VIPR1啟動子甲基化促進(jìn)轉(zhuǎn)錄因子AP-2α下調(diào)VIPR1的表達(dá)并促進(jìn)肝細(xì)胞癌的生長

原發(fā)性肝癌是全球第6 大最常見的癌癥和第3大癌癥死亡原因，2020年約有新發(fā)病例906 000例和死亡病例830 000例。在我國肝癌是第5大癌癥類型，每年新發(fā)病例約41萬，死亡病例約39.1萬。原發(fā)性肝癌中最主要的類型就是肝細(xì)胞癌（HCC），占到了總例數(shù)的75%～85%。盡管目前已經(jīng)廣泛研究了HCC中一些分子的變化，但其發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制尚未得到很好的探索，尋找與HCC發(fā)生發(fā)展相關(guān)的靶分子并研究其分子機(jī)制十分重要。

血管活性腸肽受體是一組G 蛋白偶聯(lián)受體，有VIPR1和VIPR2兩種亞型。有研究發(fā)現(xiàn)VIPR1與一些腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)。如VIPR1在前列腺癌組織中過表達(dá)，有可能作為診斷前列腺癌的靶標(biāo)；VIPR1過表達(dá)與結(jié)腸癌較差的分化有關(guān)；此外，VIPR1在腫瘤血管和巨噬細(xì)胞中的過表達(dá)也可能在侵襲性癌癥的發(fā)展中發(fā)揮重要作用。但也有一些研究報道了VIPR1的抗腫瘤作用。如神經(jīng)母細(xì)胞瘤中VIPR1的高表達(dá)會誘導(dǎo)癌細(xì)胞分化并降低其致瘤性；濾泡狀甲狀腺癌中VIPR1表達(dá)下調(diào)；肺腺癌中VIPR1表達(dá)下調(diào)以及存在VIPR1基因丟失；VIPR1過表達(dá)后可顯著抑制人肺腺癌細(xì)胞H1299的生長，遷移和侵襲；在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中VIPR1下調(diào)，與非轉(zhuǎn)移性肺癌相比，轉(zhuǎn)移性肺癌中的VIPR1降低。

我們近期報道了VIPR1在肝細(xì)胞癌組織中顯著低表達(dá)，VIPR1低表達(dá)的肝細(xì)胞癌患者總生存率降低，并且其表達(dá)下調(diào)是由VIPR1啟動子甲基化介導(dǎo)的。但VIPR1上游調(diào)控機(jī)制及其生物學(xué)功能尚不清楚，有必要作更深入的研究。DNA甲基化是一種重要的表觀遺傳修飾，可通過促進(jìn)或抑制轉(zhuǎn)錄因子與DNA結(jié)合來調(diào)節(jié)基因表達(dá)。而VIPR1的啟動子甲基化對轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合起什么作用，目前尚無相關(guān)研究報道。在本研究中，我們檢測轉(zhuǎn)錄因子AP-2α及甲基化修飾對VIPR1基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控作用，通過體內(nèi)和體外實驗檢測了VIPR1的生物學(xué)功能，探索了VIPR1在HCC中的作用機(jī)制。

雖然我國關(guān)于智能化建筑電氣節(jié)能設(shè)計的投入很多，但其在實際的使用中仍未達(dá)到預(yù)期效果，仍然有很多急需解決的問題。比如：①質(zhì)量安全監(jiān)督不嚴(yán)謹(jǐn)，這是因為電氣工程師實施節(jié)能優(yōu)化的過程中，技術(shù)應(yīng)用方面仍缺少實踐性，以致建筑電氣中的節(jié)能技術(shù)的實用性較低。②使用設(shè)備時，智能化建筑缺少智能化、自動化的電氣設(shè)備及其他附加設(shè)施使用，且我國仍未有較為成熟的研究，所以實施優(yōu)化方案時會因為使用設(shè)備受限制而不能發(fā)揮節(jié)能的最佳效果。③我國現(xiàn)階段在總體規(guī)劃智能化建筑電氣節(jié)能設(shè)計時，協(xié)調(diào)工作缺少綜合性，也沒有科學(xué)性的優(yōu)化方案，以致真正實施節(jié)能設(shè)計時達(dá)不到預(yù)期效果，也未實現(xiàn)盡量降低能耗的目標(biāo)。

1 材料和方法

1.1 細(xì)胞培養(yǎng)和DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑DAC處理

Hep3B 和Huh7 細(xì)胞系由本研究室保留并傳代。在37 ℃，5%CO下用含有10%胎牛血清和抗生素的DMEM培養(yǎng)。細(xì)胞系加入5μmol/L DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑DAC培養(yǎng)72 h，每24 h更換1次培養(yǎng)基。

1.2 使用慢病毒過表達(dá)VIPR1

二是開發(fā)利用程度低。以2011年為例（枯水年），全省用水量262.86億m3，僅占水資源總量的16.8%，低于全國22%的開發(fā)平均利用率，也低于多數(shù)省份的開發(fā)利用率 （北京97%、天津144%、河北95%、遼寧42%、河南28%、廣東25%、浙江21%、江蘇170%、湖北29%、安徽41%），開發(fā)利用潛力巨大。

1.3 siRNA轉(zhuǎn)染

本研究中使用的siRNA靶序列如下：

VIPR1 sense 5'-CCGAAUCCUGCUUCAGAAA TT-3'；

我們成功構(gòu)建了針對AP-2α兩個結(jié)合位點(diǎn)分別突變的VIPR1啟動子突變載體1、突變載體2，以及兩個結(jié)合位點(diǎn)同時突變的VIPR1啟動子突變載體1+2（圖1B），并檢測了AP-2α表達(dá)對啟動子活性的影響。VIPR1啟動子野生型載體與AP-2α表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染后熒光素酶活性顯著降低（＜0.001，圖1C），而啟動子突變載體1+2與AP-2α表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染后，熒光素酶活性明顯恢復(fù)（＜0.05）。

VIPR1 過表達(dá)慢病毒（LV-VIPR1）以及陰性對照（LV-NC）慢病毒均購自GenePharma。用慢病毒感染Huh7細(xì)胞株48 h，然后用嘌呤霉素（Santa Cruz）篩選。

antisense 5'-UUGGCAGCUUUACGUCUCCTT-3'，所有siRNA 均購自GenePharma。根據(jù)制造商的說明，使用siRNA-Mate（Genepharma）轉(zhuǎn)染Hep3B 細(xì)胞株。

實施縱向考評，傳導(dǎo)壓力。2017年，湖南電信建立了紀(jì)檢隊伍縱向一體化考核機(jī)制，印發(fā)《市州分公司紀(jì)檢監(jiān)察工作縱向考核辦法》，考評結(jié)果與季度、年度績效掛鉤。

1.4 雙熒光素酶報告基因啟動子活性檢測

使用正常人DNA 作為模板擴(kuò)增人VIPR1 基因-433 bp到+67 bp的野生型序列，以及突變了-371 bp到-354 bp 序列的VIPR1 啟動子突變型序列1，突變了-22 bp到-12 bp序列的VIPR1啟動子突變型序列2，同時突變了上述2個序列的VIPR1啟動子突變型序列1+2，將上述序列分別克隆到pGL3-Basic（VT1554,YouBio）中。從人DNA樣品中擴(kuò)增人AP-2α基因并克隆到pcDNA3.1中。轉(zhuǎn)染前1 d，將Hep3B和Huh7細(xì)胞用胰酶消化鋪96孔板，控制第2天細(xì)胞匯合度約為70%～80%，使用Hieff Trans脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑（上海翊圣生物科技有限公司），在轉(zhuǎn)染后48 h，裂解細(xì)胞，96微孔板發(fā)光檢測儀（Promega）測定熒光素酶活性，檢測值比值=螢火蟲熒光素酶檢測值/海腎熒光素酶檢測值。

數(shù)據(jù)世系的單個處理步驟Pri(1≤i≤n)包含輸入Ini、操作opi、轉(zhuǎn)換邏輯fi和輸出Outi 4方面內(nèi)容，即

1.5 焦磷酸測序

焦磷酸測序如前所述進(jìn)行。測序引物：5'-AGAT AAGTGGTATTTTTTGTTT-3'，F(xiàn)：5'-GGATGAATTG GGGTTGTTGAAAA-3'，R：5'-ACCTTCCCAAACTC CCACCTCTATA-3'。焦磷酸測序序列為VIPR1基因-423 bp到-388 bp區(qū)。

1.6 染色質(zhì)免疫共沉淀

VIPR1 蛋白在Huh7 細(xì)胞株中的表達(dá)要低于在Hep3B細(xì)胞株中的表達(dá)（圖3A），我們選擇Huh7細(xì)胞株構(gòu)建VIPR1過表達(dá)模型，Hep3B細(xì)胞株構(gòu)建VIPR1敲減模型。q-PCR結(jié)果顯示，在Huh7細(xì)胞中，與空白組相比LV-NC組VIPR1的mRNA表達(dá)水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義，LV-VIPR1組中mRNA表達(dá)水平顯著上升（＜0.05）；在Hep3B細(xì)胞中，與空白組相比NC組VIPR1的mRNA表達(dá)水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義，siVIPR1組中mRNA表達(dá)水平顯著下降（＜0.001，圖3B），因此后續(xù)實驗我們采用Huh7細(xì)胞中LV-NC組和Hep3B細(xì)胞中NC組作為對照組。Western blot 實驗結(jié)果顯示，與LV-NC組相比，LVVIPR1組中VIPR1表達(dá)量上升；與NC組相比，siVIPR1組中VIPR1表達(dá)量下降（圖3C）。

F：5'GAACCCTCGGAGACGCACAG3'，R：5'GG CGCTCCTCATGTCTACCC3'。

1.7 Western blot實驗

HCC細(xì)胞的增殖能力通過Cell Counting Kit-8測試。將細(xì)胞接種于96孔板中，2500細(xì)胞/孔，分別在鋪板0～5 d后吸去培養(yǎng)基，每孔換成150μL含有10%的CCK8的DMEM完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)1 h。使用酶標(biāo)儀檢測吸光值。

1.8 實時熒光定量PCR（qRT-PCR）

RNA提取，cDNA合成和qRT-PCR分析如前所述進(jìn)行。VIPR1和GAPDH的引物序列顯示如下：

VIPR1 上游引物F：5'-CCTCCATTCAAGGCCG CAAT-3'，下游引物R：5'-GCTGCTCATCCAAACTCG CT-3'；GPPDH為內(nèi)參，上游引物F：5'-TGCACCACCA ACTGCTTAGC-3'，下游引物R：5'-GGCATGGACTG TGGTCATGAG-3'。

為了進(jìn)一步明確說明,表1列舉了模型(11)—(15)與模型(9)—(10)的比較結(jié)果。由表1可知,提出的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)模型需要的神經(jīng)元數(shù)少且層數(shù)少,因此其結(jié)構(gòu)較為簡單。

本文采用河南省1989年至2015年的有關(guān)數(shù)據(jù)，包含了河南省65歲及以上人口占總?cè)丝诒戎亍⒑幽鲜∪丝诳倲?shù)、人口自然增長率、老齡人口撫養(yǎng)系數(shù)、城鎮(zhèn)人均可支配收入、城鎮(zhèn)化率衛(wèi)生機(jī)構(gòu)數(shù)一共7個指標(biāo)。

1.9 流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡

對于細(xì)胞周期分析，將細(xì)胞進(jìn)行血清饑餓以誘導(dǎo)細(xì)胞周期同步。收獲對數(shù)生長期的細(xì)胞，并在-20 ℃下在70%乙醇中固定1夜。第2天，洗滌細(xì)胞，在PI中孵育并通過流式細(xì)胞術(shù)分析。對于細(xì)胞凋亡分析，使用BD公司Annexin V/PI凋亡檢測試劑盒進(jìn)行Annexin V/PI染色，并用流式細(xì)胞儀分析。

1.10 細(xì)胞增殖

Western blot 如前所述進(jìn)行?？筕IPR1 抗體（1∶1000），抗AP-2α抗體（1∶1000），抗β-actin 抗體（1∶1000），均購自Abcam。

1.11 體內(nèi)實驗

5周齡BALB/c裸鼠購自江蘇集萃藥康生物科技有限公司。將總共14只BALB/c裸鼠隨機(jī)分為兩組（LVNC和LV-VIPR1，7只/組）。皮下接種Huh7細(xì)胞4×10/只。每周2次測量瘤體體積，并在35 d后注射戊巴比妥鈉，該研究方案得到了桂林醫(yī)學(xué)院實驗動物倫理委員會的批準(zhǔn)。

1.12 統(tǒng)計學(xué)分析

使用GraphPad prism 8.0進(jìn)行統(tǒng)計分析。數(shù)據(jù)的結(jié)果表示為均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差，方差分析和檢驗用于計算組間的統(tǒng)計學(xué)差異，＜0.05 認(rèn)為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 VIPR1基因啟動子區(qū)結(jié)合AP-2α下調(diào)VIPR1表達(dá)

基于Cistrome Data Browser分析ChIP-seq公共數(shù)據(jù)，顯示VIPR1基因的CpG島區(qū)有RNA聚合酶Ⅱ（POL2）和H3K4me3 富集，轉(zhuǎn)錄因子AP-2α也在CpG島區(qū)富集（圖1A）。

細(xì)胞周期實驗結(jié)果顯示，VIPR1過表達(dá)增加了G2/M期的細(xì)胞數(shù)量，＜0.01，同時減少了S期的細(xì)胞數(shù)量，＜0.01；而在VIPR1敲減的Hep3B細(xì)胞中則相反，S期的細(xì)胞數(shù)量增加，＜0.001，G2/M 期的細(xì)胞數(shù)量減少（＜0.05，圖3D～E）。

antisense5'-UUUCUGAAGCAGGAUUCGGTT-3'AP-2α sense 5'-GGAGACGUAAAGCUGCCAAT T-3'；

如上所述，隨著社會發(fā)展的日益增快，產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)升級以及新興行業(yè)的涌現(xiàn)，社會對人才的需求也逐步提升，對高等教育也提出更高的要求。因此，為了提高人才培養(yǎng)質(zhì)量，增強(qiáng)學(xué)生的創(chuàng)新實踐能力，滿足社會對人才的需求，在本科專業(yè)課程教學(xué)中探索將專業(yè)理論教學(xué)與工程實踐相融合的教學(xué)方法，不僅可以提高學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣，更重要的是通過工程應(yīng)用實踐與理論知識的交叉講解，可以讓學(xué)生理解理論知識的實際應(yīng)用場合，加深對理論知識的理解，同時通過對工程實例的學(xué)習(xí)，了解理論知識的應(yīng)用，多方面相互作用，增強(qiáng)教學(xué)效果，培養(yǎng)更為全面的人才。

焦磷酸測序結(jié)果顯示加入DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑DAC處理后，Huh7細(xì)胞中7個CpG位點(diǎn)的甲基化均值由58%下降到13.14%，Hep3B細(xì)胞中7個CpG位點(diǎn)的甲基化均值由35.43%下降到10.57%（圖2A）。染色質(zhì)免疫共沉淀結(jié)果顯示加入DAC后，隨著甲基化程度減弱，與VIPR1啟動子區(qū)結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子AP-2α顯著減少（＜0.01，圖2B）。GEPIA數(shù)據(jù)庫分析RNA-Seq數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)AP-2α和VIPR1的表達(dá)在肝組織樣本中呈顯著負(fù)相關(guān)（＜0.001，圖2C）。敲減AP-2α后，發(fā)現(xiàn)VIPR1表達(dá)上升（圖2D）。

2.2 VIPR1阻滯細(xì)胞周期進(jìn)程

使用Hep3B和Huh7細(xì)胞按照Millipore提供的方案進(jìn)行染色質(zhì)免疫沉淀測定。將稀釋的DNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物與等量的抗AP-2α抗體（Abcam）或小鼠IgG于4 ℃溫育過夜，磁珠吸附，純化染色體DNA 并通過qPCR分析。用于擴(kuò)增目的區(qū)域VIPR1基因啟動子區(qū)序列的PCR引物如下：

當(dāng)時，醫(yī)院有大量掛號窗口、收費(fèi)窗口，每個窗口都人頭攢動，也總是排著大長隊，信息技術(shù)技術(shù)主要是輔助財務(wù)人員收費(fèi)。杭州市第一人民醫(yī)院也是如此。

2.3 VIPR1促進(jìn)細(xì)胞凋亡抑制細(xì)胞增殖

細(xì)胞凋亡實驗結(jié)果顯示，與對照組相比，LV-VIPR1組的凋亡細(xì)胞顯著增加（＜0.001）。siVIPR1組的凋亡細(xì)胞數(shù)顯著降低（＜0.05，圖4A、B）。

CCK8實驗結(jié)果顯示，與對照組相比，LV-VIPR1組的細(xì)胞增殖受到抑制，而siVIPR1組的細(xì)胞增殖顯著（圖4C）。

2.4 VIPR1在體內(nèi)抑制腫瘤生長

裸鼠移植瘤實驗結(jié)果顯示，與LV-NC組相比，LVVIPR1組腫瘤的體積明顯減小（＜0.001），質(zhì)量顯著降低（＜0.05，圖5A、B）。

3 討論

RNA聚合酶Ⅱ（POL2）和H3K4me3通常在強(qiáng)啟動子處高度富集，我們通過Cistrome Data Browser分析發(fā)現(xiàn)VIPR1 基因的CpG 島區(qū)有POL2 和H3K4me3富集，提示該CpG島區(qū)為VIPR1基因的啟動子。同時分析發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄因子AP-2α也在此CpG島區(qū)富集，表明轉(zhuǎn)錄因子AP-2α可能參與VIPR1基因轉(zhuǎn)錄，并且與啟動子的甲基化相關(guān)。之前的研究發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄因子AP-2α既有轉(zhuǎn)錄激活作用，也有轉(zhuǎn)錄抑制作用。已有研究表明AP-2α可轉(zhuǎn)錄激活HER2、ESR1和CDKN1A，還可轉(zhuǎn)錄抑制FGFR1和SAA1。而轉(zhuǎn)錄因子AP-2α對VIPR1基因

的轉(zhuǎn)錄起哪種作用尚未見報道。在本研究中我們通過雙熒光素酶實驗，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染AP-2α可明顯抑制VIPR1啟動子野生型組熒光素酶活性，對于VIPR1啟動子突變型1+2組，則熒光素酶活性明顯恢復(fù)，提示VIPR1啟動子突變型序列1和序列2可影響AP-2α結(jié)合，并且AP-2α結(jié)合后抑制其轉(zhuǎn)錄活性。

我們前期的研究發(fā)現(xiàn)VIPR1 基因的啟動子存在DNA甲基化修飾，結(jié)合本研究，我們推測轉(zhuǎn)錄因子AP-2α與VIPR1啟動子的結(jié)合可能與甲基化有關(guān)。通常認(rèn)為當(dāng)啟動子甲基化后會阻礙轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄抑制，一些轉(zhuǎn)錄因子可能在其結(jié)合位點(diǎn)促進(jìn)DNA 去甲基化；而有些研究認(rèn)為DNA甲基化也可以為轉(zhuǎn)錄因子創(chuàng)造一個新的結(jié)合位點(diǎn)，一些轉(zhuǎn)錄因子可以結(jié)合甲基化的DNA進(jìn)而調(diào)控基因表達(dá)。我們首先用DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑處理肝癌細(xì)胞系，再通過焦磷酸測序檢測甲基化水平，染色質(zhì)免疫共沉淀實驗檢測AP-2α與VIPR1啟動子序列的結(jié)合情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)位于AP-2α結(jié)合位點(diǎn)附近的甲基化水平降低后，與啟動子區(qū)結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子AP-2α顯著減少。這表明除了VIPR1啟動子上的AP-2α結(jié)合位點(diǎn)（VIPR1啟動子突變型序列1和序列2）影響其結(jié)合外，結(jié)合位點(diǎn)附近的甲基化修飾也能影響轉(zhuǎn)錄因子AP-2α的結(jié)合。一項在痛風(fēng)中的研究發(fā)現(xiàn)，NRBP1基因啟動子的低甲基化抑制AP-2α結(jié)合，上調(diào)NRBP1表達(dá)，更加驗證了本實驗的結(jié)論。而在AP-2α與VIPR1啟動子序列的結(jié)合過程中，結(jié)合位點(diǎn)和甲基化修飾兩者之間誰起主導(dǎo)作用，還需后續(xù)實驗進(jìn)一步研究。我們通過GEPIA分析發(fā)現(xiàn)AP-2α和VIPR1的表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)，敲減AP-2α后，VIPR1表達(dá)上升。以上研究表明VIPR1基因啟動子區(qū)序列的甲基化促進(jìn)了轉(zhuǎn)錄因子AP-2α結(jié)合，并且抑制了VIPR1表達(dá)。

細(xì)胞周期調(diào)控是一個復(fù)雜而精確的生理過程，細(xì)胞周期的異常會導(dǎo)致細(xì)胞分裂、增殖、分化等一系列過程紊亂，還會影響免疫反應(yīng)與自噬，其失控在腫瘤發(fā)病中處于極其重要的中心環(huán)節(jié)。我們的細(xì)胞周期實驗結(jié)果顯示VIPR1過表達(dá)增加了G2/M期的細(xì)胞數(shù)量，同時減少了S期的細(xì)胞數(shù)量，VIPR1敲減的結(jié)果則相反。G2/M 檢查點(diǎn)可阻止帶有DNA損傷的細(xì)胞進(jìn)入有絲分裂期，在維持染色體完整性方面發(fā)揮著重要作用。研究報道，芹菜素通過G2/M期細(xì)胞周期阻滯抑制腎細(xì)胞癌細(xì)胞的增殖。抑制17β-HSD7可阻滯G2/M周期并阻止卵巢癌細(xì)胞增殖。這些結(jié)果提示VIPR1過表達(dá)可能阻滯了G2/M期，抑制HCC細(xì)胞的增殖。細(xì)胞周期阻滯后往往會誘發(fā)細(xì)胞凋亡，如18β-甘草次酸通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和G2/M細(xì)胞周期阻滯，抑制肺癌細(xì)胞遷移。氯丙嗪通過誘導(dǎo)G2/M細(xì)胞周期停滯和細(xì)胞凋亡抑制結(jié)直腸癌。我們在本研究中同樣發(fā)現(xiàn)VIPR1過表達(dá)后凋亡細(xì)胞顯著增加，VIPR1 敲減的結(jié)果則相反。CCK8實驗顯示與對照相比，LV-VIPR1組的細(xì)胞增殖受到抑制，而siVIPR1組的細(xì)胞增殖顯著。此外，我們還進(jìn)一步通過體內(nèi)實驗驗證了VIPR1過表達(dá)使腫瘤體積減小，且質(zhì)量減輕。這些數(shù)據(jù)表明VIPR1抑制腫瘤生長的作用，可能是通過阻滯細(xì)胞周期進(jìn)程和促進(jìn)細(xì)胞凋亡來實現(xiàn)的。

縱觀中外教師形象差異時，可以發(fā)現(xiàn)西方更加強(qiáng)調(diào)教師智慧，教師不僅僅傳授知識，更是對學(xué)生進(jìn)行啟迪，對學(xué)生思想產(chǎn)生影響；中國則更加強(qiáng)調(diào)教師師德，“德高為師”這是這一形象的生動寫照。從蘇格拉底“產(chǎn)婆術(shù)”，夸美紐斯“班級授課制”，第斯多惠“教師終身自我教育以及孔子的“有教無類”，陶行知“生活教育”都折射出教師智慧的運(yùn)用。執(zhí)教于西南大學(xué)近50年的黃希庭教授，堪稱“凝心靜氣做學(xué)問，為人師表帶學(xué)生”教書育人楷模，半個世紀(jì)的潛心耕耘，教書、育人、科研“三位一體”，成為了中國知識分子閃耀的光芒，他在為師、為人、為學(xué)方面彰顯了師者風(fēng)范。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)VIPR1基因啟動子區(qū)的甲基化促進(jìn)了轉(zhuǎn)錄因子AP-2α的結(jié)合，并且抑制了VIPR1表達(dá)，而VIPR1 過表達(dá)可使細(xì)胞周期阻滯在G2/M期，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，抑制細(xì)胞增殖和腫瘤生長（圖5C）。本研究揭示了VIPR1 在肝細(xì)胞癌中低表達(dá)的分子機(jī)制及其生物學(xué)功能，該發(fā)現(xiàn)可為肝細(xì)胞癌治療提供新策略。