熱敏灸干預(yù)對腦出血大鼠神經(jīng)功能及腦組織含水量的影響

蘆曉溪，侯志帆，趙文

1.江西省中醫(yī)院神經(jīng)外科，江西南昌 330000；2.江西中醫(yī)藥大學(xué)黨委組織部，江西南昌 330004

腦 出 血（intracerebral hemorrhage，ICH）是 指 非創(chuàng)傷性腦內(nèi)血管破裂， 導(dǎo)致血液在腦實質(zhì)內(nèi)聚集的一類臨床綜合征，屬于腦卒的一種類型[1]。 ICH 占腦卒中13%左右[2]。 最常見病因為高血壓合并細小動脈硬化，臨床癥狀多種多樣[3]。常表現(xiàn)為頭痛、嘔吐及不同程度上的意識障礙，如昏睡、昏迷、局灶性神經(jīng)功能缺損等[4-5]。 總體預(yù)后較差，而腦水腫、顱內(nèi)壓增高、腦疝的形成是致死的主要原因[6]。 目前西醫(yī)對ICH 的治療方法不多，且療效并不理想，反而長期服用藥物會帶來一定的不良反應(yīng)[7-8]。 有關(guān)報道顯示，灸法對改善ICH 患者的神經(jīng)功能和腦組織含水量有良好的療效[9]。由江西省中醫(yī)院陳日新教授發(fā)明的熱敏灸法，對ICH 患者有顯著的療效[10]。 基于此，該實驗于2020 年12 月—2021 年5 月將43 只大鼠作為實驗對象，使用熱敏灸法治療ICH 大鼠，觀察治療后大鼠ICH 神經(jīng)功能評分、神經(jīng)損傷積分值和腦組織含水量。 現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

43 只SD 大鼠（22 只雄性，21 只為雌性），適應(yīng)飼養(yǎng)時間為夏季，飼養(yǎng)一般溫度在18～26℃，相對濕度在40%～70%，噪音在85 分貝以下，氨濃度20 Pm下。 所有SD 大鼠達到SPF 級要求，均由江西中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心提供。 分籠喂養(yǎng)在江西中醫(yī)藥大學(xué)動物房內(nèi)， 溫度恒定在25℃， 濕度恒定在40%～50%， 光照周期為8～10 h， 平均體質(zhì)量 （239.45±13.78）～（241.65±14.39）g。 食物獲取方式人工喂養(yǎng)，喂養(yǎng)時間早晨9∶00、中午12∶00、下午17∶00。 飲水自由，每12 小時更換飲水。

1.2 主要儀器與試劑

大鼠立體定位儀（南京卡爾文生物科技有限公司）；Ⅶ型膠原蛋白酶（國藥準字H20080096，規(guī)格:100 μg）；熱敏灸治療儀（江西凱敦醫(yī)療器械有限公司，規(guī)格：705 mm×175 mm×367 mm），真空干燥箱（南京申運佳機械科技有限公司，產(chǎn)品型號SZG-50），75%乙醇溶液（規(guī)格:500 mL），0.9%氯化鈉溶液（規(guī)格:500 mL），0.01 g 電子天平（瑞士梅特勒-托利多），奧拉西坦注射液（國藥準字H20060072，規(guī)格:5 mL）。

1.3 分組與造模

采用隨機分組法將43 只大鼠隨機分為正常組（n=5）、假手術(shù)組（n=6）、模型組（n=9）、熱敏灸干預(yù)組（n=8）、奧拉西坦組（n=8）、熱敏灸干預(yù)聯(lián)合奧拉西坦組（n=7），在治療后24、72、110 h 比較神經(jīng)損傷程度積分、腦組織含水量。 使用Ⅶ型膠原蛋白酶誘導(dǎo)制備大鼠腦出血模型[11]。在持續(xù)12 h 禁食和6 h 的禁水后，給予大鼠2%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉(400 mg/kg)，麻醉后等待5 min，觀察大鼠是否麻醉成功，成功后固定在腦立體定位儀上，剔除頭部毛發(fā)，局部頭皮消毒， 沿頭皮正中線做1 cm 的切口， 在前囟后0.21 mm， 中線旁開2.8 mm 處鉆一個0.8 mm 的小孔，使用腦立體定位上的微量注射器（5 μl，針頭半徑為0.4 mm）沿鉆孔緩慢進針，在大鼠的尾狀核，緩慢注入3 μl 的Ⅶ型膠原蛋白酶和1 μL 的0.9%氯化鈉溶液。 留針6 min 后退針，縫合頭皮。 大鼠醒后根據(jù)Longa 評分法[12]將評分分為5 大類，第1 類無神經(jīng)缺陷（0 分）；第2 類未完全伸展左前爪（1 分）；第3 類向左旋轉(zhuǎn)（2 分）；第4 類倒向左邊（3 分）；第5類沒有自發(fā)行走，意識水平低下（4分）。 神經(jīng)功能評分，評分≥1 分可認為模型制備成功。

1.4 干預(yù)方式

假手術(shù)組注射3 μl 的0.9%生理鹽水代替，正常組不處理，模型組則只注射3 μl 的膠原酶。 熱敏灸法組：在大鼠頭皮上20 cm 處進行熱敏灸，為感受溫度的適宜程度，可以將手懸空于大鼠頭頂，感受溫度的適宜程度，待溫度適宜后，根據(jù)《實驗大鼠和小鼠穴位定位的研究概況》[13]取大鼠頭部穴位，如百會、四神聰、風(fēng)池、風(fēng)府等腧穴進行熱敏灸，時間控制在0.5～1 h，3 次/d，中間間隔休息4 h，連續(xù)實驗5 d。 奧拉西坦組：在造模術(shù)完成35 min 后，往大鼠注射奧拉西坦注射液（15 mg/mL）。 熱敏灸干預(yù)聯(lián)合奧拉西坦組：熱敏灸法和奧拉西坦注射液的用法用量，同前面熱敏灸法組和奧拉西坦組一樣。

1.5 標本采集

每組選取2 只于術(shù)后24、72、110 h 麻醉后斷頭處死， 取出腦組織用一次性的無菌紗布稀釋多余的血漬，放于天平上稱質(zhì)量，此時為濕質(zhì)量，然后將腦組織放于65℃真空干燥箱內(nèi)烘60～90 h， 拿出反復(fù)稱重直到質(zhì)量不改變時，為干質(zhì)量。剩余各組大鼠進行神經(jīng)功能行為比較。

1.6 觀察指標

①觀察腦含水量指標，腦含水量=（濕質(zhì)量-干質(zhì)量）/濕質(zhì)量×100%。

②觀察神經(jīng)功能行為， 在術(shù)后24、72、110 h 進行mNSS 的測試，測試包括運動、感覺、平衡和反射測試[14]。 （A）運動測試：提起大鼠，前后肢屈曲各記1分，30 min 內(nèi)垂直移動＞10°記1 分；正常走為0 分，不能走直線記1 分，往癱瘓側(cè)轉(zhuǎn)圈記2 分，倒向則記3 分。（B）平衡測試：姿態(tài)穩(wěn)定平衡記0 分，緊抓平衡木邊緣記1 分，一側(cè)肢體掉下記2 分，兩側(cè)掉下或者旋轉(zhuǎn)（＞1 min）記3 分，在平衡木上保持平衡但摔下來（＞40 s）記4 分，（＞20 s）記5 分，未嘗試抓住平衡木落下（＜20 s）記6 分。（C）感覺測試：本體視覺觸覺實驗記1 分，深感覺，刺激大鼠機體記1 分。 （D）反射實驗：觸及耳道時搖頭記1 分，角膜反射記1 分，驚嚇反射記1 分，肌張力障礙記1 分[15]。 mNSS 神經(jīng)功能損傷程度評分范圍為0～18 分， 分為4 個標準，第1 個標準為嚴重傷害（13～18 分）；第2 個標準為中度傷害（7～12 分）；第3 個標準為輕度傷害（1～6分）；第4 個標準為正常（0 分）。 損傷嚴重程度與分數(shù)成正相關(guān)。 正常組與假手術(shù)組無神經(jīng)功能損傷影響，所以不參與神經(jīng)功能的評分比較[16]。

1.7 統(tǒng)計方法

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。 計量資料符合正態(tài)分布以（±s）表示，采用t檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠腦組織含水量比較

正常組與假手術(shù)組在24、110 h 腦組織含水量差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。 與模型組比較，熱敏灸干預(yù)組在24 h 的腦組織含水量下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），與奧拉西坦組比較，熱敏灸干預(yù)聯(lián)合奧拉西坦組在72 h 的腦組織含水量下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。 見表1。

表1 各組大鼠腦組織含水量比較[(±s),%]Table 1 Comparison of brain tissue water content in each group of rats [(±s),%]

表1 各組大鼠腦組織含水量比較[(±s),%]Table 1 Comparison of brain tissue water content in each group of rats [(±s),%]

注：同時間正常組與假手術(shù)組比較，#P>0.05；同時間熱敏灸干預(yù)組與模型組比較，△P<0.05；同時間熱敏灸干預(yù)組與奧拉西坦組比較，□P<0.05；同時間熱敏灸干預(yù)組與熱敏灸干預(yù)聯(lián)合奧拉西坦組比較，▲P<0.05

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2.2 各組大鼠運動測試積分值比較

同時間段比較，熱敏灸干預(yù)聯(lián)合奧拉西坦組大鼠運動測試評分顯著低于奧拉西坦組、模型組、熱敏灸干預(yù)組、差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。 見表2。

表2 各組大鼠運動測試積分值比較[(±s),分]Table 2 Comparison of the integral values of exercise test of rats in each group [(±s), points]

表2 各組大鼠運動測試積分值比較[(±s),分]Table 2 Comparison of the integral values of exercise test of rats in each group [(±s), points]

注：熱敏灸干預(yù)組與同時間其他組比較，#P<0.05；熱敏灸干預(yù)組與同時間其他組比較，△P<0.05；熱敏灸干預(yù)組與同時間其他組比較，▲P<0.05

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2.3 各組大鼠平衡測試積分值比較

同時間段比較， 熱敏灸干預(yù)聯(lián)合奧拉西坦組平衡測試評分顯著低于奧拉西坦組、模型組、熱敏灸干預(yù)組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。 見表3。

表3 各組大鼠平衡測試積分值比較[(±s),分]Table 3 Comparison of the integral value of the balance test of rats in each group [(±s), points]

表3 各組大鼠平衡測試積分值比較[(±s),分]Table 3 Comparison of the integral value of the balance test of rats in each group [(±s), points]

注：熱敏灸干預(yù)組與同時間其他組比較，#P<0.05；熱敏灸干預(yù)組與同時間其他組比較，△P<0.05；熱敏灸干預(yù)組與同時間其他組比較，▲P<0.05

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2.4 各組大鼠感覺測試積分比較

同時間段比較， 熱敏灸干預(yù)聯(lián)合奧拉西坦組感覺測試評分顯著低于奧拉西坦組、模型組、熱敏灸干預(yù)組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。 見表4。

表4 各組大鼠感覺測試積分比較[(±s),分]Table 4 Comparison of sensory test scores of rats in each group [(±s), points]

表4 各組大鼠感覺測試積分比較[(±s),分]Table 4 Comparison of sensory test scores of rats in each group [(±s), points]

注：熱敏灸干預(yù)組與同時間其他組比較，#P<0.05；熱敏灸干預(yù)組與同時間其他組比較，△P<0.05；熱敏灸干預(yù)組與同時間其他組比較，▲P<0.05

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2.5 各組大鼠反射實驗測試積分比較

同時間段比較， 熱敏灸干預(yù)聯(lián)合奧拉西坦組大鼠反射測試評分顯著低于奧拉西坦組、模型組、熱敏灸干預(yù)組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。 見表5。

表5 各組大鼠反射實驗測試積分比較[(±s),分]Table 5 Comparison of test scores in the reflex test of rats in each group [(±s), points]

表5 各組大鼠反射實驗測試積分比較[(±s),分]Table 5 Comparison of test scores in the reflex test of rats in each group [(±s), points]

注：熱敏灸干預(yù)組與同時間其他組比較，#P<0.05；熱敏灸干預(yù)組與同時間其他組比較，△P<0.05；熱敏灸干預(yù)組與同時間其他組比較，▲P<0.05

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3 討論

ICH 是最為常見的腦卒中類型，具有高致死、高致殘率及高發(fā)病率[17]。 臨床癥狀表現(xiàn)為血壓升高、頭痛、嘔吐、肢體癱瘓、意識障礙等。ICH 的發(fā)作也常伴隨著其他并發(fā)癥，如顱內(nèi)壓增高、癲癇、深靜脈血栓、肺栓塞、腦心綜合征等，常用的檢查有CT、MRI、血常規(guī)、數(shù)字減影血管造影等。

西醫(yī)在治療ICH 有著好的療效， 一般治療方式為患者臥床休息2～4 周，避免情緒激動，有意識地禁食，注意水電解質(zhì)的平衡。預(yù)防吸入性肺炎和早期的感染。觀測患者的血壓， 給予止血藥物。該次實驗使用大鼠模擬腦出血患者， 給予常規(guī)治療和保護神經(jīng)的藥物奧拉西坦， 該藥在保護神經(jīng)功能方面有著顯著的效果。

奧拉西坦作用機制是促進磷酰膽堿和磷酰乙醇胺合成，提高大腦的ATP/ADP 的比值，使得大腦中的蛋白質(zhì)和核酸的合成增加， 對腦損傷的神經(jīng)功能缺失治療有顯著效果。據(jù)有關(guān)研究表明，長期服用該藥物，會出現(xiàn)皮膚瘙癢、惡心、神經(jīng)興奮、頭暈、睡眠紊亂等不良反應(yīng)。

中醫(yī)認為腦出血又叫腦中風(fēng)， 中醫(yī)治療腦中風(fēng)有多種治療方法，使用中藥方劑、針灸等方法。 但是有部分患者對針灸有抵抗性心理，隨著時代的發(fā)展，該院陳日新教授歷經(jīng)臨床18 年， 研發(fā)出了熱敏灸，又稱為熱敏懸灸。 改灸法不用針、不接觸人體、無傷害、無不良反應(yīng)，這也解決了有部分患者在治療過程中出現(xiàn)暈針等問題。 熱敏灸是運用點燃的艾材產(chǎn)生的艾熱懸灸熱敏態(tài)穴位，激發(fā)透熱、擴熱、傳熱、局部微熱遠部熱、表面微熱深部熱、非熱覺等熱敏灸感和經(jīng)氣傳導(dǎo)，并施以個體化的飽和消敏灸量，從而提高艾灸療效的新療法[18]。 在治療ICH 患者時可選擇灸百會、風(fēng)池、風(fēng)府、太沖等穴位，其中百會穴在頭部后發(fā)際正中上7 寸，當(dāng)兩耳尖直上，頭頂正中，灸該處可以緩解頭暈頭痛、失眠、昏迷等癥狀。 風(fēng)池位于后頸部，后頭骨下，兩條大筋外緣陷窩中，相當(dāng)于耳垂平齊，灸此穴具有壯陽益氣的作用。風(fēng)府位于后發(fā)際正中線上1 寸，枕外隆凸直下凹陷中。灸該處對治療腦血管疾病有顯著效果。

ICH 患者出現(xiàn)腦水腫，幾天時間就會出現(xiàn)峰值，處理不及時，嚴重的患者血腦屏障被破壞，腦血流量的過度減少也會引起腦萎縮。 該次實驗藥灸聯(lián)合組在24 h 與72 h 時腦含水量為 （76.34±0.43）%，（75.68±0.05）%，24 h 與72 h 運 動 測 試 積 分 值 為（4.84±0.76）分、（3.06±0.47）分，相較于其余組同時間段有較好的療效恢復(fù)。 邵文娜等[19]研究中對72 只大鼠采取藥針聯(lián)合治療， 結(jié)果顯示治療1、3 d 藥針組腦含水量為 （77.00±0.525）%、（76.38±0.03）%，神經(jīng)功能評分為（9.00±1.26）分、（11.67±1.21）分。 邵文娜學(xué)者研究中的腦含水量與該實驗取得的結(jié)果對比一致性良好，但在神經(jīng)功能上評分出現(xiàn)偏差，可能是藥針治療沒有藥物聯(lián)合熱敏灸干預(yù)效果好。 這也展現(xiàn)了熱敏灸在治療腦出血患者神經(jīng)功能及治療腦組織含水量的良好效果。 在治療ICH 患者時，更要注重患者的預(yù)防工作，形成良好的生活習(xí)慣、定期的體檢、預(yù)防便秘、冬季注意保暖、防止跌倒、保持好心情。

綜上所述， 熱敏灸干預(yù)對腦出血的神經(jīng)功能及腦組織含水量有顯著的改善效果， 建議在臨床上大量推廣。