老年急性腦梗死患者血清Pannexin1和sTREM-1表達(dá)水平及其與病情和預(yù)后的相關(guān)性研究

王 淼，玄洪雷

（遼陽(yáng)市中心醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，遼寧遼陽(yáng) 111000）

急性腦梗死（acute cerebral infarction）是臨床常見(jiàn)的急危重癥，多發(fā)于年齡較大的中老年人群，患者腦部血供因血栓形成而出現(xiàn)中斷或血流量驟減，進(jìn)而導(dǎo)致相應(yīng)區(qū)域的腦組織出現(xiàn)缺血、缺氧性壞死，若血供未能及時(shí)恢復(fù)，可導(dǎo)致永久性神經(jīng)功能損傷以及死亡[1]。目前卒中已成為我國(guó)最主要的疾病死亡原因，據(jù)統(tǒng)計(jì)我國(guó)每年約有200 多萬(wàn)例卒中新增病例[2]，其中急性腦梗死病例約占70%，且隨著近年來(lái)我國(guó)社會(huì)結(jié)構(gòu)趨于老齡化，卒中的發(fā)病率呈升高的趨勢(shì)，如何有效評(píng)估病情、改善患者的預(yù)后已成為我國(guó)醫(yī)療領(lǐng)域亟需攻克的難題[3]。泛連接蛋白1(Pannexin1)是跨膜通道蛋白家族成員之一，其大量表達(dá)于脊椎動(dòng)物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，近年來(lái)的研究顯示Pannexin1 在急性腦梗死中發(fā)揮著重要的促進(jìn)作用，敲除和阻斷Pannexin1 通道可有效抑制疾病的發(fā)展[4-5]?？扇苄运柘导?xì)胞觸發(fā)受體

1（soluble triggering receptors expressed on myeloid

cells-1，sTREM-1）是一種對(duì)炎癥以及感染較為敏感的細(xì)胞因子，常作為膿毒癥的預(yù)后評(píng)估指標(biāo)[6]，且其與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[7]。目前較少血清Pannexin1，sTREM-1 與急性腦梗死的相關(guān)的臨床研究，二者在急性腦梗死中的臨床價(jià)值尚不十分清楚。本研究旨在探討血清Pannexin1 和sTREM-1 在老年急性腦梗死中的表達(dá)及其與病情、預(yù)后的關(guān)系，以期為臨床評(píng)估患者病情以及預(yù)測(cè)預(yù)后提供新的思路。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2019年6月～2020年8月期間在遼陽(yáng)市中心醫(yī)院接受治療的老年急性腦梗死患者126 例作為腦梗死組，其中男性74 例，女性52 例，年齡66.85±4.74 歲，體重指數(shù)22.15±1.52kg/m2，吸煙史：54 例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均被臨床診斷為急性腦梗死，相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)參考《中國(guó)急性缺血性腦卒中診治指南2018》[8]；②發(fā)病12 h 內(nèi)入院接受治療；③均為首次發(fā)病，臨床資料完全且有完整的隨訪(fǎng)資料；④年齡超過(guò)60 歲；⑤患者及其家屬對(duì)本次研究?jī)?nèi)容均知情，且簽署了知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①并發(fā)腦出血、顱腦損傷等其他腦部疾?。虎诓l(fā)有心肌梗死、心力衰竭等疾?。虎鄄l(fā)有惡性腫瘤、自身免疫性疾病、血液系統(tǒng)疾?。虎苋朐呵? 個(gè)月內(nèi)有過(guò)大型外科手術(shù)者；⑤并發(fā)有嚴(yán)重感染；⑥入院1 周內(nèi)死亡者；⑦隨訪(fǎng)期間因疾病以外的原因死亡者。另選取同期在我院體檢的健康志愿者50 例作為健康對(duì)照組，各項(xiàng)體檢指標(biāo)均正常，無(wú)心腦血管疾病史。男性30 例，女性20 例，年齡65.48±3.65歲，體重指數(shù)22.24±1.38kg/m2，吸煙史：18 例。腦梗死組和健康對(duì)照組的性別、年齡、體重指數(shù)、吸煙史等資料比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。本次研究通過(guò)了我院倫理委員會(huì)的審批（倫審201905002）。

1.2 儀器與試劑 全自動(dòng)酶標(biāo)儀（美國(guó)的BioTek，Elx808）；Pannexin1，sTREM-1 試劑盒（南京建成生物工程研究所）。

1.3 方法 入院時(shí)統(tǒng)計(jì)所有老年急性腦梗死患者的美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院卒中量表（national institute of health stroke scale，NIHSS），評(píng)估患者的神經(jīng)功能缺損程度，并根據(jù)NIHSS 得分進(jìn)行分組，其中NIHSS 得分＜5 分納入到輕度組，5 分≤NIHSS 得分≤15 分納入到中度組，NIHSS 得分＞15 分納入到重度組。采用電話(huà)隨訪(fǎng)和門(mén)診復(fù)查的形式進(jìn)行隨訪(fǎng)，統(tǒng)計(jì)患者6 個(gè)月后的改良Rankin 評(píng)分（modified rankin scale，mRS），評(píng)估患者的遠(yuǎn)期預(yù)后情況，將mRS 得分≤2 分納入到預(yù)后良好組，mRS 得分＞2 分納入到預(yù)后不良組。

收集所有研究對(duì)象的一般資料，主要包括性別、年齡、體重指數(shù)、吸煙史等。在患者入院時(shí)以及健康對(duì)照組體檢時(shí)抽取其靜脈血5ml，在室溫下靜置1h 后以3 000r/min 離心10min，提取上層血清，采用酶聯(lián)免疫試劑盒檢測(cè)血清Pannexin1，sTREM1的表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS22.0 軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料均符合正態(tài)分布，分別以均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）、率[n(%)]的形式表示計(jì)量資料和計(jì)數(shù)資料，計(jì)量資料之間的差異采用單因素方差分析或t檢驗(yàn)進(jìn)行比較，計(jì)數(shù)資料之間的差異采用卡方檢驗(yàn)進(jìn)行比較，采用受試者操作特征曲線(xiàn)（Receiver operating characteristic curves，ROC） 分析血清Pannexin1，sTREM-1 對(duì)急性腦梗死患者預(yù)后不良的預(yù)測(cè)價(jià)值。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 腦梗死組和健康對(duì)照組的血清Pannexin1，sTREM-1 比較 腦梗死組的血清Pannexin1（4.52±2.36mg/ml），sTREM-1（25.89±7.62pg/ml）水平高于健康對(duì)照組（2.61±0.98mg/ml，11.52±5.38pg/ml），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=5.529，12.175，均P= 0.000）。

2.2 不同病情嚴(yán)重程度的患者一般資料以及血清Pannexin1，sTREM-1 比較 見(jiàn)表1。三組患者的性別、年齡、體重指數(shù)、吸煙史等資料整體比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）；三組患者的血清Pannexin1，sTREM-1 水平整體比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）；重度組的血清Pannexin1，sTREM-1 水平高于中度組（LSDt=2.402, 2.934, 均P＜0.05）和輕度組（LSDt= 5.069,5.526, 均P＜0.05），中度組的血清Pannexin1，sTREM-1 水平高于輕度組（LSDt= 3.084, 3.041, 均P＜0.05），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 不同病情嚴(yán)重程度的患者一般資料以及血清Pannexin1，sTREM-1 比較[±s，n(%)]

表1 不同病情嚴(yán)重程度的患者一般資料以及血清Pannexin1，sTREM-1 比較[±s，n(%)]

項(xiàng)目輕度組（n=38）中度組（n=52）重度組（n=36）F 值P 值性別（男/女）20/1832/2022/140.8370.658年齡（歲）65.59±4.5467.22±4.8167.65±5.041.9930.141體重指數(shù)（kg/m2）22.08±1.5122.24±1.6222.09±1.430.0650.937吸煙史[n(%)]14（36.84）24（46.15）16（44.44）0.8290.661 Pannexin1（mg/ml）3.28±1.264.62±2.155.68±2.4812.9560.000 sTREM-1（pg/ml ）20.87±6.5826.02±8.0131.00±8.8215.2750.000

2.3 不同預(yù)后情況的患者一般資料以及血清Pannexin1，sTREM-1 比較 見(jiàn)表2。預(yù)后良好組和預(yù)后不良組的性別、年齡、體重指數(shù)、吸煙史等資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）；預(yù)后不良組的血清Pannexin1，sTREM1 水平高于預(yù)后良好組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。

表2 不同預(yù)后情況的患者一般資料以及

2.4 血清Pannexin1，sTREM-1 對(duì)老年急性腦梗死患者預(yù)后不良的預(yù)測(cè)價(jià)值分析 見(jiàn)表3。ROC曲線(xiàn)見(jiàn)圖1。將預(yù)后良好組和預(yù)后不良組的血清Pannexin1，sTREM1 數(shù)據(jù)整理到SPSS 軟件，采用ROC 分析二者對(duì)急性腦梗死患者預(yù)后不良的預(yù)測(cè)價(jià)值。結(jié)果顯示，血清Pannexin1，sTREM-1 預(yù)測(cè)急性腦梗死患者預(yù)后不良的ROC 曲線(xiàn)下面積分別為0.767，0.811，sTREM-1 的預(yù)測(cè)價(jià)值略高于Pannexin1。二者聯(lián)合采用可提高敏感度的并聯(lián)診斷模式，結(jié)果顯示二者聯(lián)合后敏感度為90.48%，較單一指標(biāo)的敏感度有了大幅度提高，且約登指數(shù)也提高至0.619。

3 討論

急性腦梗死是心腦血管疾病中致死率、致殘率較高的危急重癥，患者在發(fā)病3 個(gè)月內(nèi)的病死率為9%～9.6%，而致殘率更是高達(dá)34.5%～37.1%[9-10]，且部分存活下來(lái)的急性腦梗死患者會(huì)遺留神經(jīng)功能損傷，生活自理能力較低，給社會(huì)及其家庭均帶來(lái)沉重的醫(yī)療負(fù)擔(dān)。若能在疾病早期對(duì)其進(jìn)行有效的病情評(píng)估、危險(xiǎn)分層，則可在初期對(duì)高危人群制定好有效的干預(yù)措施，進(jìn)而有效改善患者的預(yù)后。近年來(lái)生物標(biāo)志物在各種疾病的病情及預(yù)后的評(píng)估中扮演著重要的角色，尤其是血清生物標(biāo)志物，因具有取樣方便、便于檢測(cè)、可重復(fù)性高等特點(diǎn)而被廣泛研究[11]。本研究的主要目的便是發(fā)現(xiàn)可評(píng)估老年急性腦梗死患者病情和預(yù)后的血清生物標(biāo)志物。

表3 血清Pannexin1，sTREM-1 對(duì)老年急性腦梗死患者預(yù)后不良的預(yù)測(cè)價(jià)值分析

Pannexin 蛋白家族共有Pannexin1，Pannexin2，Pannexin3 三個(gè)成員，其中Pannexin1 的研究較為廣泛，其可形成非選擇性的、大電導(dǎo)的半通道，該通道在開(kāi)放的狀態(tài)下可導(dǎo)致離子和大分子物質(zhì)跨膜流動(dòng)，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞功能發(fā)生改變[12]。近年來(lái)有研究顯示[13]，Pannexin1 可加重急性腦梗死小鼠的梗死體積，而在內(nèi)皮細(xì)胞Pannexin1 缺失的情況下，小鼠的腦梗死體積明顯減少。此外還有實(shí)驗(yàn)證明[14]，Pannexin1 抑制劑對(duì)短暫性局灶性腦缺血損傷具有保護(hù)作用，可有效減輕神經(jīng)功能損傷。本研究結(jié)果顯示，腦梗死組的血清Pannexin1 水平較健康對(duì)照組異常升高，且血清Pannexin1 水平隨著患者的病情嚴(yán)重程度增加而增加，并與患者的預(yù)后密切相關(guān)，這提示Pannexin1 可能參與了疾病的發(fā)生、發(fā)展。Pannexin1 可能是通過(guò)以下幾點(diǎn)機(jī)制影響疾病的進(jìn)展[15]：①Pannexin1 通道開(kāi)放后可導(dǎo)致大量三磷酸腺苷（adenosine triphosphate，ATP）被釋放，而ATP 與嘌呤受體P2X7 介導(dǎo)的興奮性毒性是急性腦梗死患者腦損傷的重要機(jī)制，因此Pannexin1 可能通過(guò)促進(jìn)ATP 的釋放加重患者的腦損傷；②Pannexin1 可介導(dǎo)NLRP3 炎癥小體的活化，進(jìn)而促進(jìn)其大量下游炎癥因子的分泌，加重腦組織的炎癥性損傷。劉美霞等[16]人的研究亦顯示Pannexin1 與腦梗死患者的腦梗死體積以及預(yù)后有關(guān)，與本研究結(jié)果具有一致性。

圖1 血清Pannexin1，sTREM-1 預(yù)測(cè)老年急性腦梗死患者預(yù)后不良的ROC 曲線(xiàn)

sTREM-1 是髓系細(xì)胞觸發(fā)受體1（TREM-1）的可溶性形式，當(dāng)機(jī)體存在明顯的炎癥反應(yīng)時(shí)sTREM-1 可被釋放入血，血液中sTREM1 的水平可較好地反映TREM-1 的表達(dá)情況[17]。本研究結(jié)果顯示，與健康對(duì)照組相比，急性腦梗死患者血清sTREM-1 水平明顯升高，這可能是因?yàn)榛颊叽嬖诿黠@的炎癥反應(yīng)，進(jìn)而導(dǎo)致血清sTREM-1 異常升高。此外，本研究還顯示，隨著病情的加重血清sTREM-1 水平也逐漸升高，且預(yù)后不良組的血清sTREM-1 水平高于預(yù)后良好組，這提示血清sTREM1 的表達(dá)與急性腦梗死患者的病情嚴(yán)重程度和預(yù)后有關(guān)。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)[18-19]，腦缺血損傷可導(dǎo)致小膠質(zhì)細(xì)胞中TREM-1 表達(dá)上調(diào)，而在采用TREM-1 抑制劑降低其表達(dá)的模型大鼠中腦損傷程度明顯減輕，抑制TREM-1 的表達(dá)可減少活性氧、丙二醛、NLRP3 炎癥小體的表達(dá)，提示TREM-1可能是通過(guò)介導(dǎo)氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)來(lái)參與急性腦梗死的發(fā)生、發(fā)展。急性腦梗死患者預(yù)后不良多和再發(fā)缺血事件有關(guān)，而斑塊破裂導(dǎo)致的血栓形成是缺血事件的重要病理基礎(chǔ)[20]。TREM-1 可促進(jìn)炎癥反應(yīng)，加速動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)展，促進(jìn)斑塊的形成[21]，且其還可通過(guò)促進(jìn)基質(zhì)金屬蛋白酶的分泌加速斑塊纖維帽的降解，促進(jìn)斑塊的破裂[22]，進(jìn)而增加缺血事件的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。由此可見(jiàn)促進(jìn)血栓形成也可能是TREM-1 影響急性腦梗死患者預(yù)后的重要機(jī)制之一，而血清中sTREM-1 的水平可較好地反映機(jī)體TREM-1 的表達(dá)情況，因此通過(guò)檢測(cè)血清sTREM-1的表達(dá)可預(yù)測(cè)急性腦梗死患者的病情以及預(yù)后。以上分析可知，血清Pannexin1，sTREM-1 的表達(dá)均可在一定程度上反映急性腦梗死患者病情和預(yù)后情況，具備作為血清生物標(biāo)志物的潛力。本研究進(jìn)一步采用ROC 曲線(xiàn)分析血清Pannexin1，sTREM-1 對(duì)急性腦梗死患者預(yù)后不良的預(yù)測(cè)價(jià)值，結(jié)果顯示二者ROC 曲線(xiàn)下面積分別為0.767，0.811，sTREM-1的預(yù)測(cè)價(jià)值略高于Pannexin1，且二者聯(lián)合應(yīng)用可進(jìn)一步提升預(yù)測(cè)價(jià)值。

綜上所述，血清Pannexin1，sTREM-1 的表達(dá)水平與老年急性腦梗死患者的病情嚴(yán)重程度以及預(yù)后密切相關(guān)，二者聯(lián)合對(duì)患者的預(yù)后有較高的預(yù)測(cè)價(jià)值。Pannexin1，sTREM-1 均有作為老年急性腦梗死血清生物標(biāo)志物的潛力，具有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值。然而本研究的病例數(shù)較少，二者評(píng)估患者預(yù)后不良的最佳截?cái)嘀颠€有待大型研究進(jìn)行驗(yàn)證。