• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    酶解麥胚制備風味活性肽的研究

    2022-07-26 09:56:00趙原金艷張民
    食品研究與開發(fā) 2022年14期
    關(guān)鍵詞:解物分子量底物

    趙原,金艷,張民

    (天津科技大學食品營養(yǎng)與安全國家重點實驗室食品科學與工程學院,天津 300457)

    小麥作為我國重要的糧食作物,其加工副產(chǎn)物小麥胚芽約占小麥籽粒的3%,其蛋白質(zhì)含量約30%,具有明顯的資源優(yōu)勢和營養(yǎng)價值[1]。然而,目前小麥胚芽主要作為飼料廣泛應用于養(yǎng)殖業(yè),產(chǎn)品附加值較低,造成了極大的資源浪費[2]。

    活性肽一般含有2個~20個氨基酸,分子量小于6 000 Da,具有良好的生物活性,包括抗氧化、抗高血壓、抗血栓、抗菌和抗炎作用等[3-4]。與傳統(tǒng)藥物相比,活性肽具有易吸收、低毒、高效的競爭優(yōu)勢,在制藥領(lǐng)域有非常好的應用前景。目前常用的制備方法包括發(fā)酵和酶解。同時,肽類物質(zhì)也具有一定的食品風味特性,如呈鮮和增甜。從食物蛋白中提取或者通過氨基酸合成得到的分子量低于3 000 Da的呈味肽,因在天然食品以及加工食品中產(chǎn)生鮮明的特征滋味而引起人們的廣泛關(guān)注,已有多項研究從禽畜肉類、水產(chǎn)品、豆類等各種食物中制備獲得呈味肽[5]。相比于傳統(tǒng)的調(diào)味劑,呈味肽具有低熱量、天然健康的特性,具有非常好的開發(fā)前景和應用價值。因此,本研究以脫脂麥胚為原料,將風味與營養(yǎng)相統(tǒng)一,研究和開發(fā)具有生物活性的麥胚風味肽,為提高小麥副產(chǎn)物綜合利用附加值、提升糧食資源綜合利用率提供新的思路,具有廣闊的市場前景和研究價值。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    脫脂小麥胚芽(蛋白含量約為30%):河南省鯤華生物技術(shù)有限公司。

    風味蛋白酶(食品級):諾維信(中國)生物技術(shù)有限公司;濃鹽酸、濃硫酸(均為分析純):天津市化學試劑一廠;無水乙醇、氫氧化鈉、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀(均為分析純):國藥集團化學試劑有限公司;1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH):美國Sigma公司;2,2'-聯(lián)氨-雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二胺鹽[2,2'-Azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)diammonium salt,ABTS]:上海麥克林生化科技有限公司;草酸、酒石酸、蘋果酸、乳酸、檸檬酸、琥珀酸、抑菌酶、桿菌肽、乙氨酰-乙氨酰-乙氨酸(標準品):北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責任公司;5'-尿嘧啶核苷酸、5'-鳥嘌呤核苷酸、5'-次黃嘌呤核苷酸、5'-腺嘌呤核苷酸(標準品):壇墨質(zhì)檢標準物質(zhì)中心。

    1.2 儀器與設(shè)備

    電子分析天平(AB204-N):上海精科實業(yè)有限公司;電熱鼓風干燥箱(GZX-9070MBE):上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠;數(shù)顯式電熱恒溫水浴鍋(XMTD-204):天津歐諾儀器儀表有限公司;pH計(DHSJ-3F):上海儀電科學儀器股份有限公司;酶標儀(Synergy HTX):美國伯騰儀器有限公司;氨基酸分析儀(L 8900):日立公司;氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(ISQ 7000)、真空冷凍干燥機(MODULYOD-230):賽默飛世爾科技公司;離心機(TDZ5-WS):長沙湘儀離心機儀器制造有限公司。

    1.3 方法

    1.3.1 酶解麥胚單因素試驗

    以脫脂小麥胚芽粉為原料,用磷酸鹽緩沖溶液配制一定底物濃度的麥胚溶液,磁力攪拌器調(diào)漿5min,95℃水浴10 min后冷卻至酶解溫度,加入風味蛋白酶,酶解3 h。經(jīng)90℃水浴滅酶15 min后離心(3 500 r/min、20 min),上清液冷凍干燥后備用。參考張玲等[6]的方法配制雙縮脲試劑測定酶解物中肽含量,并計算麥胚肽得率。單因素試驗設(shè)計如下。

    固定酶解溫度為50℃,酶添加量4%,底物濃度4%,以麥胚肽得率為指標,選取酶解pH值為4、5、6、7、8,考察酶解pH值對酶解制備麥胚肽的影響。

    固定酶解pH值為6,酶添加量4%,底物濃度4%,以麥胚肽得率為指標,選取酶解溫度30、40、50、60、70℃,考察酶解溫度對酶解制備麥胚肽的影響。

    固定酶解pH值為6,酶解溫度為50℃,底物濃度4%,以麥胚肽得率為指標,選取酶添加量2%、3%、4%、5%、6%,考察酶添加量對酶解制備麥胚肽的影響。

    固定酶解pH值為6,酶解溫度為50℃,酶添加量4%,以麥胚肽得率為指標,選取底物濃度2%、3%、4%、5%、6%,考察底物濃度對酶解制備麥胚肽的影響。

    1.3.2 感官品評

    將酶解物配制為10 mg/mL樣液并經(jīng)121℃滅菌20 min,選擇經(jīng)過培訓的10名感官評定員(5男5女,年齡20歲~30歲)組成感官評定小組對其進行品評,感官評分標準如表1所示。

    表1 感官評分標準Table 1 Standard of sensory evaluation

    1.3.3 揮發(fā)性風味物質(zhì)的測定

    參考孫浩然[7]的方法,選擇頂空固相微萃取技術(shù)對酶解物氣味進行收集,再利用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀進行鑒定。

    1.3.4 游離氨基酸含量的測定

    參考吳陽[8]的方法稍作改動,稱取適量樣品充分溶解于超純水后與10%磺基水楊酸以3∶1的體積比混勻,于4℃下靜置1 h后反復低溫離心(10 000 r/min,10 min),取上清液,經(jīng)0.22 μm水膜過濾后上機進行測定。

    1.3.5 呈味核苷酸含量的測定

    參考呂麗等[9]的方法,稍作改動,采用高效液相色譜法,色譜條件:色譜柱為ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm);流動相為0.02 mol/L磷酸二氫鉀溶液(pH4.6)與甲醇的體積比97∶3;柱溫30℃;進樣量20μL;檢測波長254 nm;流速0.6 mL/min。樣品經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過濾后進樣測定,同時利用標準品的出峰時間及峰面積做線性回歸方程。

    1.3.6 有機酸含量的測定

    參考GB 5009.157—2016《食品安全國家標準食品中有機酸的測定》[10],采用高效液相色譜法進行有機酸的測定。

    1.3.7 肽分子量分布的測定

    參考張佳男[11]的方法,稍作改動,采用高效液相色譜法,色譜條件:TSK-gel 2000 SWXL色譜柱(7.8 mm×30 cm);流動相為乙腈-水-三氟乙酸體積比20∶80∶0.1;柱溫30 s;流速0.5 mL/min。進樣前用0.22 μm微孔濾膜過濾。以標準品的保留時間和相對分子質(zhì)量的對數(shù)做線性回歸方程。

    1.3.8 超濾分離

    將酶解物配制成一定濃度的溶液,依次使用截留量為10000Da和3000Da的超濾管,然后以8000 r/min在4℃下離心15 min,收集各組分濾液,-80℃冷凍干燥,保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.3.9 DPPH自由基清除能力的測定

    參考Wang等[12]的方法,取一定體積的不同濃度樣品水溶液,加入等體積0.1 mmol/L DPPH的無水乙醇溶液,混勻,室溫避光反應30 min后在517 nm處測得各吸光度,以相同質(zhì)量濃度的抗壞血酸做對照試驗。DPPH自由基清除率用以下公式計算。

    式中:A為樣品+0.1 mmol/L DPPH無水乙醇溶液的吸光度;A0為樣品+無水乙醇溶液的吸光度;A1為水+0.1 mmol/L DPPH無水乙醇溶液的吸光度;A2為水+無水乙醇溶液的吸光度。

    1.3.10 ABTS+自由基清除能力的測定

    參考Chen等[13]的方法,將等體積7.4 mmol/L ABTS溶液和2.6 mmol/L過硫酸鉀溶液混勻,室溫避光反應12 h~16 h后取一定體積混合液經(jīng)無水乙醇稀釋得到ABTS工作液,使其室溫避光放置30 min后在734 nm處的吸光度為0.70±0.02。取40 μL待測液和160 μL ABTS工作液于96孔酶標板反應,測定其在734 nm處的吸光度,以相同質(zhì)量濃度的抗壞血酸做對照試驗。ABTS+自由基清除率用以下公式計算。

    式中:A0為水+ABTS工作液的吸光度;A1為樣品+ABTS工作液的吸光度;A2為樣品+水的吸光度。

    1.3.11 羥自由基清除能力的測定

    參考朱楚楚[14]的方法,依次向試管中加入1.0 mL 6.0 mmol/L的水楊酸-乙醇溶液、1.0 mL 6 mmol/L的硫酸亞鐵溶液和1.0 mL樣品溶液,最后加1.0 mL 6 mmol/L的過氧化氫溶液啟動反應,搖勻后在37℃水浴反應30 min,測定其在510 nm波長處的吸光度,以相同質(zhì)量濃度的抗壞血酸做對照試驗。羥自由基清除率用以下公式計算。

    式中:A0為硫酸亞鐵+過氧化氫+水+水楊酸的吸光度;A1為硫酸亞鐵+過氧化氫+樣品+水楊酸的吸光度;A2為硫酸亞鐵+水+樣品+水楊酸的吸光度。

    1.3.12 還原力的測定

    參考趙寒青[15]的方法,取不同濃度的樣品溶液各1 mL,依次加入2.5 mL 0.2 mol/L磷酸鹽緩沖溶液(pH6.6)和2.5 mL質(zhì)量分數(shù)為1%的亞鐵氰化鉀溶液,渦旋30 s,在50℃水浴條件下反應20 min,迅速冷卻后加入2.5 mL質(zhì)量分數(shù)為10%的三氯乙酸溶液終止反應,混勻離心(3 000 r/min,10 min),取上清液 2.5 mL于試管,加入2.5 mL蒸餾水和0.5 mL質(zhì)量分數(shù)為0.1%的氯化鐵溶液后再次混勻,室溫避光放置10 min后于700 nm處測其吸光度,以相同質(zhì)量濃度的抗壞血酸做對照試驗。

    1.4 數(shù)據(jù)分析

    所有試驗平行進行3次,試驗結(jié)果以平均值±標準差表示。利用Origin 2019b、GraphPad Prism 8和IBM SPSS Statistics 26進行數(shù)據(jù)分析和圖表繪制。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 風味蛋白酶酶解麥胚的單因素試驗結(jié)果

    2.1.1 酶解pH值對麥胚肽得率和風味的影響

    酶解pH值對麥胚肽得率和風味的影響如圖1所示。

    圖1 酶解pH值對麥胚肽得率和風味的影響Fig.1 Effects of pH value of enzymatic hydrolysis on the yield and flavor of wheat germ peptides

    在不同酶解pH值條件下利用風味蛋白酶進行麥胚酶解,麥胚肽得率有顯著差異,隨著酶解pH值的提高,肽得率呈現(xiàn)一個先上升后趨于平緩的趨勢,在pH值為7時達到最大,此時麥胚肽得率為(6.11±0.14)%。同時,感官評分結(jié)果表明,酶解pH值的改變對酶解物的咸味和香味有一定影響,且均無異味產(chǎn)生,這可能是由于酶解pH值影響美拉德反應程度的不同從而生成不同風味物質(zhì)。當酶解pH值為7時呈現(xiàn)一定的咸鮮風味和較好的香氣,因此選擇酶解pH7為最佳。

    2.1.2 酶解溫度對麥胚肽得率和風味的影響

    酶解溫度對麥胚肽得率和風味的影響如圖2所示。

    圖2 酶解溫度對麥胚肽得率和風味的影響Fig.2 Effects of enzymatic hydrolysis temperature on the yield and flavor of wheat germ peptides

    當酶解溫度由30℃升高到70℃,麥胚肽得率呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢,在50℃時達到最大。其原因可能是風味蛋白酶活性在30℃~50℃范圍內(nèi)隨著溫度的升高而提高,蛋白水解度逐漸上升,而當溫度大于60℃時酶活受到抑制導致水解度下降。結(jié)合感官評分結(jié)果,酶解溫度在50℃和60℃時酶解物表現(xiàn)出較好的香氣和鮮味,因此選擇50℃為最佳酶解溫度。

    2.1.3 酶添加量對麥胚肽得率和風味的影響

    酶添加量對麥胚肽得率和風味的影響如圖3所示。

    圖3 酶添加量對麥胚肽得率和風味的影響Fig.3 Effects of enzyme addition on the yield and flavor of wheat germ peptides

    隨著蛋白酶添加量的增大,麥胚肽得率不斷提高,當酶添加量大于4%時,麥胚肽得率有所下降并逐漸趨于平緩,可能是反應中的酶達到一定含量時,酶與底物的反應過剩導致反應速度變小,繼續(xù)增大酶添加量,反應體系中的水解度的變化已經(jīng)不明顯。結(jié)合感官評分結(jié)果,在酶添加量介于3%~6%時,酶解物有一定的咸鮮風味,其它味覺感官不突出,但整體呈現(xiàn)一定香氣。綜合上述情況,選擇4%為最佳酶添加量。

    2.1.4 底物濃度對麥胚肽得率和風味的影響

    底物濃度對麥胚肽得率和風味的影響如圖4所示。

    圖4 底物濃度對麥胚肽得率和風味的影響Fig.4 Effects of substrate concentration on the yield and flavor of wheat germ peptides

    底物濃度過高,體系的流動性變差,使底物蛋白與酶分子之間的相互運動減弱,降低底物蛋白與酶分子的碰撞概率,進而反應速度減慢;其次,體系中的底物蛋白會在酶的活性位點積累,形成無活性的中間產(chǎn)物,從而抑制水解反應[16]。由圖4可以看到,隨著底物濃度的增加,多肽的得率呈現(xiàn)顯著下降的趨勢。同時,當?shù)孜餄舛葹?%時,鮮、咸味較為突出,其它味覺感官不突出,且呈現(xiàn)一定香氣。綜合上述情況,選擇2%為最佳底物濃度。

    2.2 揮發(fā)性風味物質(zhì)的測定

    酶解物中揮發(fā)性風味物質(zhì)的測定結(jié)果如表2所示。

    表2 酶解物中揮發(fā)性風味物質(zhì)的測定Table 2 Determination of volatile flavor substances in the hydrolysate

    經(jīng)過對比特征揮發(fā)性化合物的保留時間和遷移時間,對酶解物的揮發(fā)性風味成分進行定性分析,得到27種化合物,其中包括5種醇類、2種醛類、2種酯類、3種酸類、1種酚類、1種酮類、11種烴類和2種雜環(huán)類,這些化合物構(gòu)成了酶解物的揮發(fā)性風味輪廓。其中,烴類物質(zhì)的含量最高,其次是醇類和酸類。烴類化合物可能是由脂肪氧化降解產(chǎn)生的,且大部分烴類物質(zhì)香氣較弱或無氣味[17-18]。壓榨后,麥胚中的油脂不能完全去除,因此,醇類物質(zhì)可能是由于脫脂麥胚殘油中的不飽和脂肪酸被氧化酶氧化,再被裂解酶或氧化還原酶催化生成[19]。醇類一般具有令人愉悅的氣味,苯乙醇是我國規(guī)定允許使用的食用香料,具有清甜的玫瑰樣香氣。不飽和醇類的閾值較飽和醇低,對風味貢獻大[20]。酸類物質(zhì)是酯類化合物合成的前體物質(zhì)之一,可以由氨基酸降解后通過氧化或還原作用產(chǎn)生,也可通過飽和脂肪酸自身氧化降解產(chǎn)生[21]。正己酸、乙酸和辛酸整體上表現(xiàn)出不愉快的香氣。除此之外,醛類和酯類物質(zhì)也為產(chǎn)物提供了較好的花果樣香氣。其中,醛類物質(zhì)主要來自脂肪的氧化分解或者美拉德反應,閾值較低,對氣味形成的貢獻較大[22-24]。酯類物質(zhì)由醇和羧酸酯化而成,通常為食物提供良好的香氣[25],如γ-壬內(nèi)酯有濃郁椰子香氣,常用于調(diào)配食用香精。

    2.3 游離氨基酸含量的測定

    酶解物中游離氨基酸含量如表3所示。

    表3 酶解物中游離氨基酸的含量Table 3 Content of free amino acids in the hydrolysate

    氨基酸間的相互作用對酶解物的風味有一定的影響[19]。根據(jù)對游離氨基酸滋味特征的描述,游離氨基酸呈味特征以鮮味、甜味、苦味為主[26],對酶解物中的游離氨基酸的含量進行測定,可以發(fā)現(xiàn)鮮味氨基酸和甜味氨基酸的含量遠低于其閾值,苦味氨基酸中尤其以精氨酸的含量較高,達到10.132 mg/g,這可能是由于過度的酶解,肽中的疏水性氨基酸逐漸暴露在側(cè)鏈的外面,是酶解物呈苦味的原因之一[19]。

    2.4 呈味核苷酸含量的測定

    酶解物中呈味核苷酸含量如表4所示。

    表4 酶解物中呈味核苷酸的含量Table 4 Content of flavoring nucleotides in the hydrolysate

    呈味核苷酸的含量與酶解物的風味密切相關(guān),其中AMP、GMP和IMP是鮮味的重要貢獻者,并與游離氨基酸存在協(xié)同作用[27]。相關(guān)研究分析了酶解物中UMP、GMP、IMP、AMP的含量。GMP和IMP是主要的呈鮮味核苷酸,其閾值分別為0.2 mg/g和1.8 mg/g[28-29]。其中,在酶解物中檢出GMP含量為(0.143±0.026)mg/g。

    2.5 有機酸含量的測定

    酶解物中有機酸含量如表5所示。

    表5 酶解物中有機酸的含量Table 5 Content of organic acids in the hydrolysate

    有機酸是主要的酸味物質(zhì)成分,其酸性源于羧基,其含量和種類對產(chǎn)品的風味特性起到非常重要的作用。有機酸會影響感官特性,不僅能通過自身酸味調(diào)節(jié)口腔對其它滋味的感知,又能通過影響體系pH值來調(diào)控滋味物質(zhì)之間的交互作用,從而影響消費者對產(chǎn)品的接受程度[30-31]。有機酸可分為揮發(fā)酸和不揮發(fā)酸,不揮發(fā)酸包括酒石酸、蘋果酸、乳酸、檸檬酸、琥珀酸等。其中,酶解物中的酒石酸和琥珀酸的含量相對較高,是主要呈味有機酸。

    鮮味作為第5種基本味覺,是由鮮味物質(zhì)與受體結(jié)合產(chǎn)生的味覺感受,根據(jù)化學結(jié)構(gòu)的差異性,鮮味物質(zhì)可分為氨基酸及其鹽類、核苷酸類、有機酸類、肽類等[32]。琥珀酸及其鈉鹽作為有機酸類,被認定屬于鮮味物質(zhì),貢獻了特殊的鮮味和酸味[33-34]。琥珀酸的閾值為10.6 mg/100 g,在不同的濃度下,琥珀酸會產(chǎn)生強烈的咸味和苦味[35]。

    2.6 肽分子量分布的測定

    酶解物中肽分子量分布如表6所示。

    表6 酶解物中肽分子量分布Table 6 Molecular weight distribution of peptides in the hydrolysate

    酶解物中肽分子量主要分布在小于3 000 Da的部分,占總量的(63.93±1.23)%,其次是 3 000 Da~10 000 Da和大于10 000 Da的部分。有研究表明,呈味肽的分子量主要集中在3 000 Da以下[5],因此,后續(xù)試驗重點研究部分是分子量小于3 000 Da的酶解物。

    2.7 抗氧化活性研究

    對分子量小于3000Da酶解物的DPPH自由基清除率、ABTS+自由基清除率、羥自由基清除率和還原力進行測定,以抗壞血酸為陽性對照,結(jié)果如圖5~圖8所示。

    圖5 DPPH自由基清除能力的測定Fig.5 Measurement of DPPH free radical scavenging ability

    圖6 ABTS+自由基清除能力的測定Fig.6 Measurement of ABTS+free radical scavenging ability

    圖7 羥自由基清除能力的測定Fig.7 Measurement of hydroxyl free radical scavenging ability

    圖8 還原力的測定Fig.8 Determination of reducing power

    在濃度為0.1 mg/mL~10.0 mg/mL時,分子量小于3 000 Da的酶解物的DPPH自由基清除率、ABTS+自由基清除率、羥自由基清除率和還原力都隨著濃度的增加而增加。其中,分子量小于3 000 Da的酶解物的DPPH自由基清除能力(IC50值為10.327 mg/mL)和還原力相對較弱,遠低于同濃度下的抗壞血酸。在濃度為10.0 mg/mL時,分子量小于3 000 Da的酶解物對ABTS+自由基的清除能力只略低于抗壞血酸,分別為92.22%和99.67%,IC50值為0.448 mg/mL。相同濃度下,分子量小于3 000 Da的酶解物對羥自由基的清除能力也只略低于抗壞血酸,分別為95.51%和99.93%,IC50值為0.574 mg/mL??傮w而言,分子量小于3 000 Da的酶解物具有較好的體外抗氧化活性。

    3 結(jié)論

    通過單因素試驗優(yōu)化風味蛋白酶酶解麥胚制備風味活性肽的工藝參數(shù),并對酶解物中風味物質(zhì)含量、肽分子量分布及其體外抗氧化活性進行了測定。結(jié)果表明,麥胚最佳酶解條件為pH7,底物濃度2%,酶解溫度50℃,酶添加量4%,此時麥胚肽得率達到(8.17±0.70)%。在此工藝條件下,酶解物中的揮發(fā)性風味物質(zhì)以烴類、酸類和醇類物質(zhì)為主,主要呈鮮物質(zhì)天冬氨酸的含量為0.936 mg/g,5'-鳥嘌呤核苷酸的含量為(0.143±0.026)mg/g,琥珀酸的含量為(18.75±2.45)mg/g,使酶解物整體表現(xiàn)出一定的咸鮮滋味并伴有清淡的香氣。同時,體外抗氧化試驗結(jié)果表明分子量小于3 000 Da的酶解物的DPPH自由基清除率、ABTS+自由基清除率、羥自由基清除率的IC50值分別為 10.327、0.448、0.574 mg/mL,表現(xiàn)出較好的抗氧化活性。綜上,本文所制備的麥胚酶解物兼具良好的風味特性和抗氧化活性,為充分開發(fā)優(yōu)質(zhì)資源小麥胚芽,提高小麥副產(chǎn)品的市場化應用,促進營養(yǎng)健康食品產(chǎn)業(yè)的發(fā)展提供參考。

    猜你喜歡
    解物分子量底物
    兩種品牌大腸菌群酶底物法檢測試劑性能的比較
    云南化工(2021年6期)2021-12-21 07:30:56
    加入超高分子量聚合物的石墨烯纖維導電性優(yōu)異
    解析參與植物脅迫應答的蛋白激酶—底物網(wǎng)絡
    科學(2020年2期)2020-08-24 07:57:00
    麥芽蛋白質(zhì)組成分析及其酶解物ACE抑制活性
    中成藥(2018年3期)2018-05-07 13:34:28
    貽貝的可控酶解及其酶解液的抗氧化活性
    制革下腳料酶解物對番茄生長的影響
    長江蔬菜(2016年10期)2016-12-01 03:05:36
    改良的Tricine-SDS-PAGE電泳檢測胸腺肽分子量
    不同對照品及GPC軟件對右旋糖酐鐵相對分子量測定的影響
    低分子量丙烯酰胺對深部調(diào)驅(qū)采出液脫水的影響
    泛素連接酶-底物選擇關(guān)系的研究進展
    久久精品人人爽人人爽视色| 波野结衣二区三区在线| 成人黄色视频免费在线看| 色吧在线观看| 久久97久久精品| 最近的中文字幕免费完整| 极品少妇高潮喷水抽搐| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 亚洲av综合色区一区| 在线观看人妻少妇| 99视频精品全部免费 在线| 国产一区二区在线观看日韩| 免费大片18禁| 啦啦啦啦在线视频资源| 一个人看视频在线观看www免费| 国产黄色免费在线视频| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 最近的中文字幕免费完整| 久久婷婷青草| 边亲边吃奶的免费视频| 国产精品欧美亚洲77777| 大香蕉97超碰在线| 精品视频人人做人人爽| 国产永久视频网站| 国产精品一区二区在线不卡| 青春草国产在线视频| 久久久精品免费免费高清| 欧美xxⅹ黑人| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 国产精品久久久久成人av| 欧美日韩亚洲高清精品| 亚洲性久久影院| 久久女婷五月综合色啪小说| 久久99蜜桃精品久久| 成人国语在线视频| 丰满迷人的少妇在线观看| 欧美xxxx性猛交bbbb| 免费人成在线观看视频色| 精品熟女少妇av免费看| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 大香蕉97超碰在线| 日韩欧美一区视频在线观看| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 国产精品嫩草影院av在线观看| 99热这里只有精品一区| 亚洲丝袜综合中文字幕| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 天堂俺去俺来也www色官网| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 在线观看三级黄色| 午夜久久久在线观看| 免费av中文字幕在线| 欧美另类一区| 久久国产亚洲av麻豆专区| 免费日韩欧美在线观看| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 日韩欧美一区视频在线观看| 成年人免费黄色播放视频| 免费观看无遮挡的男女| 国产精品人妻久久久影院| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 国产黄片视频在线免费观看| 成人漫画全彩无遮挡| 国产精品嫩草影院av在线观看| 亚洲人与动物交配视频| 三上悠亚av全集在线观看| 亚洲三级黄色毛片| 日韩在线高清观看一区二区三区| 国产伦理片在线播放av一区| 99国产精品免费福利视频| 亚洲人成77777在线视频| 插逼视频在线观看| 天天操日日干夜夜撸| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 欧美日韩视频精品一区| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 亚洲天堂av无毛| 国产精品成人在线| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 亚洲美女搞黄在线观看| 特大巨黑吊av在线直播| av在线老鸭窝| 久久av网站| 国产探花极品一区二区| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 大香蕉久久网| 国产精品 国内视频| 3wmmmm亚洲av在线观看| 亚洲内射少妇av| 国产成人a∨麻豆精品| 久久人人爽人人片av| 十八禁高潮呻吟视频| 中国美白少妇内射xxxbb| 日本免费在线观看一区| 欧美日韩精品成人综合77777| 国产男女内射视频| av卡一久久| 999精品在线视频| 亚洲三级黄色毛片| 亚洲中文av在线| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 欧美日韩成人在线一区二区| 爱豆传媒免费全集在线观看| 99九九线精品视频在线观看视频| 最后的刺客免费高清国语| 啦啦啦啦在线视频资源| av专区在线播放| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产一区二区在线观看日韩| 一级a做视频免费观看| 久久久精品94久久精品| 18禁在线无遮挡免费观看视频| a级毛片黄视频| 美女视频免费永久观看网站| 黄色欧美视频在线观看| 麻豆成人av视频| 成人毛片60女人毛片免费| 婷婷色综合大香蕉| 丰满乱子伦码专区| 99久久精品国产国产毛片| 久久久久久久久久久丰满| h视频一区二区三区| 伦精品一区二区三区| 久久人妻熟女aⅴ| 观看av在线不卡| 97在线视频观看| a级毛片黄视频| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 欧美日本中文国产一区发布| 亚洲av中文av极速乱| 国产男女内射视频| 午夜91福利影院| 妹子高潮喷水视频| 一区二区日韩欧美中文字幕 | 丝袜脚勾引网站| 婷婷成人精品国产| 丝袜喷水一区| 国产精品一区二区三区四区免费观看| a级毛片在线看网站| 精品一区二区免费观看| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 国产精品久久久久久精品电影小说| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 午夜福利,免费看| 亚洲精品aⅴ在线观看| 各种免费的搞黄视频| 久久精品久久精品一区二区三区| 亚洲四区av| 日本黄色片子视频| 秋霞伦理黄片| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 欧美日韩精品成人综合77777| 中国国产av一级| 水蜜桃什么品种好| 欧美精品高潮呻吟av久久| 免费大片黄手机在线观看| 中文欧美无线码| 中文字幕最新亚洲高清| 欧美精品亚洲一区二区| 亚洲欧美色中文字幕在线| 亚洲成人av在线免费| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 久久99热这里只频精品6学生| 亚洲精品第二区| 免费黄频网站在线观看国产| 亚洲av国产av综合av卡| 亚洲精品国产av成人精品| av专区在线播放| 国产熟女午夜一区二区三区 | 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 综合色丁香网| 亚洲第一av免费看| 又大又黄又爽视频免费| 欧美xxxx性猛交bbbb| 亚洲中文av在线| 亚洲综合色网址| 日本黄色片子视频| 制服丝袜香蕉在线| 午夜福利视频精品| 国产又色又爽无遮挡免| 女人精品久久久久毛片| 蜜桃国产av成人99| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 久久国产亚洲av麻豆专区| 男人添女人高潮全过程视频| av播播在线观看一区| 午夜老司机福利剧场| h视频一区二区三区| 日韩中字成人| 久久精品夜色国产| 国产有黄有色有爽视频| 国产亚洲最大av| 99热这里只有精品一区| av网站免费在线观看视频| 精品少妇久久久久久888优播| 新久久久久国产一级毛片| 母亲3免费完整高清在线观看 | 搡女人真爽免费视频火全软件| 在线 av 中文字幕| 久久久久久久久久成人| 2018国产大陆天天弄谢| 高清在线视频一区二区三区| 日韩人妻高清精品专区| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 日韩在线高清观看一区二区三区| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 亚洲精品中文字幕在线视频| 久久免费观看电影| 高清欧美精品videossex| 国产不卡av网站在线观看| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 欧美xxxx性猛交bbbb| 亚洲av二区三区四区| 色哟哟·www| 中文字幕免费在线视频6| 成人毛片60女人毛片免费| 亚洲,一卡二卡三卡| 国产淫语在线视频| 精品一区二区免费观看| 欧美 日韩 精品 国产| 两个人的视频大全免费| 最后的刺客免费高清国语| 国产又色又爽无遮挡免| 一级片'在线观看视频| 亚洲精品456在线播放app| 欧美xxⅹ黑人| 午夜老司机福利剧场| 国产伦理片在线播放av一区| 久久人人爽人人爽人人片va| 欧美成人精品欧美一级黄| 交换朋友夫妻互换小说| 一本大道久久a久久精品| 欧美激情国产日韩精品一区| 国产精品欧美亚洲77777| 亚洲精品一区蜜桃| av免费观看日本| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 亚洲国产日韩一区二区| 亚洲欧洲日产国产| 国产成人精品一,二区| 精品久久久久久久久亚洲| 美女国产高潮福利片在线看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 久久青草综合色| 亚洲精品一区蜜桃| 国产精品无大码| 午夜福利视频在线观看免费| 男女国产视频网站| 日韩 亚洲 欧美在线| 亚洲经典国产精华液单| 黄色怎么调成土黄色| 精品人妻一区二区三区麻豆| 最黄视频免费看| 在线免费观看不下载黄p国产| 久久久久久久久久人人人人人人| 久久 成人 亚洲| 国产不卡av网站在线观看| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 久久精品久久久久久久性| 高清黄色对白视频在线免费看| 国产精品久久久久久av不卡| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 一级a做视频免费观看| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产熟女午夜一区二区三区 | 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 一区二区三区乱码不卡18| 高清视频免费观看一区二区| 精品一区在线观看国产| 男女无遮挡免费网站观看| 精品久久久久久电影网| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 国产 一区精品| 亚洲人与动物交配视频| 成人毛片a级毛片在线播放| 美女福利国产在线| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 国产精品三级大全| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 亚洲av成人精品一二三区| 国产乱来视频区| 满18在线观看网站| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 国产在线视频一区二区| 9色porny在线观看| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 国产男女内射视频| 日韩电影二区| 在线观看三级黄色| 在线观看一区二区三区激情| 七月丁香在线播放| 亚洲少妇的诱惑av| 国产成人91sexporn| 国产一级毛片在线| 中文欧美无线码| 国产黄色视频一区二区在线观看| 人妻夜夜爽99麻豆av| 大片免费播放器 马上看| 亚洲在久久综合| 男女国产视频网站| 国产精品国产av在线观看| xxx大片免费视频| 国产深夜福利视频在线观看| 搡女人真爽免费视频火全软件| 免费看av在线观看网站| 亚洲美女黄色视频免费看| 人妻少妇偷人精品九色| 我的老师免费观看完整版| 美女内射精品一级片tv| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 视频中文字幕在线观看| 伦精品一区二区三区| 国国产精品蜜臀av免费| 久久婷婷青草| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 精品亚洲成a人片在线观看| 婷婷色综合大香蕉| 中文字幕亚洲精品专区| 观看av在线不卡| 国产亚洲一区二区精品| 久久99精品国语久久久| 久久精品国产亚洲网站| 只有这里有精品99| 啦啦啦啦在线视频资源| 国产 一区精品| 国产视频内射| av在线观看视频网站免费| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 成人毛片60女人毛片免费| 高清欧美精品videossex| 欧美最新免费一区二区三区| av卡一久久| 少妇高潮的动态图| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 国产伦理片在线播放av一区| 国产综合精华液| 国产又色又爽无遮挡免| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 97超视频在线观看视频| 老女人水多毛片| 亚洲av男天堂| 丝袜喷水一区| 欧美精品国产亚洲| av专区在线播放| 高清av免费在线| 夜夜爽夜夜爽视频| 一级a做视频免费观看| 中文字幕久久专区| 2018国产大陆天天弄谢| 欧美变态另类bdsm刘玥| 伦理电影免费视频| 蜜桃在线观看..| a级毛片免费高清观看在线播放| 黄色欧美视频在线观看| 精品久久国产蜜桃| 亚洲人成网站在线观看播放| 青春草亚洲视频在线观看| 午夜免费男女啪啪视频观看| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 亚洲精品美女久久av网站| 国产成人av激情在线播放 | 国产国拍精品亚洲av在线观看| 国产成人精品一,二区| 黑人高潮一二区| 一个人免费看片子| 大码成人一级视频| 在线观看免费视频网站a站| xxx大片免费视频| 欧美一级a爱片免费观看看| av又黄又爽大尺度在线免费看| 久久久a久久爽久久v久久| 日韩大片免费观看网站| 夜夜爽夜夜爽视频| 欧美少妇被猛烈插入视频| 久久这里有精品视频免费| 少妇的逼好多水| av专区在线播放| 欧美国产精品一级二级三级| 欧美激情 高清一区二区三区| 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 高清av免费在线| 精品一品国产午夜福利视频| 欧美少妇被猛烈插入视频| 赤兔流量卡办理| 国产亚洲最大av| 久久亚洲国产成人精品v| 9色porny在线观看| 91精品三级在线观看| 国产黄片视频在线免费观看| 精品酒店卫生间| 国产成人免费无遮挡视频| 成人免费观看视频高清| av国产久精品久网站免费入址| .国产精品久久| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 永久网站在线| 国产精品熟女久久久久浪| 寂寞人妻少妇视频99o| 老司机亚洲免费影院| 交换朋友夫妻互换小说| 三级国产精品片| 只有这里有精品99| 三上悠亚av全集在线观看| 亚洲av成人精品一二三区| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 秋霞伦理黄片| 免费大片18禁| 久久久久久久久久久免费av| 能在线免费看毛片的网站| 欧美xxⅹ黑人| 一级黄片播放器| 91aial.com中文字幕在线观看| 性色av一级| 国产精品一国产av| 99久久人妻综合| 亚洲精品乱久久久久久| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 18禁在线播放成人免费| 性高湖久久久久久久久免费观看| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 国产亚洲欧美精品永久| 91精品一卡2卡3卡4卡| 丰满迷人的少妇在线观看| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 十八禁高潮呻吟视频| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 成人综合一区亚洲| 精品一区在线观看国产| 免费看光身美女| 91久久精品国产一区二区成人| 岛国毛片在线播放| 久久97久久精品| 国产高清不卡午夜福利| 老司机亚洲免费影院| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 99热这里只有是精品在线观看| 69精品国产乱码久久久| 伊人久久国产一区二区| 亚洲av福利一区| 国产精品国产av在线观看| 在线观看美女被高潮喷水网站| 精品酒店卫生间| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 国产成人精品无人区| 国产精品99久久99久久久不卡 | 久久久a久久爽久久v久久| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 高清不卡的av网站| 日本-黄色视频高清免费观看| av福利片在线| 亚洲图色成人| 日韩伦理黄色片| 97在线人人人人妻| 久久人人爽人人爽人人片va| 午夜福利,免费看| 在线观看免费高清a一片| 99国产综合亚洲精品| 色婷婷久久久亚洲欧美| 亚洲精品,欧美精品| 飞空精品影院首页| 我的女老师完整版在线观看| 赤兔流量卡办理| 久久青草综合色| 亚洲人成77777在线视频| 在线 av 中文字幕| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 久久久久久人妻| 99久久中文字幕三级久久日本| 日韩一区二区视频免费看| 综合色丁香网| 高清午夜精品一区二区三区| 成年人午夜在线观看视频| 超色免费av| 久久久久久久大尺度免费视频| 99久久中文字幕三级久久日本| 日韩欧美一区视频在线观看| 亚洲色图综合在线观看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 在线免费观看不下载黄p国产| 美女主播在线视频| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 水蜜桃什么品种好| 国产 一区精品| 乱码一卡2卡4卡精品| 国产一区亚洲一区在线观看| 蜜桃在线观看..| 91精品国产国语对白视频| 精品熟女少妇av免费看| 丰满饥渴人妻一区二区三| 一区二区av电影网| 日韩欧美一区视频在线观看| 免费观看无遮挡的男女| 国产免费一级a男人的天堂| 国产精品国产三级国产专区5o| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 一级毛片aaaaaa免费看小| 日本av手机在线免费观看| 全区人妻精品视频| 秋霞在线观看毛片| 少妇人妻 视频| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 亚洲av综合色区一区| 国产伦精品一区二区三区视频9| 青春草视频在线免费观看| 一级二级三级毛片免费看| 成人免费观看视频高清| 国产 精品1| 亚洲天堂av无毛| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 伦理电影免费视频| 老司机影院毛片| 熟女人妻精品中文字幕| 国产国语露脸激情在线看| 久久婷婷青草| 一二三四中文在线观看免费高清| 边亲边吃奶的免费视频| 中文字幕制服av| xxx大片免费视频| 99国产精品免费福利视频| 日韩免费高清中文字幕av| 免费高清在线观看视频在线观看| av在线app专区| 丰满乱子伦码专区| 国产精品.久久久| a 毛片基地| 日韩精品有码人妻一区| 精品人妻在线不人妻| 国产免费视频播放在线视频| av网站免费在线观看视频| 国产精品久久久久久久久免| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 伦精品一区二区三区| 高清欧美精品videossex| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 在线观看人妻少妇| 亚洲情色 制服丝袜| 国产有黄有色有爽视频| 妹子高潮喷水视频| av又黄又爽大尺度在线免费看| 91精品三级在线观看| 99久国产av精品国产电影| 亚洲天堂av无毛| 日韩视频在线欧美| 日日摸夜夜添夜夜爱| 国产成人精品无人区| 纯流量卡能插随身wifi吗| 午夜激情久久久久久久| 五月开心婷婷网| 最近的中文字幕免费完整| 日韩精品有码人妻一区| 热99久久久久精品小说推荐| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 亚洲av国产av综合av卡| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 久久综合国产亚洲精品| 久久人妻熟女aⅴ| 国产精品久久久久久久久免| 精品久久久久久久久av| 性高湖久久久久久久久免费观看| 免费黄色在线免费观看| 最近最新中文字幕免费大全7| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| av不卡在线播放| 日韩中字成人| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 日韩欧美精品免费久久| 国产精品国产三级专区第一集| 久久久国产欧美日韩av| 国产黄片视频在线免费观看| 国产永久视频网站| 亚洲少妇的诱惑av| 青青草视频在线视频观看| 久久99一区二区三区| 99热这里只有精品一区| 搡老乐熟女国产| 久久人妻熟女aⅴ| 中文字幕制服av| 伦理电影免费视频| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 欧美 日韩 精品 国产| 多毛熟女@视频| 99视频精品全部免费 在线| 超碰97精品在线观看| 国产男女内射视频| 成人亚洲欧美一区二区av| 国产69精品久久久久777片| 精品久久蜜臀av无| 性高湖久久久久久久久免费观看| 久久精品国产亚洲网站| xxx大片免费视频| 成人免费观看视频高清| 国产视频内射| 大片电影免费在线观看免费| 波野结衣二区三区在线| 妹子高潮喷水视频| 精品久久久久久久久av| 99国产综合亚洲精品| 91精品国产九色| 男女高潮啪啪啪动态图| 欧美三级亚洲精品| 99热这里只有精品一区| 成人漫画全彩无遮挡| 国产有黄有色有爽视频| 18禁动态无遮挡网站| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 亚洲第一区二区三区不卡| 成年av动漫网址| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 欧美精品一区二区大全| 精品亚洲成a人片在线观看| 91在线精品国自产拍蜜月| 日韩人妻高清精品专区|