• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    黃連解毒湯治療膿毒癥的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究

    2022-06-06 21:04:43董青青章怡祎叢億蕾陳偉
    世界中醫(yī)藥 2022年9期
    關(guān)鍵詞:網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)作用機(jī)制膿毒癥

    董青青 章怡祎 叢億蕾 陳偉

    摘要 目的:探索黃連解毒湯治療膿毒癥的核心作用靶點(diǎn)、主要活性成分及作用機(jī)制。方法:在中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)(TCMSP)以黃連、黃芩、黃柏、梔子為關(guān)鍵詞分別檢索,按照口服生物利用度(OB)≥30%,類藥性(DL)≥0.18的條件篩選,獲得黃連解毒湯各中藥的活性成分及其作用靶點(diǎn);通過在線人類孟德爾遺傳數(shù)據(jù)庫(kù)(OMIM)、GeneCards、治療靶點(diǎn)數(shù)據(jù)庫(kù)(TTD)檢索膿毒癥的疾病靶點(diǎn);將預(yù)測(cè)到的成分及其疾病靶點(diǎn)運(yùn)用Cytoscape軟件進(jìn)行中藥-成分-疾病-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及分析,篩選核心靶點(diǎn)及主要活性成分,通過STRING數(shù)據(jù)庫(kù)結(jié)合Cytoscape軟件繪制蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(PPI)網(wǎng)絡(luò)并進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)分析,通過R語(yǔ)言運(yùn)行后對(duì)核心靶點(diǎn)進(jìn)行基因本體(GO)分析和京都基因和基因組百科全書(KEGG)通路注釋分析,設(shè)定閾值 P <0.05, Q <0.05,篩選具有顯著性差異的生物過程及信號(hào)通路。結(jié)果:篩選出黃連解毒湯78個(gè)成分和841個(gè)藥物靶點(diǎn);這些共同靶點(diǎn)涉及147條生物過程包括TNF信號(hào)通路、趨化因子信號(hào)通路、HIF-1信號(hào)通路、細(xì)胞凋亡通路等代謝通路,內(nèi)分泌抵抗等與內(nèi)分泌系統(tǒng)相關(guān)的通路。結(jié)論:黃連解毒湯中小檗堿、槲皮素、山柰酚等多種成分協(xié)同作用于AGE-RAGE信號(hào)通路、TNF信號(hào)通路等,初步揭示了其在治療膿毒癥時(shí)的多成分、多途徑、多靶點(diǎn)協(xié)同作用的復(fù)雜機(jī)制過程,為未來實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證奠定了理論基礎(chǔ)。

    關(guān)鍵詞 黃連解毒湯;膿毒癥;網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué);作用機(jī)制

    Mechanism of Huanglian Jiedu Decoction in the Treatment of Sepsis Based on Network Pharmacology

    DONG Qingqing1,ZHANG Yiyi1,CONG Yilei2,CHEN Wei1

    (1 Department of Intensive Care Medicine,LongHua Hospital,Shanghai University of Traditional Chinese Medicine,Shanghai 200032,China; 2 Department of Endocrinology,LongHua Hospital,Shanghai University of Traditional Chinese Medicine,Shanghai 200032,China)

    AbstractObjective: To explore the core targets,main active components and mechanism of Huanglian Jiedu Decoction in the treatment of sepsis. Methods: The Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform(TCMSP) was searched,with 黃連(Rhizoma Coptidis),黃芩(Radix Scutellariae),黃柏(Cortex Phellodendri),and梔子(Fructus Gardeniae) as keywords.According to bioavailability(OB)≥30% and drug-likeness(DL)≥0.18,the active components and targets of each Chinese medicinal material in Huanglian Jiedu Decoction were obtained.Online Mendelian Inheritance in Man(OMIM),GeneCards,and Therapeutic Target Database(TTD) were used to screen the targets of sepsis.Then the obtained predicted components and disease targets were input in Cytoscape to construct the network of Chinese medicinal material-components-disease-targets,and the core targets and main active components were screened.The protein protein interaction(PPI) network was plotted via STRING combined with Cytoscape and topological analysis was performed.After R language running,GO analysis and KEGG pathway annotation analysis were conducted on the core targets,with the thresholds of ?P <0.05 and Q<0.05,to screen the biological processes and signaling pathways with significant differences. Results: A total of 78 components and 841 targets of Huanglian Jiedu Decoction were screened,and 147 biological pathways were involved,including metabolic pathways such as tumor necrosis factor(TNF),chemokine,hypoxia-inducible factor 1(HIF-1),and apoptosis signaling pathways,and pathways related to the endocrine system such as AGE-RAGE signaling pathway in diabetic complications and endocrine resistance. Conclusion: Berberine,quercetin,kaempferol and other components in Huanglian Jiedu Decoction synergistically acted on the AGE-RAGE signaling pathway,TNF signaling pathway,etc.,which preliminarily revealed the complex multi-component,multi-pathway and multi-target synergistic mechanism of Huanglian Jiedu Decoction in the treatment of sepsis,and laid a theoretical foundation for future experimental verification.E252CE8C-1804-4876-88BA-9A8218C9F1C1

    Keywords Huanglian Jiedu Decoction; Sepsis; Network pharmacology; Mechanism

    中圖分類號(hào):R285 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A ?doi: 10.3969/j.issn.1673-7202.2022.09.012

    膿毒癥(Sepsis)是嚴(yán)重感染、嚴(yán)重創(chuàng)傷、燒傷、休克、外科手術(shù)后常見的并發(fā)癥,可導(dǎo)致膿毒性休克、多器官功能障礙綜合征(Multiple Organ Dysfunction Syndrome,MODS)。以其在重癥監(jiān)護(hù)室中的高發(fā)病率、高病死率、高治療費(fèi)用而聞名,若并發(fā)感染性休克,病死率可高達(dá)80%[1-3]。因此結(jié)合中西醫(yī)療法的各自優(yōu)勢(shì),提高治療效果,縮短住院天數(shù),降低其病死率,是當(dāng)前迫切需要解決的科學(xué)問題。

    膿毒癥這一病名在中醫(yī)學(xué)中并未記載,中醫(yī)學(xué)者們以《傷寒論》和溫病學(xué)說作為理論基礎(chǔ)提出了膿毒癥的病機(jī)體現(xiàn)在本虛和標(biāo)實(shí)2個(gè)方面。由于發(fā)病原因和人體體質(zhì)的不同,根據(jù)正邪兩方面在疾病表現(xiàn)中所處地位,區(qū)別主次、先后,采取以扶正為主,兼顧祛邪,或以祛邪為主,兼顧扶正,隨機(jī)應(yīng)變,掌握機(jī)宜,達(dá)到有效改善預(yù)后的目的,為臨床提供參考[4-5]?,F(xiàn)代學(xué)者將膿毒癥的證型及治法概括為“三證三法”,即毒熱證與清熱解毒法,瘀血證與活血化瘀法,急性虛證與扶正固本法[6]。

    黃連解毒湯最早載于葛洪所著的《肘后備急方》,由黃連、黃芩、黃柏以及梔子按照3∶ 2∶ 2∶ 3的比例配伍而成。黃連解毒湯具有清熱解毒之功效,用于治療三焦火毒所致的熱甚發(fā)斑、熱病吐血、衄血、濕熱黃疸或外科的癰瘍疔毒等疾病。臨床常用于治療膿毒癥、痢疾、肺炎等熱毒癥患者[7]。研究發(fā)現(xiàn),黃連解毒湯具有顯著的抗炎、抑菌、抗氧化、抗血栓及免疫調(diào)節(jié)的作用[8-10]。由此可見黃連解毒湯對(duì)膿毒癥的治療有著舉足輕重的作用,但該中藥復(fù)方的有效活性成分及其作用靶點(diǎn)和機(jī)制仍須進(jìn)一步研究。本研究依托于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法預(yù)測(cè)黃連解毒湯治療膿毒癥的潛在作用靶點(diǎn)及其機(jī)制,為臨床干預(yù)治療提供新的思路。

    1資料與方法

    1.1藥物成分及靶點(diǎn)篩選

    在中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP)中檢索黃連解毒湯中各藥物的成分作為潛在活性成分[11],并根據(jù)口服生物利用度(Oral Bioavailability,OB)≥30%和類藥性(Drug Likeness,DL)≥0.18進(jìn)行篩選[12],使用PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)獲得上述成分的SDF格式化學(xué)結(jié)構(gòu),導(dǎo)入Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫(kù)(http://www.swisstargetprediction.ch/),取預(yù)測(cè)得分大于0的靶點(diǎn)作為藥物靶點(diǎn)[13]。

    1.2膿毒癥作用靶點(diǎn)篩選

    使用在線人類孟德爾遺傳數(shù)據(jù)庫(kù)(Online Mendelian Inheritance in Man,OMIM,https://omim.org/)、GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.genecards.org/)、治療靶點(diǎn)數(shù)據(jù)庫(kù)(Therapeutic Target Database,TTD,http://db.idrblab.net/ttd/)以“Sepsis”為關(guān)鍵詞進(jìn)行檢索,將上述3個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)的靶點(diǎn)數(shù)據(jù)匯總,去重后獲得疾病作用靶點(diǎn)。

    1.3藥物-疾病共同靶點(diǎn)的篩選

    在Venny 2.1在線軟件作圖工具平臺(tái)(https://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/)上輸入藥物靶點(diǎn)及疾病靶點(diǎn),繪制韋恩圖。

    1.4中藥-成分-疾病-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及分析

    使用Cytoscape 3.7.2軟件(http://www.cytoscape.org),構(gòu)建“藥物-成分-疾病-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖,其中網(wǎng)絡(luò)中節(jié)點(diǎn)(Node)表示黃連解毒湯的4味中藥、活性成分及潛在靶點(diǎn),節(jié)點(diǎn)之間則以邊(Edge)相連。使用Network Analyzer工具計(jì)算網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋮?shù),根據(jù)節(jié)點(diǎn)連接度(Degree)、介度中心性(Betweenness Centrality)及緊密度中心性(Closeness Centrality)對(duì)黃連解毒湯的網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)進(jìn)行分析[14-16]。

    1.5蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相關(guān)作用關(guān)系網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

    將上述139個(gè)共同靶點(diǎn)輸入到Search Tool for the Retrieval of Interacting Genes/Proteins數(shù)據(jù)庫(kù)(STRING,http://string-db.org/)[17]中進(jìn)行檢索,設(shè)置蛋白種類為“Homo Sapiens”,最低相互作用閾值為0.4,獲取靶點(diǎn)相互作用的網(wǎng)絡(luò)關(guān)系數(shù)據(jù),將其導(dǎo)入Cystoscap 3.7.2軟件,繪制蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(Protein-protein Interaction,PPI)網(wǎng)絡(luò)圖。

    1.6基于拓?fù)浞治龅暮诵陌悬c(diǎn)篩選

    將PPI網(wǎng)絡(luò)導(dǎo)入Cystoscap 3.7.2中,通過NetworkAnalyzer工具進(jìn)行拓?fù)浞治?,以Degree,Betweenness Centrality,Average Shortest Path Length和Closeness Centrality這4個(gè)參數(shù)為參考標(biāo)準(zhǔn)[18],通過Degree排序,選取分值大于平均分的基因作為核心靶點(diǎn),將前30個(gè)靶點(diǎn)使用R3.6.0繪制條形圖。

    1.7基于聚類分析的核心靶點(diǎn)篩選

    將已經(jīng)構(gòu)建好的PPI網(wǎng)絡(luò)導(dǎo)入Cytoscape 3.7.2中,使用MCODE模塊進(jìn)行基因簇的分析以及核心靶點(diǎn)的篩選[19-20]。E252CE8C-1804-4876-88BA-9A8218C9F1C1

    1.8靶點(diǎn)的生物功能及通路富集分析

    利用R語(yǔ)言的clusterProfiler工具包[21]將基因Symbol轉(zhuǎn)為基因ID,對(duì)靶點(diǎn)進(jìn)行基因本體(Gene Ontology,GO)生物過程富集和京都基因和基因組百科全書(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析,保存結(jié)果,設(shè)定閾值 P <0.05, Q <0.05,篩選具有顯著性差異的生物過程及信號(hào)通路。

    2結(jié)果

    2.1黃連解毒湯的潛在活性成分

    查找出黃柏、黃連、黃芩、梔子的化學(xué)成分分別為黃柏37個(gè)、黃連14個(gè)、黃芩36個(gè)、梔子15個(gè),合并后刪除重復(fù)成分共得到潛在活性成分85個(gè)。使用Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫(kù)篩選出黃連成分作用靶點(diǎn)448個(gè)、黃柏成分作用靶點(diǎn)699個(gè)、黃芩成分442個(gè)、梔子成分373個(gè),最后排除重復(fù)作用靶點(diǎn)和非人體作用靶點(diǎn)得到841個(gè)藥物靶點(diǎn)。見表1。

    2.2膿毒癥的潛在作用靶點(diǎn)

    將OMIM、GeneCards、TTD數(shù)據(jù)庫(kù)獲得的膿毒癥相關(guān)藥物靶點(diǎn)去重,共獲得疾病靶點(diǎn)816個(gè)。將841個(gè)藥物靶點(diǎn)、816個(gè)疾病靶點(diǎn)繪制韋恩圖,二者取交集后獲得藥物-疾病共同靶點(diǎn)139個(gè)。見圖1。

    2.3疾病-成分-靶點(diǎn)核心網(wǎng)絡(luò)

    將黃連解毒湯中85個(gè)潛在活性成分與139個(gè)藥物-疾病共同靶點(diǎn)輸入Cytoscape軟件中,刪除7個(gè)與疾病靶點(diǎn)無交集的活性成分,并繪制出“藥物-成分-靶點(diǎn)-疾病”相互作用的網(wǎng)絡(luò)圖。圖中紫色長(zhǎng)方形代表藥物,藍(lán)色三角形代表各活性分子,綠色圓形代表靶點(diǎn),紅色菱形代表疾病。見圖2。對(duì)網(wǎng)絡(luò)圖進(jìn)行拓?fù)浞治隹梢钥闯?,一個(gè)活性成分可作用于多個(gè)靶點(diǎn),作用靶點(diǎn)數(shù)量前5位的化合物分別為:5,2′-二羥基-6,7,8-三甲氧基黃酮(5,2′-Dihydroxy-6,7,8-Trimethoxyflavone),5-羥基-7,8-二甲氧基黃酮(Moslosooflavone),黃芩酮Ⅱ(SkullcapflavoneⅡ),5,7,2,5-四羥基-8,6-二甲氧基黃酮(5,7,2,5-Tetrahydroxy-8,6-Dimethoxyflavone),半枝蓮種素(Rivularin),這些化合物有可能在治療膿毒癥過程中起著重要的作用。見表2。

    2.4PPI網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建及關(guān)鍵靶點(diǎn)篩選

    PPI網(wǎng)絡(luò)圖共有78個(gè)靶點(diǎn)可發(fā)生蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用,有2 324條相互作用連接線,平均度值為33.4。根據(jù)Degree值大小進(jìn)行排序,Degree值越大,說明該節(jié)點(diǎn)很可能就是關(guān)鍵成分或關(guān)鍵靶點(diǎn)。見圖3~4。

    2.5PPI網(wǎng)絡(luò)聚類結(jié)果

    使用MCODE插件將黃連解毒湯靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行聚類分析,總共得到5個(gè)基因簇和4個(gè)核心基因,核心基因?yàn)門NFRSF1A、AGTR1、F2、CYP2C19。見表3,圖5。

    2.6靶點(diǎn)蛋白GO分析

    將139個(gè)共同靶點(diǎn)經(jīng)R語(yǔ)言運(yùn)行,GO結(jié)果顯示,黃連解毒湯治療膿毒癥共涉及2 256條生物過程(Biological Process,BP)通路,其中主要包括白細(xì)胞遷移(Leukocyte Migration)、對(duì)外界刺激的積極調(diào)節(jié)反應(yīng)(Positive Regulation of Response to External Stimulus)、肽基酪氨酸磷酸化(Peptidyl-Tyrosine Phosphorylation)等。共有74條細(xì)胞組分(Cell Component,CC)表達(dá)過程,主要涉及膜筏(Membrane Raft)、膜區(qū)(Membrane Region)、細(xì)胞質(zhì)囊泡腔(Cytoplasmic Vesicle Lumen)、肥大細(xì)胞顆粒(Mast Cell Granule)、含膠原的細(xì)胞外基質(zhì)(Collagen-Containing Extracellular Matrix)等。141個(gè)與分子功能(Molecular Function,MF)相關(guān)的過程,主要集中于非跨膜蛋白酪氨酸激酶活性(Non-Membrane Spanning Protein Tyrosine Kinase Activity)、磷酸酶結(jié)合(Phosphatase Binding)、蛋白質(zhì)酪氨酸激酶活性(Protein Tyrosine Kinase Activity)、絲氨酸水解酶活性(Serine Hydrolase Activity)、蛋白磷酸酶結(jié)合(Protein Phosphatase Binding)。見圖6~8。

    2.7KEGG通路富集分析篩選出147條KEGG通路,將前20的結(jié)果繪制成條形圖。這些通路包括了卡波西肉瘤相關(guān)皰疹病毒感染(Kaposi Sarcoma-Associated Herpesvirus Infection)、TNF信號(hào)通路(TNF Signaling Pathway)、人巨細(xì)胞病毒感染通路(Human Cytomegalovirus Infection)。見圖9。

    3討論

    3.1組方分析

    黃連解毒湯主治三焦積熱,邪火妄行,故用黃芩瀉肺火于上焦,黃連瀉脾火于中焦,黃柏瀉腎火于下焦,梔子通瀉三焦之火,從膀胱而出。蓋陽(yáng)盛則陰衰,火盛則水衰,故用大苦大寒之藥,抑陽(yáng)而扶陰,瀉其亢盛之火,而救其欲絕之水,然非實(shí)熱,不可輕投[7]。根據(jù)現(xiàn)代藥理學(xué)的研究,發(fā)現(xiàn)黃連解毒湯具有抑制耐藥性、抗氧化、抗血栓形成、降糖、調(diào)脂、保護(hù)心肌、增強(qiáng)免疫調(diào)節(jié)等優(yōu)點(diǎn),最重要的是可以抗炎,抑菌,抗內(nèi)毒素及保護(hù)腦功能[22]。在現(xiàn)代臨床研究中,黃連解毒湯被廣泛應(yīng)用于各種疾病的治療中,尤其是在急性感染性疾病方面,如膿毒癥、急性感染性心內(nèi)膜炎、重癥肛周膿腫、急性百草枯中毒、急性盆腔炎等[23]。E252CE8C-1804-4876-88BA-9A8218C9F1C1

    3.2成分分析

    研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)黃連解毒湯潛在活性成分的口服生物利用度高,作用靶點(diǎn)廣泛。根據(jù)已有文獻(xiàn)進(jìn)一步分析,小檗堿作為黃連和黃柏的主要藥效物質(zhì)基礎(chǔ),其能夠改善學(xué)習(xí)記憶能力、保護(hù)心肌缺血的再灌注損傷、抗糖尿病、抗炎、降脂。鹽酸巴馬汀具有和小檗堿相似的化學(xué)結(jié)構(gòu),能有效抗炎、抗菌、抗病毒和降血糖等[24-25]。羅煜等[26]的研究表明,鹽酸巴馬汀可同時(shí)作用于核因子κB/p38MAPK信號(hào)通路和NLKP3炎癥小體信號(hào)通路上,最終減少炎癥介質(zhì)的釋放,起到良好的抗炎功效。黃芩中的黃芩苷通過對(duì)icaA和cida基因表達(dá)的降低,影響細(xì)胞間多糖黏附素(PIA)的合成和細(xì)胞外DNA(eDNA)的釋放,從而對(duì)金黃色葡萄球菌生物被膜的形成產(chǎn)生抑制作用[27]。此外黃芩苷還有顯著的抗炎[28]、抗病毒[29]、清除自由基[30]、抗氧化[31]、保護(hù)腎臟[32]、抑制心肌缺血[33]和免疫調(diào)節(jié)作用[34]。山柰酚為梔子中的黃酮類化合物,具有抗氧化、抗炎、抗病原微生物和心血管系統(tǒng)保護(hù)的作用[35]。槲皮素(Quercetin),又名櫟精,是一種黃酮類化合物,具有抗氧化應(yīng)激、抑菌、抗病毒、調(diào)節(jié)免疫及抗血小板聚集等藥理作用[36-39]。

    3.3靶點(diǎn)分析

    根據(jù)Degree值大小排序,對(duì)排名前30位靶點(diǎn)根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)一步分析。其中血清白蛋白(Serum Albumin,ALB)是人類血液中最豐富的蛋白質(zhì)。該蛋白在調(diào)節(jié)血漿膠體滲透壓中起作用,并充當(dāng)多種內(nèi)源性分子(包括激素,脂肪酸和代謝產(chǎn)物)以及外源性藥物的載體蛋白,具有抗氧化和抗炎特性,可作為活性氧[40-41]和氮[42]的清除劑,并且可作為酸堿平衡的緩沖分子[43]。感染性休克患者的特點(diǎn)是內(nèi)皮屏障滲漏增加,ALB和高密度脂蛋白(High Density Lipoprotein,HDL)顯著丟失[44-45]。一磷酸鞘氨醇(Sphingosine Monophosphate,S1P)是一種重要的免疫調(diào)節(jié)劑,負(fù)責(zé)淋巴細(xì)胞的發(fā)育、T細(xì)胞和B細(xì)胞的定位和遷移以及細(xì)胞因子的分泌等生理細(xì)胞反應(yīng)[46]。ALB和HDL等S1P載體分子參與了S1P效應(yīng)的調(diào)控[47]。因此,膿毒癥患者的S1P濃度也會(huì)降低,特別是在感染性休克患者中。

    同時(shí),一個(gè)靶分子可被不同活性成分靶向作用,如MAPK14、MPO、TLR8等。MAPK14可以參與炎癥反應(yīng)中細(xì)胞因子的產(chǎn)生,正向調(diào)控RNA聚合酶Ⅱ啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄,在膿毒癥的發(fā)病過程中起到關(guān)鍵作用[48]。髓過氧化物酶是嗜中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)的標(biāo)志,是氧化應(yīng)激的標(biāo)志[49]。在膿毒癥早期,髓過氧化物酶的產(chǎn)生超過人體的抗氧化防御能力,這種不平衡可以導(dǎo)致直接的線粒體損害,甚至能夠?qū)е缕鞴偎ソ遊50-51]。此外,其他的研究表明,降低膿毒癥的氧化應(yīng)激可以作為一種線粒體保障策略[52-53]。因此,髓過氧化物酶可能是膿毒癥的潛在治療靶點(diǎn)。TLR8是Toll樣受體(TLR)家族的成員,因其能夠識(shí)別來自乙型肝炎病毒(HBV),丙型肝炎病毒(HCV),人免疫缺陷病毒(HIV)和流感病毒的單鏈RNA(ssRNA)的能力而聞名。最近,一些研究證實(shí),TLR8介導(dǎo)的RNA識(shí)別在金黃色葡萄球菌,大腸埃希氏菌和萊姆病螺旋體感染的檢測(cè)中起著至關(guān)重要的作用[54-56]。影響TLR8活性的溶酶體功能抑制對(duì)革蘭氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性細(xì)菌感染均具有抗炎作用,這意味著TLR8的抑制可作為膿毒癥的一種潛在治療手段[55]。

    此外,本研究通過對(duì)黃連解毒湯PPI網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行聚類分析得出了其中顯著性較強(qiáng)的4個(gè)模塊,其中模塊1中包含TNFRSF1A、IL-2、TNF、TLR8、TLR7等炎癥相關(guān)因子。當(dāng)病原微生物入侵機(jī)體時(shí),激活細(xì)胞因子釋放炎癥介質(zhì),這表明黃連解毒湯能夠通過抑制炎癥反應(yīng)發(fā)揮治療作用。

    腎素-血管緊張素系統(tǒng)(Renin Angiotensin System,RAS)在膿毒癥中被激活,不僅與膿毒癥中的微血管功能障礙有關(guān),還貫穿臟器功能紊亂的始終[57]。最近,Zhang等[58]已證明RAS的低表達(dá)與嚴(yán)重膿毒癥患者的不良預(yù)后相關(guān)。血管緊張素作為RAS的重要環(huán)節(jié),其中腎素血管緊張素Ⅱ(Renin Angiotensin Ⅱ,Ang-2)與膿毒癥的炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡、血管滲漏等病理過程密切相關(guān)。目前相關(guān)研究表明,嚴(yán)重膿毒癥患者的Ang-2和腎素水平升高,而升高的程度與反應(yīng)性充血期間的微血管復(fù)氧率負(fù)相關(guān)[57]。模塊2中的核心基因?yàn)锳GTR1(AT1),AT1作為Ang-2的主要受體,大多數(shù)已知的Ang-2的作用是由AT1介導(dǎo)的。AT1具有調(diào)節(jié)血管收縮作用,并參與Ang-2調(diào)控炎癥,研究表明AT1在膿毒癥患者體內(nèi)下調(diào)[59]。

    通過此網(wǎng)絡(luò)驗(yàn)證了黃連解毒湯治療膿毒癥是通過多成分、多靶點(diǎn)、共同調(diào)節(jié)的方式發(fā)揮作用的。

    3.4通路結(jié)果分析

    通過GO富集分析發(fā)現(xiàn)黃連解毒湯治療膿毒癥的78個(gè)潛在關(guān)鍵靶點(diǎn)基因的主要生物過程涉及炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、細(xì)胞因子的分泌調(diào)節(jié)、細(xì)胞凋亡調(diào)控等。分子功能包括蛋白激酶結(jié)合、受體活性、細(xì)胞因子活性、激酶活性調(diào)控等方面;細(xì)胞組分則主要富集在細(xì)胞區(qū)域、細(xì)胞質(zhì)膜和線粒體等方面。

    黃連解毒湯的KEGG通路富集結(jié)果表明,其絕大部分基因富集在TNF信號(hào)通路、Toll樣受體信號(hào)通路、EB病毒感染、趨化因子信號(hào)通路、HIF-1信號(hào)通路、甲型流感等炎癥通路,破骨細(xì)胞分化通路、細(xì)胞凋亡通路等代謝通路,糖尿病并發(fā)癥中的AGE-RAGE信號(hào)通路、內(nèi)分泌抵抗等與內(nèi)分泌系統(tǒng)相關(guān)的通路。

    眾所周知,核因子κB是炎癥反應(yīng)中的主要轉(zhuǎn)錄因子,廣泛的細(xì)胞外刺激如病毒、細(xì)菌和酵母產(chǎn)物與不同的Toll樣受體(TLR)相互作用,以及TNF、IL-1分別與TNF受體1(TNFR1)和IL-1受體(IL-1R)結(jié)合均能激活核因子κB通路,以響應(yīng)各種刺激[60]。E252CE8C-1804-4876-88BA-9A8218C9F1C1

    研究表明,糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)能結(jié)合細(xì)胞膜上RAGE,上調(diào)炎癥反應(yīng)并導(dǎo)致組織細(xì)胞的破壞[61],并且能夠?qū)е卵趸瘧?yīng)激和細(xì)胞功能不良,自由基產(chǎn)生以及核因子κB的活化[62]。核因子κB則能夠誘導(dǎo)促進(jìn)細(xì)胞因子IL-6、TNF-α、IL-α等的釋放,從而引起炎癥反應(yīng)[63]。蔡紅蝶等[64]的實(shí)驗(yàn)表明AGEs作用于腸道L細(xì)胞(GLUTag),通過上調(diào)細(xì)胞RAGE表達(dá),從而激活NADPH氧化酶,升高p38MAPK磷酸化水平,促使核因子κB表達(dá),釋放炎癥介質(zhì),其發(fā)病機(jī)制與本研究預(yù)測(cè)具有一致性,而黃酮類成分能顯著調(diào)節(jié)GLUTag細(xì)胞中AGEs/RAGE/p38MAPK/核因子κB信號(hào)通路。但AGE-RAGE軸在導(dǎo)致多器官衰竭和死亡的過度炎癥反應(yīng)中的相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究較少,本研究可為黃連解毒湯治療膿毒癥的進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究提供參考。

    綜上所述,本研究依托網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué),對(duì)黃連解毒湯治療膿毒癥的化學(xué)成分、作用靶點(diǎn)和相關(guān)信號(hào)通路進(jìn)行系統(tǒng)分析和探討,預(yù)測(cè)了黃連解毒湯中小檗堿、槲皮素、山柰酚等多種成分協(xié)同作用于AGE-RAGE信號(hào)通路、TNF信號(hào)通路等,初步揭示了其在治療膿毒癥時(shí)的多成分、多途徑、多靶點(diǎn)協(xié)同作用的復(fù)雜機(jī)制過程,為未來實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證奠定了理論基礎(chǔ)。

    參考文獻(xiàn)

    [1] Singer M,Deutschman CS,Seymour CW,et al.The Third International Consensus Definitions for Sepsis and Septic Shock(Sepsis-3)[J].JAMA,2016,315(8):801-810.

    [2]Fay KT,F(xiàn)ord ML,Coopersmith CM.The intestinal microenvironment in sepsis[J].Biochim Biophys Acta Mol Basis Dis,2017,1863(10 Pt B):2574-2583.

    [3]Galley HF.Oxidative stress and mitochondrial dysfunction in sepsis[J].Br J Anaesth,2011,107(1):57-64.

    [4]羅洋.中醫(yī)藥治療膿毒血癥研究進(jìn)展[J].湖北中醫(yī)雜志,2014,36(2):77-79.

    [5]陳林靜,江艷芬.膿毒血癥診治進(jìn)展[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2016,25(11):1244-1247.

    [6]李銀平.從“三證三法”看中西醫(yī)結(jié)合治療危重病的研究思路——王今達(dá)教授學(xué)術(shù)思想探討[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合急救雜志,2004,11(1):7-9.

    [7] 許濟(jì)群.方劑學(xué)[M].5版.上海:上??茖W(xué)技術(shù)出版社,1985:58-59.

    [8]房康,吳高榮,王輝,等.黃連解毒湯自沉淀化學(xué)成分及其抗PC12細(xì)胞損傷研究[J].中草藥,2017,48(18):3714-3719.

    [9]崔曉娟,盧卓,肖思萌,等.黃連解毒湯對(duì)UC小鼠的抗炎作用、入血成分測(cè)定及其作用靶點(diǎn)的虛擬篩選[J].中國(guó)中藥雜志,2021,46(1):206-213.

    [10] 董靜,尤凱,郭星,等.黃連解毒湯的藥理學(xué)研究進(jìn)展[J].沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2014,16(1):51-53.

    [11]Ru J,Li P,Wang J,et al.TCMSP:a database of systems pharmacology for drug discovery from herbal medicines[J].J Cheminform,2014,6:13.

    [12]Liu J,Pei T,Mu J,et al.Systems Pharmacology Uncovers the Multiple Mechanisms of Xijiao Dihuang Decoction for the Treatment of Viral Hemorrhagic Fever[J].Evid Based Complement Alternat Med,2016,2016:9025036.

    [13] 李鑫琦,高耀,李愛平,等.含黃芪方劑組方規(guī)律及核心藥對(duì)“黃芪-當(dāng)歸”分子機(jī)制的研究[J].中草藥,2019,50(21):5273-5281.

    [14]姚瑤.基于系統(tǒng)藥理學(xué)的中藥復(fù)方配伍及作用機(jī)制研究[D].咸陽(yáng):西北農(nóng)林科技大學(xué),2014.

    [15]劉惠.基于系統(tǒng)藥理學(xué)的甘草作用機(jī)制和新藥發(fā)現(xiàn)研究[D].咸陽(yáng):西北農(nóng)林科技大學(xué),2013.

    [16]張新莊,蕭偉,徐筱杰,等.利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法研究熱毒寧注射液抗流感病毒的分子作用機(jī)制[J].物理化學(xué)學(xué)報(bào),2013,29(7):1415-1420.

    [17]Szklarczyk D,F(xiàn)ranceschini A,Wyder S,et al.STRING v10:protein-protein interaction networks,integrated over the tree of life[J].Nucleic Acids Res,2015,43(Database issue):D447-452.

    [18]Zhang X,Gu J,Cao L,et al.Network pharmacology study on the mechanism of traditional Chinese medicine for upper respiratory tract infection[J].Mol Biosyst,2014,10(10):2517-2525.E252CE8C-1804-4876-88BA-9A8218C9F1C1

    [19]黃秀芳,高運(yùn)吉,廖鋼,等.基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探索射麻止喘液治療哮喘的作用機(jī)制[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2019,25(23):187-195.

    [20]世界中醫(yī)藥學(xué)會(huì)聯(lián)合會(huì).網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)評(píng)價(jià)方法指南[J].世界中醫(yī)藥,2021,16(4):527-532.

    [21]Yu G,Wang LG,Han Y,et al.clusterProfiler:an R package for comparing biological themes among gene clusters[J].OMICS,2012,16(5):284-287.

    [22]張保國(guó),程鐵峰,郝錦錦.黃連解毒湯藥效學(xué)研究概況[J].中國(guó)藥學(xué)雜志,2009,44(16):1204-1208.

    [23]李雅.黃連解毒湯的現(xiàn)代臨床研究進(jìn)展[J].中國(guó)中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育,2018,16(24):158-160.

    [24]周鑫疊.巴馬汀抗骨關(guān)節(jié)炎作用的實(shí)驗(yàn)研究[D].杭州:浙江大學(xué),2014.

    [25] Long J,Song J,Zhong L,et al.Palmatine:A review of its pharmacology,toxicity and pharmacokinetics[J].Biochimie,2019,162:176-184.

    [26]羅煜,吳嘉思,朱正文,等.鹽酸巴馬汀抑制NF-κB/p38 MAPK信號(hào)通路及NLRP3炎癥小體抗炎機(jī)制研究[J].中藥新藥與臨床藥理,2020,31(7):762-768.

    [27]張洺嘉,謝明杰.黃芩素抑制金黃色葡萄球菌生物被膜的形成[J].中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào),2018,34(3):334-340.

    [28]白琳,楊雨欣,萬巧鳳,等.黃芩苷經(jīng)TLR2/NF-κB途徑減輕類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎大鼠滑膜炎[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào),2017,33(11):1569-1573.

    [29]Nayak MK,Agrawal AS,Bose S,et al.Antiviral activity of baicalin against influenza virus H1N1-pdm09 is due to modulation of NS1-mediated cellular innate immune responses[J].J Antimicrob Chemother,2014,69(5):1298-1310.

    [30]劉淵宏,宋龍.液質(zhì)聯(lián)用法篩選黃芩中清除自由基的活性物質(zhì)[J].中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志,2015,21(9):1156-1159.

    [31]Wen YF,Zhao JQ,Bhadauria M,et al.Baicalin prevents cadmium induced hepatic cytotoxicity,oxidative stress and histomorphometric alterations[J].Exp Toxicol Pathol,2013,65(1-2):189-196.

    [32]孫潔,任建功,羅暉,等.黃芩苷對(duì)2型糖尿病腎病大鼠survivin表達(dá)的影響[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2019,30(1):59-61.

    [33]陳玲玲,方侃,姜敏,等.黃芩甙預(yù)處理對(duì)心肌缺血/再灌注損傷大鼠血流動(dòng)力學(xué)及肌鈣蛋白I濃度的影響[J].海南醫(yī)學(xué),2018,29(14):1931-1934.

    [34]劉曉婷.黃芩苷對(duì)流感病毒H1N1感染A549細(xì)胞的作用及免疫調(diào)控機(jī)制的研究[D].北京:北京中醫(yī)藥大學(xué),2016.

    [35]孔令希.山柰酚抗動(dòng)脈粥樣硬化作用機(jī)理探討及其藥代動(dòng)力學(xué)研究[D].重慶:重慶醫(yī)科大學(xué),2014.

    [36]湯海波,楊萍.槲皮素對(duì)內(nèi)毒素誘導(dǎo)急性肺損傷大鼠的作用機(jī)制[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2016,32(4):531-534.

    [37]Zaplatic E,Bule M,Shah S,et al.Molecular mechanisms underlying protective role of quercetin in attenuating Alzheimer′s disease[J].Life Sci,2019,224:109-119.

    [38]Patel RV,Mistry BM,Shinde SK,et al.Therapeutic potential of quercetin as a cardiovascular agent[J].Eur J Med Chem,2018,155:889-904.

    [39]黎敏,楊武斌,米本中,等.槲皮素抗癌作用機(jī)制相關(guān)研究報(bào)道[J].中藥藥理與臨床,2018,34(2):129-132,24.

    [40]King TP.On the sulfhydryl group of human plasma albumin[J].J Biol Chem,1961,236:PC5.

    [41]Quinlan GJ,Margarson MP,Mumby S,et al.Administration of albumin to patients with sepsis syndrome:a possible beneficial role in plasma thiol repletion[J].Clin Sci(Lond),1998,95(4):459-465.

    [42]Stamler JS,Jaraki O,Osborne J,et al.Nitric oxide circulates in mammalian plasma primarily as an S-nitroso adduct of serum albumin[J].Proc Natl Acad Sci U S A,1992,89(16):7674-7677.E252CE8C-1804-4876-88BA-9A8218C9F1C1

    [43]Reeves RB.Temperature-induced changes in blood acid-base status:Donnan rCl and red cell volume[J].J Appl Physiol,1976,40(5):762-767.

    [44]D.C.Angus,T.van der Poll,Severe sepsis and septic shock,N.Engl[J]J Med,2013,369(9):840-851.

    [45]Winkler MS,Nierhaus A,Holzmann M,et al.Decreased serum concentrations of sphingosine-1-phosphate in sepsis[J].Crit Care,2015,19:372.

    [46]Raza Z,Saleem U,Naureen Z.Sphingosine 1-phosphate signaling in ischemia and reperfusion injury[J].Prostaglandins Other Lipid Mediat,2020,149:106436.

    [47]Winkler MS,Nierhaus A,Poppe A,et al.Sphingosine-1-Phosphate:A Potential Biomarker and Therapeutic Target for Endothelial Dysfunction and Sepsis?[J].Shock,2017,47(6):666-672.

    [48]Dakal TC,Kala D,Dhiman G,et al.Predicting the functional consequences of non-synonymous single nucleotide polymorphisms in IL8 gene[J].Sci Rep,2017,7(1):6525.

    [49]Yu G,Liang Y,Zheng S,et al.Inhibition of Myeloperoxidase by N-Acetyl Lysyltyrosylcysteine Amide Reduces Oxidative Stress-Mediated Inflammation,Neuronal Damage,and Neural Stem Cell Injury in a Murine Model of Stroke[J].J Pharmacol Exp Ther,2018,364(2):311-322.

    [50]Liu CH,Zhang WD,Wang JJ,et al.Senegenin Ameliorate Acute Lung Injury Through Reduction of Oxidative Stress and Inhibition of Inflammation in Cecal Ligation and Puncture-Induced Sepsis Rats[J].Inflammation,2016,39(2):900-906.

    [51]Cherruault Y.New deterministic methods for global optimization and applications to biomedicine[J].Int J Biomed Comput,1991,27(3-4):215-229.

    [52]Florentino D,Giustina AD,Goldim M,et al.Early life neuroimmune challenge protects the brain after sepsis in adult rats[J].Neurochem Int,2020,135:104712.

    [53]Giustina AD,Goldim MP,Danielski LG,et al.Fish oil-rich lipid emulsion modulates neuroinflammation and prevents long-term cognitive dysfunction after sepsis[J].Nutrition,2020,70:110417.

    [54]Bergstrm B,Aune MH,Awuh JA,et al.TLR8 Senses Staphylococcus aureus RNA in Human Primary Monocytes and Macrophages and Induces IFN-β Production via a TAK1-IKKβ-IRF5 Signaling Pathway[J].J Immunol,2015,195(3):1100-1111.

    [55]Krüger A,Oldenburg M,Chebrolu C,et al.Human TLR8 senses UR/URR motifs in bacterial and mitochondrial RNA[J].EMBO Rep,2015,16(12):1656-1663.

    [56]Cervantes JL,La Vake CJ,Weinerman B,et al.Human TLR8 is activated upon recognition of Borrelia burgdorferi RNA in the phagosome of human monocytes[J].J Leukoc Biol,2013,94(6):1231-1241.E252CE8C-1804-4876-88BA-9A8218C9F1C1

    [57] Doerschug KC,Delsing AS,Schmidt GA,et al.Renin-angiotensin system activation correlates with microvascular dysfunction in a prospective cohort study of clinical sepsis[J].Crit Care,2010,14(1):R24.

    [58]Zhang W,Chen X,Huang L,et al.Severe sepsis:Low expression of the renin-angiotensin system is associated with poor prognosis[J].Exp Ther Med,2014,7(5):1342-1348.

    [59]Bucher M,Ittner KP,Hobbhahn J,et al.Downregulation of angiotensin Ⅱ type 1 receptors during sepsis[J].Hypertension,2001,38(2):177-182.

    [60]Yu XH,Zheng XL,Tang CK.Nuclear Factor-κB Activation as a Pathological Mechanism of Lipid Metabolism and Atherosclerosis[J].Adv Clin Chem,2015,70:1-30.

    [61]Yan SF,D′Agati V,Schmidt AM,et a1.Receptor for Advanced Glycation Endproducts(RAGE):a fomidable force in the pathogenesis of the cardiovascular complications of diabetes & aging[J].Curr Mol Med,2007,7(8):699-7l0.

    [62]Bierhaus A,Hofmann MA,Ziegler R,et a1.AGEs and their interaction with AGE-receptors in Vascular disease and diabetes mellitus.I.The AGE concept[J].CardioVasc Res,1998,37(3):586-600.

    [63]王悅,申潔,何倩,等.基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及分子對(duì)接技術(shù)探討黃芩茶防治結(jié)直腸癌的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制[J].中國(guó)中藥雜志,2021,46(23):6251-6260.

    [64]蔡紅蝶,宿樹蘭,陶偉偉,等.黃蜀葵花中5種黃酮類化合物對(duì)腸道L細(xì)胞AGEs/RAGE/p38MAPK/NF-κB信號(hào)通路的調(diào)節(jié)作用[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào),2017,33(6):798-805.

    (2021-03-03收稿本文編輯:魏慶雙)

    基金項(xiàng)目:上海市重大危重醫(yī)療事件中西醫(yī)協(xié)同響應(yīng)與干預(yù)平臺(tái)建設(shè)項(xiàng)目(ZY2018-2020-FWTX-7004)作者簡(jiǎn)介:董青青(1994.07—),女,碩士研究生在讀,研究方向:中西醫(yī)結(jié)合治療急危重癥,E-mail:sixi16602152267@163.com通信作者:陳偉(1962.07—),男,博士研究生,主任醫(yī)師,博士研究生導(dǎo)師,研究方向:心血管和危重病的中西醫(yī)結(jié)合防治,E-mail:cwdoctor@163.comE252CE8C-1804-4876-88BA-9A8218C9F1C1

    猜你喜歡
    網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)作用機(jī)制膿毒癥
    血清IL-6、APC、CRP在膿毒癥患者中的表達(dá)及臨床意義
    膿毒癥的病因病機(jī)及中醫(yī)治療進(jìn)展
    基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法分析中藥臨床治療胸痹的作用機(jī)制
    從網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)角度研究白芍治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的作用
    基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的沙棘總黃酮治療心肌缺血的作用機(jī)制研究
    基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析丹參山楂組分配伍抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用機(jī)制研究
    通過技術(shù)創(chuàng)新促進(jìn)我鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整
    冠心丹參方及其有效成分治療冠心病的研究進(jìn)展
    大數(shù)據(jù)對(duì)高等教育發(fā)展的推動(dòng)研究
    人間(2016年26期)2016-11-03 17:51:57
    帕羅西汀治療腦卒中后抑郁癥的臨床療效和安全性及作用機(jī)制
    99久久精品热视频| 2018国产大陆天天弄谢| 永久网站在线| 国产欧美亚洲国产| 亚洲,欧美,日韩| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 在线观看一区二区三区激情| 丁香六月天网| 涩涩av久久男人的天堂| 日日啪夜夜爽| av黄色大香蕉| 亚洲av成人精品一区久久| 亚洲av在线观看美女高潮| 免费黄网站久久成人精品| 晚上一个人看的免费电影| 亚洲av综合色区一区| 国产乱来视频区| 国产中年淑女户外野战色| 色婷婷久久久亚洲欧美| 一区二区三区乱码不卡18| 久久精品久久精品一区二区三区| 国产黄片视频在线免费观看| 免费观看性生交大片5| 国精品久久久久久国模美| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 色哟哟·www| 一级毛片电影观看| 欧美少妇被猛烈插入视频| 夫妻午夜视频| 日韩av免费高清视频| 欧美另类一区| 观看美女的网站| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 六月丁香七月| 一区二区三区免费毛片| 最近手机中文字幕大全| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 日韩欧美精品免费久久| 免费观看的影片在线观看| 能在线免费看毛片的网站| 最近手机中文字幕大全| 日本欧美国产在线视频| 欧美精品亚洲一区二区| 午夜激情福利司机影院| 日韩 亚洲 欧美在线| 国产视频内射| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 成人二区视频| 亚洲国产欧美日韩在线播放 | 日韩av不卡免费在线播放| 黄片无遮挡物在线观看| 少妇丰满av| 99久久中文字幕三级久久日本| 婷婷色综合大香蕉| 99久久精品热视频| 精品午夜福利在线看| 男女边吃奶边做爰视频| 18禁在线播放成人免费| 久久97久久精品| 成人无遮挡网站| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 狂野欧美激情性bbbbbb| 少妇人妻精品综合一区二区| 免费看av在线观看网站| 高清在线视频一区二区三区| 国产免费又黄又爽又色| 97超碰精品成人国产| 久久精品国产亚洲av涩爱| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 久久鲁丝午夜福利片| 少妇高潮的动态图| 黑丝袜美女国产一区| 国产永久视频网站| 最新的欧美精品一区二区| 久久99蜜桃精品久久| 国产伦精品一区二区三区视频9| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| av网站免费在线观看视频| 全区人妻精品视频| 国产免费福利视频在线观看| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 国产欧美日韩综合在线一区二区 | 成人漫画全彩无遮挡| 国产精品人妻久久久影院| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 国产av一区二区精品久久| 亚洲精品国产色婷婷电影| 亚洲欧洲国产日韩| 亚洲av成人精品一二三区| 人人妻人人澡人人看| 亚洲精品日韩av片在线观看| 日本wwww免费看| 精品午夜福利在线看| 国产男女内射视频| 色视频在线一区二区三区| 大片免费播放器 马上看| 国产淫片久久久久久久久| 久久精品国产亚洲网站| 超碰97精品在线观看| 日本91视频免费播放| 欧美97在线视频| 久久av网站| 黄色日韩在线| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 中文天堂在线官网| 亚洲精品亚洲一区二区| 精品国产乱码久久久久久小说| 中国三级夫妇交换| 大片电影免费在线观看免费| 国产精品三级大全| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 午夜91福利影院| 亚洲综合精品二区| 男人爽女人下面视频在线观看| 欧美xxxx性猛交bbbb| 国产91av在线免费观看| 亚洲国产毛片av蜜桃av| av黄色大香蕉| 国产精品蜜桃在线观看| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 一区二区三区免费毛片| 久久国产亚洲av麻豆专区| 国产高清国产精品国产三级| av卡一久久| 国产老妇伦熟女老妇高清| 精品一区二区三区视频在线| 超碰97精品在线观看| 日日啪夜夜爽| 精品亚洲成a人片在线观看| 久热这里只有精品99| 欧美+日韩+精品| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 日韩欧美 国产精品| 一区二区三区精品91| 日本vs欧美在线观看视频 | 国产色婷婷99| 国产在线免费精品| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 亚洲欧美精品专区久久| 亚洲国产欧美在线一区| 精品少妇久久久久久888优播| 日本欧美国产在线视频| 香蕉精品网在线| 国产成人精品一,二区| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 国产精品秋霞免费鲁丝片| 激情五月婷婷亚洲| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 色婷婷久久久亚洲欧美| 在线观看www视频免费| 亚洲av成人精品一区久久| 一个人看视频在线观看www免费| 夫妻性生交免费视频一级片| 亚洲一区二区三区欧美精品| 久久精品国产自在天天线| 丰满乱子伦码专区| 久久国内精品自在自线图片| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 亚洲精品一二三| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 欧美精品一区二区免费开放| 亚洲av福利一区| 91精品国产国语对白视频| 秋霞在线观看毛片| 国产日韩欧美在线精品| 黄色配什么色好看| 成人毛片60女人毛片免费| 又大又黄又爽视频免费| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 91精品国产九色| 久久婷婷青草| 欧美最新免费一区二区三区| 亚洲精品自拍成人| 色婷婷av一区二区三区视频| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 日韩免费高清中文字幕av| 婷婷色av中文字幕| 两个人免费观看高清视频 | videossex国产| 美女视频免费永久观看网站| 伊人久久精品亚洲午夜| 国产精品偷伦视频观看了| 国产亚洲91精品色在线| av福利片在线| 国产精品欧美亚洲77777| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 日韩一区二区三区影片| 另类亚洲欧美激情| 伦理电影大哥的女人| 久久热精品热| 女人精品久久久久毛片| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 国产91av在线免费观看| 黄色欧美视频在线观看| 日本黄色日本黄色录像| 久久99蜜桃精品久久| xxx大片免费视频| 大香蕉97超碰在线| 又爽又黄a免费视频| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 亚洲欧美日韩另类电影网站| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 国产成人精品久久久久久| 国产伦精品一区二区三区视频9| 久久影院123| 我要看黄色一级片免费的| 久久久久久久久久久丰满| 日韩在线高清观看一区二区三区| 伦精品一区二区三区| 亚洲精品自拍成人| 夫妻午夜视频| 亚洲国产色片| 国产日韩欧美在线精品| 全区人妻精品视频| 视频区图区小说| 国产成人免费无遮挡视频| 丝袜在线中文字幕| 黄色配什么色好看| 亚洲美女黄色视频免费看| 欧美另类一区| 下体分泌物呈黄色| 乱码一卡2卡4卡精品| 亚洲国产日韩一区二区| 国产成人精品久久久久久| av福利片在线| 一二三四中文在线观看免费高清| 另类精品久久| 99re6热这里在线精品视频| 久久99精品国语久久久| 国产亚洲欧美精品永久| 亚洲四区av| 日本91视频免费播放| 免费观看av网站的网址| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 午夜老司机福利剧场| 精品亚洲成a人片在线观看| 全区人妻精品视频| 久久久久久伊人网av| 久久韩国三级中文字幕| 特大巨黑吊av在线直播| 欧美+日韩+精品| 精品久久久久久久久亚洲| 91精品国产国语对白视频| 如何舔出高潮| 午夜福利,免费看| 亚洲真实伦在线观看| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 国产中年淑女户外野战色| 国产午夜精品一二区理论片| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 亚州av有码| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 久久久久久久久久久丰满| 老司机影院毛片| 99热网站在线观看| av卡一久久| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 欧美日本中文国产一区发布| 欧美日韩精品成人综合77777| 六月丁香七月| 日日啪夜夜爽| 久久久久久久久久人人人人人人| 五月伊人婷婷丁香| 成人影院久久| 最近的中文字幕免费完整| 国产又色又爽无遮挡免| 男的添女的下面高潮视频| 各种免费的搞黄视频| 春色校园在线视频观看| 久久精品国产a三级三级三级| 国产在线免费精品| 99热国产这里只有精品6| 久久青草综合色| av黄色大香蕉| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 亚洲自偷自拍三级| 久久久久网色| 99久久精品一区二区三区| 久久久亚洲精品成人影院| 国产精品免费大片| 老司机亚洲免费影院| 国产成人精品一,二区| 成人毛片a级毛片在线播放| 丰满人妻一区二区三区视频av| 免费观看的影片在线观看| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 插逼视频在线观看| 亚洲精品乱久久久久久| 亚洲av免费高清在线观看| 国产日韩欧美在线精品| 我的老师免费观看完整版| 成人特级av手机在线观看| 国产视频内射| 一个人看视频在线观看www免费| 精品国产乱码久久久久久小说| 国产免费视频播放在线视频| 久久久久久久国产电影| 免费av不卡在线播放| 在线观看三级黄色| 国产 精品1| 少妇的逼水好多| 国产精品国产三级专区第一集| 免费大片18禁| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 人妻 亚洲 视频| 午夜日本视频在线| 国产精品女同一区二区软件| 色视频www国产| 成人免费观看视频高清| 精品少妇久久久久久888优播| 最近2019中文字幕mv第一页| 久久狼人影院| 国产免费一级a男人的天堂| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 国产日韩欧美视频二区| 亚洲久久久国产精品| 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | 99re6热这里在线精品视频| 日韩精品有码人妻一区| 大片免费播放器 马上看| 成人综合一区亚洲| 久久免费观看电影| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 美女内射精品一级片tv| av在线app专区| 我的老师免费观看完整版| 丰满迷人的少妇在线观看| 18禁动态无遮挡网站| 99视频精品全部免费 在线| av又黄又爽大尺度在线免费看| 麻豆成人午夜福利视频| 亚洲人成网站在线观看播放| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 亚洲色图综合在线观看| 日日啪夜夜爽| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 人人澡人人妻人| 三上悠亚av全集在线观看 | 欧美日韩国产mv在线观看视频| 午夜影院在线不卡| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 高清不卡的av网站| av在线app专区| 国产精品国产三级专区第一集| 毛片一级片免费看久久久久| 一个人免费看片子| 亚洲一区二区三区欧美精品| 国产黄片视频在线免费观看| 99久久人妻综合| 日韩人妻高清精品专区| av在线播放精品| 欧美一级a爱片免费观看看| 国产精品成人在线| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 久久狼人影院| 国产真实伦视频高清在线观看| av卡一久久| av视频免费观看在线观看| 最新中文字幕久久久久| 五月天丁香电影| 91精品一卡2卡3卡4卡| 欧美bdsm另类| 简卡轻食公司| 欧美人与善性xxx| 黑人高潮一二区| 99热这里只有是精品在线观看| 国产av精品麻豆| 91久久精品国产一区二区三区| 丝袜在线中文字幕| 夫妻性生交免费视频一级片| 亚洲内射少妇av| 九九爱精品视频在线观看| 国产成人精品无人区| 国产黄片视频在线免费观看| 日韩视频在线欧美| 午夜av观看不卡| 2021少妇久久久久久久久久久| 久久毛片免费看一区二区三区| 少妇丰满av| 久久精品夜色国产| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 久久人人爽人人爽人人片va| 亚洲av不卡在线观看| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 日本av手机在线免费观看| 黄色欧美视频在线观看| 美女主播在线视频| 国产 精品1| h日本视频在线播放| 亚洲欧洲日产国产| 美女视频免费永久观看网站| 制服丝袜香蕉在线| 精品少妇久久久久久888优播| 男人添女人高潮全过程视频| 亚洲怡红院男人天堂| 韩国av在线不卡| 免费观看在线日韩| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 日韩制服骚丝袜av| 亚洲精品第二区| 欧美区成人在线视频| 中国国产av一级| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 少妇人妻一区二区三区视频| 性色avwww在线观看| 熟女av电影| 国产一区二区在线观看av| 少妇人妻精品综合一区二区| 国产黄片美女视频| 一级a做视频免费观看| 嘟嘟电影网在线观看| 日本-黄色视频高清免费观看| 18禁在线播放成人免费| 乱码一卡2卡4卡精品| 亚洲美女黄色视频免费看| 丰满少妇做爰视频| 国产伦理片在线播放av一区| 中国三级夫妇交换| 晚上一个人看的免费电影| 国产精品久久久久久久电影| 国产精品一区二区在线不卡| 精品亚洲成a人片在线观看| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 亚洲高清免费不卡视频| 赤兔流量卡办理| 女人精品久久久久毛片| 如何舔出高潮| 一级,二级,三级黄色视频| 亚洲综合精品二区| 午夜福利,免费看| 一级毛片 在线播放| 国产一级毛片在线| 欧美精品一区二区大全| 国产成人a∨麻豆精品| 国产伦理片在线播放av一区| 国产一区亚洲一区在线观看| 国产精品蜜桃在线观看| 日韩欧美 国产精品| 久久午夜福利片| 尾随美女入室| 久久人人爽人人爽人人片va| av线在线观看网站| 国产永久视频网站| 精品国产国语对白av| 国产精品99久久久久久久久| 亚洲国产欧美在线一区| 亚洲精品国产av蜜桃| 国产精品99久久久久久久久| 国产精品不卡视频一区二区| 一级毛片 在线播放| 国产精品蜜桃在线观看| 亚洲精品亚洲一区二区| 美女cb高潮喷水在线观看| 久久久久国产网址| 欧美少妇被猛烈插入视频| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 亚洲真实伦在线观看| 国产 精品1| 日本黄大片高清| 久久青草综合色| 国产精品人妻久久久久久| 97超视频在线观看视频| 久久精品国产亚洲av天美| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 2021少妇久久久久久久久久久| 性高湖久久久久久久久免费观看| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 亚洲三级黄色毛片| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 青春草国产在线视频| 三级国产精品欧美在线观看| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 99re6热这里在线精品视频| 免费av中文字幕在线| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 老熟女久久久| 精华霜和精华液先用哪个| 秋霞在线观看毛片| 免费观看在线日韩| 国产免费视频播放在线视频| 高清视频免费观看一区二区| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 国产乱人偷精品视频| 亚洲欧洲国产日韩| 欧美3d第一页| 这个男人来自地球电影免费观看 | 亚洲国产精品专区欧美| 欧美丝袜亚洲另类| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 黄色视频在线播放观看不卡| 天堂中文最新版在线下载| 最近手机中文字幕大全| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 色视频在线一区二区三区| 人人妻人人看人人澡| av一本久久久久| 夜夜爽夜夜爽视频| 十分钟在线观看高清视频www | 精品国产一区二区三区久久久樱花| 国产免费视频播放在线视频| 黄色配什么色好看| 黄色怎么调成土黄色| kizo精华| 精品久久久久久久久av| 夜夜爽夜夜爽视频| 97超视频在线观看视频| 亚洲图色成人| 看非洲黑人一级黄片| 久热久热在线精品观看| 欧美日韩视频精品一区| a级毛色黄片| 在线观看免费日韩欧美大片 | 超碰97精品在线观看| 只有这里有精品99| 狂野欧美激情性bbbbbb| 人妻夜夜爽99麻豆av| 亚洲av免费高清在线观看| 日本免费在线观看一区| 午夜福利影视在线免费观看| 欧美日韩综合久久久久久| 一区二区三区免费毛片| 五月开心婷婷网| 校园人妻丝袜中文字幕| 午夜免费男女啪啪视频观看| av一本久久久久| kizo精华| 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 亚洲国产成人一精品久久久| 亚洲天堂av无毛| 欧美成人精品欧美一级黄| 国产真实伦视频高清在线观看| 欧美3d第一页| 国产精品无大码| 性色av一级| 亚洲天堂av无毛| 久久久久久久大尺度免费视频| 最新中文字幕久久久久| 熟妇人妻不卡中文字幕| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 99热这里只有精品一区| 草草在线视频免费看| 日日啪夜夜爽| 十分钟在线观看高清视频www | 成年美女黄网站色视频大全免费 | 国产精品一区www在线观看| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 国产片特级美女逼逼视频| 国产免费福利视频在线观看| 成年人午夜在线观看视频| 亚洲精品aⅴ在线观看| 女性被躁到高潮视频| 一级,二级,三级黄色视频| 少妇人妻精品综合一区二区| 免费高清在线观看视频在线观看| 欧美3d第一页| 亚洲精品日韩av片在线观看| 亚洲人成网站在线播| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 伊人久久国产一区二区| 久久久久视频综合| 国产淫语在线视频| √禁漫天堂资源中文www| 日韩一区二区视频免费看| 激情五月婷婷亚洲| 色5月婷婷丁香| 日本爱情动作片www.在线观看| av有码第一页| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 熟女电影av网| 久久久久网色| 午夜日本视频在线| 久久精品久久久久久久性| 观看av在线不卡| 内地一区二区视频在线| 亚洲怡红院男人天堂| 伊人久久国产一区二区| 桃花免费在线播放| 国产成人精品一,二区| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 久久这里有精品视频免费| 国产精品一区二区在线不卡| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 91精品国产国语对白视频| 中文字幕人妻丝袜制服| 国产精品一区www在线观看| 亚洲精品自拍成人| 男人狂女人下面高潮的视频| 免费播放大片免费观看视频在线观看| av线在线观看网站| 亚洲综合色惰| 免费人成在线观看视频色| 亚洲精品国产色婷婷电影| 亚洲国产精品999| 日本爱情动作片www.在线观看| 亚洲成人av在线免费| 国产精品久久久久久精品电影小说| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 国产精品久久久久久久久免| 日本wwww免费看| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 午夜激情久久久久久久| 亚洲欧美成人精品一区二区| 久久青草综合色| 国产av精品麻豆| 男人爽女人下面视频在线观看| 久久久午夜欧美精品| 91精品国产九色| 亚洲av男天堂| 久久这里有精品视频免费|