2021 年云南省玉溪市小反芻獸疫專項(xiàng)監(jiān)測(cè)評(píng)估

楊秋楠，羅曉燕，宋詩(shī)雅，李晶，徐聰，楊耀蘭，李錫慧，張文東，趙煥云，呂嶸

（1.玉溪市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，云南玉溪 653100；2.云南省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，云南昆明 650201）

小反芻獸疫（peste des petits ruminants，PPR）由小反芻獸疫病毒（peste des petits ruminants virus，PPRV）引起，又稱為“羊瘟”，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為須通報(bào)動(dòng)物疫病，并列入2030 年根除目標(biāo)[1]。PPR 對(duì)羊群危害嚴(yán)重，引起的感染率和死亡率高達(dá)90%[2]。PPRV屬于副黏病毒科（Paramyxoviridae）麻疹病毒屬（Morbillivirus）[3]，具有高度傳染性，主要通過(guò)密切接觸傳播，也可通過(guò)呼吸系統(tǒng)傳播[4]。PPR 一年四季均可發(fā)生，但多發(fā)于雨季及干燥寒冷季節(jié)[5]。PPR 潛伏期通常為3～21 d，OIE 在《陸生動(dòng)物衛(wèi)生法典》中規(guī)定為21 d[6]。2007 年，我國(guó)首次發(fā)生PPR 疫情，引發(fā)毒株為基因IV 系，與周邊國(guó)家流行的毒株屬同一系[7]。

目前，對(duì)PPR 尚無(wú)有效的治療方法，疫苗免疫是其主要防控措施[8]。2014 年4 月初，云南省多個(gè)市州發(fā)生輸入性PPR 疫情，其中包括玉溪市[9]。此后，玉溪市開(kāi)始實(shí)施PPR 強(qiáng)制免疫措施。有條件的規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)，按本場(chǎng)免疫程序或結(jié)合群體免疫抗體監(jiān)測(cè)情況進(jìn)行適時(shí)免疫。而對(duì)散養(yǎng)戶，每年開(kāi)展春秋兩季集中免疫，對(duì)所有種公羊、種母羊（空懷）、育肥羊、羔羊（1 月齡以上）進(jìn)行集中免疫，并及時(shí)進(jìn)行補(bǔ)免、加強(qiáng)免；免疫接種人員主要為鄉(xiāng)村獸醫(yī)、動(dòng)物防疫合作社成員和畜主，疫苗為政府統(tǒng)一購(gòu)買的商品化活疫苗[8]。近年來(lái)，玉溪市養(yǎng)羊業(yè)發(fā)展逐步加快，羊存欄量逐年增長(zhǎng)。2020年以來(lái)，全市羊飼養(yǎng)量基本維持在35 萬(wàn)只以上，年出欄30 萬(wàn)只以上。其中，山區(qū)、半山區(qū)總存欄約占全市存欄的68%，以散養(yǎng)為主，多數(shù)貧困戶依靠山羊養(yǎng)殖實(shí)現(xiàn)了脫貧。因此，切實(shí)做好PPR防控，事關(guān)玉溪市養(yǎng)羊業(yè)的持續(xù)健康發(fā)展，事關(guān)農(nóng)戶增收，意義重大。

為全面摸清玉溪市PPR 流行情況及疫苗免疫效果，加快推進(jìn)PPR 無(wú)疫區(qū)建設(shè)及凈化工作，2021 年玉溪市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心對(duì)全市羊群開(kāi)展了專項(xiàng)監(jiān)測(cè)，以期為該病的綜合防控，免疫退出評(píng)估，最終實(shí)現(xiàn)消滅PPR 的目標(biāo)提供數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 監(jiān)測(cè)目標(biāo)群

2021 年3 月，玉溪市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心對(duì)所轄9 個(gè)縣區(qū)分別統(tǒng)計(jì)羊存欄情況，將全市1 084 個(gè)羊養(yǎng)殖場(chǎng)群（存欄100 只以上的規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)，1 個(gè)行政村內(nèi)所有散養(yǎng)戶存欄羊作為1 個(gè)群體）作為目標(biāo)群。

1.2 監(jiān)測(cè)單元

場(chǎng)群層面，抽樣單元為每個(gè)規(guī)模場(chǎng)和行政村；場(chǎng)內(nèi)層面，抽樣單元為所有免疫PPR 的羊只。

1.3 抽樣方案

本次專項(xiàng)監(jiān)測(cè)集中采樣時(shí)間為2021 年4—5月。根據(jù)全市養(yǎng)殖存欄情況，采用多階段隨機(jī)抽樣方法[10]，先抽取場(chǎng)群，再抽取個(gè)體[6]，采集免疫血清和眼鼻棉拭子樣品。

1.3.1 血清學(xué)樣品 第一階段，計(jì)算全市開(kāi)展PPR 免疫效果評(píng)估所需抽樣的場(chǎng)點(diǎn)數(shù)。以估計(jì)流行率計(jì)算樣本量，按照95%的置信水平、85%的預(yù)期免疫合格率（根據(jù)2017—2020 年監(jiān)測(cè)結(jié)果確定）、10%的可接受誤差，利用公式（1）計(jì)算出抽樣場(chǎng)點(diǎn)數(shù)。依據(jù)全市共有1 084 個(gè)羊養(yǎng)殖場(chǎng)群，計(jì)算得出應(yīng)采集47 個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)點(diǎn)。根據(jù)規(guī)模場(chǎng)與行政村場(chǎng)點(diǎn)比例，按比例分配規(guī)模場(chǎng)點(diǎn)24 個(gè)、行政村場(chǎng)點(diǎn)23 個(gè)。再根據(jù)各縣區(qū)場(chǎng)群比例，通過(guò)分層比例抽樣，確定各縣區(qū)抽取場(chǎng)點(diǎn)數(shù)。

式中，n為抽樣個(gè)數(shù)，p為預(yù)期流行率，z為統(tǒng)計(jì)量（置信水平為95%時(shí)，z2=1.962），e為可接受的最大絕對(duì)誤差。第二階段，計(jì)算所需的抽樣羊只數(shù)量。采用預(yù)估流行率方法，按照95%的置信水平、85%的預(yù)期免疫合格率（根據(jù)2017—2020 年監(jiān)測(cè)結(jié)果確定）、10%的可接受誤差，根據(jù)抽出場(chǎng)點(diǎn)的存欄確定具體采樣數(shù)量。采樣時(shí)，群內(nèi)隨機(jī)選羊，按系統(tǒng)隨機(jī)方法抽樣。

1.3.2 病原學(xué)樣品 第一階段，計(jì)算全市開(kāi)展PPR 病原學(xué)檢測(cè)所需抽樣的場(chǎng)點(diǎn)數(shù)。以發(fā)現(xiàn)疫病或證明無(wú)疫方法計(jì)算樣本量的抽樣策略，按照估計(jì)場(chǎng)點(diǎn)流行率3%、置信水平95%，依據(jù)公式（2）計(jì)算出抽樣的場(chǎng)點(diǎn)數(shù)，運(yùn)用按比例隨機(jī)分層抽樣的方式抽取監(jiān)測(cè)場(chǎng)點(diǎn)。全市1 084 個(gè)羊養(yǎng)殖場(chǎng)群，計(jì)算得出應(yīng)采集95 個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)點(diǎn)。根據(jù)規(guī)模場(chǎng)與行政村場(chǎng)點(diǎn)比例，按比例分配規(guī)模場(chǎng)點(diǎn)48 個(gè)、行政村場(chǎng)點(diǎn)47 個(gè)。再根據(jù)各縣區(qū)場(chǎng)群比例，通過(guò)分層比例抽樣，確定各縣區(qū)抽取場(chǎng)點(diǎn)數(shù)。

式中，n為抽樣個(gè)體數(shù)，CL 為置信水平，Se 為檢測(cè)方法的敏感性，N為群體數(shù)，D為陽(yáng)性動(dòng)物數(shù)（群體數(shù)與預(yù)定流行率的乘積，即D=N×p）。第二階段，計(jì)算所需的抽樣羊只數(shù)量。采用證明無(wú)疫的方法，按照3%的預(yù)期流行率、95%的置信水平，計(jì)算出每個(gè)規(guī)模場(chǎng)（村）所抽取的羊只數(shù)量。采樣時(shí)，群內(nèi)隨機(jī)選羊，按系統(tǒng)隨機(jī)抽樣方法。

1.4 檢測(cè)方法與試劑

對(duì)采集的血清樣品，采用PPRV 阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒（科前生物公司）和酶標(biāo)儀（型號(hào)anthos 2010，安圖生物公司）進(jìn)行PPRV 免疫抗體檢測(cè)。

對(duì)采集的棉拭子樣品，采用探針?lè)晒釶CR 試劑盒（TakaRa One Step PremixScriptTMRTPCR kit）、熒光定量PCR 儀（ABI QuantStudio 7 Flex）進(jìn)行PPRV 核酸檢測(cè)。

2 結(jié)果與分析

2.1 免疫抗體檢測(cè)

2.1.1 總體情況 按照估計(jì)流行率計(jì)算樣本量的抽樣策略，計(jì)劃采集免疫血清樣品1 641 份，實(shí)際采集并檢測(cè)免疫血清樣品1 631 份，檢出PPRV 抗體合格樣品1 364 份，免疫個(gè)體合格率為83.62%，達(dá)到了國(guó)家要求的抗體合格率70%以上的標(biāo)準(zhǔn)。共檢測(cè)47 個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)點(diǎn)，合格場(chǎng)群39 個(gè)，群體合格率為82.98%。

2.1.2 不同養(yǎng)殖類型 本次血清學(xué)監(jiān)測(cè)涉及47 個(gè)場(chǎng)點(diǎn)，其中規(guī)模場(chǎng)24 個(gè)、行政村23 個(gè)，群體免疫合格率分別為83.33%、82.61%，個(gè)體免疫合格率分別為82.50%、84.83%。不管是從場(chǎng)群水平（P=0.95 ＞0.05），還是從個(gè)體水平（P=0.20 ＞0.05）看，差異均不顯著。具體結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 不同養(yǎng)殖類型的免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2.1.3 不同養(yǎng)殖區(qū)域 不同縣區(qū)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果（表2）顯示：最高的PPRV 免疫抗體個(gè)體合格率為97.13%，最低的為63.73%，不同區(qū)域間免疫抗體水平有差異，部分縣區(qū)差異顯著（P＜0.05）。

表2 不同養(yǎng)殖區(qū)域的免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2.1.4 不同企業(yè)疫苗 本次采集的羊血清樣品，涉及2 個(gè)廠家生產(chǎn)的2 種疫苗，分別是A 公司生產(chǎn)的“小反芻獸疫弱毒活疫苗（Clone9株）”和B 公司生產(chǎn)的“小反芻獸疫-山羊痘二聯(lián)活疫苗（Clone9+AV41株）”。本次采樣流調(diào)中，明確記錄免疫疫苗廠家的羊血清樣品1 208 份，2 個(gè)企業(yè)生產(chǎn)的PPR 疫苗免疫合格率均高于國(guó)家規(guī)定的最低70%的保護(hù)水平，且不同企業(yè)疫苗的免疫抗體合格率差異不顯著（P=0.06 ＞0.05）。具體結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 不同企業(yè)PPR 疫苗免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2.1.5 不同羊只性別 本次監(jiān)測(cè)評(píng)估明確記錄性別的羊血清樣品1 517 份，其中公羊458 份、母羊1 059 份，個(gè)體合格率分別為88.86%、81.96%，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01）。具體結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 不同性別羊只PPR 免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2.2 病原學(xué)檢測(cè)

9 個(gè)縣區(qū)涉及95 個(gè)場(chǎng)點(diǎn)（規(guī)模場(chǎng)48 個(gè)、行政村47 個(gè)），共采集羊眼鼻棉拭子樣品6 438 份，均未檢測(cè)到PPRV 核酸陽(yáng)性樣品。

3 討論

3.1 不同養(yǎng)殖規(guī)模免疫情況

監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)，不同養(yǎng)殖規(guī)模免疫群體合格率與個(gè)體合格率均超過(guò)國(guó)家規(guī)定的最低標(biāo)準(zhǔn)70%，且不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，說(shuō)明玉溪市對(duì)散養(yǎng)戶的PPR免疫重視程度越來(lái)越高。隨著動(dòng)物防疫合作社的普及，合作社專業(yè)隊(duì)伍為散養(yǎng)戶進(jìn)行統(tǒng)一免疫，免疫效果逐步提升，春秋兩防免疫工作開(kāi)展有一定成效。

3.2 不同區(qū)域免疫情況

玉溪市9 個(gè)縣區(qū)中，僅1 個(gè)縣區(qū)的PPR 個(gè)體合格率低于70%。通過(guò)對(duì)比發(fā)現(xiàn)，該縣區(qū)不同養(yǎng)殖類型的場(chǎng)點(diǎn)抗體合格率均較低。該縣區(qū)多為山地散養(yǎng)，村落分布較散，這給羊群免疫帶來(lái)了諸多不便，可能存在漏免現(xiàn)象；同時(shí)部分村落因路途較遠(yuǎn)，可能存在因疫苗保存不當(dāng)，造成疫苗失效的情況。后期需要繼續(xù)加大對(duì)散戶免疫的重視力度，配備完善的疫苗免疫設(shè)施和工具，同時(shí)加大對(duì)基層防疫員的免疫技術(shù)培訓(xùn)，使其規(guī)范免疫操作。對(duì)于免疫抗體較低的地區(qū)，要重點(diǎn)監(jiān)測(cè)和監(jiān)管，及時(shí)做好補(bǔ)免工作。

3.3 不同廠家疫苗免疫情況

兩個(gè)企業(yè)的PPR 疫苗免疫合格率均高于國(guó)家規(guī)定的保護(hù)水平，表明兩個(gè)企業(yè)生產(chǎn)的PPR 疫苗免疫原性良好，能夠起到抵御PPRV 感染的效果，建議后期持續(xù)監(jiān)測(cè)兩種疫苗的免疫效果。

3.4 不同性別免疫情況

公羊免疫抗體水平明顯高于母羊。這是因?yàn)楣虼蠖嘧鳛榉N羊來(lái)飼養(yǎng)，免疫重視程度相對(duì)較高，且飼養(yǎng)周期長(zhǎng)，免疫次數(shù)多；而母羊飼養(yǎng)周期相對(duì)較短，加之母羊懷孕期間不建議免疫，且部分畜主怕影響母羊的生產(chǎn)性能拒絕免疫[11]，可能出現(xiàn)漏免情況。因此，在每年春秋兩季集中免疫的基礎(chǔ)上，應(yīng)根據(jù)免疫記錄，及時(shí)對(duì)漏免的孕、幼畜進(jìn)行補(bǔ)免，使應(yīng)免羊只免疫密度長(zhǎng)期保持較高水平，同時(shí)加大對(duì)養(yǎng)殖戶免疫知識(shí)的宣貫，充分落實(shí)其免疫主體責(zé)任。

3.5 病原檢測(cè)情況

本次監(jiān)測(cè)未檢測(cè)到PPRV 核酸陽(yáng)性樣品，說(shuō)明發(fā)生PPR 的風(fēng)險(xiǎn)較低。目前玉溪市最大的風(fēng)險(xiǎn)來(lái)自于未經(jīng)檢疫外購(gòu)羊只的流入，今后應(yīng)重點(diǎn)加強(qiáng)引入羊群的檢疫監(jiān)督工作，加大活羊調(diào)運(yùn)監(jiān)管力度，加強(qiáng)引種及外購(gòu)羊的檢疫檢驗(yàn)，防止發(fā)生輸入性疫情。

4 小結(jié)

玉溪市PPR 免疫效果整體較好，轄區(qū)內(nèi)發(fā)生的PPR 風(fēng)險(xiǎn)較低，但部分縣區(qū)免疫合格率偏低。因此，應(yīng)持續(xù)做好該病的免疫和監(jiān)測(cè)，加大防疫知識(shí)宣傳力度，提高養(yǎng)殖戶免疫意識(shí)，加強(qiáng)防疫人員培訓(xùn)，整體提高玉溪市疫病防控能力，盡快實(shí)現(xiàn)消滅PPR 目標(biāo)。