(fù)性精密度均小于1/4允許總誤差，中間精密度均小于1/3 允許總誤差，驗(yàn)證通過(guò)，見(jiàn)表2。

表2 20 組孕酮精密度驗(yàn)證結(jié)果

2.2 正確度驗(yàn)證結(jié)果

孕酮的平均偏倚小于1/2 允許總誤差，驗(yàn)證通過(guò)，見(jiàn)表3。

表3 孕酮正確度驗(yàn)證結(jié)果

2.3 可報(bào)告范圍驗(yàn)證結(jié)果

孕酮廠家提供的線性范圍為＜0.1 ng/mL ～40 ng/mL，見(jiàn)表4?？芍甭蔭 為0.980，在0.970 ～1.030范圍內(nèi)；相關(guān)系數(shù)r 為0.998，r ≥0.975；線性方程為y = 0.9802x+0.6324；驗(yàn)證通過(guò)。

表4 孕酮性能驗(yàn)證結(jié)果（ng/mL）

2.4 生物參考區(qū)間驗(yàn)證結(jié)果

不同分組的測(cè)定結(jié)果可知驗(yàn)證均通過(guò)，參考區(qū)間符合率為95%，廠家提供的生物參考區(qū)間可接受，見(jiàn)表5。

表5 孕酮參考區(qū)間的驗(yàn)證結(jié)果

3.討論

廠家提供的性能參數(shù)是在最佳條件下完成的，與檢驗(yàn)科的實(shí)驗(yàn)條件和實(shí)驗(yàn)室操作人員的能力等因素存在差異，且《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》等文件也明確要求需要對(duì)檢驗(yàn)方法和程序的分析性能進(jìn)行驗(yàn)證。驗(yàn)證的時(shí)機(jī)一般有如下幾種情況：（1）新項(xiàng)目開(kāi)展檢驗(yàn)方法和程序常規(guī)應(yīng)用之前；（2）已確立的檢驗(yàn)方法和程序發(fā)生變更；（3）已確立的檢驗(yàn)方法和程序其設(shè)備發(fā)生變更；（4）檢測(cè)系統(tǒng)發(fā)生了變更，如設(shè)備故障維修后、設(shè)備重大維護(hù)后、設(shè)施環(huán)境發(fā)生變更后等。

孕酮是育齡期女性非常重要的性激素之一，但近年由于各種因素影響，性激素分泌異常呈上升趨勢(shì)?；诖?，保障孕酮準(zhǔn)確檢測(cè)是檢驗(yàn)科的重要工作。良好的精密度和正確度是保證檢測(cè)系統(tǒng)檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性的重要前提，也是其他方法學(xué)評(píng)價(jià)和驗(yàn)證的基礎(chǔ)。精密度驗(yàn)證時(shí)，需保證驗(yàn)證樣品至少有2 個(gè)不同的濃度，并盡可能選用參考區(qū)間2 端接近的濃度或臨床決定水平處的濃度。我國(guó)參考系統(tǒng)不夠完善、參考物質(zhì)存在較多弊端，很多檢驗(yàn)項(xiàng)目的參考方法和有證參考物質(zhì)正確度驗(yàn)證難以實(shí)現(xiàn)。因此，目前正確度驗(yàn)證多采用PT/EQA 的統(tǒng)計(jì)值實(shí)現(xiàn)。參考區(qū)間指依據(jù)所有參考值的分布特性和臨床使用要求，選擇合適的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行歸納分析后確定的限值。

本文結(jié)果顯示，低水平和高水平質(zhì)控品測(cè)得的重復(fù)性精密度分別為2.59%和4.12%，均小于1/4 允許總誤差6.25%；而測(cè)得的中間精密度分別為5.46%和4.60%，均小于1/3 允許總誤差8.33%，符合國(guó)家衛(wèi)健委臨檢中心室間質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)相關(guān)要求。測(cè)得的孕酮的平均偏倚為6%，小于1/2 允許總誤差12.5%，符合國(guó)家衛(wèi)健委臨檢中心室間質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)相關(guān)要求?？蓤?bào)告范圍驗(yàn)證中，可知斜率a 為0.980，在0.970 ～1.030 范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)r 為0.998，r ≥0.975，表明實(shí)測(cè)值與理論值之間相關(guān)性良好。與單志鳴等得出的a為0.9716，r為0.9998，Y = 0.9716X+0.138 線性關(guān)系研究結(jié)果性能指標(biāo)分析基本一致。參考區(qū)間驗(yàn)證試驗(yàn)中，男性測(cè)得的20 組數(shù)據(jù)均在0.14 ～2.06 ng/mL 范圍內(nèi)，女性卵泡中期測(cè)得的20 組數(shù)據(jù)有18 組落在0.31 ～1.52 ng/mL 范圍內(nèi)；女性黃體中期測(cè)得的20 組數(shù)據(jù)有18 組落在5.16 ～18.56 ng/mL范圍內(nèi)，女性絕經(jīng)期測(cè)得的20 組數(shù)據(jù)有19 組落在＜0.08 ～0.78 ng/mL 范圍內(nèi)，妊娠頭3 個(gè)月測(cè)得的20 組數(shù)據(jù)均在4.73 ～50.74 ng/mL 范圍內(nèi)，妊娠中3 個(gè)月測(cè)得的20 組數(shù)據(jù)有19 組落在19.41 ～45.30 ng/mL 范圍內(nèi)，這與廠家提供的參數(shù)基本一致，能夠滿(mǎn)足質(zhì)量管理體系文件的要求。

綜上所述，通過(guò)對(duì)孕酮項(xiàng)目的精密度、正確度、可報(bào)告范圍、參考區(qū)間各項(xiàng)性能參數(shù)的驗(yàn)證與分析，證實(shí)孕酮項(xiàng)目的檢測(cè)系統(tǒng)性能良好，能夠保證孕酮檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性，更好地為臨床服務(wù)。