泰萬菌素對PRRSV 感染的臨床調(diào)節(jié)作用及對豬瘟和口蹄疫疫苗免疫效果的影響

萬 進，戴銀娣，馬妮妮，孫少輝，朱光山，徐瑞華，馬小平，張志榜，王聰

（1.中牧實業(yè)股份有限公司，北京 100070；2.中牧南京動物藥業(yè)有限公司，江蘇南京 210012；3.宜春學院生命科學與資源環(huán)境學院，江西宜春 336000）

豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的以繁殖母豬流產(chǎn)，產(chǎn)死胎、弱仔、木乃伊胎等繁殖障礙及仔豬和育肥豬呼吸道癥狀為特征的病毒性傳染病，嚴重影響全球養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展[1]。多項研究證明，PRRSV感染可導(dǎo)致豬只免疫抑制。Thanawongnuwech 等[2]研究發(fā)現(xiàn)，豬肺血管內(nèi)巨噬細胞是PRRSV 的重要復(fù)制位點，PRRSV 可對肺泡巨噬細胞產(chǎn)生不利影響，并導(dǎo)致肺血管內(nèi)巨噬細胞殺菌功能弱化，促進豬血源性細菌感染。Labarque 等[3]研究發(fā)現(xiàn)，使用PRRSV 減毒活疫苗免疫豬只產(chǎn)生的特異性抗體無法清除肺部病毒，其機制與PRRSV 感染巨噬細胞系統(tǒng)引起機體細胞免疫功能低下，從而影響豬體的正常免疫功能有關(guān)。Li 等[4]研究發(fā)現(xiàn)，PRRSV感染豬群對豬瘟（CSF）疫苗的免疫應(yīng)答水平明顯低于未感染豬群，尤其在CSF 疫苗免疫接種3～5周后該差異更加明顯，推測PRRS 高發(fā)豬場的CSF高流行率可能與感染PRRSV 的豬只對CSF 疫苗的低水平免疫應(yīng)答有關(guān)。王美君等[5]對PRRSV 持續(xù)性感染豬場進行CSF 疫苗免疫抗體水平監(jiān)測時發(fā)現(xiàn)，豬瘟病毒（CSFV）抗體水平與豬群PRRS 發(fā)病程度密切相關(guān)。此外，還有多項研究[6-9]證明，CSF 的免疫失敗與豬場PRRSV 感染有關(guān)。

泰萬菌素是大環(huán)內(nèi)酯類專用動物抗生素，具有抗菌活性和抑制炎癥反應(yīng)等作用[10-11]，對支原體、螺旋體以及大部分革蘭陽性菌和部分革蘭陰性菌均有較強的抗性，主要用于防治家禽支原體病、豬喘氣病、豬痢疾、豬增生性腸炎等疫病[12-13]。據(jù)報道[14-15]，泰萬菌素還能減少豬群PRRSV 的感染。本研究以PRRSV 陽性場的母豬和種公豬為試驗對象，驗證泰萬菌素在田間條件下是否對PRRSV感染水平具有調(diào)節(jié)功能，分析其對CSF、口蹄疫（FMD）疫苗免疫效果產(chǎn)生何種影響，以期為豬場制定PRRS 及其他疫病的免疫方案提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

河南省某規(guī)模豬場，共有基礎(chǔ)母豬2 000 頭、種公豬120 頭，商品豬若干。母豬群有減料現(xiàn)象，部分母豬妊娠中期發(fā)生流產(chǎn)，全群流產(chǎn)率約為8%。病原微生物監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，本場非洲豬瘟病毒（ASFV）抗原、抗體及偽狂犬病毒（PRV）gE 抗體均為陰性。有3 頭母豬流產(chǎn)，共產(chǎn)死胎15 個，產(chǎn)房臍帶血呈PRRSV 抗原陽性。母豬群免疫方案：CSF 疫苗（傳代細胞苗）、PRRS 疫苗（R98株）均1 年3 次普免。

1.2 藥物

藥物A（25%酒石酸泰萬菌素可溶性粉），由中牧南京動物藥業(yè)有限公司提供；藥物B（25%酒石酸泰萬菌素可溶性粉），購自某動保公司。

1.3 主要試劑

PRRSV X3 抗體檢測試劑盒、Real PCR NA PRRS 1-2型RNA 檢測預(yù)混液試劑盒、CSFV 抗體檢測試劑盒、口蹄疫病毒（FMDV）抗體檢測試劑盒、Real PCR ASFV DNA 檢測預(yù)混液試劑盒，均購自美國愛德士（IDEXX）生物科技公司。

1.4 試驗方案

2 000 頭基礎(chǔ)母豬隨機等分為A、B 兩組，給藥前采集A 組和B 組母豬血液用于PRRSV、CSFV、FMDV 抗原和抗體檢測。A 組給藥方案：每噸水添加750 g 藥物A，全群飲水用藥，每月用藥14 d，連用3 個月；B 組給藥方案：每噸水添加750 g 藥物B，用藥方式及療程同A 組。3 個月后采血，分離血清用于PRRSV、CSFV、FMDV 抗原及抗體檢測。詳細記錄A 組用藥前后母豬的各項生產(chǎn)性能指標，包括母豬流產(chǎn)率、年化淘汰率平均值、后備母豬利用率、母豬日采食量（全程采食統(tǒng)計）、窩產(chǎn)仔數(shù)、斷奶仔豬成活率、仔豬平均出生重、斷奶重，用于后續(xù)藥物療效評估。

選擇種公豬120 頭，每天灌服藥物A 5 g/頭，每月連用14 d，連用3 個月。用藥前和用藥結(jié)束后，分別采血檢測PRRSV 抗體水平。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

PRRSV 抗體陽/陰性判斷標準：計算每個樣品的S/P值，如果S/P值小于0.4，則判定為陰性；如果S/P值大于或等于0.4，則判定為陽性。

CSFV 抗體陽/陰性判斷標準：計算每個樣品的阻斷率（PI），如果被檢樣本的PI 值大于或等于40%，則判定為陽性；如果PI 值小于或等于30%，則判定為陰性；如果PI 為30～40%，則需重測。

FMDV A/O型抗體陽/陰性判斷標準：計算每個樣品的PI，如果PI 值大于或等于50%，則判定為陽性；如果PI 值小于50%，則判定為陰性。

使用GraphPad Prism 8.00 軟件對試驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 母豬群用藥前后PRRSV 抗體檢測

結(jié)果（表1）顯示：母豬群用藥前后的PRRSV 抗體陽性率均為100%。用藥后的PRRSV抗體水平、S/P值離散度相比用藥前均差異顯著（P＜0.05），表明泰萬菌素具有調(diào)節(jié)PRRSV 感染程度，優(yōu)化豬群PRRSV 抗體水平的作用。此外，結(jié)合豬群S/P值在各區(qū)間的比例數(shù)據(jù)能更好地反映豬群中PRRSV 的活動狀態(tài)，S/P值在0.4～2.0范圍內(nèi)視為免疫效果最佳，該值變高（≥2.0），表明PRRSV 有活躍跡象，將對母豬生產(chǎn)性能造成一定影響。由表1 可知，A 組用藥前后PRRSV 抗體S/P值在0.4～2.0 范圍內(nèi)所占比例由53.6%升至89.3%，B 組由50.0%升至83.3%。表明用藥泰萬菌素后，豬群的免疫效果整體得到提升。

2.2 母豬群用藥前后CSFV 抗體檢測

結(jié)果（表1）顯示：A、B 兩組豬群用藥后，CSFV 抗體陽性率分別由67.9%、75.0%提高到100%，抗體PI 值離散度分別由34.3%和11.6%降至7.9%和4.6%，表明用藥后CSFV 抗體水平更整齊。此外，CSFV 的平均抗體水平也有大幅度提升，A 組由50.8%升至91.1%，B 組由49.5%升至81.1%，說明兩組母豬群對CSF 疫苗的免疫應(yīng)答機能已得到很好恢復(fù)。

表1 給藥前后母豬群PRRSV、CSFV 平均抗體水平、陽性率及離散度變化

2.3 母豬群用藥前后FMDV A/O型抗體檢測

與未給藥對照組相比，試驗組豬群FMDV A/O型抗體陽性率均有小幅提高，抗體PI 值略微增長，且PI 值離散度略微降低（表2），說明泰萬菌素對豬群FMDV A/O型抗原免疫應(yīng)答水平有一定調(diào)節(jié)作用。

表2 母豬群使用泰萬菌素前后FMDV A/O型抗體陽性率、離散度變化 %

2.4 給藥前后母豬生產(chǎn)性能指標比較

對比用藥前后母豬生產(chǎn)性能指標（表3），經(jīng)泰萬菌素治療母豬的各項生產(chǎn)性能得到改善，如流產(chǎn)率下降8.0%，母豬年化淘汰率平均值下降4.0%，窩產(chǎn)仔數(shù)增加1.3 頭，仔豬斷奶重增加0.6 kg，斷奶仔豬成活率增長5.1%，說明泰萬菌素能在一定程度上提升母豬群的生產(chǎn)成績。

表3 用藥前后母豬各項生產(chǎn)性能指標比較

2.5 種公豬用藥前后PRRSV 抗體檢測

結(jié)果（表4）顯示：經(jīng)泰萬菌素保健3 個月后，種公豬PRRSV 抗體陽性率由100%降至66.1%，抗體S/P值均降至2.0 以內(nèi)，且離散度降至22.5%。該場種公豬未免疫PRRSV，用藥前抗體陽性率為100%，說明種公豬全群自然感染過PRRSV。用藥后的結(jié)果提示泰萬菌素可能通過抑制PRRSV 在豬體內(nèi)的復(fù)制，使豬群的感染水平降低，從而使豬群PRRS 感染程度逐漸趨于穩(wěn)定，PRRSV 抗體水平有所下降。

表4 給藥前后種公豬群PRRSV 平均抗體水平、陽性率及離散度變化

3 討論

3.1 豬群PRRSV 抗體S/P 值的含義需系統(tǒng)解讀

本試驗中A、B 組用藥泰萬菌素前后S/P值≥2.0 樣本數(shù)大幅降低，PRRSV 平均抗體水平及離散度更趨優(yōu)化，且對比用藥前后母豬繁殖性能、窩產(chǎn)仔數(shù)、仔豬斷奶重、斷奶仔豬成活率等生產(chǎn)指標發(fā)現(xiàn)，經(jīng)泰萬菌素治療后的母豬群生產(chǎn)成績得到提升，與Stuart 等[16]、Takagi 等[17]、李桃梅[18]關(guān)于泰萬菌素對PRRSV 的作用結(jié)果一致，表明泰萬菌素具有調(diào)節(jié)PRRSV 感染程度的作用。該試驗通過對PRRSV 抗體S/P均值進行分析，對豬場PRRSV感染程度有了初步了解，但對S/P值的全面認識還需考慮到以下幾種情況：對于陰性豬群，因為未免疫，只要通過ELISA 或IFA 檢測到特異性抗體便可以確診。美國愛荷華州立大學獸醫(yī)診斷實驗室認為，將PRRSV 陰性豬群的S/P=0.4 設(shè)為標準cutoff 值并不合適，應(yīng)該將其下調(diào)至0.2 或0.1，以便能更早發(fā)現(xiàn)PRRSV 感染，及早處理（行業(yè)會議PRRS 防控經(jīng)驗交流）。對于陽性豬群，僅憑S/P值大小無法準確評估PRRSV 感染狀態(tài)，有從業(yè)者將S/P值大于2.0 歸為野毒感染，S/P值小于2.0 判定為疫苗免疫，但筆者認為這是值得商榷的。由于豬只的個體差異，毒株的差異及接觸病毒時間的長短不同，都可能導(dǎo)致S/P值不同，比如處于強毒感染早期的S/P值有低于2.0 的情況，這時經(jīng)驗性的2.0基線將導(dǎo)致誤判。也有從業(yè)者提出在固定疫苗、免疫程序和生產(chǎn)管理模式以及監(jiān)測方法的前提下，可以通過定期抽查一定比例豬群的抗體水平，繪制本豬群的基準線，當抗體S/P值發(fā)生異動時，則預(yù)警感染和疫病的發(fā)生，這是一個宏觀的豬群疫病預(yù)警機制。此外，對單一動物間隔一段時間進行兩次抗體檢測的雙血清法，可從抗體S/P值的波動，更準確地推測感染狀況。

3.2 CSFV 抗體水平的提升與泰萬菌素使用緊密相關(guān)

A、B 兩組用藥后CSFV 抗體水平及陽性率大幅提升，這與Li 等[4]、張建新等[9]的報道類似。其機制可能是泰萬菌素通過抑制PRRSV 在豬體內(nèi)的復(fù)制，導(dǎo)致豬體內(nèi)PRRSV 載量下降，從而在一定程度上緩解由PRRSV 感染導(dǎo)致的免疫抑制狀態(tài)，故CSF 疫苗的免疫效果得以提升。Zhao 等[10]也發(fā)現(xiàn)泰萬菌素可以通過抑制NF-κB 途徑的活化來發(fā)揮抗炎等免疫調(diào)節(jié)作用，從而減輕PRRSV 感染仔豬的肺部病變評分，改善仔豬生長性能。此外CSF等疫苗免疫應(yīng)答水平不高還可能與某些病毒的抗體依賴性增強作用（ADE）有關(guān)，如PRRSV 抗體引起的ADE 現(xiàn)象[19]。在免疫PRRS 弱毒疫苗后，豬只產(chǎn)生抗體的同時PRRSV 復(fù)制也加劇，一定程度上抑制了豬只的機體免疫功能并對PRRSV 清除產(chǎn)生負面作用，使得豬免疫系統(tǒng)對其他疫苗的免疫應(yīng)答水平隨之下降。

3.3 豬群疫苗免疫效果不佳需考慮免疫抑制因素

PRRSV 等病毒主要感染豬肺泡內(nèi)巨噬細胞從而導(dǎo)致機體的免疫抑制，該種現(xiàn)象不但使豬肺部組織PRRSV 抗體水平不足，無法中和體內(nèi)病毒[5]，也使機體對CSFV[7]、FMDV[20]等的免疫應(yīng)答水平不高，本試驗結(jié)果亦是如此。因此在評價豬場疫苗免疫效果時，除了考慮疫苗質(zhì)量高低及免疫程序是否合理這兩個因素之外，還需考慮豬場免疫抑制疾病的防控是否已得到很好解決。

綜上，泰萬菌素能較好地調(diào)節(jié)豬群PRRSV 平均抗體水平，使S/P值更加優(yōu)化，豬群回歸正常生產(chǎn)性能水平。泰萬菌素通過對PRRSV 感染程度的調(diào)節(jié)，可以間接影響豬群的免疫狀態(tài)，使CSF、FMD 疫苗的免疫效果有所提升，尤其對CSFV 平均抗體水平、離散度及陽性率有明顯改善。