佩蘭黃酮的純化及其抗氧化與抗運(yùn)動(dòng)疲勞作用

胡 華

（成都文理學(xué)院體育與醫(yī)護(hù)學(xué)院，四川成都 610401）

社會(huì)發(fā)展節(jié)奏的加快，使得人們嘗試各種運(yùn)動(dòng)以舒緩身心，但過(guò)度的運(yùn)動(dòng)量易使身體出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)性疲勞，影響正常的生活與工作。有研究顯示，運(yùn)動(dòng)性疲勞的產(chǎn)生與體內(nèi)自由基的增多有關(guān)[1?2]，若機(jī)體補(bǔ)充抗氧化劑，使其與內(nèi)源性自由基相互作用，能有效減輕氧化損傷，預(yù)防運(yùn)動(dòng)性疲勞[3?4]。近年來(lái)，部分抗氧化性較好的天然物質(zhì)，如：多糖、黃酮、多酚、生物堿、肽類、氨基酸等，已被發(fā)現(xiàn)具有良好的抗運(yùn)動(dòng)疲勞效果[5?7]，而目前關(guān)于佩蘭的抗運(yùn)動(dòng)效果的相關(guān)研究還較少。

佩蘭（Eupatorium fortuneiTurcz.）是菊科植物佩蘭的干燥地上部分，具有醒脾開(kāi)胃、發(fā)表解暑等功效，分布于南方各省，已被衛(wèi)健委認(rèn)定為保健食品的添加成分，屬于藥食兩用植物，生物安全性較好，其化學(xué)成分主要為揮發(fā)油、黃酮、多糖、生物堿及其它酚酸類化合物等[8?9]，目前，對(duì)其揮發(fā)油的活性研究較多，而對(duì)其黃酮類化合物的研究較少。許冰[10]研究發(fā)現(xiàn)，佩蘭黃酮化合物的結(jié)構(gòu)類型主要以黃酮類為主，如：蘆丁、槲皮素等，存在較多的酚羥基，而該類化合物通常具有較好的抗氧化作用，但因其提取物的雜質(zhì)較多，可能影響相關(guān)活性作用。因此，本研究利用大孔樹(shù)脂具有機(jī)械篩分與分離純化的特性，探討其純化佩蘭黃酮提取物的最佳條件，比較純化前、后產(chǎn)物的抗氧化能力，同時(shí)通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)考察其抗運(yùn)動(dòng)疲勞活性，以期為佩蘭黃酮的深入開(kāi)發(fā)與利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

佩蘭 成都市天泰藥房，經(jīng)鑒定為菊科植物佩蘭的莖；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品 中國(guó)食品藥品檢定研究院（批號(hào)：100080-201811）；西洋參顆粒 湯臣倍健股份有限公司；D101 型大孔樹(shù)脂 天津波鴻樹(shù)脂科技有限公司；抗壞血酸、鄰苯三酚、三羥基氨基甲烷（Tris）、硫酸亞鐵等 均為分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；乳酸（lactic acid，LA）、血清尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶試劑盒（glutathione peroxidase,GSH-Px） 南京建城科技有限公司；試驗(yàn)用水為純化水。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：SPF 級(jí)健康雄性小鼠80 只，體質(zhì)量19～26 g 成都藥康生物科技有限公司[動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（川）2020-230]。

KJ-14B06 型破壁機(jī) 深圳市康佳電器有限公司；ME203 型電子天平 梅特勒-托利多有限公司；L5 型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì) 上海精密科學(xué)儀器有限公司；RE-3000A 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海越眾儀器設(shè)備有限公司；DHZ-C 型恒溫振蕩器 蘇州培英實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；SJIA-12N-50B 型立式冷凍干燥機(jī)寧波雙嘉儀器有限公司；H3-18KR 型離心機(jī) 湖南可成儀器設(shè)備有限公司；JA-500 型超聲波清洗器濟(jì)寧奧超電子設(shè)備有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 佩蘭黃酮提取 佩蘭經(jīng)完全干燥后粉碎，過(guò)80 目篩，準(zhǔn)確稱取2.0 g 粉碎后樣品置于60 mL 體積分?jǐn)?shù)為70%乙醇溶液中，在50 kHz 超聲功率下提取30 min，重復(fù)提取4 次后，合并提取液離心，上清液經(jīng)減壓蒸發(fā)溶劑濃縮后，冷凍干燥即得佩蘭黃酮粗提物[11]。

1.2.2 動(dòng)態(tài)吸附與洗脫

1.2.2.1 吸附條件考察 根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，固定上樣液pH4.0、上樣流速1.0 mL/min，分別考察60 mL 不同質(zhì)量濃度的上樣液（1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mg/mL）在裝有預(yù)處理后樹(shù)脂的玻璃層析柱（2.6 cm×25 cm）的吸附率；固定上樣液濃度3.0 mg/mL，上樣流速1.0 mL/min，以鹽酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH，分別考察60 mL 不同pH 上樣液（2.0、3.0、4.0、5.0、6.0）的吸附率；不同體積的3.0 mg/mL 上樣液（pH4.0）分別于0.5、1.0、2.0 mL/min 流速上樣后，測(cè)定泄漏液中黃酮含量，繪制泄露曲線，確定最佳上樣液體積與流速。

式中：m0為上樣液中的黃酮質(zhì)量，mg；me為吸附后流出液中的黃酮質(zhì)量，mg；η 為吸附率，%。

1.2.2.2 洗脫條件考察 根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，上樣完成后，經(jīng)50 mL 水洗后，采用100 mL 不同體積分?jǐn)?shù)（50%、60%、70%、80%、90%）乙醇溶液于2.0 mL/min 流速對(duì)最佳吸附條件上樣后的樹(shù)脂柱進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，測(cè)定其黃酮含量，計(jì)算不同體積分?jǐn)?shù)乙醇的洗脫率，考察洗脫液乙醇的最佳體積分?jǐn)?shù)；采用體積分?jǐn)?shù)為70%乙醇溶液分別于1.0、2.0、3.0 mL/min 流速洗脫飽和吸附后的樹(shù)脂柱，測(cè)定不同體積下洗脫液中黃酮含量，繪制洗脫曲線，確定最佳洗脫液體積與流速。

式中：m0為上樣液中的黃酮質(zhì)量，mg；me為飽和吸附后溶液中的黃酮質(zhì)量，mg；cd為洗脫液中黃酮濃度，mg/mL；V2為洗脫液體積，mL；Dd為洗脫率，%。

1.2.3 黃酮純度測(cè)定 以蘆丁作為對(duì)照品，采用亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉法測(cè)定樣品的黃酮含量[12]，橫坐標(biāo)為不同質(zhì)量濃度的蘆丁溶液，縱坐標(biāo)為相應(yīng)溶液的吸光度值，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：y=15.22x+0.014（R2=0.9998），可知在0.005～0.05 mg/L 的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。將樣品溶液稀釋后，采用上述分析方法測(cè)定其黃酮濃度后，根據(jù)下式計(jì)算樣品的黃酮純度（以蘆丁計(jì)）。

式中：c 為樣品中的黃酮濃度，mg/mL；V 為樣品體積，mL；D 為稀釋倍數(shù)；m 為樣品的質(zhì)量，mg；W 為樣品中黃酮純度，%。

1.2.4 抗氧化試驗(yàn)

1.2.4.1 羥基自由基（?OH）清除能力的測(cè)定 兩支試管內(nèi)均加入10 mmol/L 硫酸亞鐵溶液1 mL 和10 mmol/L水楊酸-乙醇溶液1 mL，分別繼續(xù)加入1 mL 黃酮純化物溶液和VC溶液（陽(yáng)性對(duì)照）后，各加入8.8 mmol/L雙氧水1 mL，置于37 ℃水浴中30 min 后，于510 nm測(cè)定吸光度（As），另以純化水作空白對(duì)照（A0），按式（4）計(jì)算黃酮純化產(chǎn)物對(duì)羥基自由基的清除率，提取物溶液考察同上操作[13]。

1.2.4.2 超氧陰離子自由基（O2??）清除能力的測(cè)定兩支試管內(nèi)均加入50 mmol/L Tris-HCl 溶液（pH8.2）5 mL 和5 mL 純化水，置于25 ℃水浴25 min，各加入1 mL 黃酮純化物溶液和VC溶液（陽(yáng)性對(duì)照），分別加入25 mmol/L 領(lǐng)苯三酚0.5 mL，混勻后繼續(xù)置于25 ℃水浴5 min 后，各添加8 mmol/L HCl 溶液1 mL 于510 nm 測(cè)定吸光度（As），另以純化水作空白對(duì)照（A0），按式（4）計(jì)算黃酮純化產(chǎn)物對(duì)超氧陰離子自由基的清除率，提取物溶液考察同上操作[14]。

1.2.5 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

1.2.5.1 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備 80 只小鼠經(jīng)適應(yīng)性喂養(yǎng)5 d 后，隨機(jī)平均分為空白對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、提取組和純化組。按照《保健食品功能評(píng)價(jià)要求》并結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)研究方法[15?16]，動(dòng)物設(shè)置劑量應(yīng)不超過(guò)人體推薦量30 倍，根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，各組給藥劑量采用最低有效量的30 倍，其中，陽(yáng)性對(duì)照組給予0.3 mg/g（以體重計(jì)，下同）的西洋參顆粒；而提取物組和純化物組分別給予0.3 mg/g 佩蘭黃酮提取物與純化物，所有灌胃溶液體積2 mL，空白對(duì)照組則灌胃等體積生理鹽水。所有給藥通過(guò)灌胃方式，每天1 次，連續(xù)30 d。

1.2.5.2 爬桿實(shí)驗(yàn) 末次灌胃結(jié)束后，各組隨機(jī)選取10 只小鼠置于玻璃棒上，記錄其肌肉緊張抱緊爬桿至跌落的時(shí)間，反復(fù)實(shí)驗(yàn)3 次后，將其累計(jì)時(shí)間記為爬桿時(shí)間[17]。

1.2.5.3 LA、BUN、MDA 濃度與SOD、GSH-Px 活力測(cè)定 各組其它小鼠置于水中游泳30 min 取出，休息10 min 后，采血離心，通過(guò)試劑盒檢測(cè)血清中LA 與BUN 濃度，另切取肝臟，按照相關(guān)試劑盒使用說(shuō)明檢測(cè)MDA 濃度與SOD、GSH-Px 活力。

1.3 數(shù)據(jù)處理

所有試驗(yàn)平行測(cè)定5 次，結(jié)果表示采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差，通過(guò)SPSS 19.0 軟件進(jìn)行單因素方差（ANOVA）分析，比較組間差異，P<0.05 認(rèn)為具有顯著性差異，P<0.01 認(rèn)為具有極顯著性差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 動(dòng)態(tài)吸附純化條件

2.1.1 上樣液濃度選擇 不同上樣液濃度對(duì)D101大孔樹(shù)脂吸附佩蘭黃酮的影響，如圖1 所示，隨著上樣液濃度的增大，樹(shù)脂對(duì)黃酮化合物的吸附率不斷減小，其中，當(dāng)上樣液質(zhì)量濃度大于3.0 mg/L 時(shí)，吸附率開(kāi)始急劇下降。上樣液濃度過(guò)高，樣品溶液中其它雜質(zhì)可能與目標(biāo)物競(jìng)爭(zhēng)吸附，可使樹(shù)脂提前飽和吸附，從而造成部分佩蘭黃酮化合物的泄漏，降低吸附效率[18]，因此確定最佳上樣液濃度為3.0 mg/L。

圖1 上樣液濃度對(duì)佩蘭黃酮的吸附率影響Fig.1 Effect of different loading solution concentration on adsorption rate of Eupatorium fortunei Turcz.flavonoids

2.1.2 上樣液pH 選擇 不同上樣液pH 對(duì)D101 大孔樹(shù)脂吸附佩蘭黃酮的影響，如圖2 所示。從圖2可知，樹(shù)脂對(duì)黃酮化合物的吸附隨上樣液pH 增大而先增大再減小，當(dāng)溶液pH 為4.0 時(shí)，吸附率達(dá)到最大。由于佩蘭黃酮化合物結(jié)構(gòu)的基本母核為2-苯基色原酮，存在較多的酚羥基與羰基，因而在弱酸性環(huán)境下，易呈分子形態(tài)與樹(shù)脂中吸附位點(diǎn)相互作用，致使吸附率升高[19]，因此確定最佳上樣液pH 為4.0。

圖2 上樣液pH 對(duì)佩蘭黃酮的吸附率影響Fig.2 Effect of different pH value of loading solution on adsorption rate of Eupatorium fortunei Turcz.flavonoids

2.1.3 泄漏曲線 當(dāng)吸附一段時(shí)間后，流出液中黃酮化合物的含量約為上樣液濃度10%時(shí)，認(rèn)為黃酮開(kāi)始泄漏，繪制不同流速下D101 大孔樹(shù)脂的泄露曲線，結(jié)果見(jiàn)圖3。從圖3 可知，當(dāng)上樣流速逐漸增大，泄漏點(diǎn)對(duì)應(yīng)的上樣液體積從約80 mL 減小至40 mL?？赡苡捎诖罂讟?shù)脂對(duì)黃酮化合物的吸附存在膜擴(kuò)散與粒擴(kuò)散過(guò)程，若流速過(guò)快，佩蘭黃酮尚未與樹(shù)脂充分相互作用，但上樣流速過(guò)慢，使得純化時(shí)間較長(zhǎng)，不利于推廣應(yīng)用，綜合考慮吸附效率與純化效果，選擇最佳上樣流速為1.0 mL/min，上樣液體積為60 mL。

圖3 不同流速下大孔樹(shù)脂的吸附泄漏曲線Fig.3 Adsorption leakage curve of the macroporous resin in different flow rate

2.2 動(dòng)態(tài)洗脫純化條件

2.2.1 洗脫液體積分?jǐn)?shù)選擇 采用一定體積分?jǐn)?shù)的乙醇溶液作為洗脫液，考察不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇溶液對(duì)佩蘭黃酮化合物的洗脫率影響，結(jié)果見(jiàn)圖4。從圖4 可知，隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增大，黃酮化合物的洗脫率逐漸上升，當(dāng)增大至70%后，開(kāi)始出現(xiàn)下降。這是由于乙醇的體積分?jǐn)?shù)越高，其對(duì)弱極性的黃酮化合物洗脫能力越強(qiáng)，但體積分?jǐn)?shù)過(guò)高，吸附在樹(shù)脂中醇溶性雜質(zhì)也可能被洗脫，造成“競(jìng)爭(zhēng)解吸”[20]，導(dǎo)致洗脫率下降，因此選擇乙醇溶液體積分?jǐn)?shù)為70%。

圖4 不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇溶液對(duì)洗脫率的影響Fig.4 Effect of different ethyl alcohol concentration on elution rate

2.2.2 洗脫曲線 在不同流速下，采用體積分?jǐn)?shù)70%乙醇溶液洗脫飽和吸附后的D101 大孔樹(shù)脂，收集洗脫液，測(cè)定黃酮化合物含量，繪制洗脫曲線，如圖5 所示。隨著洗脫流速的增大，峰形逐漸變寬，且完全洗脫黃酮化合物的乙醇用量增多，而洗脫流速偏低洗脫曲線峰形尖銳且對(duì)稱，因此選擇最佳洗脫流速為1.0mL/min，洗脫液體積100 mL。

圖5 不同流速下大孔樹(shù)脂的洗脫曲線Fig.5 Elution curve of the macroporous resin at different flow rate

2.3 最佳純化工藝驗(yàn)證

綜合上述結(jié)果，確定D101 大孔樹(shù)脂純化佩蘭黃酮化合物的最佳條件：上樣濃度與流速分別為3.0 mg/L和1.0 mL/min，上樣液pH 與體積分別為4.0 與60 mL，洗脫液體積分?jǐn)?shù)與體積分別為70%與100 mL，洗脫流速為1.0 mL/min。在該最佳純化條件下，佩蘭黃酮化合物在產(chǎn)物中純度由24.2%增大至69.4%，約提高了2.87 倍，韓秋菊等[21]曾采用D101 大孔樹(shù)脂純化藁本黃酮，純度約為純化前2.05 倍；李倩[22]則采用D101 大孔樹(shù)脂純化新疆圓柏黃酮，純度約為純化前2.79 倍，表明采用D101 大孔樹(shù)脂純化佩蘭黃酮工藝可行。

2.4 純化前后產(chǎn)物的抗氧化作用

2.4.1 ?OH 清除率的比較 ?OH 化學(xué)性質(zhì)活潑，可與體內(nèi)多數(shù)細(xì)胞相互作用，致使發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化、核酸斷裂、蛋白質(zhì)與多糖解聚等不良反應(yīng)[23]。以VC作陽(yáng)性對(duì)照，考察不同濃度的佩蘭黃酮提取物與純化物對(duì)?OH 清除率的影響，結(jié)果見(jiàn)圖6。從圖6 可見(jiàn)，佩蘭黃酮的提取物與純化物對(duì)?OH 的清除能力均隨濃度的提高而增大，佩蘭黃酮純化物的半抑制質(zhì)量濃度（IC50）為0.47 mg/mL 低于提取物（0.61 mg/mL），表明純化工藝有利于提高其清除?OH 能力，但在相同濃度下其清除?OH 的作用低于VC。

圖6 不同物質(zhì)對(duì)?OH 的清除能力Fig.6 Scavenging ability of different substances on hydroxyl radical

2.4.2 O2??清除率的比較 O2??與體內(nèi)細(xì)胞化合物中羥基結(jié)合后的產(chǎn)物會(huì)破壞細(xì)胞的DNA，影響其正常功能。以VC作陽(yáng)性對(duì)照，考察不同濃度的佩蘭黃酮提取物與純化物對(duì)O2??清除率的影響，結(jié)果見(jiàn)圖7。從圖7 可見(jiàn)，兩種物質(zhì)對(duì)O2??的清除能力均隨濃度的提高而增大，但純化物的IC50值（0.42 mg/mL）低于提取物0.52 mg/mL，表明純化后的佩蘭黃酮對(duì)O2??的清除能力更強(qiáng)，但二者的清除作用均低于等濃度VC。

圖7 不同物質(zhì)對(duì)O2??的清除能力Fig.7 Scavenging ability of different substances on superoxide anion radical

2.5 抗運(yùn)動(dòng)性疲勞作用

2.5.1 爬桿時(shí)間 小鼠爬桿是全身能量消耗性運(yùn)動(dòng)，因此可通過(guò)觀察不同組別小鼠的爬桿時(shí)間，衡量其運(yùn)動(dòng)耐力，結(jié)果見(jiàn)表1。從表1 可見(jiàn)，與空白對(duì)照組相比，提取組與純化組小鼠的爬桿時(shí)間分別平均延長(zhǎng)1.2min 和2.4 min，具有顯著差異（P<0.05，P<0.01），表明佩蘭黃酮有助于緩解機(jī)體運(yùn)動(dòng)疲勞，延長(zhǎng)運(yùn)動(dòng)時(shí)間，而純化組小鼠的爬桿時(shí)間較提取組延長(zhǎng)，具有極顯著差異（P<0.01），表明樹(shù)脂純化工藝有利于提高佩蘭黃酮產(chǎn)物的活性，但二者爬桿時(shí)間均低于陽(yáng)性對(duì)照組。

表1 不同組小鼠的爬桿時(shí)間 （n=10）Table 1 The climbing time in mice of different groups (n=10)

2.5.2 體內(nèi)LA 與BUN 濃度 LA 是在機(jī)體劇烈運(yùn)動(dòng)后，肌肉耗氧加劇體內(nèi)供氧不足的條件下，血糖經(jīng)糖酵解生成的產(chǎn)物。體內(nèi)乳酸含量越高，生理環(huán)境pH 下降越快，從而影響骨骼肌的收縮強(qiáng)度，產(chǎn)生疲勞感[24]。從表2 結(jié)果可見(jiàn)，與空白對(duì)照組相比，提取組與純化組小鼠的血清中LA 平均濃度分別降低1.17、2.43 mmol/L，具有顯著差異（P<0.05，P<0.01），且純化組小鼠的LA 平均濃度較提取組下降約1.26 mmol/L，具有顯著性差異（P<0.05），表明純化后的佩蘭黃酮更有利于延緩體內(nèi)LA 的生成或加速其代謝，但其LA 濃度仍高于陽(yáng)性對(duì)照組。

BUN 作為劇烈運(yùn)動(dòng)后，蛋白質(zhì)的分解代謝產(chǎn)物，可用于評(píng)價(jià)機(jī)體的疲勞狀態(tài)。從表2 結(jié)果可知，與空白對(duì)照組相較，提取組與純化組小鼠的血清中BUN 平均濃度分別降低0.61、1.34 mmol/L，差異顯著（P<0.05，P<0.01），同時(shí)純化組小鼠的BUN 平均濃度較提取組下降約0.73 mmol/L，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），表明純化后的佩蘭黃酮更有利于減少體內(nèi)BUN 的積累，但其BUN 濃度仍高于陽(yáng)性對(duì)照組。

表2 不同組小鼠的LA 與BUN 濃度（n=10）Table 2 The contents of LA and BUN in mice of different groups (n=10)

2.5.3 MDA 濃度與SOD、GSH-Px 活性 運(yùn)動(dòng)性疲勞的產(chǎn)生主要源于劇烈運(yùn)動(dòng)下，體內(nèi)產(chǎn)生大量的超氧陰離子自由基，同時(shí)血漿脂質(zhì)過(guò)氧化物濃度上升，從而誘導(dǎo)體內(nèi)蛋白質(zhì)氧化，生成MDA。MDA 濃度過(guò)高導(dǎo)致組織和細(xì)胞的氧化損傷，使得體內(nèi)氧化與抗氧化系統(tǒng)失衡[25]。從表3 可見(jiàn)，與空白對(duì)照組相較，提取組與純化組小鼠的血清中MDA 平均濃度分別降低0.31、0.74 mmol/L，具有顯著性差異（P<0.05，P<0.01），而純化組小鼠MDA 平均濃度較提取組下降約0.43 mmol/L，表明純化后的佩蘭黃酮有助于減小體內(nèi)氧化程度，避免MDA 的生成，但與陽(yáng)性對(duì)照組相較，仍明顯偏高。

SOD 與GSH-Px 是重要的抗氧化酶，其中SOD可與超氧陰離子自由基發(fā)生歧化反應(yīng)生成過(guò)氧化氫和氧氣，而GSH-Px 可將過(guò)氧化氫或其它有機(jī)過(guò)氧化物還原成水和醇，從而減緩體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)阻斷自由基的的氧化破壞過(guò)程[26]。從表3 可知，與空白對(duì)照組相較，提取組小鼠的SOD 與GSHPx 平均活力分別提高22.27、24.64 U/mL，具有顯著性差異（P<0.05）；而純化組小鼠的SOD 與GSHPx 平均活力分別提高42.21、54.45 U/mL，具有極顯著性差異（P<0.01），表明純化后的佩蘭黃酮更有利于增強(qiáng)體內(nèi)SOD 與GSH-Px 活性，但上述結(jié)果均低于陽(yáng)性對(duì)照組。

表3 不同組小鼠的MDA 濃度和SOD、GSH-Px活性（n=10）Table 3 MDA content and SOD,GSH-Px activity in mice of different groups (n=10)

3 結(jié)論

本研究考察D101 大孔樹(shù)脂純化佩蘭黃酮的最佳條件，并比較了不同產(chǎn)物的抗氧化與抗運(yùn)動(dòng)疲勞活性。試驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)上樣濃度與流速分別為3.0 mg/L和1.0 mL/min，上樣液pH 與體積分別為4.0 與60 mL，洗脫液體積分?jǐn)?shù)與體積分別為70%與100 mL，洗脫流速為1.0 mL/min 時(shí)，佩蘭黃酮化合物在產(chǎn)物中純度由24.2%增大至69.4%，約為純化前2.87 倍。佩蘭黃酮純化物對(duì)?OH 與O2??的IC50值分別為0.47、0.42 mg/mL 均高于提取物，表明采取大孔樹(shù)脂純化工藝有利于提高佩蘭黃酮產(chǎn)物的抗氧化能力。純化后的佩蘭黃酮能夠延長(zhǎng)小鼠的運(yùn)動(dòng)時(shí)間，減少其體內(nèi)LA 與BUN 的生成，并有助于增強(qiáng)體內(nèi)SOD 與GSH-Px 的活力，進(jìn)而降低MDA 的生成，從而有利于提高動(dòng)物的運(yùn)動(dòng)耐力。但純化后佩蘭黃酮化合物的種類仍有待進(jìn)一步分離鑒定，以明確其具體抗運(yùn)動(dòng)疲勞機(jī)制。