TARDBP在胃腺癌組織中的表達(dá)及其臨床意義

李尚彧，曹 石，陳 琳

（1.山西師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，山西臨汾 041000；2.蘭州大學(xué)第一醫(yī)院病理科，蘭州 730000；3.陜西省人民醫(yī)院病理科，西安 710068）

胃癌是消化道常見(jiàn)的惡性腫瘤,位居腫瘤死亡率第2位[1]。胃癌的發(fā)生與多種因素有關(guān)，包括環(huán)境因素、幽門(mén)螺桿菌感染、遺傳因素、飲食習(xí)慣等。近年來(lái)，胃癌發(fā)生的分子機(jī)制及靶向治療已取得了一定的進(jìn)展[2]。然而，部分胃癌的病因及發(fā)病機(jī)制還不清楚，探索和研究新的分子靶點(diǎn)對(duì)胃癌精準(zhǔn)診療可能有所幫助。

TAR DNA結(jié)合蛋白（transactive response DNAbinding protein，TARDBP），又 稱TDP-43，是 由TARDBP基因編碼的一種高度保守的核蛋白，其基因位于人類染色體1p36.2[3]。TARDBP作為一種核蛋白在人體多種正常組織中可表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)，TARDBP在多種神經(jīng)退行性疾?。ɡ绨柶澓Ｄ?、額顳葉變性、肌萎縮側(cè)索硬化癥）中可能起重要的作用[4]。研究還顯示，TARDBP在人類腫瘤發(fā)生中可能起重要作用，其在肝細(xì)胞癌、白血病等少數(shù)腫瘤中表達(dá)，可能會(huì)成為腫瘤診療的分子標(biāo)志物。目前關(guān)于TARDBP在胃腺癌中的表達(dá)尚未見(jiàn)報(bào)道,因此，我們通過(guò)免疫組織化學(xué)（SP）法研究了TARDBP在胃腺癌組織、癌旁組織和正常胃黏膜組織中的表達(dá)，以期為胃癌的診療提供幫助。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 收集2017年1月～2018年1月陜西省人民醫(yī)院病理科確診的49例胃腺癌組織作為實(shí)驗(yàn)組,19例胃癌旁組織（距離腫瘤邊緣2cm的組織被定義為癌旁組織）和19例正常胃黏膜組織作為對(duì)照組?；颊呔邮芪赴└涡允中g(shù)切除,病理診斷為胃腺癌且所有病理切片均由有經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)師復(fù)核，術(shù)前均未接受放療、化療等。收集病人的臨床病理資料，包括患者年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期；49例胃腺癌中男性42例,女性7例；年齡42～76（62）歲；腫瘤＞3cm者33例，≤3cm者16例；分化程度中高中分化者19例，低分化者30例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者28例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者21例；臨床分期Ⅰ～Ⅱ者21例，Ⅲ～Ⅳ者28例。

1.2 儀器與試劑 兔抗人單克隆抗體TARDBP(克隆號(hào):EPR5810)購(gòu)自美國(guó)Abcam公司，按1∶150比例稀釋抗體，二抗試劑盒、DAB等試劑均購(gòu)自中國(guó)福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司。

1.3 方法

1.3.1 免疫組織化學(xué)檢測(cè)：所有胃癌組織、癌旁組織及正常胃黏膜組織標(biāo)本均以 10g/dl的福爾馬林固定，石蠟包埋。本研究采用免疫組織化學(xué)（SP）染色法，免疫組織化學(xué)（SP）染色法具體操作步驟參照說(shuō)明書(shū)，用 PBS 代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3.2 免疫組織化學(xué)（SP）法結(jié)果判讀：TARDBP蛋白著色部位在細(xì)胞核, 免疫組織化學(xué)判讀采用半定量計(jì)分法。依據(jù)染色強(qiáng)度和染色細(xì)胞的百分比評(píng)分，其具體為：①按陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比記分為:陰性為0分,陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤10%為1分,10%～30%為2分,≥30%為3分。②按染色強(qiáng)度計(jì)分為：無(wú)陽(yáng)性染色為0分,弱染色為1分,中等染色為2分,強(qiáng)染色為3分。兩項(xiàng)得分結(jié)果相乘：總分＜3分為陰性,總分≥3分為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 20軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料通過(guò)χ2檢驗(yàn)或Fisher精確概率法檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TARDBP在胃腺癌組織、癌旁組織及正常胃黏膜組織中的表達(dá) 見(jiàn)圖1。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)（SP）染色法研究了TARDBP在胃腺癌組織、癌旁組織和正常胃黏膜組織中的表達(dá)。研究結(jié)果顯示，TARDBP的著色部位在細(xì)胞核（圖1B，C，D），其在胃腺癌組織中可高表達(dá)（89.80%，44/49,圖1B），在胃腺癌癌旁組織中可高表達(dá)（68.42%，13/19，圖1D），在胃正常黏膜組織中低表達(dá)（26.32%，5/19，圖1E）。TARDBP在胃腺癌組織中的表達(dá)高于癌旁組織中的表達(dá)，但其差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=3.171，P＞0.05)；TARDBP在胃腺癌組織及癌旁組織中的表達(dá)均顯著高于正常胃黏膜組織中的表達(dá)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=27.400，6.756，均P＜0.05）。

圖1 TARDBP在胃腺癌組織、癌旁組織及正常胃黏膜組織中的表達(dá)

2.2 TARDBP在胃腺癌中的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 見(jiàn)表1。TARDBP在胃腺癌中的表達(dá)與患者性別、年齡、腫瘤分化程度、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期均無(wú)相關(guān)性，其差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＞0.05，)。

表1 TARDBP在胃癌中的表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系

3 討論

TAR DNA結(jié)合蛋白（TARDBP）是由TARDBP基因編碼的一種高度保守的核蛋白，其基因位于人類染色體1p36.2[3]。TARDBP分子量為43kDa，含414個(gè)氨基酸殘基[3]。TARDBP含有兩個(gè)RNA識(shí)別基序、一個(gè)核定位序列、一個(gè)核輸出信號(hào)和一個(gè)富含甘氨酸的C-末端，而在其C端發(fā)現(xiàn)了許多引起人類疾病的肌萎縮側(cè)索硬化癥突變[5]。TARDBP的表達(dá)譜較廣泛，在多種人體正常組織中可表達(dá)，包括胰腺組織、脾臟組織、胎盤(pán)組織、卵巢組織、睪丸組織、肺組織、前列腺組織、小腸組織、腎臟組織、結(jié)腸組織、胸腺組織和腦組織等[6-7]。

TARDBP在RNA的代謝中起多種作用，包括轉(zhuǎn)錄、剪接、mRNA的轉(zhuǎn)運(yùn)以及microRNA的生物合成[8]。TARDBP不同于其他調(diào)節(jié)保守外顯子剪接的RNA結(jié)合蛋白，而是抑制了非保守外顯子的剪接，并且在肌萎縮側(cè)索硬化癥-額顳葉變性病例中這個(gè)過(guò)程受到了損害。研究發(fā)現(xiàn)，TARDBP還參與了miRNA的生物合成，下調(diào)的TARDBP表達(dá)水平或存在突變的TARDBP損害了細(xì)胞模型中miRNA的生物合成。NEUMANN等[9]研究發(fā)現(xiàn)，TARDBP是額顳葉癡呆患者大腦中泛素不溶性聚集物的組成部分。后來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，TARDBP在多種神經(jīng)退行性疾病，例如阿爾茲海默病、額顳葉變性、肌萎縮側(cè)索硬化癥中都起重要的作用[4]。有研究報(bào)道，TARDBP存在于睪丸的生殖細(xì)胞、支持細(xì)胞和間質(zhì)干細(xì)胞的細(xì)胞核，參與睪丸組織中基因表達(dá)的調(diào)控，其異常表達(dá)可影響男性生育能力，導(dǎo)致男性不育[10]。因此，TARDBP在RNA的代謝和男性生育中可能具有重要的作用。

研究發(fā)現(xiàn)，TARDBP的表達(dá)在白血病中有明顯的改變，而TARDBP與尤因肉瘤的易感性有顯著的相關(guān)性[11-12]。PARK 等[13]研究發(fā)現(xiàn)，TARDBP是肝細(xì)胞癌細(xì)胞糖酵解的調(diào)節(jié)因子，其抑制了micro RNA 520的表達(dá)，進(jìn)而抑制了磷酸果糖激酶血小板亞型的表達(dá)，從而調(diào)節(jié)肝細(xì)胞癌糖酵解，并且其在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)與肝細(xì)胞癌患者的總生存率顯著相關(guān)（高表達(dá)患者的生存率明顯較低）。CHEN等[14]研究發(fā)現(xiàn)TARDBP調(diào)節(jié)腫瘤相關(guān)的 microRNA，結(jié)果顯示TARDBP可能通過(guò)調(diào)節(jié) miR-423-3p促進(jìn)肺癌癌細(xì)胞的遷移，miR-500a-3p 的表達(dá)降低與肺癌患者的不良生存相關(guān)，表明 TARDBP 可能通過(guò)調(diào)節(jié) miR-500a-3p對(duì)癌癥具有抑制作用，TARDBP調(diào)節(jié)的 miRNA 可能在癌癥的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮多方面的作用。因此，TARDBP可能在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中具有一定的關(guān)聯(lián)。

關(guān)于TARDBP在其他惡性腫瘤（包括胃腺癌）中的表達(dá)鮮有報(bào)道。我們通過(guò)免疫組織化學(xué)（SP）染色法研究了TARDBP在胃腺癌組織、癌旁組織和正常胃黏膜組織中的表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)TARDBP在胃腺癌及癌旁組織中的表達(dá)均顯著高于正常胃黏膜組織中的表達(dá)；TARDBP在胃腺癌中的表達(dá)高于癌旁組織中的表達(dá)。TARDBP在胃癌及癌旁組織均高表達(dá)，并且顯著高于正常胃黏膜組織，提示TARDBP蛋白可能在胃腺癌的發(fā)生中起到了一定作用。有研究報(bào)道，代謝綜合征和胃癌的發(fā)生有關(guān)[15-16]，而TARDBP在細(xì)胞代謝中發(fā)揮重要作用，包括葡萄糖代謝和脂質(zhì)代謝[17-18]。因此，TARDBP可能通過(guò)細(xì)胞代謝途徑對(duì)胃癌發(fā)生、進(jìn)展起一定作用，當(dāng)然還需進(jìn)一步研究。我們分析了TARDBP在胃癌中的表達(dá)與患者性別、年齡、分化程度、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期的相關(guān)性，但結(jié)果顯示均無(wú)相關(guān)性 (P＞0.05)。此外，TARDBP在多種人體正常組織中可表達(dá)，但以往研究中缺少在胃黏膜組織中表達(dá)的報(bào)道，我們研究發(fā)現(xiàn)其在正常胃黏膜中有一定的表達(dá)率（26.32%）。

綜上所述，我們用免疫組織化學(xué)（SP）染色法證實(shí)，相比于正常胃黏膜組織，TARDBP在胃腺癌組織和癌旁組織中高表達(dá)，提示TARDBP表達(dá)失調(diào)可能與胃腺癌的發(fā)生、發(fā)展存在一定相關(guān)性，可能成為胃癌診療的新的分子標(biāo)志物。目前，由于我們的研究樣本量仍偏少，研究結(jié)果需擴(kuò)大樣本量或多中心研究結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)。