傣藥莫哈蒿中化學(xué)成分的研究

瞿 璐 黃 豐 孫 赟 蘇 佳 饒高雄

云南中醫(yī)藥大學(xué), 云南 昆明 650500

莫哈蒿又名鴨嘴花，來源于爵床科(Acanthaceae)植物鴨嘴花屬(Adhatoda)鴨嘴花AdhatodavasicaNees[1]，原產(chǎn)于馬來西亞、印度等國家，我國云南西雙版納、廣西等地區(qū)較多栽培。傣藥是我國古老的傳統(tǒng)醫(yī)藥之一，莫哈蒿是傣族沿用已久的藥物，味微苦、氣腥，性平，入水塔，具有清火利水、消腫止痛、續(xù)筋接骨的功效，常用于治療筋骨扭傷，風(fēng)濕痹痛；其也為藏醫(yī)習(xí)用藥材，藏族驗方二十五味松石丸處方中就包含莫哈蒿[2]，主治肝中毒、肝痛、肝硬化，肝滲水及各種急性慢性肝炎和膽囊炎。

莫哈蒿含有多種化學(xué)成分，包括生物堿類、黃酮類以及萜類，但目前研究主要以生物堿類成分為主，包括鴨嘴花堿、鴨嘴花堿酮、鴨嘴花酚堿、鴨嘴花定堿、甜菜堿等[3]，黃酮類成分研究較少，為了進一步開發(fā)傣藥莫哈蒿藥用資源，闡明藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，本實驗對莫哈蒿進行提取，并運用各種色譜方法和技術(shù)對其進行分離[4-5]，對得到的單體化合物進行結(jié)構(gòu)解析，從莫哈蒿中分離純化得到14 個化合物，其中，化合物1～6為生物堿類化合物，7～12為黃酮類化合物，化合物8、10、13 為首次從鴨嘴花屬中分離得到，并對化合物6 的核磁數(shù)據(jù)進行了修訂。

1 儀器與材料

VARIAN 500 MR超導(dǎo)核磁共振波譜儀(TMS 為內(nèi)標(biāo)，瑞士Bruker 公司)、VARIAN 400 MR超導(dǎo)核磁共振波譜儀(TMS 為內(nèi)標(biāo)，瑞士Bruker 公司)。

正相柱色譜用硅膠(75～150 μm)，薄層色譜高效硅膠GF254 板(青島海洋化工廠)，YMC S-50 gel(50 μm，日本YMC 株式會社)，Sephadex LH-20(瑞典Ge Healthcare Bio-Sciences AB 公司)，D101 大孔吸附樹脂(凈品級，天津海光化工有限公司)，HPLC 用分析柱以及制備柱 [Cosmosil 5C18-MS-II(250 mm × 4.6 mm，5 μm)和Cosmosil 5C18-MS-II(250 mm × 10 mm，5 μm)，日本Nacalai Tesque 公司]，試劑二氯甲烷、甲醇、冰醋酸為色譜純或分析純。

本實驗所用莫哈蒿采集于云南西雙版納傣族自治州，由云南中醫(yī)藥大學(xué)李學(xué)芳副教授鑒定為AdhatodavasicaNees 的干燥莖葉，標(biāo)本保存于云南中醫(yī)藥大學(xué)。

2 提取與分離

取傣藥莫哈蒿15.0 kg，用85% EtOH 加熱回流提取3 次，減壓回收溶劑，真空干燥得到浸膏1000.0 g。取85%EtOH提取物溶于10 L 水，經(jīng)D101 大孔吸附樹脂柱分離(H2O → 95% EtOH)，得H2O、85% EtOH 洗脫物分別為700.1 g、230.0 g。

取上述85% EtOH 洗脫物(230.0 g)經(jīng)硅膠柱層析，以二氯甲烷-甲醇系統(tǒng)依次洗脫，得到9 個組分Fr. 1～9。Fr. 4～9 經(jīng)正相硅膠、反相ODS、Sephadex LH-20 柱色譜和制備型高效液相色譜分離制備，得到了化合物1(30.9 mg)、2(128.9 mg)、3(5.9 mg)、4(150.5 mg)、5(114.3 mg)、6(37.8 mg)、7(7.1 mg)、8(3.1 mg)、9(4.2 mg)、10(2.1 mg)、11(2.2 mg)、12(2.5 mg)、13(19.8 mg)、14(250.0 mg)。各化合物結(jié)構(gòu)如圖1所示。

圖1 莫哈蒿中得到的化合物圖

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物 1：白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS 給出其準(zhǔn)分子離子峰m/z 147.0550 [M+H]+(calcd for C8H7N2O，147.0553)，確定其分子式為C8H6N2O。1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：8.13(1H，dd，J= 1.5、8.0 Hz，H-8)，8.11(1H，s，H-3)，7.82(1H，m，H-6)，6.68(1H，dd，J= 1.5、8.0 Hz，H-5)，7.55(1H，m，H-7)。13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：160.3(C-1)，144.9(C-3)，126.1(C-5)，133.7(C-6)，126.7(C-7)，125.2(C-8)，148.2(C-4a)，122.1(C-8a)。以上數(shù)據(jù)與文獻[6]相對照，鑒定該化合物的結(jié)構(gòu)為4(3H)-quinazolinone。

化合物 2：白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS 給出其準(zhǔn)分子離子峰m/z 189.1020[M+H]+(calcd for C11H13N2O，189.1022)，確定其分子式為C11H12N2O。1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：7.12(1H，m，H-5)，7.00(1H，m，H-7)，6.93(1H，m，H-6)，6.39(1H，m，H-8)，5.38(1H，s，3-OH)，4.61(2H，m，overlapped，H2-9)，4.55(1H，m，overlapped，H-3)，[3.37(1H，m)，3.25(1H，m)，H2-1]，[2.35(1H，m)，1.92(1H，m)，H2-2]。13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：47.0(C-1)，29.5(C-2)，70.9(C-3)，124.0(C-5)，128.4(C-6)，124.4(C-7)，126.4(C-8)，47.8(C-9)，163.7(C-3a)，143.5(C-4a)，120.3(C-8a)。以上數(shù)據(jù)與文獻[7]相對照，鑒定該化合物的結(jié)構(gòu)為鴨嘴花堿。

化合物 3：白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS 給出其準(zhǔn)分子離子峰m/z 219.1130[M+H]+(calcd for C12H15N2O2，219.1128)，確定其分子式為C12H14N2O2。1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：6.75(1H，d，J=9.5 Hz，H-5)，6.53(1H，dd，J= 2.5、9.5 Hz，H-6)，6.36(1H，d，J= 2.5 Hz，H-8)，5.48(1H，s，3-OH)，4.63(1H，m，H-3)，4.32(2H，s，H2-9)，3.88(3H，s，4′-OCH3)，[3.23(1H，m)，3.15(1H，m)，H2-1]，[2.18(1H，m)，1.73(1H，m)，H2-2]。13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：47.1(C-1)，29.6(C-2)，70.5(C-3)，125.0(C-5)，115.0(C-6)，154.3(C-7)，112.9(C-8)，47.6(C-9)，161.3(C-3a)，135.8(C-4a)，121.3(C-8a)，55.0(7-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[7]相對照，鑒定該化合物的結(jié)構(gòu)為7-甲氧基鴨嘴花堿。

化合物 4：白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS 給出其準(zhǔn)分子離子峰m/z 203.0815 [M+H]+(calcd for C11H11N2O2，203.0810)，確定其分子式為C11H10N2O2。1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：8.13(1H，dd，J=1.5、8.5 Hz，H-8)，7.82(1H，ddd，J= 1.5、7.0、8.5 Hz，H-6)，7.70(1H，br.d，J=8.0 Hz，H-5)，7.52(1H，m，H-7)，5.48(1H，s，3-OH)，5.00(1H，m，H-3)，[4.11(1H，m)，3.89(1H，m)，H2-1]，[2.46(1H，m)，2.00(1H，m)，H2-2]。13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：42.5(C-1)，29.0(C-2)，70.7(C-3)，125.8(C-5)，133.6(C-6)，126.5(C-7)，125.2(C-8)，160.0(C-9)，159.3(C-3a)，120.0(C-4a)，148.5(C-8a)。以上數(shù)據(jù)與文獻[8]相對照，鑒定該化合物的結(jié)構(gòu)為鴨嘴花酮堿。

化合物 5：白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS 給出其準(zhǔn)分子離子峰m/z 219.0760 [M+H]+(calcd for C11H11N2O3，219.0764)，確定其分子式為C11H10N2O3。1H NMR(400 MHz，CD3OD)δ：7.60(1H，d，J= 9.5 Hz，H-5)，7.51(1H，d，J= 2.5 Hz，H-8)，7.29(1H，dd，J= 2.5、9.5 Hz，H-6)，5.48(1H，s，3-OH)，5.06(1H，m，H-3)，[4.22(1H，m)，3.99(1H，m)，H2-1]，[2.59(1H，m)，2.12(1H，m)，H2-2]。13C NMR(100 MHz，CD3OD)δ：44.5(C-1)，31.2(C-2)，73.0(C-3)，129.4(C-5)，125.2(C-6)，158.0(C-7)，110.0(C-8)，162.3(C-9)，158.8(C-3a)，143.7(C-4a)，122.9(C-8a)。以上數(shù)據(jù)與文獻[7]相對照，鑒定該化合物的結(jié)構(gòu)為7-羥基鴨嘴花酮堿。

化合物 6：白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS 給出其準(zhǔn)分子離子峰m/z 233.0919 [M+H]+(calcd for C12H13N2O3，233.0921)，確定其分子式為C12H12N2O3。1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：7.64(1H，d，J= 8.0 Hz，H-5)，7.52(1H，d，J= 2.0 Hz，H-8)，7.42(1H，dd，J=2.0、8.0 Hz，H-6)，6.09(1H，s，3-OH)，4.98(1H，m，H-3)，[4.11(1H，m)，3.91(1H，m)，H2-1]，3.88(3H，s，4′-OCH3)，[2.49(1H，m)，2.00(1H，m)，H2-2]。13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：42.5(C-1)，29.1(C-2)，71.7(C-3)，128.1(C-5)，123.0(C-6)，157.0(C-7)，105.3(C-8)，159.0(C-9)，157.8(C-3a)，142.9(C-4a)，120.8(C-8a)，55.0(7-OCH3)。其1H、13C NMR 譜數(shù)據(jù)與文獻[9]相對照，并結(jié)合2D NMR 譜的解析，鑒定該化合物的結(jié)構(gòu)為7-methoxyvasicinone，對文獻中C-7、C-9 和C-3a 之間的化學(xué)位移值進行了修訂。

化合物 7：黃色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS 給出準(zhǔn)分子離子峰m/z 269.0453 [M-H]-(calcd for C15H9O5，269.0455)，確定其分子式為C15H10O5。1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ：12.98(1H，br. s，5-OH)，7.93(2H，d，J=8.5 Hz，H-2′,6′)，6.94(2H，d，J= 8.5 Hz，H-3′,5′)，6.77(1H，s，H-3)，6.48(1H，d，J= 2.0 Hz，H-8)，6.20(1H，d，J= 2.0 Hz，H-6)；13C NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：163.6(C-2)，102.7(C-3)，181.6(C-4)，161.4(C-5)，98.9(C-6)，164.4(C-7)，93.9(C-8)，157.3(C-9)，103.5(C-10)，121.1(C-1′)，128.4(C-2′,6′)，115.9(C-3′,5′)，161.2(C-4′)。以上數(shù)據(jù)與文獻[10]報道對照基本一致，故鑒定該化合物為芹菜素。

化合物 8：黃色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS給出準(zhǔn)分子離子峰m/z 283.0603 [M-H]-(Calcd for C16H11O5，283.0612)，確定其分子式為C16H12O5。1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)：δ12.87(1H，s，12-OH)，8.00(1H，d，J=8.5 Hz，H-2′,6′)，7.10(1H，d，J= 8.5 Hz，H-3′,5′)，6.77(1H，s，H-3)，6.37(1H，br.s，H-8)，6.07(1H，br.s，H-6)，3.86(3H，s，4′-OCH3)；13C-NMR(125 MHz，DMSO-d6)：δ162.5(C-2)，102.5(C-3)，181.1(C-4)、161.4(C-5)，99.7(C-6)，167.6(C-7)，94.4(C-8)，157.5(C-9)，103.3(C-10)，123.0(C-1′)，128.0(C-2′,6′)，114.5(C-3′,5′)，162.0(C-4′)，55.4(4′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[11]報道對照基本一致，故鑒定該化合物為刺槐素。

化合物 9：黃色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS給出準(zhǔn)分子離子峰m/z 285.0404 [M-H]-(calcd for C15H9O6，285.0405)，確定其分子式為C15H10O6。1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)：δ12.87(1H，s，12-OH)，7.43(1H，dd，J =2.0、8.0 Hz，H-6′)，7.41(1H，d，J = 2.0 Hz，H-2′)，6.90(1H，d，J = 8.0 Hz，H-5′)，6.67(1H，s，H-3)，6.45(1H，br.s，H-8)，6.20(1H，br.s，H-6)；13C-NMR(125 MHz，DMSO-d6)：δ163.8(C-2)，102.8(C-3)，181.6(C-4)、161.4(C-5)，98.7(C-6)，164.1(C-7)，93.8(C-8)，157.2(C-9)，103.6(C-10)，121.4(C-1′)，113.3(C-2′)，147.5(C-3′)，149.6(C-4′)，115.9(C-5′)，118.9(C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻[12]報道對照基本一致，故鑒定該化合物為木犀草素。

化合物 10：黃色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS給出準(zhǔn)分子離子峰m/z 299.0548 [M-H]-(Calcd for C16H11O6，299.0561)，確定其分子式為C16H12O6。1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)：δ12.97(1H，s，12-OH)，7.51(1H，br.d，J=7.5Hz，H-6′)，7.42(1H，br.s，H-2′)，7.07(1H，d，J=7.5Hz，H-5′)，6.68(1H，s，H-3)，6.39(1H，br.s，H-8)，6.12(1H，br.s，H-6)，3.86(3H，s，4′-OCH3)；13C-NMR(125 MHz，DMS-d6)：δ162.9(C-2)，118.3(C-3)，181.2(C-4)，161.5(C-5)，99.5(C-6)，166.9(C-7)，94.1(C-8)，157.4(C-9)，103.3(C-10)，123.1(C-1′)，112.7(C-2′)，146.8(C-3′)，151.0(C-4′)，112.1(C-5′)，118.3(C-6′)，55.7(4′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[13]報道對照基本一致，故鑒定該化合物為香葉木素。

化合物 11：黃色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS 給出其準(zhǔn)分子離子峰m/z 287.0556 [M+H]+(calcd for C15H11O6，287.0550)，確定其分子式為C15H10O6。1H NMR(DMSO-d6，500 MHz)δ：12.49(1H，br. s，5-OH)，8.07(2H，d，J= 9.0 Hz，H-2′,6′)，6.95(2H，d，J=9.0 Hz，H-3′,5′)，6.45(1H，d，J= 2.0 Hz，H-8)，6.21(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)。13C NMR(DMSO-d6，125 MHz)δ：146.7(C-2)，135.7(C-3)，175.7(C-4)，160.7(C-5)，98.2(C-6)，164.1(C-7)，93.5(C-8)，156.2(C-9)，102.9(C-10)，121.7(C-1′)，129.4(C-2′,6′)，115.4(C-3′,5′)，159.1(C-4′)。以上數(shù)據(jù)與文獻[14]相對照，鑒定該化合物的結(jié)構(gòu)為山柰酚。

化合物 12：黃色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS 給出準(zhǔn)分子離子峰m/z 303.0495 [M-H]-(calcd for C15H9O7，303.0499)，確定其分子式為C15H10O7。1H NMR(DMSO-d6，500 MHz)δ：12.49(1H，br. s，5-OH)，7.74(1H，d，J= 1.5 Hz，H-2′)，7.59(1H，dd，J= 1.5、8.5 Hz，H-6′)，6.94(1H，d，J=8.5 Hz，H-5′)，6.45(1H，d，J=1.5 Hz，H-8)，6.23(1H，d，J= 1.5 Hz，H-6)。13C NMR(DMSO-d6，125 MHz)δ：146.7(C-2)，135.7(C-3)，175.8(C-4)，160.7(C-5)，98.2(C-6)，164.0(C-7)，93.3(C-8)，156.1(C-9)，103.0(C-10)，122.0(C-1′)，115.1(C-2′)，145.0(C-3′)，147.7(C-4′)，115.6(C-5′)，122.0(C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻[15]相對照，鑒定該化合物的結(jié)構(gòu)為槲皮素。

化合物 13：白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS 給出準(zhǔn)分子離子峰m/z 247.1300 [M+Na]+(calcd for C13H20O3Na，247.1305)，確定其分子式為C13H20O3。1H NMR(CD3OD，400 MHz)δ：5.87(1H，d，J=1.4 Hz，H-4)，5.80(1H，dd，J= 6.4、16.0 Hz，H-8)，5.78(1H，d，J= 16.0 Hz，H-8)，4.32(1H，dq，J=6.4、6.4 Hz，H-9)，[2.48(1H，d，J= 16.4 Hz)，2.16(1H，d，J=16.4 Hz)，H2-2]，1.91(3H，d，J = 1.2 Hz，H3-13)，1.24(3H，d，J = 6.8 Hz，H3-10)，1.03(3H，s，H3-12)，1.00(3H，s，H3-11)。13C NMR(CD3OD，100 MHz)δ：41.0(C-1)，49.4(C-2)，199.8(C-3)，125.7(C-4)，166.0(C-5)，79.0(C-6)，128.6(C-7)，135.6(C-8)，67.2(C-9)，18.2(C-10)，23.1(C-11)，22.4(C-12)，22.1(C-13)。以上數(shù)據(jù)與文獻[16]相對照，鑒定該化合物的結(jié)構(gòu)為vomifoliol。

化合物 14：白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS 給出準(zhǔn)分子離子峰m/z 413.3780 [MH]-(calcd for C29H49O，413.3789)，確定其分子式為C29H50O。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：5.38(1H，d，J= 4.6 Hz，H-6)，1.11(3H，s，H-19)，0.97(3H，d，J=4.8 Hz，H-21)，0.87(3H，d，J= 6.4 Hz，H-2)，0.83(3H，d，J= 8.0 Hz，H-26)，0.71(3H，s，H-18)。13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ：37.3(C-1)，29.7(C-2)，71.8(C-3)，42.3(C-4)，140.8(C-5)，121.7(C-6)，31.9(C-7)，31.7(C-8)，50.1(C-9)，36.5(C-10)，21.1(C-11)，39.8(C-12)，42.3(C-13)，56.8(C-14)，24.3(C-15)，28.2(C-16)，56.1(C-17)，11.9(C-18)，19.8(C-19)，36.2(C-20)，18.8(C-21)，34.0(C-22)，26.1(C-23)，45.8(C-24)，29.2(C-25)，19.0(C-26)，19.4(C-27)，23.1(C-28)，11.9(C-29)。以上數(shù)據(jù)與文獻[17]相對照，鑒定該化合物的結(jié)構(gòu)為β-谷甾醇。

4 討論

作者應(yīng)用多種色譜法對傣藥莫哈蒿的化學(xué)成分進行了系統(tǒng)的分離制備，并結(jié)合多種波譜法鑒定了14 個化合物，其中，化合物4(3H)-quinazolinone(1)，鴨嘴花堿(2)，7-甲氧基鴨嘴花堿(3)，鴨嘴花酮堿(4)，7-羥基鴨嘴花酮堿(5)，7-methoxyvasicinone(6)為生物堿類化合物；芹菜素(7)，刺槐素(8)，木犀草素(9)，香葉木素(10)，山柰酚(11)，槲皮素(12)為黃酮類化合物，化合物刺槐素(8)、香葉木素(10)和vomifoliol(13)均為首次從鴨嘴花屬中分離得到。查閱相關(guān)文獻發(fā)現(xiàn)，鴨嘴花堿(2)能夠抑制氯化鉀，乙酰膽堿及磷酸組胺引起的豚鼠離體氣管平滑肌收縮，表現(xiàn)出較強的體外擴張支氣管活性[18]；芹菜素(7)、木犀草素(9)、山柰酚(11)具有抗細(xì)胞毒性的作用[19]；芹菜素(7)、木犀草素(9)、香葉木素(10)、槲皮素(12)具有抗炎、抗氧化活性的藥理作用[20]。莫哈蒿是傣族沿用已久的藥物，具有較好的臨床的療效，莫哈蒿在臨床上用于治療呼吸系統(tǒng)方面的疾病，如咳嗽、感冒、哮喘、支氣管炎、肺結(jié)核，這可能與鴨嘴花堿(2)能較強的擴張體外支氣管相關(guān)；莫哈蒿還可用于治療筋骨扭傷，風(fēng)濕痹痛可能與芹菜素(7)、木犀草素(9)、香葉木素(10)、槲皮素(12)具有抗炎、抗氧化活性的藥理作用密切相關(guān)，但具體的作用機理及靶點還需要進一步分子藥理學(xué)的研究；本研究還會進一步完善莫哈蒿的物質(zhì)基礎(chǔ)，對其臨床應(yīng)用會有進一步的指導(dǎo)意義，還可為新藥的研究與開發(fā)奠定基礎(chǔ)，為民族藥的研究與開發(fā)提供參考。