血清aβ2GP1在自身免疫性卵巢早衰患者中的表達(dá)及其與性激素水平的關(guān)系*

余 建，周 婷，湯 娟，韓小梅

長(zhǎng)沙市中醫(yī)醫(yī)院/長(zhǎng)沙市第八醫(yī)院婦產(chǎn)科，湖南長(zhǎng)沙 410100

卵巢早衰指女性卵巢在40歲之前失去正常功能所致的疾病，是近些年來(lái)婦科較為多見的疾病之一[1]。有30%患者與自身免疫異常相關(guān)，自身免疫性卵巢早衰患者常因?yàn)樽陨砻庖呦到y(tǒng)失調(diào)并生成相應(yīng)的識(shí)別卵巢抗體，抗體和抗原反應(yīng)破壞卵巢，最終引起不孕，患者通常出現(xiàn)繼發(fā)性閉經(jīng)、不孕不育以及低雌激素等癥狀，臨床上常常以血清卵泡刺激素(FSH)為金標(biāo)準(zhǔn)[2]。研究認(rèn)為，免疫因素是卵巢早衰的重要致病因素，已成為了臨床上關(guān)注焦點(diǎn)[3]。血清抗β2-糖蛋白1抗體(aβ2GP1)是一種異質(zhì)性抗體，有研究報(bào)道，aβ2GP1是生殖免疫的重要檢測(cè)指標(biāo)，其在自身免疫性卵巢早衰的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中具有重要的意義[4-5]。因此，本研究選取本院收治的114例卵巢早衰患者以及62例同期體檢健康女性作為研究對(duì)象，探討血清aβ2GP1在自身免疫性卵巢早衰患者中的表達(dá)情況及其與性激素水平的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取本院2017年5月至2020年1月收治的114例卵巢早衰患者及62例同期體檢健康女性作為研究對(duì)象。將其中62例自身免疫性卵巢早衰患者作為試驗(yàn)組，52例非自身免疫性卵巢早衰患者作為對(duì)照組，62例體檢健康女性作為健康組。試驗(yàn)組年齡23～33歲、平均(28.98±1.23)歲，體質(zhì)量指數(shù)(BMI)19～24 kg/m2、平均(22.23±1.42)kg/m2；對(duì)照組年齡24～33歲、平均(28.43±1.21)歲，BMI 19～24 kg/m2，平均(22.38±1.24)kg/m2；健康組年齡24～33歲、平均(28.52±1.19)歲，BMI 19～24 kg/m2、平均(22.42±1.34)kg/m2。3組年齡、BMI差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。卵巢早衰患者納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)試驗(yàn)組患者符合《中華婦產(chǎn)科學(xué)》[6]中自身免疫性卵巢早衰診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)患者出現(xiàn)4個(gè)月以上閉經(jīng)，且伴有圍絕經(jīng)期綜合征；(3)患者年齡<40歲；(4)腹腔鏡檢查見子宮和卵巢縮小，卵巢無(wú)卵泡，皮髓質(zhì)比例失調(diào)；(5)患者陰道超聲發(fā)現(xiàn)雙卵巢切面無(wú)大卵泡，無(wú)排卵征象；(6)試驗(yàn)組患者存在自身免疫性疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并嚴(yán)重凝血功能、肝腎功能異?；颊撸?2)近期接受激素類藥物治療患者；(3)存在生殖系統(tǒng)或者內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病患者；(4)臨床資料不完整患者。

1.2方法

1.2.1aβ2GP1檢測(cè) 試驗(yàn)組及對(duì)照組于入院次日，健康組于體檢當(dāng)日抽取空腹靜脈血2.5 mL，以3 500 r/min離心10 min，分離血清。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)及江蘇浩歐博生物醫(yī)藥股份有限公司的相應(yīng)試劑盒檢測(cè)血清aβ2GP1-免疫球蛋白(Ig)A、aβ2GP1-IgM、aβ2GP1-IgG的表達(dá)情況。具體方法：取緩沖液稀釋血清標(biāo)本，隨后將稀釋液10倍濃縮處理，充分振蕩搖勻，采用吸管將酶結(jié)合物與緩沖稀釋液1∶10混合處理，并且處理后在4 h內(nèi)使用酶結(jié)合物，隨后使用緩沖液沖洗干凈，并予以10倍濃縮，采用干凈的吸管將緩沖液吸出并與蒸餾水進(jìn)行1∶10稀釋處理，同時(shí)將處理后的液體保持在5 ℃左右。向?qū)?yīng)的微孔加入100 μL標(biāo)準(zhǔn)品、陽(yáng)性對(duì)照物、陰性對(duì)照物和稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品，隨后在室溫內(nèi)進(jìn)行溫育，持續(xù)30 min。洗板后使其與酶結(jié)合物溫育，方法與上述一致，再次進(jìn)行洗板，將100 μL底物開始微孔溫育，持續(xù)15 min，隨后向所有微孔內(nèi)加入終止液，采用邁瑞醫(yī)療有限公司的MR-96A酶標(biāo)儀進(jìn)行比色處理，根據(jù)試劑盒說(shuō)明書判定aβ2GP1-IgA、aβ2GP1-IgM、aβ2GP1-IgG檢測(cè)結(jié)果(<12 RU/mL為陰性，≥12 RU/mL為陽(yáng)性)。

1.2.2性激素水平檢測(cè) 所有研究對(duì)象均抽取空腹靜脈血2.5 mL，以3 500 r/min離心10 min，分離血清。采用固相ELISA及上海酶聯(lián)生物科技有限公司血清雌二醇(E2)ELISA試劑盒檢測(cè)E2，采用ELISA及上海晶抗生物工程有限公司卵泡刺激素(FSH)ELISA試劑盒檢測(cè)FSH，采用膠體金免疫層析法及河南維銳生物科技有限公司的黃體生成素(LH)試劑盒檢測(cè)LH。

1.2.3觀察指標(biāo) 比較3組血清aβ2GP1陽(yáng)性率和性激素(E2、FSH、LH)水平，分析血清aβ2GP1陽(yáng)性率與性激素的相關(guān)性，分析發(fā)生自身免疫性卵巢早衰的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

2 結(jié) 果

2.13組血清aβ2GP1陽(yáng)性率比較 3組的aβ2GP1-IgA陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；3組的aβ2GP1-IgM和aβ2GP1-IgG陽(yáng)性率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其中試驗(yàn)組的aβ2GP1-IgM和aβ2GP1-IgG陽(yáng)性率均明顯高于對(duì)照組和健康組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 3組血清aβ2GP1陽(yáng)性率比較[n(%)]

2.23組性激素水平比較 3組患者E2、FSH和LH水平差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；對(duì)照組和健康組E2、FSH和LH水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與對(duì)照組和健康組比較，試驗(yàn)組E2、LH水平降低，F(xiàn)SH水平升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 3組性激素水平比較

2.3血清aβ2GP1陽(yáng)性率與性激素水平的相關(guān)性 Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，aβ2GP1-IgM和aβ2GP1-IgG的陽(yáng)性率與患者E2、LH水平均呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，與FSH水平均呈正相關(guān)(P<0.05)。見表3。

表3 血清aβ2GP1陽(yáng)性率與患者性激素水平的相關(guān)性

2.4發(fā)生自身免疫性卵巢早衰的獨(dú)立危險(xiǎn)因素分析 以是否發(fā)生自身免疫性卵巢早衰作為因變量，以血清aβ2GP1、年齡、E2、LH、FSH作為自變量，建立Logistic回歸模型，分析結(jié)果顯示，血清aβ2GP1陽(yáng)性，E2、LH水平降低及FSH水平升高均是發(fā)生自身免疫性卵巢早衰的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(OR>1，P<0.05)。見表4。

表4 發(fā)生自身免疫性卵巢早衰的獨(dú)立危險(xiǎn)因素分析

3 討 論

卵巢早衰時(shí)指女性在40歲之前因?yàn)闄C(jī)體出現(xiàn)某種原因而造成的卵巢功能減退，臨床上可出現(xiàn)閉經(jīng)、不孕以及雌激素水平異常，同時(shí)促性腺激素水平增加。目前，卵巢早衰的發(fā)病機(jī)制并不明確，可能與盆腔炎、化學(xué)治療、手術(shù)因素等有關(guān)[7-8]，也有研究認(rèn)為可能與患者自身免疫性功能障礙有關(guān)[9]。近些年來(lái)，生殖免疫學(xué)研究逐漸深入，發(fā)現(xiàn)生育力降低、胚胎的丟失等可能與患者自身免疫功能障礙存在密切關(guān)系[10]；血清aβ2GP1被認(rèn)為在復(fù)發(fā)性流產(chǎn)和不孕不育癥的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用[11-12]。因此，本研究檢測(cè)卵巢早衰患者和同期體檢健康女性血清aβ2GP1并進(jìn)行對(duì)比，為臨床的診治提供參考。

國(guó)外有學(xué)者發(fā)現(xiàn)自身免疫性卵巢功能衰退存在不同階段性的卵巢功能異常，這與患者自身免疫障礙緊密相關(guān)[13]。毛小莉等[14]認(rèn)為卵巢早衰患者常合并一種以上的自身免疫性疾病，所以對(duì)卵巢早衰患者自身免疫抗體進(jìn)行檢測(cè)較為重要。血清aβ2GP1是一種針對(duì)磷脂結(jié)合蛋白的異質(zhì)性抗體，主要將β2糖蛋白1作為靶抗原[15]。本研究顯示，試驗(yàn)組aβ2GP1-IgM和aβ2GP1-IgG的陽(yáng)性率均明顯高于對(duì)照組和健康組(P<0.05)，表明血清aβ2GP1在自身免疫性卵巢早衰患者的發(fā)病中發(fā)揮著重要的作用。血清aβ2GP1能夠與內(nèi)皮細(xì)胞、單核細(xì)胞、滋養(yǎng)層細(xì)胞等多種細(xì)胞表面受體結(jié)合，介導(dǎo)細(xì)胞炎癥反應(yīng)、凝血功能障礙從而引發(fā)病理性改變[16]。本研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組和健康組比較，試驗(yàn)組E2、LH水平降低(P<0.05)，F(xiàn)SH水平升高(P<0.05)。可能原因：卵巢早衰患者因卵巢萎縮，引起血管阻力升高以及血流灌注降低，進(jìn)而導(dǎo)致管壁順應(yīng)性下降，引發(fā)卵巢缺血、缺氧等，使E2水平明顯降低；卵巢血管收縮和竇狀卵泡產(chǎn)生，導(dǎo)致血管網(wǎng)和卵巢血流的改變，引起LH以及FSH水平異常[17]。卵巢早衰患者血液循環(huán)內(nèi)可能存在針對(duì)卵巢的抗體，同時(shí)可能因?yàn)闄C(jī)體免疫反應(yīng)出現(xiàn)改變，抑制了卵泡反應(yīng)。相關(guān)性分析顯示，aβ2GP1-IgM和aβ2GP1-IgG的陽(yáng)性率與患者E2、LH水平均呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，與FSH水平均呈正相關(guān)(P<0.05)，表明血清aβ2GP1與患者性激素水平存在一定的相關(guān)性。血清aβ2GP1能夠干擾活化的蛋白C，促進(jìn)凝血因子的形成，從而促進(jìn)血栓的生成，同時(shí)血清aβ2GP1能夠介導(dǎo)抗磷脂抗體結(jié)合到細(xì)胞膜上，對(duì)于抗磷脂抗體綜合征的發(fā)病具有重要的促進(jìn)作用[18]。本研究采用Logistic回歸模型分析，發(fā)現(xiàn)血清aβ2GP1陽(yáng)性是患者發(fā)生自身免疫性卵巢早衰的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(OR=1.762，P<0.05)，提示血清aβ2GP1可以作為自身免疫性卵巢早衰的檢測(cè)指標(biāo)。E2能夠以協(xié)調(diào)作用的方式影響FSH以及LH水平的變化，在E2高水平時(shí)，又可對(duì)下丘腦和腺垂體進(jìn)行抑制，從而降低FSH和LH水平，是一種正負(fù)反饋的影響。本研究顯示，血清E2、LH水平降低及FSH水平升高是患者發(fā)生自身免疫性卵巢早衰的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(OR=2.335、2.149、2.629，P<0.05)，這也提示血清E2、LH、FSH可以作為自身免疫性卵巢早衰的檢測(cè)指標(biāo)。但需要注意的是，卵巢早衰患者可能會(huì)存在短暫的卵巢功能改善，甚至可出現(xiàn)再次排卵，會(huì)引起性激素的波動(dòng)和異常，因此，對(duì)于性激素需要進(jìn)行多次檢測(cè)[19-20]。本研究檢測(cè)血清aβ2GP1，發(fā)現(xiàn)其陽(yáng)性率在自身免疫性卵巢早衰患者中具有重要的意義，但本研究樣本量較少，可能導(dǎo)致結(jié)果存在一定偏差，需擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步研究。

綜上所述，血清aβ2GP1在自身免疫性卵巢早衰患者中呈高表達(dá)，與患者性激素水平密切相關(guān)，是發(fā)生自身免疫性卵巢早衰的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。