上皮性卵巢癌組織中miR-506-3p及miR-532-5p的表達與臨床病理特征及預后的相關(guān)研究

林燕玲，王 瑛，張 敏，康 靈，邢維珍，黎先萍（上海兒童醫(yī)學中心三亞市婦女兒童醫(yī)院，海南三亞 572000）

上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer，EOC）是常見的影響女性生命健康的惡性腫瘤，晚期EOC的生存率較低[1-2]。微小核糖核酸(microRNA，miRNA)是一類小分子RNA，參與EOC的發(fā)生發(fā)展，有望作為EOC的診斷標志物[3-4]。研究發(fā)現(xiàn)，EOC存在miR-506-3p及miR-532-5p的異常表達，其可能為EOC的診斷、治療和預后提供重要的幫助[5-6]。本研究通過檢測miR-506-3p及miR-532-5p在EOC組織中的表達情況，分析其預測EOC預后的價值，為EOC的治療提供指導。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取2017年1月～2019年12月三亞市婦女兒童醫(yī)院和三亞中心醫(yī)院收治的118例EOC患者，年齡37～74(54.28±10.35)歲。納入標準：①符合國際婦產(chǎn)科聯(lián)合會(FIGO)[7]分類標準，經(jīng)病理確診；②符合腫瘤細胞減滅手術(shù)指征者。排除標準：①術(shù)前已接受其他治療者；②并發(fā)其他惡性腫瘤。術(shù)后每3個月對EOC患者隨訪1次，隨訪截止時間為2020年12月31日，記錄患者的總生存時間（overall survival，OS）和無進展生存時間(progression-free survival，PFS)。本研究符合醫(yī)學倫理，患者知情同意。

1.2 儀器與試劑 SLAN-96S熒光定量PCR儀（上海宏石醫(yī)療科技公司），PCR所有相關(guān)試劑盒(上海聯(lián)邁生物工程有限公司)，離心機(上海電器有限公司)產(chǎn)品。

1.3 方法 采集EOC組織及其相應正常組織，Trizol法提取總RNA，使用熒光定量PCR儀檢測。反應體系為20μl：1μl 引物及探針Mix（20×），10μl TaqMan通用混合物溶液（2×），1.33 μl反向轉(zhuǎn)錄脫氧核糖核酸，7.67μl雙蒸餾水。擴增條件為：95℃預變性10 min，95℃變性15 s，60℃復性60 s。采用2-△△Ct法計算miR-506-3p及miR-532-5p水平。

1.4 統(tǒng)計學分析 采用SPSS 20.0軟件。計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，組間比較采用配對t檢驗；計數(shù)資料比較采用χ2檢驗。采用COX回歸分析影響EOC患者預后的因素。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 不同組織miR-506-3p及miR-532-5p水平比較 EOC組織中miR-506-3p的水平為0.31±0.05，miR-532-5p的水平為0.24±0.03，均較癌旁正常組織（1.16±0.42，1.48±0.51）明顯減低，差異有統(tǒng)計學意義（t=13.582，16.217，均P＜0.001）。

2.2 miR-506-3p及miR-532-5p水平與臨床特征關(guān)系 見表1。以miR-506-3p的中位數(shù)0.45和miR-532-5p的中位數(shù)0.32為臨界值，分為miR-506-3p高表達組（miR-506-3p≥0.45，n=57）和miR-506-3p低表達組（miR-506-3p＜0.45，n=61），以及miR-532-5p高表達組（miR-532-5p≥0.32，n=55）和miR-532-5p低表達組（miR-532-5p＜0.32，n=63）。miR-506-3p及miR-532-5p低表達組患者的Ⅲ～Ⅳ期、低分化、淋巴轉(zhuǎn)移及腹膜轉(zhuǎn)移發(fā)生率明顯高于miR-506-3p及miR-532-5p高表達組，差異均有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05）。

表1 miR-506-3p及miR-532-5p水平與臨床特征關(guān)系[n(%)]

2.3 EOC患者預后與miR-506-3p及miR-532-5p表達的關(guān)系 見圖1和圖2。EOC患者隨訪時間為9～60個月，中位時間30.4個月。Kaplan-Meier生存分析顯示，miR-506-3p低表達組患者OS明顯低于miR-506-3p高表達組（χ2=10.758，P＜0.001）；miR-506-3p低表達組患者PFS明顯低于miR-506-3p高表達組（χ2=9.658，P＜0.001)，miR-532-5p低表達組患者OS明顯低于miR-532-5p高表達組（χ2=12.660，P＜0.001）；miR-532-5p低表達組患者PFS明顯低于miR-532-5p高表達組（χ2=10.273，P＜0.001)。

圖1 miR-506-3p高表達組與miR-506-3p低表達組EOC患者OS及PFS比較

圖2 miR-532-5p高表達組與miR-532-5p低表達組EOC患者OS及PFS比較

2.4 EOC患者預后影響因素分析 見表2。COX回歸分析模型顯示，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[HR（95%CI）=1.840（1.137～4.105）]，腹膜轉(zhuǎn)移[HR（95%CI）=2.974（2.106～6.113）]，miR-506-3p＜0.45[HR（95%CI）=1.902（1.217～4.533）]及miR-532-5p＜0.32[HR（95%CI）=2.506（1.582～4.905）]是影響EOC患者預后不良的獨立危險因素（P＜0.05）。

表2 EOC患者預后影響因素分析

3 討論

上皮卵巢癌（EOC）是一種好發(fā)于女性的惡性腫瘤，其發(fā)生發(fā)展與基因異常表達高度關(guān)聯(lián)，而miRNA的表達在EOC中發(fā)揮了極為關(guān)鍵的作用。早期對EOC患者進行預后預測有助于提高患者的生存率。miRNA作為一類非編碼RNA，參與調(diào)控EOC的發(fā)病機制，有望作為EOC診斷及預后評估的重要指標[8-9]。有研究發(fā)現(xiàn)，miRNA在EOC中低表達，其過度表達降低了EOC細胞活力并抑制其遷移、侵襲和增殖，在EOC轉(zhuǎn)移和進展中起著關(guān)鍵作用，為EOC的臨床治療提供潛在的指導[10]。

本研究miR-506-3p及miR-532-5p在EOC組織較正常組織明顯降低，提示其低表達可能參與EOC的發(fā)生。既往研究顯示，miR-506-3p在EOC組織中存在低表達，miR-506-3p可能是一個抑癌基因，對EOC細胞增殖、細胞周期進程和凋亡具有抑制作用，將來可能為EOC的治療提供新的方向[11]。另有研究發(fā)現(xiàn)，miR-532-5p在EOC中的表達降低，其降低與細胞增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移有關(guān)，是EOC發(fā)病中較為關(guān)鍵的作用基因[12]。本研究中miR-506-3p及miR-532-5p表達降低與EOC臨床分期大，分化程度低，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腹膜轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示其低表達可能促進疾病的病情進展。SAMUEL等[13]研究認為，EOC組織中miRNA的表達較正常組織減低，其低表達與疾病進展相關(guān)，可為EOC的診斷及預后指導提供較大的幫助。

本研究通過分析EOC患者生存情況與miR-506-3p及miR-532-5p表達的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)miR-506-3p及miR-532-5p低表達與EOC患者生存期短有關(guān)，提示檢測miR-506-3p及miR-532-5p水平有助于指導EOC的預后情況。本研究多因素分析顯示，EOC患者預后不良的獨立危險因素為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腹膜轉(zhuǎn)移、miR-506-3p＜0.45及miR-532-5p＜0.32，進一步說明了miR-506-3p及miR-532-5p低表達與EOC預后不良密切相關(guān)。XIA等[14]研究指出，EOC組織miR-506-3p表達下調(diào)，其高表達可抑制EOC的進展，檢測miR-506-3p水平可為EOC的治療提供重要的指導。WEI等[15]研究認為，miR-532-5p的低表達與EOC的臨床分期和轉(zhuǎn)移高度相關(guān)，參與促進EOC組織細胞的增殖、集落形成和侵襲，是EOC患者預后不良的獨立危險因素，有望作為EOC治療的潛在靶點及新的預后標志物。另有研究表明，EOC的發(fā)生、進展與miRNA的異常表達有關(guān)，miRNA作為預測EOC預后的標志物具有很好的應用前景[16]。

綜上認為，miR-506-3p及miR-532-5p在EOC組織表達減低，其低表達與EOC患者預后不良有關(guān)，對EOC患者預后預測具有一定的指導意義。但本研究隨訪時間較短，其結(jié)果可能存在一定的偏差，尚需更多的前瞻性研究共同來驗證。