柴黃清胰活血顆粒對SAP模型大鼠ET/NO、TXA2/PGI2的影響

蔣亞玲，石容，陳輝，李麗，馮雯，王天剛，陳珊珊通信作者)

(西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院脾胃科，四川 瀘州 646000)

0 引言

急性重癥胰腺炎(acute severe pancreatitis,SAP)是一種由多種因素誘發(fā)、時常伴有局部或全身并發(fā)癥的臨床急危重癥，具有起病急、發(fā)展快、病死率高的特點。據(jù)統(tǒng)計，大約有30%左右的急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)最終可發(fā)展成為SAP[1]。根據(jù)全球醫(yī)學(xué)學(xué)者對急性胰腺炎病癥機(jī)理的深入研究，“腸道菌群移位”“胰酶自身消化”“鈣超載”“細(xì)胞凋亡”“胰腺微循環(huán)障礙”“氧自由基損傷”等研究理論相繼被提出[2-4]。近年來，“胰腺微循環(huán)障礙學(xué)說”備受廣大學(xué)者重視。研究發(fā)現(xiàn)，胰腺微循環(huán)障礙不僅是急性重癥胰腺炎的致病起因，更是在整個急性重癥胰腺炎的發(fā)病中作為持續(xù)性的損傷機(jī)理，使患者病情逐漸惡化[5]。改善SAP患者胰腺微循環(huán)障礙是治療急性重癥胰腺炎的臨床手段。我院周德端教授將急性重癥胰腺炎病機(jī)總結(jié)歸納為脾虛且不運為本，瘀血阻滯、濕熱內(nèi)蘊為標(biāo)。在此基礎(chǔ)上創(chuàng)制了柴黃清胰活血方，后期經(jīng)加工成為院內(nèi)制劑柴黃清胰活血顆粒，該中成藥用于急性重癥胰腺炎的治療，臨床療效甚為顯著。本研究基于前期研究成果上，通過搭建急性重癥胰腺炎大鼠模型，其中治療組采用0.2g/mL的柴黃清胰活血顆粒藥物進(jìn)行干預(yù)，于12h、24h分別檢測血液流變學(xué)變化，ET、NO、PGI2、TXA2在胰腺中的含量及比值的變化，從而深入研究柴黃清胰活血顆粒對急性重癥胰腺炎模型大鼠胰腺微循環(huán)障礙影響。因?qū)嶒炦^程中TXA2、PGI2會迅速降解，不易被試劑檢出，故通常檢測TXA2、PGI2穩(wěn)定代謝產(chǎn)物血栓素B2(thromboxane B2,TXB2)、6酮前列腺素FIα(6-keto-prostaglandin1α, 6-keto-PGF1α)來間接反應(yīng)二者的水平。

1 材料與方法

1.1 主要藥物及試劑

柴黃清胰活血顆粒：其處方為：赤芍、黃芩、丹參、生大黃、延胡索、桃仁等。由本院制劑室提供。前期研究證實：柴黃清胰活血顆粒治療SAP臨床效果呈劑量依賴性，高劑量(0.2g/100g)療效更好[6]。故本實驗直接用0.2g/100g劑量進(jìn)行干預(yù)。采用九十?dāng)z氏度的蒸餾水與顆粒溶解后配制成0.2g/mL濃度的藥備用。

1.2 方法

選取雄性小鼠48只，體重波動于(250±20)g， 通過電腦隨機(jī)數(shù)字表將48只大鼠隨機(jī)分為：假手術(shù)組(A組)，SAP模型組(B組)，顆粒治療組(C組)。采用3.5%?；悄懰徕c制作SAP大鼠模型[6]。于12小時、24小時分別處死各組大鼠8只。腹主動脈取血并提取胰腺組織。使用生化分析儀檢測血液變化；利用ELISA法全面檢測胰腺組織NO、TXB2、ET、6-keto-PGF1α含量。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 血液流變學(xué)變化

在相同時間點，B、C組各切變率下的血漿粘度、全血粘度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)較A組明顯升高(P<0.05)，C組較B組上述指標(biāo)總體下降(P<0.05)。其中干預(yù)24h后，C組較B組血漿粘度值差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。12h、24hC組較B組紅細(xì)胞聚集指數(shù)亦下降，但P>0.05的對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表1。

表1 血液流變學(xué)測定(±s)

表1 血液流變學(xué)測定(±s)

注*：A、B、C組對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.05；#：B、C組對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.05；?：C組與B組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，P >0.05。

組別 時點 全血粘度 血漿粘度 紅細(xì)胞聚集指數(shù)低切 中切 高切A組 12h 6.67±0.27 5.72±0.28 4.44±0.12 1.30±0.02 7.60±0.15 24h 4.77±0.28 5.80±0.33 4.50±0.13 1.21±0.12 7.78±0.22 B組 12h 7.25±0.25* 6.60±0.54* 4.96±0.18* 1.43±0.07* 8.29±0.24*24h 7.40±0.27* 6.95±0.22* 5.12±0.18* 1.51±0.11* 8.42±0.26*C組 12h 6.99±0.13*# 6.16±0.24*# 4.74±0.17*# 1.35±0.04*# 8.13±0.12*?24h 7.15±0.11*# 6.64±0.14*# 4.96±0.13*# 1.43±0.09*? 8.27±0.04*?

2.2 胰腺組織NO、ET含量及ET/NO比值(簡稱E/N)變化

2.2.1 胰腺組織NO含量

與A組比較，B、C組NO含量均顯著增加(P<0.05)；C組與B組比較，C組NO含量較B組明顯下降(P<0.05)，見表2。

表2 各組大鼠胰腺組織12h、24h NO含量 (μmmol/L,±s)

表2 各組大鼠胰腺組織12h、24h NO含量 (μmmol/L,±s)

注*：A、B、C組對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.05；#：B、C組對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.05。

組別 12h 24h A組 21.30±3.32 19.8±3.14 B組 44.55±7.05* 43.20±5.65*C組 31.51±3.215*# 36.00±2.25*#F值 45.917 73.528 P值 <0.001 <0.001

2.2.2 胰腺組織ET含量

B組和C組相同時間點ET值相對于A組均呈現(xiàn)明顯增加(P<0.05)，C組ET值相對于B組的相應(yīng)時間點呈現(xiàn)明顯下降(P<0.05)，見表3。

表3 各組大鼠胰腺組織12h、24h ET含量(μmmol/L,±s)

表3 各組大鼠胰腺組織12h、24h ET含量(μmmol/L,±s)

注*：A、B、C組對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.05；#：B、C組對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.05。

組別 12h 24h A組 60.00±6.55 58.26±6.44 B組 178.30±10.39* 176.39±11.91*C組 108.90±10.37*# 137.26±12.38*#F值 328.277 258.266 P值 <0.001 <0.001

2.2.3 E/N比值的變化

B、C組E/N比值較A組相同時間點均顯著升高(P<0.05)，C組E/N比值較B組相同時間點明顯下降(P<0.05)，見表4。

表4 各組大鼠12h、24h E/N比值的變化(±s)

表4 各組大鼠12h、24h E/N比值的變化(±s)

注*：A、B、C組對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.05；#： B、C組對比比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.05。

組別 12h 24h A組 2.75±0.19 3.00±0.51 B組 3.87±0.38* 4.28±0.18*C組 3.35±0.51*# 3.91±0.13*#F值 16.967 3.787 P值 <0.05 <0.001

2.3 胰腺組織TXB2、6-keto-PGF1α含量及TXB2/6-keto-PGF1α比值(簡稱T/P比值)的變化

2.3.1 胰腺組織TXB2含量

B、C組TXB2含量較A組明顯升高(P<0.05)，C組TXB2含量較B組相同時間點降低(P<0.05)。見表6。

表6 大鼠各組胰腺組織12h、24hTXB2含量(pg/mL,±s)

表6 大鼠各組胰腺組織12h、24hTXB2含量(pg/mL,±s)

注：*：A、B、C組對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.05；#： B、C組對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

組別 12h 24h A組 284.20±18.87 285.10±16.68 B組 635.92±17.08* 899.21±37.41*C組 440.78±18.47*# 563.46±25.84*#F值 619.953 967.807 P值 <0.001 <0.001

2.3.2 胰腺組織6-keto-PGF1α含量

相同時間點，B組及C組6-keto-PGF1α含量較A組升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，C組6-keto-PGF1α含量較B組明顯下降，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表5。

表5 各組大鼠胰腺組織12h、24h6-keto-PGF1α含量(pg/mL,±s)

表5 各組大鼠胰腺組織12h、24h6-keto-PGF1α含量(pg/mL,±s)

注*：A、B、C組對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.05；#： B、C組對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.05。

組別 12h 24h A組 236.93±37.71 268.74±18.76 B組 309.93±17.29* 356.78±29.98*C組 281.54±16.02*# 296.07±25.39*#F值 24.457 26.430 P值 <0.001 <0.001

2.3.3 T/P比值的變化

B組、C組T/P比值較A組升高(P<0.05)，C組相同時間點T/P比值較B組下降(P<0.05)，見表7。

表7 各組大鼠胰腺組織12h、24h T/P比值(±s)

表7 各組大鼠胰腺組織12h、24h T/P比值(±s)

注*：A、B、C組對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.05；#：B、C組對比比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.05。

組別 12h 24h A組 1.05±0.05 1.07±0.01 B組 2.17±0.27* 2.53±0.19*C組 1.64±0.13*# 1.91±0.13*#F值 80.969 202.155 P值 <0.05 <0.05

3 討論

近年來，胰腺微循環(huán)障礙理論逐漸被廣大學(xué)者認(rèn)為是急性重癥胰腺炎的重要致病機(jī)理之一。因此，采用中西醫(yī)結(jié)合方式改善胰腺微循環(huán)障礙已成為SAP的重要治療方案。SAP時胰腺組織受缺血缺氧刺激，胰腺小動脈括約肌發(fā)生痙攣，大量炎性介質(zhì)產(chǎn)生并釋放入血，進(jìn)一步破壞內(nèi)皮完整性，內(nèi)皮破壞后可促使內(nèi)皮細(xì)胞分泌如TXA2、PGI2、NO、ET等血管活性物質(zhì)[7]。NO、ET是一對重要的血管活性物質(zhì)，具有雙向調(diào)節(jié)血管張力的作用。其中，ET為現(xiàn)在人們知曉的最厲害的血管收縮肽，幾乎可以收縮所有的動靜脈[8]。重癥急性胰腺炎發(fā)生時會使ET引發(fā)釋放，從而導(dǎo)致胰腺的微血管進(jìn)行收縮，從而加重組織缺氧、缺血。NO是一種強力效果的血管舒張劑，SAP時因炎癥的影響，巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等會產(chǎn)生NO，NO主要拮抗ET的發(fā)揮作用[9]。研究表明，ET/NO比值不平衡在胰腺微循環(huán)障礙的作用往往比NO、ET值變化更為重要[10]。除NO、ET外，PGI2、TXA2也是現(xiàn)在使用頻繁的活性血管物質(zhì)。體循環(huán)出現(xiàn)缺血缺氧時，在凝血酶、環(huán)氧合酶作用下，機(jī)體產(chǎn)生大量的PGI2、TXA2，共同進(jìn)行胰腺微循環(huán)障礙調(diào)節(jié)[11-12]。SAP時，TXA2的作用，致血小板變形、聚集，從而引發(fā)凝血功能障礙，造成胰腺組織缺氧缺血加重[13]。PGI2是一種血管舒張劑，能拮抗TXA2的縮血管作用。研究表明，純粹的抑制TXA2合成不會明顯提高SAP患者生存時間，下調(diào)血漿或組織中的TXA2/PGI2的比值對于治療SAP顯得更為重要[14-15]。

傳統(tǒng)的中國醫(yī)藥學(xué)中把“急性重癥胰腺炎”病癥列入“腹痛”“脾心痛”等范疇。其病機(jī)主要為濕熱、氣滯、血瘀。其中，血瘀是濕熱、氣滯、毒結(jié)發(fā)展的必然結(jié)果，與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)微循環(huán)障礙學(xué)說類似。近年來，中醫(yī)中藥已成為SAP治療方案中的重要組成部分，發(fā)揮著舉足輕重的作用。前期研究表明，柴黃清胰活血顆粒作為處方診治重癥急性胰腺炎臨床效果明顯，能改善患者腹痛、腹脹等癥狀體征，縮短患者住院天數(shù)，提高急性重癥胰腺炎患者的臨床療效[16]。柴黃清胰活血顆粒組方中大部分藥物均有活血化瘀的作用，因此推測它的機(jī)理與改善微循環(huán)障礙有聯(lián)系。

本實驗研究結(jié)果表明，B、C兩組各切變率下的全血粘度值、血漿粘度值及紅細(xì)胞聚集指數(shù)均高于A組，提示SAP大鼠存在血液流變學(xué)改變；與B組比較，C組不同切變率下的全血粘度、血漿粘度均顯著下降，表明柴黃清胰活血顆粒能明顯改變急性重癥胰腺炎模型大鼠循環(huán)障礙。實驗中發(fā)現(xiàn)：B、C組ET/NO、TXA2/PGI2比值均較A組明顯升高；C組ET/NO、TXA2/PGI2比值明顯低于B組，且C組比值逐漸趨于正常比值。表明柴黃清胰活血顆?？赡芾谜{(diào)整ET/NO、TXA2/PGI2比值，改變血液流變學(xué)變化，最終改變SAP微循環(huán)障礙，這是其診治重癥急性胰腺炎的重要機(jī)理。