紅冬蛇菰的化學(xué)成分研究*

陳孝禮，江文婧，吳繼春，杜 江,2

(1 貴州中醫(yī)藥大學(xué)，貴州 貴陽 550025；2 貴州省苗醫(yī)藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 貴州 貴陽 550025)

紅冬蛇菰(Balanophoraharlandii Hook.F)，為蛇菰科蛇菰屬草本寄生植物，別名為蛇菰、葛蕈、地重樓，苗藥名為購俗(ngoub xud)，產(chǎn)于廣西、云南、貴州等地，為苗族民間常用草藥，具有涼血止血、補(bǔ)益肝腎、清熱解毒等功效，民間常用于痔瘡、梅毒、小兒陰莖腫、胃痛、咳嗽咳血等病癥的治療[1-3]，從1919年至今，對于蛇菰屬植物的研究相對較多，主要含三萜、黃酮、甾體等化學(xué)成分，具有抗腫瘤、降血糖、醒酒保肝、抑菌等藥理作用[4]。目前關(guān)于紅冬蛇菰的研究僅報(bào)道了37個(gè)化合物，滕榮偉等[1]于2000年從云南紅冬蛇菰中分離出11個(gè)化合物，分別是桐甾醇，桐甾醇-3-O-(6′-O-棕櫚?；?-β-D-葡萄吡喃糖甙，(-)-lariciresinol，(-)-松脂醇[(-pinoresinol]，β-香樹脂醇，乙酸蛇麻脂醇酯，棕櫚酸，1-O-咖啡?；?β-D-葡萄吡喃糖，1-O-咖啡?；?(6-O-沒食子?；?-β-D-葡萄吡喃糖，1-O-咖啡?；?(4-O-沒食子?；?-β-D-葡萄吡喃糖、沒食子酸。楊崇仁等[5]從紅冬蛇菰中分離出19個(gè)化合物，主要類型為鞣酸、黃酮和酚類物質(zhì)。范升等人又從廣東紅冬蛇菰二氯甲烷提取物及其莖部分真菌中出11個(gè)化合物，主要類型有三萜、甾體等化學(xué)成分[6]。滕榮偉和楊崇仁都分離得到 1-O-咖啡?；?β-D-葡萄吡喃糖，滕榮偉和范升都分離得到β-香樹脂醇、桐甾醇、乙酸蛇麻脂醇酯。。張聲源等人在對紅冬蛇菰進(jìn)行資源調(diào)查是發(fā)現(xiàn)當(dāng)?shù)厝罕妼⑵渲谱鞒伤幧艁矸乐翁悄虿〖帮L(fēng)濕性疾病，且紅冬蛇菰具有非常好的抗氧化活性及抑制亞硝化作用[7-8]。目前關(guān)于紅冬蛇菰的化學(xué)成分、藥理作用與臨床應(yīng)用研究均較少，課題組后期將對后續(xù)紅冬蛇菰中分離鑒定出的化學(xué)成分進(jìn)行活性研究。為了明確紅冬蛇菰的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，本研究在前人研究的基礎(chǔ)上對紅冬蛇菰化學(xué)成分進(jìn)行研究，以期為該植物的進(jìn)一步臨床應(yīng)用及開發(fā)利用提供參考

1 儀器和試藥

數(shù)顯調(diào)溫?zé)犸L(fēng)槍，寧波得力工具有限公司；Bruker Avance Neo-400 MHz核磁共振波譜儀(TMS為內(nèi)標(biāo))，德國Bruker公司；1000Y西廚多功能粉碎機(jī)，永康市鉑歐五金制品有限公司；WFH-308B型三色紫外分析儀，上海精科實(shí)業(yè)有限公司； New Classic MF型電子天平。瑞士Metter-Toledo公司；Buchi 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，瑞士步琦有限公司；GF254 薄層硅膠板，青島海洋化工有限公司；柱層析硅膠(140～160目，200～300目)，青島海洋化工有限公司；Sephadex LH-20葡聚糖凝膠，美國GE公司。

無水乙醇、石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、甲醇(分析純)，天津市富宇精細(xì)化工有限公司，純凈水，華潤怡寶飲料有限公司。

實(shí)驗(yàn)藥材購于貴州省貴陽市萬東橋藥材市場，由貴州中醫(yī)藥大學(xué)江洪副教授鑒定為蛇菰科蛇菰屬紅冬蛇菰(Balanophoraharlandii Hook. F)的全草。標(biāo)本存放于貴州省苗醫(yī)藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(標(biāo)本號2018100403)。

2 方法與結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)方法

干燥的紅冬蛇菰6 kg，粉碎，95%乙醇冷浸提取3次，每次1天。合并提取液，濃縮得浸膏400 g。浸膏直接經(jīng)硅膠柱層析(石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫)，得到A～D四個(gè)部分。A部分經(jīng)硅膠柱層析(環(huán)己烷洗脫)、凝膠柱層析(二氯甲烷-甲醇 1:1洗脫)得到化合物1(25 mg)；B部分重結(jié)晶得到化合物2(135 mg)，母液經(jīng)硅膠柱層析(石油醚-乙酸乙酯5:1洗脫)、凝膠柱層析(二氯甲烷-甲醇1:1洗脫)、得到化合物3(33 mg)、4(42 mg)；C部分經(jīng)凝膠柱層析(二氯甲烷-甲醇1:1洗脫)、硅膠柱層析(石油醚-乙酸乙酯7:1洗脫)得到化合物5(23 mg)；D部分經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷-甲醇10:1洗脫)、凝膠柱層析(甲醇洗脫)得到化合物6(44 mg)。

2.2 化合物的結(jié)構(gòu)與解析

2.2.1 化合物1：dotriacont-1-ene

無色油狀，分子式為C32H64。1H NMR(400 MHz, CDCl3)δ： 5.81(1H, m, H-2), 4.99(1H, d,J=17.1, H-1a), 4.94(1H, d,J=17.2, H-1b), 2.08～2.00(2H, m, H-3), 0.85～0.80(1H, m, -CH3);13C NMR(100 MHz, CDCl3)δ： 114.0(C-1), 139.3(C-2), 33.83(C-3), 29.0(C-4), 29.2(C-5), 29.5(C-6), 29.7(C-7～C28), 29.4(C-29), 31.9(C-30), 22.7(C-31), 14.1(C-32). 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道一致，故鑒定該化合物為dotriacont-1-ene。

2.2.2 化合物2：11α, 12α-epoxytaraxer-14-en-3β-yl-acetate

白色結(jié)晶。分子式為C32H49O3。1H NMR(400 MHz, CDCl3)δ： 5.55(1H, dd,J=8.3, 3.3 Hz, H-15), 4.57～4.48(1H, m, H-3), 3.11(1H, t,J=5.1 Hz, H-11), 2.80(1H, d,J=4.6 Hz, H-12), 2.05(3H, s, -COOCH3);13C NMR(100 MHz, CDCl3)δ： 37.9(C-1), 23.2(C-2), 80.7(C-3), 37.7(C-4), 54.7(C-5), 18.8(C-6), 33.2(C-7), 38.9(C-8), 51.8(C-9), 37.5(C-10), 53.5(C-11), 58.2(C-12), 36.5(C-13), 157.1(C-14), 118.9(C-15), 35.3(C-16), 35.4(C-17), 48.2(C-18), 40.3(C-19), 28.7(C-20), 36.6(C-21), 38.2(C-22), 27.9(C-23), 17.0(C-24), 16.6(C-25), 27.0(C-26), 30.2(C-27), 29.9(C-28), 33.7(C-29),19.5(C-30), 170.8(-COOCH3), 21.2(-COOCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道一致，故鑒定該化合物為11α, 12α-epoxytaraxer-14-en-3β-yl-acetate。

2.2.3 化合物3：cis-octadec-9-enoic acid

白色膏狀。分子式為C18H32O2。1H NMR(400 MHz, CDCl3)δ： 5.28(2H, m, H-9, 10), 2.27(2H, t,J=7.6 Hz, H-2), 0.81(3H, t,J=6.8 Hz, -CH3);13C NMR(100 MHz, CDCl3)δ： 180.4(C-1), 130.0(C-10), 129.7(C-9), 34.1(C-2), 31.9(C-17), 29.7(C-8), 29.7(C-14), 29.7(C-7), 29.6(C-16), 29.6(C-12), 29.4(C-15), 29.4(C-4), 29.3(C-6), 29.2(C-5), 27.2(C-11), 24.7(C-13), 22.8(C-3), 14.1(C-18)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道一致，故鑒定該化合物為cis-octadec-9-enoic acid。

2.2.4 化合物4：二十四烷酸

白色粉末，分子式為C24H48O2。1H NMR(400 MHz, CDCl3)δ： 2.27(2H, t,J=7.6 Hz, H-2), 1.56(2H, p,J=7.2 Hz, H-3), 1.29～1.11(20H, m, -CH2), 0.85～0.74(3H, m, -CH3);13C NMR(100 MHz, CDCl3)δ： 180.4(C-1), 34.1(C-2), 31.9(C-3), 29.8(C-4), 29.5(C-5), 29.1(C-6), 29.0(C-7～C-20), 27.2(C-23), 24.7(C-24)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道一致，故鑒定該化合物為二十四烷酸。

2.2.5 化合物5：β-香樹脂醇

白色結(jié)晶。分子式為C30H50O。1H NMR(400 MHz, CDCl3)δ： 5.18(1H, t,J=3.7 Hz, H-12), 3.22(1H, m, H-3), 0.7～1.1(24H, S, 23～30-CH3);13C NMR(100 MHz, CDCl3)δ： 38.9(C-1), 27.3(C-2),79.0(C-3), 38.5(C-4), 55.4(C-5), 18.7(C-6), 32.7(C-7), 39.8(C-8), 47.3(C-9), 37.1(C-10), 23.6(C-11), 121.8(C-12), 145.2(C-13), 41.8(C-14), 26.2(C-15), 27.0(C-16), 32.5(C-17), 47.7(C-18), 46.9(C-19), 31.1(C-20), 34.8(C-21), 37.7(C-22), 28.1(C-23), 15.5(C-24), 15.6(C-25), 16.8(C-26), 26.2(C-27), 28.4(C-28), 33.3(C-29), 23.7(C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報(bào)道一致，故鑒定該化合物為β-香樹脂醇。

2.2.6 化合物6：12Z, 15Z-十八碳二烯酸甲酯

白色油狀。分子式為C20H34O2。1H NMR(400 MHz, CDCl3)δ： 5.38～5.19(3H, m, H-10, 12, 13), 4.96～4.80(1H, m, H-9), 0.93～0.81(3H, m, H-18);13C NMR(100 MHz, CDCl3)δ： 174.3(C-1), 34.3(C-2), 24.9(C-3), 27.2(C-4), 129.7(C-5), 130.0(C-6), 27.2(C-7), 27.2(C-8), 130.0(C-9), 128.1(C-10), 25.6(C-11), 127.9(C-12), 130.2(C-13), 27.2(C-14), 29.6(C-15), 31.9(C-16), 22.6(C-17), 14.0(C-18), 62.4(C-1′), 14.1(C-2′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報(bào)道一致，故鑒定該化合物為12Z, 15Z-十八碳二烯酸甲酯。

3 結(jié) 論

紅冬蛇菰總浸膏經(jīng)過硅膠柱層析、凝膠柱層析等分離技術(shù)和波譜數(shù)據(jù)鑒定得到6個(gè)化合物，分別是dotriacont-1-ene(1)、11α,12α-epoxytaraxer-14-en-3β-yl-acetate(2)、cis-octadec- 9-enoic acid(3)、二十四烷酸(4)、β-香樹脂醇(5)、12Z,15Z-十八碳二烯酸甲酯(6)，化合物1～4、6為首次從該屬植物中分離得到，化合物1、3、4、6為脂肪酸類，化合物2、5為三萜類化合物?；衔?具有抗炎及降壓作用[15-16]，化合物5在降血糖、降血脂方面均有較好的療效[17]，高血糖是糖尿病的前兆，現(xiàn)代治療糖尿病多以降糖的方法，化合物5的降糖作用與紅冬蛇菰能夠防治糖尿病或許有一定的相關(guān)性，紅冬蛇菰的其他藥理作用有待進(jìn)一步研究，且所分離鑒定出的化合物的抗炎、降壓、降血脂、降血糖作用與蛇菰屬植物的部分藥理作用相似。蛇菰屬藥用資源相對豐富，民間藥用基礎(chǔ)深厚，全世界約有18個(gè)屬120種，我國2個(gè)屬20種，廣泛分布于臺灣、四川、貴州、云南等地。近年來國內(nèi)外學(xué)者對蛇菰屬植物研究廣泛，但紅冬蛇菰的基礎(chǔ)研究相對較少，本課題對紅冬蛇菰化學(xué)成分進(jìn)行研究，為其開發(fā)與利用提供參考。