快速定量分析氫氯噻嗪片的研究

彭夢俠，郭金卡

（嘉應學院 化學與環(huán)境學院/廣東省山區(qū)特色農業(yè)資源保護與精準利用重點實驗室，廣東 梅州 514015）

氫氯噻嗪是利尿類的一種降壓藥，廣泛運用于臨床，用于治療高血壓、水腫，是高血壓防治指南的一線藥物.其調節(jié)血壓的原理是通過排鈉利尿，減少細胞外容量，降低高血壓容量負荷.氫氯噻嗪的療效得到肯定的同時也存在一些不良反應，如低血鉀、脂代謝紊亂、高鈣低磷血癥、高尿酸痛風、直立性低血壓等.[1-2]市售氫氯噻嗪片的廠家較多，價格相差較大，藥效是否相同是消費者關心的問題，更是藥物監(jiān)督部門需要解決的問題.

目前，氫氯噻嗪含量的檢測以高效液相色譜法為主，以乙腈-水（12∶88）流動相，檢測波長為271 nm，氫氯噻嗪質量濃度線性范圍為2.05～10.25μg/mL，平均回收率為98.48%.該方法簡便，靈敏度高.還有紫外分光光度法：在最大吸收波長272 nm 測定吸收值，計算氫氯噻嗪片的含量，在2.0～14.0 μg/mL濃度范圍內成較好的線性關系.毛細管電泳法：毛細管電泳法測定復方降壓片中的維生素B1、維生素B6、氫氯噻嗪等五種組分的含量，在測定范圍內有良好的線性關系，回收率高.反高效液相色譜法：以ZORBAX C18為色譜柱，0.02 mol/L 磷酸鹽緩沖液-甲醇（80∶20）為流動相，紫外檢測波長為226 nm，重現(xiàn)性好，回收率高.[3-8]

近年來，近紅外光譜技術訊速發(fā)展，在藥品檢測、化工、食品等方面得到了廣泛的應用.[9-16]與傳統(tǒng)分析方法相比，近紅外技術操作簡單、成本低、不受樣品狀態(tài)影響等特點.本文擬采用近紅外光譜技術，建立樣品中氫氯噻嗪的定量分析模型，為藥品監(jiān)督管理部門日常打擊假劣藥品提供一種可靠便捷快速的分析方法.

1 實驗部分

1.1 實驗儀器

LC-20AT 高效液相色譜儀（日本島津公司）、AntarisⅡ型近紅外（FT-NIR）光譜儀（美國賽默飛科技公司）、Super-Shak IR 震蕩機（日本株式會社）.

1.2 實驗藥品、樣品

表1 實驗藥品及樣品

1.3 實驗方法

1.3.1 參比方法：HPLC 測定樣品中的氫氯噻嗪含量[8]

流動相：磷酸二氫鈉15.60 g，加少量的超純水溶解、攪拌，待達到室溫時，加水稀釋至1 000 mL，再加111.1 mL 乙腈，磷酸二氫鈉-乙腈體積比例為9∶1，然后用磷酸調節(jié)pH 至3.00，用0.45μm 的濾膜在溶劑抽濾器上抽濾.

色譜柱條件：C18 烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱；以磷酸二氫鈉-乙腈（9∶1）為流動相；檢測波長為271 nm；流速：1.5 mL/min；進樣量：20 μL；柱溫：30 ℃.

標準曲線的繪制：取10 mg 氫氯噻嗪標準品置于100 mL 的容量瓶中，用乙腈定容，作為對照品儲備液.用移液管移取氫氯噻嗪對照品儲備液分別向7 個10 mL 容量瓶加入1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、8.0 mL，用乙腈定容，配制不同濃度的標準溶液.橫坐標用質量濃度(X)、縱坐標用色譜峰面積(Y)，做線性回歸，得到氫氯噻嗪的線性回歸方程.

測定樣品中氫氯噻嗪的含量：用震蕩機將樣品氫氯噻嗪片制成粉末，稱取 10 mg 樣品，置于50 mL容量瓶中，用乙腈定容，超聲5 min.每種樣品取兩個樣，得到的值取平均，結果為樣品中氫氯噻嗪的實測值.

1.3.2 樣品的近紅外光譜測定

光譜采集條件：用空氣做背景，用積分球模塊附件采樣，波數(shù)范圍10 000～4 000 cm-1，掃描64 次，分辨率設為8 cm-1，優(yōu)化增益設為1 x.

光譜的采集：取樣品10 片，用震蕩機研磨成粉（震蕩機的轉速設為4 000 轉/min，時間設為1 min)，分成3 份，裝入3 個樣品杯中，用積分球模塊采集其譜圖，每個樣采集5 張圖，每種樣品得到15 張譜圖.

1.3.3 氫氯噻嗪片中氫氯噻嗪含量的定量分析模型的建立及外部驗證

以1.3.1 HPLC 法得到的樣品中氫氯噻嗪含量為參比方法，從實驗樣品中選A1-A 10 為建立模型的訓練集樣品，任意取每個樣品中的12 張譜圖為訓練集樣本，其余3 張譜圖為內部驗證集樣本.采用偏最小二乘法（PLS），建立氫氯噻嗪片中氫氯噻嗪含量的定量分析模型.

對優(yōu)化出的模型進行外部驗證，進一步驗證模型的準確性.未參與建立模型的A11-A 12 樣品為外部驗證樣品，每個樣品選3 個樣本譜圖（每個樣本測5 張譜圖，取平均譜圖），對模型進行外部驗證.

2 結果與討論

2.1 HPLC 分析樣品結果

按照1.3.1 的方法，繪制標準曲線（見圖1），標準曲線呈線性相關，線性回歸方程為y=50,225,081.69x-4,385.53，相關系數(shù)R2=0.999 7，線性關系良好.得到A1-A 12 樣品中氫氯噻嗪的含量，氫氯噻嗪的質量百分比在9.37%～31.10%之間.

圖1 氫氯噻嗪標準曲線

2.2 樣品中氫氯噻嗪含量的分析模型的建立

按照1.3.3 建模，用常規(guī)光譜數(shù)據(jù)、一階導數(shù)光譜數(shù)據(jù)和二階導數(shù)光譜數(shù)據(jù)，結合手動選擇波段和預處理方式優(yōu)化模型.結果表明，用一階導數(shù)光譜數(shù)據(jù)，選5 939.01～5 815.21 cm-1、4 443.34～4 170.92 cm-1等兩個波段，諾里斯導數(shù)濾噪，得到的模型最佳.最優(yōu)模型的校正均方差(RMSEC)：0.297，校正系數(shù)Rc：0.999 1，樣品預測均方差(RMSEP)：0.263，預測系數(shù)Rp：0.995 3，模型的性能指數(shù)（performance Index）：95.5.模型氫氯噻嗪片樣本中氫氯噻嗪預測值與真實值的關系見圖2.

圖2 樣品中氫氯噻嗪的預測值與真實值

2.3 最優(yōu)模型的外部驗證

用1.3.3 的方法，對2.2 得到的最優(yōu)模型作外部驗證，得到A11、A12 樣品中氫氯噻嗪含量的預測值，如表2.

表2 模型的預測值及其與HPLC 測定值的誤差

從表2 可看出，模型的預測值與HPLC 實測值的絕對誤差：-0.34%～0.61%，相對誤差：-1.30%～2.19%.外部驗證結果，進一步證明了得到的模型對氫氯噻嗪片中氫氯噻嗪含量的預測是準確可靠的.

3 結論

以HPLC 法為參比方法分析樣品中氫氯噻嗪的含量，測定樣品的近紅外光譜，用偏最小二乘法，建立了粉末樣品中氫氯噻嗪的快速、準確定量分析模型.在應用模型時，僅僅需要采集待測樣品的近紅外光譜圖，然后導入模型，迅速得到分析結果.建立了一種檢測氫氯噻嗪片中氫氯噻嗪含量的新方法.這種新方法不用溶劑、不用對照品、不用對樣品進行處理，是一種快速可靠的檢測方法.