甲狀腺微小乳頭狀癌血漿和組織circRNA-102002的表達(dá)及其臨床價值

符國宏，王連臣，陳 旭，鄭揚慈（三亞中心醫(yī)院/海南省第三人民醫(yī)院普外科，海南三亞572000）

甲狀腺微小乳頭狀癌（papillary thyroid microcarcinoma，PTMC）是一種常見的低度惡性腫瘤，在全球范圍內(nèi)發(fā)病呈年輕化趨勢且速度在逐年遞增，部分PTMC患者出現(xiàn)轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)甚至死亡，給患者生命健康帶來巨大的沖擊[1]。PTMC病灶隱匿，對其診斷較為困難，常規(guī)超聲檢查方法已不能滿足臨床的需求。近年來研究認(rèn)為，環(huán)狀核糖核酸（circRNA）作為一種新出現(xiàn)的具有相對穩(wěn)定結(jié)構(gòu)的非編碼RNA，參與腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲、遷移和凋亡等過程，circRNA可能為PTMC的診斷和治療提供新思路[2-3]。有研究發(fā)現(xiàn)，circRNA-102002在PTMC患者中存在異常表達(dá)，參與PTMC的發(fā)生發(fā)展，可能為PTMC的診療提供重要的幫助[4]。本研究通過檢測PTMC 患者circRNA-102002的表達(dá)情況，分析circRNA-102002表達(dá)對PTMC診斷及預(yù)測頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的價值，以期為PTMC的診療提供幫助。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取2018年1月～2020年12月三亞中心醫(yī)院/海南省第三人民醫(yī)院收治的PTMC患者97例，其中男性25例，女性72例，年齡26～68（47.15±11.32）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①PTMC經(jīng)病理組織檢查確診，均行甲狀腺切除術(shù)；②年齡≥18歲，首次確診PTMC。排除標(biāo)準(zhǔn)：①術(shù)前已接受放療、化療或其他抗腫瘤治療者；②有頸部手術(shù)，頭頸部放射史，并發(fā)其他惡性腫瘤者。根據(jù)97例PTMC患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況分為頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移56例和頸部無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移41例。另招募45例健康體檢正常者作為對照組，其中男性13例，女性32例，年齡27～64（45.80±10.16）歲。

1.2 儀器和試劑 ABI 7500型熒光定量PCR儀（ABI公司）；PCR試劑盒，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和TRIzol試劑盒（Qiagen公司），醫(yī)用離心機（Eppendorf公司產(chǎn)品），紫外分光光度儀（上海光學(xué)儀器公司）。

1.3 方法 采集PTMC患者術(shù)中癌組織及相應(yīng)癌旁正常組織，進(jìn)行實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）。PCR總反應(yīng)體系為20μl：1μl引物及探針Mix，10μlTaqMan通用混合物溶液，1.33μl反轉(zhuǎn)錄脫氧核糖核酸，7.67μl雙蒸水。以油醛3-磷酸脫氫酶（GAPADH）為內(nèi)參基因，采用2-△△Ct法計算circRNA-102002水平。另在術(shù)前采集所有研究對象的空腹靜脈血3 ml于EDTA抗凝管中，離心分離血漿，檢測血漿circRNA-102002水平。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS22.0統(tǒng)計軟件分析，符合正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗。應(yīng)用受試者工作特征（ROC）曲線分析circRNA-102002對 PTMC診斷及預(yù)測淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的價值。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血漿和組織circRNA-102002表達(dá)水平情況PTMC癌組織circRNA-102002表達(dá)水平為2.42±1.06，明顯高于癌旁組織（0.56±0.12），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=17.390，P＜0.001）。PTMC組血漿circRNA-001059表達(dá)水平為2.08±0.93，明顯高于對照組（0.31±0.08），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=15.427，P＜0.001）。

2.2 PTMC患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組circRNA-102002表達(dá)水平比較 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組血漿和組織circRNA-102002表達(dá)水平（2.95±1.17，3.46±1.51）均明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（1.24±0.43，1.35±0.58），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=15.382,17.964，均P＜0.001）。

2.3 circRNA-102002對PTMC的診斷價值 見表1和圖1。血漿和組織circRNA-102002診斷PTMC的最佳截斷值分別為1.37，1.58，其曲線下面積（AUC）為0.810（95%CI：0.752～0.870）和0.850（95%CI：0.790～0.907），與對照組0.500（95%CI：0.442～0.561）比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（Z=6.107,6.925,均P＜0.001）。

圖1 circRNA-102002診斷PTMC的ROC曲線

表1 circRNA-102002對PTMC的診斷價值

2.4 circRNA-102002預(yù)測PTMC患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的價值 見表2和圖2。血漿和組織circRNA-102002診斷PTMC患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的最佳截斷值為2.27，2.65，其AUC為0.857（95%CI：0.798～0.920）和0.891（95%CI：0.834～0.955），與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組0.680（95%CI：0.621～0.743）比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（Z=5.827, 7.164, 均P＜0.001）。

圖2 circRNA-102002診斷PTMC患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的ROC曲線

表2 circRNA-102002預(yù)測PTMC患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的價值

3 討論

甲狀腺微小乳頭狀瘤（PTMC）是一種生長緩慢的內(nèi)分泌腫瘤，發(fā)病隱匿，大多數(shù)患者早期無明顯癥狀，但部分患者確診時已存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，這可影響PTMC患者的預(yù)后和加大發(fā)生死亡的風(fēng)險[5]。因此，尋找一種方便、有效的腫瘤標(biāo)志物，對PTMC進(jìn)行早期診斷和早期發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，是改善PTMC患者預(yù)后的關(guān)鍵所在。circRNA是一種廣泛存在于生物體內(nèi)新興的內(nèi)源性非編碼RNA，具有穩(wěn)定性、特異性及保守性等特點，在惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展中起著重要作用，可為惡性腫瘤的診斷、預(yù)后判斷及靶向治療提供有效的指導(dǎo)作用[6-7]。QI等[8]研究表明，circRNA-0001666在甲狀腺癌中異常高表達(dá)，其高表達(dá)與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移高度關(guān)聯(lián)，對甲狀腺癌進(jìn)展有重要的影響，可能是甲狀腺癌預(yù)后判斷及靶向治療的潛在分子標(biāo)志物。WANG等[9]研究認(rèn)為，circRNA-0062389在調(diào)節(jié)腫瘤進(jìn)展方面具有顯著的作用，可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移，為甲狀腺乳頭狀癌提供了一種新的生物標(biāo)記物和治療靶點。既往的研究指出，circRNA-102002參與PTMC的發(fā)生發(fā)展，可能為PTMC的診斷及治療帶來很好的幫助。

本研究顯示，PTMC癌組織circRNA-102002表達(dá)水平明顯高于癌旁正常組織，PTMC組血漿circRNA-102002表達(dá)水平明顯高于對照組，提示circRNA-102002在PTMC患者中存在異常高表達(dá)，其可能通過發(fā)揮癌基因的作用來參與PTMC發(fā)生。GUO等[10]研究發(fā)現(xiàn)，與鄰近正常組織相比，circRNA在甲狀腺癌中表達(dá)失調(diào)，其參與癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲，與甲狀腺乳頭狀癌發(fā)病密切相關(guān)。本研究中與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組比較，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組circRNA-102002表達(dá)水平明顯升高，提示circRNA-102002高表達(dá)與PTMC患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，可能參與患者的惡性進(jìn)展。GUO等[11]研究指出，與正常組織相比，腫瘤組織中circRNA存在異常表達(dá)，circRNA可能參與了腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，可能是甲狀腺乳頭狀癌診斷和進(jìn)展評價的新型臨床標(biāo)記物。PAN等[12]研究證實，circRNA是腫瘤發(fā)生的關(guān)鍵調(diào)控因子, 促進(jìn)癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲，抑制細(xì)胞凋亡，參與PTMC的發(fā)生及進(jìn)展，對PTMC的診斷及預(yù)后判斷具有很好的指導(dǎo)意義。

本研究ROC曲線顯示，血漿和組織circRNA-102002表達(dá)水平診斷PTMC的曲線下面積均大于0.810，而且其預(yù)測患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的AUC均大于0.850，說明無論采集血漿還是組織，circRNA-102002對PTMC診斷及預(yù)測淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的價值均較好，circRNA-102002可能是PTMC診斷及預(yù)測淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的有效標(biāo)志物。由此可見，檢測circRNA-102002表達(dá)情況對PTMC診斷及預(yù)測淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有較好的幫助，同時也為患者治療提供了新的手段。YANG等[13]研究顯示，circRNA在PTMC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中異常表達(dá)，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用，可能是診斷PTMC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的可靠標(biāo)志物。SUN等[14]研究發(fā)現(xiàn)，circRNA參與甲狀腺癌的發(fā)生發(fā)展，其高表達(dá)與患者總生存期短有關(guān)，對甲狀腺癌診斷和預(yù)后判斷均具有很大的潛力。另有研究認(rèn)為，circRNA參與調(diào)控細(xì)胞凋亡、細(xì)胞遷移和黏附，是一種有前途的甲狀腺癌無創(chuàng)性分子標(biāo)志物，為甲狀腺癌治療提供了一個有希望的治療機會[15]。

綜上所述，血漿和組織circRNA-102002表達(dá)水平在PTMC患者中明顯升高，circRNA-102002在診斷PTMC及預(yù)測淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的曲線下面積均較高，其敏感度和特異度均較好。因此，circRNA-102002可作為PTMC診斷及預(yù)測淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的參考指標(biāo)，應(yīng)用于臨床有助于早期發(fā)現(xiàn)PTMC。