膀胱尿路上皮癌中p140Cap和Ki-67的表達(dá)及其相關(guān)性

鄧程恩

摘要：目的：探討p140Cap和細(xì)胞核增殖相關(guān)抗原67（Ki-67）在膀胱尿路上皮癌組織中的表達(dá)及其相關(guān)性。方法：應(yīng)用免疫組化SP法檢測(cè)p140Cap、Ki-67在膀胱尿路上皮癌組織和膀胱癌癌旁組織中的表達(dá)。結(jié)果：膀胱尿路上皮癌組織中的p140Cap、Ki-67陽性表達(dá)率高于膀胱癌癌旁組織;膀胱尿路上皮癌組織中的p140Cap陽性表達(dá)與腫瘤病理分級(jí)無關(guān);p140Cap和Ki-67在膀胱尿路上皮癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)。結(jié)論：p140Cap在膀胱癌組織中高表達(dá)，可能在膀胱癌的發(fā)展中發(fā)揮促癌作用，抑制凋亡;p140Cap和Ki-67可能在膀胱尿路上皮癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起重要作用，影響膀胱癌不良預(yù)后。

關(guān)鍵詞：膀胱尿路上皮癌;p140Cap;細(xì)胞核增殖相關(guān)抗原67;免疫組織化學(xué)

【中圖分類號(hào)】 R694 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】 A? ? ? 【文章編號(hào)】2107-2306（2022）12--01

膀胱癌屬世界九大惡性腫瘤之一。膀胱移行細(xì)胞癌（BTCC）具有多灶性、易復(fù)發(fā)性和較高死亡率的生物學(xué)特征[1]。研究多基因與膀胱移行細(xì)胞癌生物學(xué)行為的關(guān)系，不僅可以了解膀胱移行細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展過程中各基因及其所表達(dá)產(chǎn)物所發(fā)生的改變，還可通過了解各基因的作用及相互關(guān)系，為移行細(xì)胞癌發(fā)病機(jī)制的闡明提供一定的幫助。細(xì)胞核相關(guān)抗原67（Ki-67）是一種僅在增殖細(xì)胞中表達(dá)的蛋白，是檢測(cè)細(xì)胞增殖活性的重要指標(biāo)。p140Cap主要表達(dá)于大腦、睪丸以及富含上皮的組織，例如乳腺、大腸等。目前關(guān)于人類腫瘤組織中表達(dá)的報(bào)道較少，僅根據(jù)過往報(bào)道籠統(tǒng)認(rèn)為，p140Cap的陰性表達(dá)率與腫瘤的惡性程度成負(fù)相關(guān)?，F(xiàn)本研究應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)膀胱尿路上皮癌組織和癌旁組織中p140Cap和Ki-67表達(dá)，旨在探討p140Cap和Ki-67蛋白表達(dá)的意義及相關(guān)性。

1研究方法：

1.1膀胱尿路上皮癌患者資料和組織準(zhǔn)備

選取廣西醫(yī)科大學(xué)附腫瘤醫(yī)院泌尿外科所收治的膀胱尿路上皮癌患者15例，標(biāo)本均經(jīng)病理證實(shí)為膀胱尿路上皮癌，提取患者的手術(shù)切除標(biāo)本。入選病例均為男性，年齡47～77歲，平均63歲。15例標(biāo)本病理分級(jí)按WHO標(biāo)準(zhǔn)分為：低級(jí)別6例，高級(jí)別9例。臨床分期按UICC-TNM標(biāo)準(zhǔn)分為：Tis～T1期7例，T2～T4期8例。術(shù)后和活檢時(shí)采集樣本，從每例患者標(biāo)本中可獲得腫瘤組織和癌旁正常膀胱粘膜組織備用，取癌旁正常膀胱粘膜組織標(biāo)本作對(duì)照。

1.2免疫組化檢測(cè)p140Cap和Ki-67的表達(dá)

采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)15例膀胱尿路上皮癌者組織及癌旁正常組織中p140Cap和Ki-67的表達(dá)情況。

實(shí)驗(yàn)試劑：用于免疫組織化學(xué)染色的p140Cap一抗多克隆兔抗人SNAP25InteractingProteinAb抗體購自Novus，即用型快捷免疫組織化學(xué)MaxVision試劑盒，Ki-67鼠抗人單克隆抗體購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，二抗和DAB顯色試劑盒購于福州邁新生物技術(shù)公司。

1.3免疫組化結(jié)果判斷：

Olympus（日本）BX53雙目顯微鏡下觀察，每張切片隨機(jī)選取4個(gè)不同視野，分別計(jì)數(shù)陽性和陰性細(xì)胞。p140Cap陽性表達(dá)產(chǎn)物呈黃色顆粒狀，表達(dá)較強(qiáng)時(shí)呈棕黃色，定位于細(xì)胞核中。光鏡下半定量結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)[2]：染色強(qiáng)度分?jǐn)?shù)標(biāo)準(zhǔn)：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。同樣物鏡下陽性細(xì)胞數(shù)：≤10%為1分，11%—50%為2分，51%—75%為3分，≥75%為4分。兩類分?jǐn)?shù)乘積滿3分為“+”;4分為“++”;5分以上為“+++”;“+、++、+++”為表達(dá)陽性;“++、+++”為表達(dá)強(qiáng)陽性。本研究P140Cap陽性表達(dá)率為（評(píng)分大于4分，++/+++），即高表達(dá)。Ki-67陽性表達(dá)定位于細(xì)胞核，陽性表達(dá)表現(xiàn)為棕黃色顆粒染色，以陽性表達(dá)率<20%為陰性，≥20%為陽性[3]。

1.4分析p140Cap和Ki-67蛋白的表達(dá)及相關(guān)性。

2.結(jié)果：

膀胱尿路上皮癌組織p140Cap陽性表達(dá)率（++/+++）為100%（15/15），癌旁正常組織陽性表達(dá)率為3/15（20%），癌組織陽性表達(dá)率高于癌旁正常組織;低級(jí)別和高級(jí)別尿路上皮癌組織均高表達(dá)p140Cap。在膀胱尿路上皮癌組織中p140Cap的表達(dá)未體現(xiàn)出與癌細(xì)胞惡性程度及浸潤程度相關(guān)。Ki-67在膀胱尿路上皮癌組織中的陽性率12/15（80%），癌旁正常膀胱組織2/15（13.3%），癌組織Ki-67陽性表達(dá)率高于癌旁正常組織。高級(jí)別尿路上皮癌組織Ki-67呈高表達(dá)，低級(jí)別癌組織Ki-67呈低表達(dá)，Ki-67隨癌細(xì)胞惡性程度及浸潤程度增加有增強(qiáng)趨勢(shì)。經(jīng)分析，膀胱尿路上皮癌組織P140Cap、Ki-67表達(dá)陽性表達(dá)率均高于癌旁組織組織，兩者表達(dá)成正相關(guān)。

3.討論

膀胱癌作為泌尿系統(tǒng)三大常見的惡性腫瘤之一，可由吸煙、感染等多種因素所致。腫瘤分子標(biāo)志物作為反映腫瘤存在于機(jī)體內(nèi)具體情況的重要觀察指標(biāo)，在健康人體內(nèi)可能本不存在，而在惡性腫瘤患者的機(jī)體內(nèi)或腫瘤組織中，可以檢測(cè)到較高含量，并根據(jù)含量多少反映腫瘤的惡性程度，用于判斷腫瘤發(fā)生、發(fā)展情況時(shí)具有重要價(jià)值。

p140Cap主要表達(dá)于大腦、睪丸以及富含上皮的組織如乳腺和大腸等，目前的主要通路將E-鈣粘蛋白固定在細(xì)胞膜上并抑制EGFR和Erk1/2信號(hào)傳導(dǎo)，阻斷癌細(xì)胞的分散和增殖，從而影響癌細(xì)胞的侵襲和生長[4]。在乳腺癌細(xì)胞中，p140Cap可能通過Src和Rac激活表達(dá)控制非依賴性生長，p140Cap高表達(dá)抑制體內(nèi)腫瘤生長，p140Cap低表達(dá)增加體內(nèi)腫瘤的形成。同時(shí)有學(xué)者[5]發(fā)現(xiàn)：p140Cap在乳腺癌中可作為腫瘤抑制劑，發(fā)揮負(fù)性調(diào)節(jié)作用。并且p140Cap在大部分結(jié)腸癌細(xì)胞中高表達(dá)，少部分大腸腺瘤表達(dá)，正常組織極少表達(dá)，在大腸癌發(fā)展的過程中發(fā)揮促進(jìn)腸癌細(xì)胞生長、轉(zhuǎn)移和侵襲，抑制凋亡的作用[6]。

Ki-67作為一種僅在細(xì)胞核內(nèi)表達(dá)，與細(xì)胞分裂增殖相關(guān)的蛋白，是目前檢測(cè)腫瘤細(xì)胞增殖活性的指標(biāo)之一，并且其陽性表達(dá)可隨腫瘤分化程度降低或臨床分期增高而升高，同時(shí)Ki-67可能不僅與膀胱尿路上皮癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，還與浸潤、轉(zhuǎn)移有關(guān)。本研究癌組織Ki-67陽性表達(dá)率高于癌旁正常組織，且隨癌細(xì)胞惡性程度及浸潤程度增加呈增強(qiáng)趨勢(shì)，與之前研究相似，均證實(shí)了p140Cap、Ki-67和膀胱尿路上皮癌的相關(guān)性。

通過本研究，p140Cap表現(xiàn)為癌基因的特性，可能在膀胱癌的發(fā)展中發(fā)揮促癌作用，抑制凋亡，為預(yù)測(cè)膀胱癌預(yù)后的一個(gè)新的分子標(biāo)志物。p140Cap、Ki-67兩者表達(dá)成正相關(guān)，聯(lián)合檢測(cè)二者有助于膀胱尿路上皮癌發(fā)病機(jī)制的進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)：

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基金項(xiàng)目：廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生健康委員會(huì)自籌經(jīng)費(fèi)項(xiàng)目（No.Z20191091）