矢車菊-3-O-葡萄糖苷及其代謝物原兒茶酸對雜環(huán)胺誘導(dǎo)細(xì)胞損傷的修復(fù)機(jī)制

周 娜，張會敏，潘 飛，艾 欣，趙 磊，王成濤

（北京工商大學(xué)，食品營養(yǎng)與人類健康北京高精尖創(chuàng)新中心，北京市食品添加劑工程技術(shù)研究中心，北京 100048）

花色苷是一種廣泛分布于植物中的天然色素，由花青素和糖分子通過糖苷鍵連接而成?，F(xiàn)已知天然花青素多達(dá)20 種，其中矢車菊素、牽?；ㄉ?、飛燕草素、錦葵色素、天竺葵素和芍藥色素這6 種最為常見。大量研究表明，花色苷具有抗炎、抗癌、預(yù)防糖尿病及改善視力等功效。由于胃環(huán)境的pH值較低，花色苷進(jìn)入人體后，在胃部保持穩(wěn)定，能夠通過胃黏膜，同時以糖苷形式被胃部快速吸收（大約20%～25%）。與胃部相反，腸道pH值接近于中性，花色苷在小腸內(nèi)迅速代謝，并以原型或代謝物（乙醇醛、硫酸鹽和甲基化衍生物）進(jìn)入血液，或分泌到膽汁和尿液中。未被小腸吸收的花色苷進(jìn)入結(jié)腸并發(fā)生實質(zhì)性的結(jié)構(gòu)變化，在生理條件下或在微生物作用下水解為花青素，進(jìn)一步降解為簡單的酚酸，如香草酸、兒茶酸、高香草酸等。矢車菊-3--葡萄糖苷（cyanidin-3-glucoside，C3G）是自然界中最為常見、含量最豐富的花色苷，其在人體內(nèi)的主要代謝產(chǎn)物有原兒茶酸、3-甲基沒食子酸、沒食子酸、丁香酸和2,4,6-三羥基苯等，其中原兒茶酸含量最多。

雜環(huán)胺是肉類中的蛋白質(zhì)經(jīng)高溫加工過程中產(chǎn)生的一種有毒的有機(jī)化合物。根據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)和產(chǎn)生機(jī)制不同，雜環(huán)胺可分為兩大類，即氨基咪唑氮雜芳香烴類和氨基咔啉類，前者是由氨基酸、還原糖和肌酸或者肌酐在300 ℃的高溫下縮聚而成，主要有2-氨基-1-甲基-6-苯基咪唑[4,5-]吡啶（2-amino-1-methyl-6-phenylimidazo[4,5-]pyridine，PhIP）、2-氨基-3-甲基咪唑[4,5-]喹啉（2-amino-3-methylimidazo[4,5-]quinoline，IQ）、2-氨基-3,8-二甲基咪唑[4,5-]喹喔啉（2-amino-3,8-dimethylimidazo[4,5-]quinoxal，MeIQx）等；后者則是由氨基酸和蛋白質(zhì)在300 ℃的高溫下裂解而產(chǎn)生，主要包括3-氨基-1,4-二甲基-5-吡啶并[4,3-]吲哚、3-氨基-1-甲基-5-吡啶并[4,3-]吲哚、2-氨基-9-吡啶并[2,3-]吲哚、2-氨基-3-甲基-9-吡啶并[2,3-]吲哚、2-氨基-6-甲基吡啶[1,2-:3’2’-]咪唑、2-氨基-二吡啶并[1,2-:3’2’-]咪唑等。大量流行病學(xué)調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)，長期攝入雜環(huán)胺會增加直腸癌、肺癌、乳腺癌、肝癌、胃癌等癌癥的病發(fā)率，然而，家庭烹飪卻難以完全避免雜環(huán)胺的產(chǎn)生。在已知的30多種雜環(huán)胺中，PhIP在肉制品熱加工過程中最容易生成、含量最為豐富，IQ被國際癌癥研究中心列為2A級致癌物，致癌作用最強(qiáng)。因此，從食源性物質(zhì)中尋找抑制PhIP和IQ毒性的活性成分具有重要意義。

研究發(fā)現(xiàn)，一些天然多酚、黃酮類物質(zhì)、化學(xué)合成物以及某些新鮮蔬果液等能夠降低雜環(huán)胺的致突變性。Kalemba-Dro?d?等通過彗星實驗發(fā)現(xiàn)富含抗氧化物質(zhì)（多酚、黃酮類、花青素、抗壞血酸）的漿果果汁能顯著降低PhIP引起的氧化應(yīng)激和DNA損傷。Jain等發(fā)現(xiàn)姜黃素可同時抑制PhIP誘導(dǎo)活性氧的生成和DNA加合物的形成，對DNA損傷有積極的改善效果；Akhtar等發(fā)現(xiàn)楊梅素能夠有效地防止癌癥前期單克隆丙種球蛋白病患者和健康人體DNA受到PhIP誘導(dǎo)損傷，這種保護(hù)作用可能歸因于其通過上調(diào)腫瘤抑制基因的水平而發(fā)揮抗腫瘤活性。許多研究表明，C3G與其主要代謝物原兒茶酸（protocatechuic acid，PCA）具有抗氧化、抗炎、抗癌等生物活性。然而，目前鮮見C3G和PCA對PhIP和IQ毒性影響的作用機(jī)制研究。

雜環(huán)胺被消化吸收后，主要通過血液運(yùn)輸至肝臟進(jìn)行代謝。雜環(huán)胺活性代謝物不僅可以與脂質(zhì)和蛋白質(zhì)結(jié)合，導(dǎo)致氧化應(yīng)激、細(xì)胞損傷和生物功能性喪失，還可以與DNA形成雜環(huán)胺-DNA加合物引起遺傳毒性，誘發(fā)細(xì)胞凋亡。細(xì)胞的凋亡受多種基因的調(diào)控，抗凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Bax參與調(diào)控細(xì)胞凋亡。人肝癌HepG2細(xì)胞被廣泛應(yīng)用于遺傳毒理學(xué)等方面的研究，對于研究毒物作用機(jī)制有著重要意義。因此，本研究選用HepG2細(xì)胞，采用IQ和PhIP誘導(dǎo)細(xì)胞損傷，通過測定細(xì)胞存活率、細(xì)胞核形態(tài)和細(xì)胞周期來比較C3G和PCA對雜環(huán)胺損傷細(xì)胞毒性的影響，并測定DNA損傷相關(guān)基因（、、和）和凋亡相關(guān)基因（、、、、、和）的表達(dá)，初步探討其修復(fù)機(jī)制，為雜環(huán)胺所致肝損傷防治和功能食品開發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

人肝癌細(xì)胞系（HepG2細(xì)胞）由中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)細(xì)胞中心提供。

IQ、PhIP 加拿大TRC生物技術(shù)公司；C3G、PCA成都曼斯特生物技術(shù)有限公司；DMEM干粉培養(yǎng)基、青霉素-鏈霉素 美國Gibco公司；胎牛血清以色列Biological Industries公司；胰蛋白酶、細(xì)胞毒性實驗（cell counting kit-8，CCK-8）試劑盒、噻唑藍(lán)試劑、Hoechst33258染色劑 上海碧云天生物技術(shù)有限公司；TRIzol細(xì)胞裂解液 美國Ambion生物技術(shù)公司；反轉(zhuǎn)錄試劑盒、實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（quantitative polymerase chain reaction，qPCR）試劑盒 北京天根生化科技有限公司；其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

HDL超凈工作臺 北京東聯(lián)哈爾儀器制造有限公司；Galaxy 170S恒溫CO細(xì)胞培養(yǎng)箱 德國Eppondorf生物技術(shù)公司；SpectraMaxi3多功能酶標(biāo)儀 美國Molecular Devices公司；ECLIPSE Ti倒置顯微鏡 日本Nikon公司；CFX96Toμch熒光定量PCR儀 美國Bio-Rad公司；BD Calibur流式細(xì)胞分析儀 美國Becton Dickinson公司；TDL-5-A低速臺式離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠。

1.3 方法

1.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)

將HepG2細(xì)胞系用含體積分?jǐn)?shù)10%胎牛血清、100 U/mL青霉素和質(zhì)量濃度100 μg/mL鏈霉素的DMEM培養(yǎng)液于5% CO、37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，使細(xì)胞貼壁生長。

1.3.2 HepG2細(xì)胞存活率的測定

實驗分為對照組（正常培養(yǎng)的細(xì)胞）、IQ單獨(dú)損傷組、PhIP單獨(dú)損傷組、IQ+C3G組、IQ+PCA組、PhIP+C3G組、PhIP+PCA組。將處在對數(shù)生長期的細(xì)胞接種于96 孔板中，利用血球計數(shù)板調(diào)整密度至每孔5×10個/100 μL，5% CO、37 ℃孵育24 h，細(xì)胞全部貼壁后，給予IQ或PhIP（0、62.5、125、250、500 μmol/L）以確定合適的作用濃度，再分別用不同終濃度的C3G和PCA（0、100、200、400、500 μmol/L）進(jìn)行干預(yù)，每組5 個復(fù)孔。孵育48 h后，加入10 μL CCK-8工作液，繼續(xù)培養(yǎng)2 h。用酶標(biāo)儀于570 nm波長處測各孔吸光度。根據(jù)下式計算細(xì)胞存活率。

1.3.3 Hoechst33258染色法觀察細(xì)胞核形態(tài)

將生長狀態(tài)良好的細(xì)胞接種于6 孔培養(yǎng)板中的無菌蓋玻片上，37 ℃、5% CO條件下培養(yǎng)24 h，待細(xì)胞融合至約50%～80%。加入含有不同濃度的雜環(huán)胺培養(yǎng)液（IQ終濃度為250、500、1 000 μmol/L，PhIP終濃度為125、250、500 μmol/L），放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)48 h；用預(yù)冷的乙醇溶液將細(xì)胞固定，于4 ℃過夜；洗凈固定液，加入Hoechst33258染色液避光染色；制作載玻片并隨機(jī)選取10 個非重疊視野置于400 倍的熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞核形態(tài)。

1.3.4 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期

將狀態(tài)良好的細(xì)胞接種于60 mm的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，24 h后加入IQ（500 μmol/L）或PhIP（125 μmol/L），隨后分別加入400 μmol/L C3G或PCA，作用48 h后，加入1 mL 0.25%胰酶消化2～3 min，收集細(xì)胞于15 mL離心管中，1 000 r/min離心10 min，收集細(xì)胞，用4 ℃預(yù)冷的磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）（pH 7.4、0.01 mol/L）清洗細(xì)胞2 次，再用200 μL PBS懸浮細(xì)胞，得到單細(xì)胞懸浮液，于體積分?jǐn)?shù)70%乙醇溶液中4 ℃固定24 h；2 000 r/min離心10 min收集固定后的細(xì)胞，再用4 ℃預(yù)冷的PBS清洗3 次，得到的細(xì)胞用500 μL PBS懸浮得到細(xì)胞懸浮液，加入終質(zhì)量濃度為25 μg/mL的RNaseA，37 ℃水浴40 min；加入26.3 μL質(zhì)量濃度1 mg/mL的碘化丙啶（propidium iodide，PI）冰上避光染色30 min后，流式細(xì)胞儀檢測每組細(xì)胞周期分布情況。

1.3.5 實時熒光qPCR

各組加樣作用48 h后的細(xì)胞經(jīng)胰酶消化后收集于離心管中，用4 ℃預(yù)冷PBS洗滌2 次，離心收集細(xì)胞沉淀。利用Trizol法提取細(xì)胞總mRNA，加入10 μL的焦碳酸二乙酯（diethylpyrocarbonate，DEPC）水溶解RNA，按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書進(jìn)行cDNA合成。反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系：2 μL 10×反轉(zhuǎn)錄緩沖液、1 μL酶混合物、2 μL引物混合物、5 μL雙蒸水，于42 ℃孵育15 min，95 ℃孵育3 min。以三磷酸甘油醛脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，）基因作為內(nèi)參基因，引物序列見表1。

表1 qPCR所用引物序列Table 1 Primer sequences used for qPCR

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

用SPSS Statistic 21軟件進(jìn)行單因素方差分析，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。實驗設(shè)定3～5 個平行組，每個實驗重復(fù)不少于3 次，以＜0.05表示存在顯著性差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 IQ和PhIP對HepG2細(xì)胞存活率和細(xì)胞核形態(tài)的影響

選用不同濃度（0～500 μmol/L）的雜環(huán)胺誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞48 h，CCK-8檢測細(xì)胞存活率，篩選出建立體外細(xì)胞損傷模型的最佳IQ和PhIP誘導(dǎo)濃度。如圖1所示，隨著雜環(huán)胺處理濃度的不斷增大，細(xì)胞的存活率均呈下降趨勢。與對照組相比，IQ濃度為250 μmol/L和500 μmol/L時，細(xì)胞存活率分別下降至81.71%和70.68%；而PhIP濃度僅為62.5 μmol/L時，細(xì)胞存活率就已經(jīng)下降至86.48%，當(dāng)作用濃度增大為500 μmol/L時，細(xì)胞存活率可降至33.31%。當(dāng)細(xì)胞存活率為90%以上時認(rèn)為雜環(huán)胺在該濃度下無細(xì)胞毒性，而當(dāng)細(xì)胞存活率低于60%時，細(xì)胞損傷嚴(yán)重難以恢復(fù)，結(jié)合前期研究報道，本實驗選擇500 μmol/L IQ以及125 μmol/L PhIP用于后續(xù)研究。

圖1 IQ和PhIP對HepG2細(xì)胞存活率的影響Fig. 1 Effects of IQ and PhIP on the survival rate of HepG2 cells

采用Hoechst33258熒光染色法觀察IQ和PhIP作用48 h后HepG2細(xì)胞核形態(tài)的變化。由圖2可看出，對照組細(xì)胞核形態(tài)圓潤清晰，熒光顯色均勻彌散。而經(jīng)過雜環(huán)胺處理的細(xì)胞，細(xì)胞核或者細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)了明亮并且濃密的熒光，說明經(jīng)過藥物處理后的細(xì)胞核發(fā)生明顯變化，呈現(xiàn)核濃縮狀態(tài)，染色質(zhì)遭到破壞發(fā)生形變，即典型的凋亡細(xì)胞核狀態(tài)，同時可看出濃縮細(xì)胞核數(shù)量隨著藥物濃度的增大而增加。

圖2 IQ和PhIP對HepG2細(xì)胞核形態(tài)的影響（400×）Fig. 2 Effects of IQ and PhIP on the nucleus morphology of HepG2 cells (400 ×)

2.2 C3G和PCA對雜環(huán)胺損傷HepG2細(xì)胞存活率的影響

C3G和PCA對雜環(huán)胺損傷細(xì)胞存活率的影響如圖3所示。IQ或PhIP單獨(dú)處理后，HepG2細(xì)胞存活率均顯著降至對照組的60%左右。由圖3A可知，與IQ單獨(dú)損傷組相比，100～500 μmol/L的C3G均能顯著提高細(xì)胞存活率（＜0.05），而PCA僅在500 μmol/L時能夠顯著提高細(xì)胞存活率（＜0.05）。由圖3B可知，與PhIP單獨(dú)損傷組相比，100～500 μmol/L C3G均能顯著提高細(xì)胞存活率（＜0.05），而PCA僅在200 μmol/L和400 μmol/L時能夠顯著提高細(xì)胞存活率（＜0.05）。因此，C3G對雜環(huán)胺損傷HepG2細(xì)胞的保護(hù)作用效果要比PCA更好。

圖3 C3G和PCA對IQ（A）和PhIP（B）損傷HepG2細(xì)胞存活率的影響Fig. 3 Effects of C3G and PCA on the survival rate of HepG2 cells injured by IQ (A) and PhIP (B)

2.3 C3G和PCA對雜環(huán)胺損傷HepG2細(xì)胞周期的影響

為了探究C3G和PCA對雜環(huán)胺誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞增殖能力變化的影響，運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)對細(xì)胞周期的分布情況進(jìn)行了檢測。圖4A～C顯示，與對照組相比，IQ誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞的G0/G1期和S期細(xì)胞比例分別顯著和極顯著下降（＜0.05、＜0.01），而G2/M期細(xì)胞比例極顯著增加（＜0.01），這表明IQ（500 μmol/L）可使HepG2細(xì)胞發(fā)生G2/M期阻滯和DNA損傷，使細(xì)胞產(chǎn)生不利于有絲分裂的信號。與IQ單獨(dú)損傷組相比，C3G和PCA均能夠誘導(dǎo)G0/G1期細(xì)胞比例顯著或極顯著降低（＜0.05、＜0.01），S期細(xì)胞比例升高，說明加入C3G或PCA可使HepG2細(xì)胞發(fā)生明顯的S期阻滯，對DNA損傷有改善效果。

如圖4D～F所示，與對照組相比，PhIP誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞的G0/G1期細(xì)胞比例極顯著升高（＜0.01），S期細(xì)胞比例極顯著下降（＜0.01），而G2/M期細(xì)胞比例未發(fā)生明顯改變。這表明PhIP（125 μmol/L）可使細(xì)胞產(chǎn)生G0/G1期阻滯，無法進(jìn)入S期進(jìn)行DNA的復(fù)制，影響了正常的細(xì)胞周期進(jìn)程，使細(xì)胞修復(fù)損傷或發(fā)生凋亡。與PhIP單獨(dú)損傷組相比，C3G和PCA均能夠誘導(dǎo)G0/G1期細(xì)胞比例顯著或極顯著降低（＜0.05、＜0.01），S期細(xì)胞比例極顯著上升（＜0.01），說明加入C3G或PCA后可促進(jìn)細(xì)胞由G1期進(jìn)入S期，促進(jìn)細(xì)胞體外生長增殖能力，對125 μmol/L PhIP引起的細(xì)胞周期變化有積極改善作用。

圖4 流式細(xì)胞術(shù)檢測C3G和PCA對雜環(huán)胺損傷HepG2細(xì)胞周期的影響Fig. 4 Effects of C3G and PCA on cell cycle of HepG2 cells damaged by heterocyclic aromatic amines

2.4 C3G和PCA對雜環(huán)胺損傷HepG2細(xì)胞的DNA損傷和細(xì)胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)的影響

C3G和PCA對雜環(huán)胺誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞DNA損傷基因mRNA表達(dá)的影響如圖5所示。與對照組相比，IQ顯著提高了4 種DNA損傷相關(guān)基因的表達(dá)量；PhIP顯著提高了和基因的表達(dá)量（＜0.05）。由此說明IQ和PhIP可以通過提高DNA損傷相關(guān)基因的表達(dá)水平從而造成HepG2細(xì)胞的損傷。與IQ單獨(dú)損傷組相比，C3G可顯著降低、和基因的mRNA表達(dá)水平（＜0.05）（圖5A），PCA可顯著降低GADD45α和基因的mRNA表達(dá)水平（＜0.05）（圖5B）。但C3G和PCA對PhIP誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞和基因的mRNA表達(dá)水平無顯著影響（＞0.05）（圖5C、D），說明兩者可能通過其他途徑減輕PhIP對細(xì)胞產(chǎn)生的不利影響。Liu Wei等發(fā)現(xiàn)，和基因和蛋白的表達(dá)水平在紫外照射HepG2細(xì)胞12 h后明顯升高，而經(jīng)過一定濃度的藍(lán)莓花青素干預(yù)后，兩者的表達(dá)量顯著降低，這與本實驗C3G干預(yù)IQ造成DNA損傷后的變化趨勢相同，說明C3G和PCA對IQ造成的DNA損傷有改善作用。但加入PCA和C3G后，基因mRNA表達(dá)水平變化趨勢有明顯差異，其原因仍待查明，推測基因參與多條通路，與其他通路中的作用靶點有關(guān)。

圖5 C3G和PCA對雜環(huán)胺誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞DNA損傷相關(guān)基因mRNA表達(dá)的影響Fig. 5 Effects of C3G and PCA on the mRNA expression of DNA damagerelated genes in HepG2 cells induced by heterocyclic aromatic amines

C3G和PCA對雜環(huán)胺誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡相關(guān)基因mRNA表達(dá)的影響如圖6所示。與對照組相比，經(jīng)IQ和PhIP處理的HepG2細(xì)胞的促凋亡基因、、、的mRNA表達(dá)量顯著提高（＜0.05），PhIP處理的HepG2細(xì)胞的基因表達(dá)量無顯著變化（＞0.05），說明IQ和PhIP能促進(jìn)HepG2細(xì)胞發(fā)生凋亡，IQ和PhIP作用后亦能使抑凋亡基因的mRNA表達(dá)量顯著上調(diào)（＜0.05），這與Pezdirc等報道的250 μmol/L IQ作用HepG2細(xì)胞使基因表達(dá)量顯著下調(diào)，基因表達(dá)量上調(diào)的趨勢不同，其原因仍需進(jìn)一步探究。與IQ單獨(dú)損傷組相比，C3G和PCA顯著降低了促凋亡基因的表達(dá)水平（＜0.05），進(jìn)一步顯著提高了抑凋亡基因和的mRNA表達(dá)水平（＜0.05）（圖6A、B），由此可得出，C3G和PCA可顯著下調(diào)IQ引起的促凋亡基因的過表達(dá)，可以降低IQ誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性和細(xì)胞凋亡。吳實在研究C3G修復(fù)紫外線照射后的細(xì)胞損傷時也發(fā)現(xiàn)，C3G可下調(diào)紫外線氧化損傷后基因的表達(dá)量，上調(diào)基因表達(dá)量，以此實現(xiàn)對損傷細(xì)胞的修復(fù)作用。與PhIP單獨(dú)處理組相比，加入C3G干預(yù)后，促凋亡基因除和基因mRNA表達(dá)水平顯著降低外（＜0.05），其他促凋亡基因、、mRNA表達(dá)水平均顯著升高（＜0.05）（圖6C）；加入PCA干預(yù)后，促凋亡基因、、基因mRNA表達(dá)水平顯著降低（＜0.05），而其他促凋亡基因、基因mRNA表達(dá)水平仍顯著升高（＜0.05）（圖6D）。上述研究表明，C3G和PCA能夠使細(xì)胞凋亡保持在合適的水平，當(dāng)PhIP誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡程度較輕時，可降低細(xì)胞凋亡從而使細(xì)胞恢復(fù)正常狀態(tài)；而當(dāng)PhIP使細(xì)胞凋亡嚴(yán)重至不可修復(fù)時，細(xì)胞繼續(xù)增殖容易誘發(fā)突變，C3G和PCA則促進(jìn)這部分細(xì)胞凋亡，從而減少PhIP誘發(fā)的突變。

圖6 C3G和PCA對雜環(huán)胺誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡相關(guān)基因mRNA表達(dá)的影響Fig. 6 Effects of C3G and PCA on the mRNA expression of apoptosisrelated genes in HepG2 cells induced by heterocyclic aromatic amines

3 結(jié) 論

本實驗通過雜環(huán)胺誘導(dǎo)建立HepG2細(xì)胞肝損傷模型，比較C3G和PCA對雜環(huán)胺損傷細(xì)胞毒性的影響，并初步探討其修復(fù)機(jī)制。結(jié)果表明，IQ和PhIP能顯著降低細(xì)胞存活率并使細(xì)胞核發(fā)生皺縮破壞；C3G和PCA能夠顯著提高雜環(huán)胺損傷細(xì)胞的存活率，并對雜環(huán)胺引起的細(xì)胞周期變化有積極改善作用；C3G和PCA對IQ造成的DNA損傷和細(xì)胞凋亡有改善作用，對PhIP造成的DNA損傷也有一定的修復(fù)效果，但當(dāng)PhIP損傷嚴(yán)重至無法逆轉(zhuǎn)時，C3G和PCA可促進(jìn)細(xì)胞凋亡，降低癌變發(fā)生幾率。與國內(nèi)外現(xiàn)有研究相比，本研究首次系統(tǒng)研究并比較了C3G及其代謝產(chǎn)物PCA對雜環(huán)胺誘導(dǎo)細(xì)胞損傷的修復(fù)作用及潛在作用機(jī)制，同時揭示了C3G可通過母體和代謝物形式共同發(fā)揮其生物活性。本研究可為日常飲食中減輕雜環(huán)胺對人體健康的危害提供理論指導(dǎo)，并促進(jìn)花色苷資源的開發(fā)與應(yīng)用。