芡實(shí)殼醇提物抑制人胃癌SGC7901細(xì)胞和人肝癌HepG2細(xì)胞增殖并促進(jìn)其凋亡

殷東杰，薛夢(mèng)恒，楊過，黃永康，易陽(yáng)，王宏勛,3,王麗梅,3*

（1.武漢輕工大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，湖北武漢 430023）（2.武漢輕工大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，湖北武漢 430023）（3.湖北省生鮮食品工程技術(shù)研究中心，湖北武漢 430023）

芡實(shí)（Euryale feroxSalib.）又稱卵菱，為睡蓮科一年生水生草本植物芡的干燥成熟種仁。芡實(shí)是我國(guó)傳統(tǒng)的食用蔬果，栽培歷史悠久，種植廣泛，在我國(guó)南北各省均有分布[1]?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》記載，芡實(shí)味甘、澀，性平，具有益腎固精、補(bǔ)脾止瀉、除濕止帶的療效[2]，中醫(yī)將其歸于脾、腎二經(jīng)，并廣泛用于治療遺精滑精，遺尿尿頻，脾虛久瀉之癥[3]。現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)芡實(shí)具有抗炎[4]、抗心肌缺血[5]、降血糖[6,7]、抑制腫瘤[8,9]等作用。

多酚類化合物主要包括類黃酮、酚酸、單寧、香豆素類、木脂素類、芪類等物質(zhì)。大量研究表明，眾多植物天然多酚具有抑制腫瘤等作用，并且具有作用溫和，對(duì)機(jī)體細(xì)胞毒性較低的優(yōu)點(diǎn)[10,11]。植物天然多酚已被證明在清除導(dǎo)致DNA損傷、促進(jìn)腫瘤發(fā)生的單線態(tài)氧和各種自由基方面十分有效[12]。Zhang[13]發(fā)現(xiàn)芡實(shí)殼提取物表現(xiàn)出抗氧化活性、自由基清除能力及對(duì)脂質(zhì)過氧化的抑制作用，福林酚法及HPLC測(cè)定表明芡實(shí)殼提取物酚類物質(zhì)含量豐富且主要成分為沒食子酸及蘆丁，推測(cè)這可能是芡實(shí)殼提取物具抗氧化能力的主要原因。Fang等[14]用植物多酚新綠原酸對(duì)移植了AGS胃癌細(xì)胞的小鼠進(jìn)行處理，結(jié)果顯示新綠原酸能誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡及阻止癌細(xì)胞的遷移和侵襲。

我國(guó)芡實(shí)種植范圍廣，產(chǎn)量高，但芡實(shí)殼作為副產(chǎn)品被大量丟棄，未被深入研究及開發(fā)利用。相關(guān)研究表明芡實(shí)殼醇提物中含有大量酚類物質(zhì)，能清除體外自由基，具有良好的抗氧化能力[15-19]。Lee等[20]發(fā)現(xiàn)芡實(shí)提取物具有清除高水平的DPPH自由基，抑制脂質(zhì)過氧化，促進(jìn)細(xì)胞活力，保護(hù)H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡并增強(qiáng)各種抗氧化酶的作用。WU等[21]通過小鼠體內(nèi)抗氧化試驗(yàn)，表明口服芡實(shí)殼酚提取物可提高衰老小鼠肝、腎中SOD、CAT、GSH-Px的活性，降低MDA水平及降低小鼠游泳后BUN含量，增加HG含量，證實(shí)了芡實(shí)殼酚提取物的抗氧化活性和抗疲勞作用。

本課題組前期通過實(shí)驗(yàn)篩選發(fā)現(xiàn)，芡實(shí)殼醇提物對(duì)人肝癌HepG2細(xì)胞及人胃癌SGC7901細(xì)胞的抑制增殖作用較強(qiáng)。為進(jìn)一步評(píng)價(jià)芡實(shí)殼醇提物生物活性，本文考察芡實(shí)殼醇提物對(duì)人肝癌HepG2細(xì)胞及人胃癌SGC7901細(xì)胞的體外抗腫瘤活性并初步探討可能的作用機(jī)理，為抗腫瘤天然產(chǎn)物資源篩選提供依據(jù)，也為芡實(shí)資源綜合開發(fā)利用提供了理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

芡實(shí)殼，購(gòu)買自武漢武商量販超市；DMEM、F12培養(yǎng)基、PBS，Hyclone公司；FBS、雙抗、胰蛋白酶，杭州四季青生物工程材料公司；細(xì)胞凋亡試劑盒、細(xì)胞周期檢測(cè)試劑盒、線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒、細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度檢測(cè)試劑盒，Solaibio公司；人胃癌細(xì)胞株SGC7901、人肝癌細(xì)胞株HepG2，湖北百奧斯生物技術(shù)有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

酶標(biāo)儀，Thermo Fisher公司；離心機(jī)，湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司；微量移液器，德國(guó)Eppendorf公司；T25培養(yǎng)瓶、96孔板、凍存管、6孔板，美國(guó)Coming公司；SCHP-80 CO2培養(yǎng)箱，常州恒德儀器有限制造公司；流式細(xì)胞儀，BD公司。

1.3 方法

1.3.1 芡實(shí)殼醇提物制備過程

取新鮮芡實(shí)殼置于50 ℃烘箱內(nèi)烘干，研磨機(jī)磨碎后用75%乙醇超聲提取，經(jīng)真空冷凍干燥機(jī)濃縮凍干后得到芡實(shí)殼醇提物凍干粉。

1.3.2 CCK-8法檢測(cè)芡實(shí)殼提取物對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制率[22,23]

取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的SGC7901細(xì)胞及HepG2細(xì)胞，用胰蛋白酶進(jìn)行消化，用含有10%胎牛血清及1%雙抗的DMEM培養(yǎng)基吹打?yàn)榧?xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞密度為4×104cells/mL，接種于96孔板，每孔100 μL。于37 ℃，含5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，棄去培養(yǎng)基，PBS沖洗后加入含有不同濃度芡實(shí)殼醇提物的培養(yǎng)基100 μL，分別培養(yǎng)24 h、48 h，每孔加入10 μL CCK-8試劑，孵育3 h后用酶標(biāo)儀測(cè)定450 nm處吸光值。細(xì)胞增殖抑制率計(jì)算公式為：

1.3.3 Annexin V-FITC/PI雙染檢測(cè)細(xì)胞凋亡[24,25]

取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期且密度為1×105cells/mL的細(xì)胞懸液并接種于6孔板中，每孔1 mL，培養(yǎng)24 h后加入1 mL含不同濃度芡實(shí)殼醇提物的培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24 h。胰蛋白酶消化離心后收集細(xì)胞，預(yù)冷PBS洗滌細(xì)胞兩次，棄去PBS，用Annexin V結(jié)合液調(diào)整懸浮細(xì)胞密度為5×104cells/mL，加入5 μL Annexin V-FITC染色液4 ℃避光染色15 min，加入10 μL PI染色液4 ℃遮光孵育5 min，用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。

1.3.4 細(xì)胞周期檢測(cè)[26,27]

取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期且密度為1×106cells/mL的細(xì)胞懸液并接種于6孔板中，每孔1 mL，培養(yǎng)24 h后加入1 mL含不同濃度芡實(shí)殼醇提物的培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24 h。胰酶消化細(xì)胞，4 ℃、1500 r/min離心5 min收集細(xì)胞，預(yù)冷PBS洗滌細(xì)胞兩次，棄去PBS，加入預(yù)冷的75%乙醇，4 ℃固定過夜。離心收集固定后的細(xì)胞，加入RNA酶200 μL，37 ℃避光孵育30 min，再加入PI 100 μL并在4 ℃避光染色30 min，用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。

1.3.5 細(xì)胞線粒體膜電位檢測(cè)

取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期且密度為1×105cells/mL的細(xì)胞懸液并接種于6孔板中，每孔1 mL，培養(yǎng)24 h加入1 mL含不同濃度芡實(shí)殼醇提物的培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24 h。胰蛋白酶消化離心后收集細(xì)胞，加入0.5 mL JC-1染色工作液37 ℃孵育20 min，JC-1染色緩沖液沖洗細(xì)胞2次，并調(diào)整懸浮細(xì)胞密度為5×104cells/mL，用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。

1.3.6 細(xì)胞鈣離子濃度檢測(cè)

取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期且密度為1×105cells/mL的細(xì)胞懸液并接種于6孔板中，每孔1 mL，培養(yǎng)24 h后加入1 mL含不同濃度芡實(shí)殼醇提物的培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24 h。胰蛋白酶消化離心后收集細(xì)胞，HBSS清洗兩次后調(diào)整細(xì)胞密度為5×104cells/mL，加入BB cell Probe TM F3染色工作液，在37 ℃孵育20 min。HBSS洗滌細(xì)胞2～3次重懸細(xì)胞，37 ℃孵育10 min，用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD），組間差別采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，α=0.05，p＜0.05則表明差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與討論

2.1 芡實(shí)殼提取物組分分析

用75%乙醇對(duì)芡實(shí)殼回流提取并采用福林酚法測(cè)定其總酚含量[28]，由表1可知，芡實(shí)殼醇提物樣品中總酚含量約為 43.96%，得率達(dá) 9.19%。用UPLC-HR-MS法鑒定芡實(shí)殼醇提物中主要有效成分，結(jié)果表明老歡草素、柯里拉京、1,2,3,6-四-O-沒食子酰-β-D-葡萄糖、鞣花酸、石榴皮苦素B為醇提物中主要的多酚類物質(zhì)。單恬恬[29]通過CCK-8增殖實(shí)驗(yàn)表明，芡實(shí)殼醇提物中具抗腫瘤活性的主要多酚類物質(zhì)有鞣花酸、柯里拉京、老鸛草素。

表1 芡實(shí)殼醇提物多酚含量 Table 1 The content of polyphenols in the ethanol extract of Euryale ferox seed shell

2.2 芡實(shí)殼醇提物對(duì)腫瘤細(xì)胞體外抑制作用

利用CCK-8法分別測(cè)定芡實(shí)殼醇提物對(duì)SGC7901及HepG2細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用。由表2數(shù)據(jù)分析可知，芡實(shí)殼醇提物作用SGC7901細(xì)胞24 h后，在100～800 μg/mL濃度范圍內(nèi)有顯著抑制作用，抑制率在37.40%～58.22%之間（p＜0.05）；醇提物作用SGC7901細(xì)胞48 h后，在50～800 μg/mL濃度范圍內(nèi)有顯著抑制作用，抑制率在33.44%～92.31%之間（p＜0.05）；醇提物作用HepG2細(xì)胞24 h后，在200～800 μg/mL濃度范圍內(nèi)有顯著抑制作用，抑制率在35.52%～57.26%之間（p＜0.05）；醇提物作用HepG2細(xì)胞48 h后，在100～800 μg/mL濃度范圍內(nèi)有顯著抑制作用，抑制率在50.83%～98.18%之間（p＜0.05）。隨細(xì)胞處理時(shí)間及芡實(shí)殼醇提物劑量的增加，兩種細(xì)胞的增殖抑制率呈現(xiàn)明顯上升趨勢(shì)，這表明芡實(shí)殼醇提物對(duì)SGC7901及HepG2細(xì)胞增殖影響具有顯著的時(shí)間及劑量依賴性。Nam等[7]研究結(jié)果表明，150 μg/mL芡實(shí)殼醇提物作用A549細(xì)胞、HepG2細(xì)胞、Hep3B等細(xì)胞24 h后，對(duì)各種細(xì)胞抑制率都在35%以上，說明芡實(shí)殼醇提物對(duì)這些腫瘤細(xì)胞的增殖都具有一定抑制作用。

表2 芡實(shí)殼醇提物對(duì)SGC7901及HepG2細(xì)胞增殖影響 Table 2 Inhibition of SGC7901 and HepG2 cells by Euryale ferox seed shell ethanol extract

由表3可知，芡實(shí)殼醇提物對(duì)SGC7901和HepG2細(xì)胞作用24 h的IC50分別為457.69、556.52 μg/mL；作用48 h的IC50分別為87.05、148.59 μg/mL。數(shù)據(jù)表明芡實(shí)殼醇提物對(duì)SGC7901細(xì)胞的增殖抑制效果略高于HepG2細(xì)胞。

表3 芡實(shí)殼醇提物對(duì)SGC7901及HepG2細(xì)胞作用IC50值 Table 3 IC50 of SGC7901 and HepG2 cells by effect of Euryale ferox seed shell ethanol extract

2.3 芡實(shí)殼醇提物對(duì)細(xì)胞凋亡的影響

如圖1和圖2所示，采用FITC-Annexin V/PI雙染法檢測(cè)芡實(shí)殼醇提物對(duì)SGC7901及HepG2細(xì)胞凋亡影響。結(jié)果顯示芡實(shí)殼醇提物可促進(jìn)SGC7901及HepG2細(xì)胞凋亡，隨芡實(shí)殼醇提物濃度增加，細(xì)胞凋亡比例也隨之增大，表明芡實(shí)殼醇提物對(duì)兩種癌細(xì)胞的促凋亡作用具有濃度依賴性。

由圖3可知，晚期凋亡細(xì)胞在總凋亡細(xì)胞中占多數(shù)，表明流式結(jié)果具說服力；SGC7901在芡實(shí)殼醇提物作用下凋亡率高于HepG2細(xì)胞。與空白組相比，醇提物濃度高于50 μg/mL時(shí)可顯著促進(jìn)SGC7901細(xì)胞凋亡，高于100 μg/mL時(shí)可顯著促進(jìn)HepG2細(xì)胞凋亡。曾軍英等[30]用垂盆草醇提物對(duì)HepG2細(xì)胞進(jìn)行處理，表明該醇提物可通過抑制Mcl-1和Bcl-2的表達(dá)來抑制HepG2細(xì)胞的增殖并誘導(dǎo)其凋亡。

2.4 芡實(shí)殼醇提物對(duì)細(xì)胞周期的影響

芡實(shí)殼醇提物對(duì)HepG2及SGC7901細(xì)胞的細(xì)胞周期均存在一定影響。細(xì)胞周期檢查點(diǎn)被阻滯可引起細(xì)胞異常增殖及引發(fā)細(xì)胞凋亡。由圖4可知，芡實(shí)殼醇提物濃度在50～200 μg/mL范圍時(shí)，隨芡實(shí)殼醇提物濃度增加，HepG2中G0/G1期細(xì)胞含量顯著降低而S期細(xì)胞含量顯著升高，G2/M期細(xì)胞含量無明顯變化，表明細(xì)胞被阻滯在S期檢查點(diǎn)，醇提物濃度繼續(xù)升高則對(duì)細(xì)胞周期無明顯影響。

圖5中，芡實(shí)殼醇提物濃度低于200 μg/mL時(shí)對(duì)SGC7901細(xì)胞周期無明顯影響；當(dāng)濃度在200 μg/mL以上時(shí)，隨著醇提物濃度升高，G0/G1期細(xì)胞含量逐漸增加，細(xì)胞阻滯于G0/G1期，這表明細(xì)胞無法順利通過G1檢查點(diǎn)而被阻滯在G0/G1期。芡實(shí)殼醇提物濃度為800 μg/mL時(shí)，HepG2和SGC7901細(xì)胞中處于G2/M期的細(xì)胞所占比例較其他對(duì)應(yīng)組別明顯增加。G2/M檢查點(diǎn)有著調(diào)節(jié)細(xì)胞復(fù)制的作用，推測(cè)芡實(shí)殼醇提物可能通過影響細(xì)胞周期來促使凋亡過程發(fā)生。

綜上所述，芡實(shí)殼醇提物濃度在50～200 μg/mL范圍內(nèi)可使HepG2細(xì)胞阻滯于S期檢查點(diǎn)。李科[31]研究白藜蘆醇對(duì)HepG2細(xì)胞周期的影響，結(jié)果表明白藜蘆醇可以將HepG2細(xì)胞阻滯在S期從而抑制HepG2細(xì)胞的增殖，作用機(jī)制可能與CDK2及Cyclin E的活性有關(guān)；當(dāng)提取物濃度在200 μg/mL以上時(shí)，SGC7901細(xì)胞被阻滯在G0/G1期而無法順利通過G1檢查點(diǎn)。閆開旭[32]將沒食子酸作用于SGC7901細(xì)胞，結(jié)果顯示G0/G1期細(xì)胞數(shù)目與沒食子酸濃度呈正比，且早期凋亡細(xì)胞數(shù)目與沒食子酸濃度也呈現(xiàn)出正相關(guān)，表明沒食子酸可影響SGC7901細(xì)胞周期并促使其凋亡，Western Blot檢測(cè)結(jié)果表明其機(jī)制可能是阻礙了Cyclin D1的表達(dá)。

2.5 芡實(shí)殼醇提物對(duì)細(xì)胞線粒體膜電位的影響

芡實(shí)殼醇提物可使SGC7901細(xì)胞線粒體膜電位下降且呈顯著濃度依賴性。線粒體膜電位對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)氧化分解、維持胞內(nèi)能量供應(yīng)有著重要作用。由圖6可知，芡實(shí)殼醇提物可使SGC7901細(xì)胞線粒體膜電位下降且呈顯著濃度依賴性（p＜0.01），醇提物濃度為200 μg/mL時(shí)SGC7901細(xì)胞線粒體膜電位下降率達(dá)21.92%。隨提取物濃度不斷升高，線粒體膜電位持續(xù)下降；醇提物濃度為800 μg/mL時(shí)線粒體膜電位較對(duì)照組降低56.58%。

由圖7可知，相較于SGC7901細(xì)胞，芡實(shí)殼醇提物可使HepG2細(xì)胞線粒體膜電位下降更為明顯，且呈顯著濃度依賴性（p＜0.01）。醇提物濃度為200 μg/mL時(shí)HepG2細(xì)胞線粒體膜電位下降53.81%；醇提物濃度為800 μg/mL時(shí)線粒體膜電位較對(duì)照組降低84.90%。有研究表明，線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔（MPTP）對(duì)線粒體內(nèi)鈣離子穩(wěn)態(tài)具有重要作用，MPTP的形成主要受BcL-2家族調(diào)節(jié)。MPTP的開放會(huì)使線粒體膜電位去極化，ATP合成不足，使得Caspases被活化，最終導(dǎo)致線粒體凋亡通路激活[33,34]。

綜上所述，芡實(shí)殼醇提物可能通過作用線粒體膜上的Bcl-2家族蛋白來使SGC7901和HepG2細(xì)胞線粒體膜電位下降，進(jìn)而激活線粒體凋亡通路從而促進(jìn)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。杭佳等[35]用白蘞主要藥效成分之一沒食子酸處理人肝癌HepG2細(xì)胞以研究其作用機(jī)制，結(jié)果顯示沒食子酸在12.5～200 μg/mL范圍內(nèi)對(duì)HepG2細(xì)胞生長(zhǎng)有明顯抑制作用，其抗腫瘤作用機(jī)制可能為通過降低細(xì)胞線粒體膜電位而誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡。

2.6 芡實(shí)殼醇提物對(duì)細(xì)胞鈣離子濃度的影響

細(xì)胞內(nèi)鈣離子是細(xì)胞中重要的第二信使，胞質(zhì)鈣離子濃度變化一定程度上可以反映出細(xì)胞所處狀態(tài)，其改變與胞內(nèi)多種調(diào)控相關(guān)。染料Fluo-3-AM可在胞內(nèi)被分解為Fluo-3探針，結(jié)合游離鈣離子后發(fā)出的熒光可被流式細(xì)胞儀捕捉，借此可對(duì)胞內(nèi)鈣離子濃度進(jìn)行測(cè)定。圖8及圖9中顯示各組細(xì)胞總熒光強(qiáng)度，Count軸為細(xì)胞數(shù)量，F(xiàn)ITC-A表示細(xì)胞內(nèi)結(jié)合鈣離子后的染料熒光強(qiáng)度。分析可知，與空白組相比，芡實(shí)殼醇提物可顯著使SGC7901和HepG2細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度升高，SGC7901細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度變化僅在醇提物濃度高于100 μg/mL時(shí)才具有顯著性差異，醇提物濃度為100 μg/mL時(shí)可使SGC7901細(xì)胞內(nèi)鈣離子熒光強(qiáng)度升高17.81%，且具有濃度依賴性；HepG2細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度變化僅在醇提物濃度高于200 μg/mL時(shí)才具有顯著性差異，醇提物濃度為200 μg/mL時(shí)可使HepG2細(xì)胞內(nèi)鈣離子熒光強(qiáng)度升高14.14%，且具有濃度依賴性。細(xì)胞胞質(zhì)鈣離子濃度可作為信號(hào)來對(duì)細(xì)胞多種活動(dòng)進(jìn)行調(diào)節(jié)。

相關(guān)研究表明，胞質(zhì)鈣離子濃度升高可使胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)失調(diào)，由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)釋放至胞質(zhì)中的鈣離子會(huì)使細(xì)胞核及線粒體內(nèi)鈣離子濃度升高，線粒體攝取過多游離鈣離子后會(huì)出現(xiàn)過載，使線粒體內(nèi)膜出現(xiàn)損傷，導(dǎo)致細(xì)胞色素C釋放，進(jìn)而活化Caspases導(dǎo)致細(xì)胞凋亡[36]。由此可知芡實(shí)殼醇提物介導(dǎo)的SGC7901細(xì)胞凋亡可能與鈣離子濃度升高密切相關(guān)。魏劍鋒等[37]發(fā)現(xiàn)三七總皂苷在200～800 μg/mL范圍內(nèi)能夠抑制HepG2細(xì)胞的生長(zhǎng)并誘導(dǎo)其凋亡，并且具有濃度和時(shí)間依賴，檢測(cè)表明其機(jī)制可能是通過影響細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度來起到腫瘤抑制作用。

3 結(jié)論

3.1 芡實(shí)殼醇提物對(duì)人胃癌SGC7901細(xì)胞及人肝癌HepG2細(xì)胞增殖皆具有一定的抑制作用，且呈時(shí)間及劑量依賴性。流式細(xì)胞儀FITC-Annexin V/PI雙染法結(jié)果顯示芡實(shí)殼醇提物對(duì)兩種細(xì)胞均具有凋亡誘導(dǎo)作用。福林酚法測(cè)定結(jié)果表明芡實(shí)殼醇提物總酚含量達(dá)43.96%，推測(cè)芡實(shí)殼醇提物內(nèi)含有的多酚可能是通過對(duì)活性氧進(jìn)行調(diào)控來抑制腫瘤細(xì)胞增殖。

3.2 根據(jù)細(xì)胞周期、細(xì)胞線粒體膜電位及細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的檢測(cè)結(jié)果可知，細(xì)胞周期檢測(cè)表明，濃度為200～800 μg/mL的醇提物可使SGC7901細(xì)胞阻滯于G0/G1期；濃度為50～200 μg/mL的醇提物可使HepG2細(xì)胞阻滯于S期；醇提物對(duì)兩株細(xì)胞系線粒體膜電位均有顯著影響，表明芡實(shí)殼醇提物可能通過激活腫瘤細(xì)胞線粒體通路來進(jìn)一步促進(jìn)細(xì)胞凋亡；芡實(shí)殼醇提物濃度升高可使兩種細(xì)胞胞內(nèi)鈣離子濃度增高，但SGC7901細(xì)胞對(duì)醇提物的變化更為敏感。芡實(shí)殼醇提物對(duì)兩種細(xì)胞作用模式不盡相同，對(duì)不同細(xì)胞可能通過激活不同的凋亡通路來誘發(fā)凋亡。

3.3 綜上可知，芡實(shí)殼醇提物對(duì)人胃癌SGC7901細(xì)胞及人肝癌HepG2細(xì)胞的增殖具有一定的體外抑制作用并可促進(jìn)其凋亡，且對(duì)人胃癌SGC7901細(xì)胞的抑制效果好于人肝癌HepG2細(xì)胞。推測(cè)芡實(shí)殼醇提物可能主要通過升高細(xì)胞胞質(zhì)鈣離子濃度使得線粒體膜電位降低，從而激活線粒體相關(guān)凋亡通路來促使HepG2細(xì)胞和SGC7901細(xì)胞的凋亡。目前，芡實(shí)殼在抗腫瘤方面的機(jī)理性研究依舊較少，結(jié)合其他多酚類物質(zhì)的作用機(jī)制推測(cè)其抗腫瘤作用可能涉及多條代謝通路，具腫瘤抑制作用的芡實(shí)殼有極大的潛在商業(yè)價(jià)值，其在食品、化工等行業(yè)的開發(fā)利用還有待研究。