乙型肝炎病毒相關(guān)原發(fā)性肝癌患者血清B7-H2、白細(xì)胞介素6 水平及其與預(yù)后相關(guān)性研究

陳冰燕，徐繪婷，丁翔宇，陳海燕，陳櫞

南通市腫瘤醫(yī)院 1.檢驗科；4.普外科，江蘇 南通 226300 ；2.南通市海門區(qū)人民醫(yī)院 檢驗科，江蘇 南通 226300 ；3.南通市港閘區(qū)陳橋街道社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心 預(yù)防保健部，江蘇 南通 226300

原發(fā)性肝癌（primary liver cancer，PLC）是指肝細(xì)胞或肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞發(fā)生的惡性腫瘤，在我國發(fā)病率和病死率較高，其發(fā)病與乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）、丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）感染、飲酒、遺傳等多種因素有關(guān)，其中，HBV 持續(xù)性感染是引起PLC 發(fā)生較主要的原因［1-2］。PLC 早期臨床癥狀隱匿，一經(jīng)發(fā)現(xiàn)病情可能已經(jīng)發(fā)展為中晚期，因此很難得到及時有效的治療，患者預(yù)后較差［3］。B7-H2 是近年來發(fā)現(xiàn)的正性共刺激因子，其主要由淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞分泌，能夠抑制腫瘤免疫反應(yīng)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和分化［4-5］。白細(xì)胞介素6（interleukin-6，IL-6）是趨化因子家族成員，主要由巨噬細(xì)胞等免疫細(xì)胞分泌，與機體的炎性反應(yīng)存在密切關(guān)系［6］。有研究發(fā)現(xiàn)，IL-6通過參與機體的免疫調(diào)節(jié)通路，影響惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展［7］。本研究旨在探討HBV 相關(guān)PLC 患者血清B7-H2 和IL-6 水平及其與預(yù)后的相關(guān)性?，F(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取自2017 年2 月至2019 年2 月收治的97 例HBV 相關(guān)PLC 患者納入PLC 組。男性54 例，女性43 例；年齡范圍35～70 歲，年齡（49.73±10.19）歲。符合原發(fā)性肝癌診療規(guī)范（2019 年版）診斷標(biāo)準(zhǔn)［8］，均接受經(jīng)導(dǎo)管肝動脈化療栓塞術(shù)治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并藥物性肝損傷、丙型肝炎；（2）合并其他器質(zhì)性疾??；（3）合并其他惡性腫瘤。另選同期體檢的30 例健康人納入健康組，男性17 例，女性13 例；年齡范圍35～70 歲，年齡（49.14±10.17）歲。兩組性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。本研究已獲醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。所有受試者知情同意。

1.2 血清B7-H2 和IL-6 水平檢測 采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清B7-H2、IL-6 水平。采集受試者空腹外周靜脈血10 ml，靜置30 min，3 500 r/m 離心10 min，取上清液，放置于-80℃冰箱內(nèi)保存待測。

1.3 隨訪 HBV 相關(guān)PLC 患者出院后隨訪3 年，通過電話、門診復(fù)查等方式詢問患者的生存情況，隨訪截止時間為2022 年1 月。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 24.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，組間比較采用t 檢驗；計數(shù)資料以例（百分率）表示，組間比較采用χ2檢驗。采用Spearman 相關(guān)分析探討血清B7-H2、IL-6 與臨床分期的關(guān)系，Pearson 積差相關(guān)分析探討血清B7-H2、IL-6 與甲胎蛋白（alpha-fetoprotein，AFP）、HBV DNA 的關(guān)系；采用受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線及曲線下面積（area under curve，AUC）檢測血清B7-H2、IL-6 對HBV 相關(guān)PLC 患者預(yù)后的評估價值；采用多因素Cox 回歸分析影響HBV 相關(guān)PLC 預(yù)后的危險因素。以P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組受試者血清B7-H2、IL-6 水平比較 PLC 組血清B7-H2、IL-6水平高于健康組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

表1 兩組受試者血清B7-H2、IL-6 水平比較（）

表1 兩組受試者血清B7-H2、IL-6 水平比較（）

2.2 不同特 征HBV相關(guān)PLC 患者血清B7-H2、IL-6 水平比較 不同性別、年齡、分化程度、腫瘤直徑HBV 相關(guān)PLC 患者血清B7-H2、IL-6 水平比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；不同臨床分期、AFP、HBV DNA 水平的HBV 相關(guān)PLC 患者血清B7-H2、IL-6 水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），且Ⅲ～ Ⅳ期、AFP ≥400 ng/ml HBV 相關(guān)PLC患者血清B7-H2、IL-6 水平均高于Ⅰ～ Ⅱ期和AFP<400 ng/ml患者，HBV DNA 陽性HBV 相關(guān)PLC 患者血清B7-H2、IL-6水平高于HBV DNA 陰性患者。見表2。

表2 不同特征HBV 相關(guān)PLC 患者血清B7-H2、IL-6 水平比較（）

表2 不同特征HBV 相關(guān)PLC 患者血清B7-H2、IL-6 水平比較（）

2.3 血清B7-H2、IL-6 與臨床分期、AFP、HBV DNA 相關(guān)分析 血清B7-H2、IL-6 與HBV DNA 無相關(guān)性（P>0.05）；血清B7-H2 與臨床分期、AFP 呈正相關(guān)（r=0.582、0.431，P<0.001）；血清IL-6 與臨床分期、AFP 呈正相關(guān)（r=0.426、0.517，P<0.001）。

2.4 血清B7-H2、IL-6 對HBV相關(guān)PLC 的ROC 曲線預(yù)測價值 ROC 曲線分析顯示，血清B7-H2、IL-6 預(yù)測HBV相關(guān)PLC 的AUC 為0.806（95% 可信區(qū)間0.754～0.885）、0.824（95% 可信區(qū)間0.774～0.873），截斷值為23.4 ng/ml、94.8 pg/ml，特異度為78.2%、79.3%，敏感度為84.3%、85.7%；二者聯(lián)合檢測的AUC 為0.887（95% 可信區(qū)間0.836～0.938），特異度為86.3%，敏感度為81.3%。見圖1。

圖1 血清B7-H2、IL-6預(yù)測HBV相關(guān)PLC的ROC曲線

2.5 HBV 相關(guān)PLC 患者的預(yù)后情況及影響患者預(yù)后的單因素分析 97 例HBV 相關(guān)PLC 患者連續(xù)隨訪3 年，隨訪終止共47 例存活，存活率為48.5%（47/97）。單因素分析結(jié)果顯示，不同腫瘤直徑、AFP、HBV DNA 的HBV 相關(guān)PLC患者3 年存活率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；高分化、臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期、B7-H2<23.4 ng/ml、IL-6<94.8 pg/ml的HBV 相關(guān)PLC 患者3 年存活率明顯高于低分化、臨床分期為Ⅲ～ Ⅳ期、B7-H2 ≥23.4 ng/ml、IL-6 ≥94.8 pg/ml患者（P<0.05）。見表4。

表4 HBV 相關(guān)PLC 患者預(yù)后影響因素的單因素分析/例（百分率/%）

2.6 影響HBV 相關(guān)PLC 患者預(yù)后的多因素Cox 回歸分析 將HBV 相關(guān)PLC 患者的預(yù)后作為因變量，單因素分析有意義的指標(biāo)作為自變量進(jìn)行多因素Cox 回歸分析。結(jié)果顯示，低分化、臨床分期為Ⅲ/Ⅳ期、B7-H2 ≥23.4 ng/ml、IL-6 ≥94.8 pg/ml 是HBV 相關(guān)PLC 患者預(yù)后的危險因素（P<0.05）。見表5。

表5 影響HBV 相關(guān)PLC 患者預(yù)后的多因素Cox 回歸分析

3 討論

PLC 是威脅我國居民健康常見的惡性腫瘤之一，其病死率較高，具有起病隱匿、病情進(jìn)展快、惡性程度高、預(yù)后差等特點［9-10］。PLC 患者的早期臨床表現(xiàn)不明顯，無特異性，中晚期會出現(xiàn)肝組織的破裂出血，引起急腹癥，威脅患者的生命安全［11］。HBV 感染是引起PLC 發(fā)生的重要因素，近年來隨著HBV 攜帶者以及乙肝患者增多，HBV 相關(guān)PLC 患者的發(fā)病率逐年升高［12-13］。目前，臨床上主要通過影像學(xué)檢查、肝穿刺活檢、血清指標(biāo)檢測等方法篩查診斷PLC。其中，AFP 是臨床上診斷PLC 較廣泛的特異性標(biāo)志物，但其在慢性肝炎、肝硬化患者中亦會出現(xiàn)升高，缺乏特異性［14］。因此，尋找合適的生物標(biāo)志物用于HBV 相關(guān)PLC 的早期診斷，對改善疾病預(yù)后具有重要意義。

本研究發(fā)現(xiàn)，PLC 組患者血清B7-H2、IL-6 水平高于健康組（P<0.05），提示血清B7-H2、IL-6 水平在HBV 相關(guān)PLC患者中升高，可能參與HBV 相關(guān)PLC 的發(fā)生、發(fā)展。B7-H2在B 淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等細(xì)胞中均有表達(dá)，其能促進(jìn)T 淋巴細(xì)胞增殖與分化，增加細(xì)胞因子分泌，從而參與機體的免疫反應(yīng)，同時能與相應(yīng)受體結(jié)合，促進(jìn)炎癥因子釋放入血，與炎癥反應(yīng)的嚴(yán)重程度密切相關(guān)［15-16］。有研究發(fā)現(xiàn)，B7-H2 在結(jié)腸癌、胃癌等中呈高表達(dá)，具有促進(jìn)腫瘤增殖分化的作用［17-19］。B7-H2 與胃癌患者的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)，可以作為早期篩查的生物學(xué)標(biāo)記物［20］。IL-6 作為一種炎性細(xì)胞因子，能夠與細(xì)胞的表面受體相結(jié)合，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞生存基因表達(dá)，增強腫瘤細(xì)胞抗凋亡的能力［21-24］。既往研究發(fā)現(xiàn)［25］，血清IL-6 水平與卵巢癌腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，對患者預(yù)后有一定預(yù)測價值。

本研究發(fā)現(xiàn)，Ⅲ～Ⅳ期、AFP ≥400 ng/ml 患者血清B7-H2、IL-6 高于Ⅰ～Ⅱ期及AFP<400 ng/ml 患者，HBV DNA 陽性HBV 相關(guān)PLC 患者血清B7-H2、IL-6 高于HBV DNA 陰性患者（P<0.05）。這表明，血清B7-H2、IL-6 水平與患者病情嚴(yán)重程度有關(guān)。中晚期HBV 相關(guān)PLC 患者機體的免疫功能下降，導(dǎo)致機體炎性反應(yīng)加劇，促使血清B7-H2、IL-6 水平升高。HBV 患者本身存在慢性炎癥，當(dāng)病情發(fā)展為PLC 時，機體的炎性反應(yīng)加劇，血清B7-H2、IL-6 水平升高，同時炎性環(huán)境更利于PLC 細(xì)胞的增殖與分化［26］。本研究中，血清B7-H2、IL-6 與臨床分期、AFP 均呈正相關(guān)（P<0.05），表明隨著HBV 相關(guān)PLC 患者病情進(jìn)展，血清B7-H2、IL-6 水平會出現(xiàn)升高。本研究中，血清B7-H2、IL-6預(yù)測HBV 相關(guān)PLC 的AUC 為0.806、0.824，二者聯(lián)合AUC為0.887，提示與單項指標(biāo)預(yù)測相比，血清B7-H2、IL-6 聯(lián)合預(yù)測的價值更高，可以作為輔助診斷HBV 相關(guān)PLC 患者的實驗室標(biāo)志物。多因素Cox 回歸分析結(jié)果顯示，低分化、臨床分期為Ⅲ～ Ⅳ期、B7-H2 ≥23.4ng/ml、IL-6 ≥94.8 pg/ml是HBV 相關(guān)PLC 患者預(yù)后的危險因素（P<0.05）。這表明隨著患者癌細(xì)胞的分化程度降低、臨床分期提高，其侵襲能力逐漸增強，對周圍組織的損害加大，導(dǎo)致患者的預(yù)后越來越差。

綜上所述，HBV 相關(guān)PLC 患者血清中B7-H2、IL-6 水平升高，其與患者的預(yù)后有關(guān)，二者可作為早期輔助診斷HBV 相關(guān)PLC 的實驗室標(biāo)志物。