基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接研究黃葵膠囊治療糖尿病腎病的作用機(jī)制

焦圓圓 方錦穎 卓莉 李文歌

摘要 目的：基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接方法分析黃葵膠囊治療糖尿病腎病的作用機(jī)制。方法：通過(guò)化源網(wǎng)數(shù)據(jù)庫(kù)、中藥與化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)、PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)以及文獻(xiàn)查閱，搜集黃葵膠囊化學(xué)成分，運(yùn)用Swiss ADME數(shù)據(jù)庫(kù)篩選出黃葵膠囊活性成分，依據(jù)Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)黃葵膠囊各活性成分靶點(diǎn);通過(guò)GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)和在線人類孟德?tīng)栠z傳數(shù)據(jù)庫(kù)（OMIM）檢索糖尿病腎病疾病相關(guān)靶點(diǎn)，利用韋恩圖獲取黃葵膠囊治療糖尿病腎病的關(guān)鍵靶點(diǎn)，通過(guò)R3.6.2軟件對(duì)靶蛋白進(jìn)行基因本體（GO）生物過(guò)程富集分析和京都基因和基因組百科全書（KEGG）通路富集分析。通過(guò)Cytoscape 3.7.2軟件構(gòu)建黃葵膠囊治療糖尿病腎病的“關(guān)鍵活性成分-重要靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)，最后利用AutoDock進(jìn)行分子對(duì)接，計(jì)算最低結(jié)合能。結(jié)果：黃葵膠囊治療糖尿病腎病的核心活性成分為4′，5，7，8-四甲氧基黃酮、槲皮素、沒(méi)食子酸、原兒茶酸等，核心靶點(diǎn)PIK3R1、PIK3CA、AKT1、SRC、ESR1等，活性成分與關(guān)鍵靶點(diǎn)分子對(duì)接的最低結(jié)合能均接近-5 kcal/mol。黃葵膠囊治療糖尿病腎病的作用機(jī)制可能與內(nèi)分泌抵抗、缺氧誘導(dǎo)因子-1（HIF-1）信號(hào)通路、表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）酪氨酸激酶抑制劑耐藥機(jī)制、雌激素信號(hào)通路等有關(guān)。結(jié)論：本研究初步驗(yàn)證黃葵膠囊可通過(guò)多成分、多靶點(diǎn)、多通路治療糖尿病腎病的作用，為黃葵膠囊的進(jìn)一步研究提供理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞 黃葵膠囊;糖尿病腎病;網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué);分子對(duì)接;活性成分;靶點(diǎn);信號(hào)通路;作用機(jī)制

Mechanism of Huangkui Capsules in the Treatment of Diabetic Nephropathy Based on Network Pharmacology and Molecular Docking

JIAO Yuanyuan1，2，F(xiàn)ANG Jinying2，3，ZHUO Li2，LI Wenge1，2

（1 Graduate School of Peking Union Medical College，Peking Union Medical College and Chinese Academy of Medical Sciences，Beijing 100730，China; 2 Department of Nephrology，China-Japan Friendship Hospital，Beijing 100029，China; 3 Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China）

AbstractObjective： To explore the mechanism of Huangkui Capsules in the treatment of diabetic nephropathy based on network pharmacology and molecular docking. Methods： The chemical components of Huangkui Capsules were collected from ChemSrc，Chinese medicine and chemical component database，PubChem，and available literature.The active ingredients of Huangkui Capsules were screened from Swiss ADME and the target genes of the active ingredients in Huangkui Capsules were predicted by Swiss Target Prediction.The genes associated with diabetic nephropathy were obtained from GeneCards and Online Mendelian Inheritance in Man（OMIM）.Venny2.1.0 was used to identify the key targets shared by Huangkui Capsules and diabetic nephropathy.R3.6.2 was used to perform gene ontology（GO） annotation and Kyoto Encyclopedia of Genes and Genome（KEGG） pathway enrichment for the key targets.Cytoscape 3.7.2 was employed to establish an “active ingredient-target-pathway” network for Huangkui Capsules in the prevention and treatment of diabetic nephropathy.Finally，AutoDock was used for molecular docking between active ingredients and key targets and calculating the lowest binding energy. Results： The major active ingredients of Huangkui Capsules in the treatment of diabetic nephropathy were 4′，5，7，8-tetramethoxyflavone，quercetin，gallic acid，and protocatechuic acid，and the key targets were PIK3R1，PIK3CA，AKT1，SRC，and ESR1.The lowest binding energy between the active ingredients and the key targets was close to -5 kcal/mol.Huangkui Capsules may treat diabetic nephropathy via endocrine resistance，epidermal growth factor receptor（EGFR） tyrosine kinase inhibitor resistance，hypoxia-inducible factor-1（HIF-1） signaling pathway，and estrogen signaling pathway. Conclusion： Huangkui Capsules can treat diabetic nephropathy through multiple ingredients，targets，and signaling pathways，which provides a theoretical basis for further research on Huangkui Capsules.13394B73-CB2C-4322-A0A1-5D8D25E41881

Keywords Huangkui Capsules; Diabetic nephropathy; Network pharmacology; Molecular docking; Active ingredient; Target; Signaling pathway; Mechanism

中圖分類號(hào)：R285;R289.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A ?doi： 10.3969/j.issn.1673-7202.2022.09.011

糖尿病腎?。―iabetic Nephropathy，DN）是糖尿病微血管病的主要并發(fā)癥之一，其患病率逐漸上升，目前已取代慢性腎小球腎炎，成為導(dǎo)致終末期腎病（End-stage Renal Disease，ESRD）的最主要病因[1-2]。受DN的臨床特點(diǎn)和病理學(xué)變化存在明顯差異的影響，DN的治療仍具有一定挑戰(zhàn)。目前改善全球腎臟病預(yù)后組織（Kidney Disease：Improving Global Outcomes，KDIGO）指南推薦治療DN的主要方法包括積極控制血糖，使用鈉-葡萄糖協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2（Sodium-glucose Linked Transporter-2，SGLT-2）抑制劑及腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（Renin-Angiotensin-Aldosterone System，RAAS）抑制劑等[3]。除此之外，研究表明單味中藥和中藥復(fù)方制劑可以降低DN患者蛋白尿，改善腎功能，延緩DN進(jìn)入ESRD時(shí)間[4]。黃葵膠囊（Huangkui Capsule，HKC）作為黃蜀葵花的提取物制劑，有清熱、利濕、解毒之效。研究表明，HKC具有抗炎、抗氧化、清除自由基、保護(hù)腎小管上皮細(xì)胞及抗纖維化等作用。臨床證實(shí)HKC夠顯著降低DN患者的蛋白尿，保護(hù)腎功能，其效果優(yōu)于單用RAAS阻滯劑類藥物[5]。但是，黃葵膠囊治療DN的作用機(jī)制尚不十分明確。本研究以黃葵膠囊為研究對(duì)象，應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的研究方法[6]，探究黃葵膠囊的活性成分和相關(guān)重要靶點(diǎn)，創(chuàng)建主要活性成分-靶點(diǎn)-通路的關(guān)系網(wǎng)絡(luò)，深入研究黃葵膠囊治療DN的作用機(jī)制，同時(shí)為后續(xù)研究提供理論參考。

1資料與方法

1.1黃葵膠囊活性成分及相關(guān)靶點(diǎn)篩選通過(guò)化源網(wǎng)、中藥與化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)等方式獲得黃葵膠囊主要活性成分，并結(jié)合文獻(xiàn)進(jìn)行補(bǔ)充。主要化合物的名稱和2D結(jié)構(gòu)通過(guò)檢索PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)獲得。同時(shí)將化合物的2D結(jié)構(gòu)上傳至Swiss ADME數(shù)據(jù)庫(kù)，并依據(jù)胃腸道吸收及類藥性（Drug Likeness，DL）進(jìn)行篩選。將篩選出符合ADME條件的化合物的2D結(jié)構(gòu)上傳至Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫(kù)，納入其中置信度>0的活性成分靶點(diǎn)，最后確定黃葵膠囊主要活性成分和靶點(diǎn)。

1.2DN疾病相關(guān)靶點(diǎn)篩選確定“diabetic nephropathy”為主題詞，搜索GeneCards（https：//www.genecards.org/）、在線人類孟德?tīng)栠z傳數(shù)據(jù)庫(kù)（Online Mendelian Inheritance in Man，OMIM）（https：//omim.org/）獲取DN相關(guān)靶點(diǎn)。通常GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)中，評(píng)分越高代表該靶點(diǎn)與疾病關(guān)聯(lián)越緊密。因此，當(dāng)靶點(diǎn)數(shù)目較多時(shí)可通過(guò)將評(píng)分大于中位數(shù)的相關(guān)靶點(diǎn)作為DN潛在靶點(diǎn)。利用韋恩圖將2個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)結(jié)果取并集得到DN靶點(diǎn)。通常設(shè)定數(shù)據(jù)庫(kù)中Score值大于中位數(shù)的靶點(diǎn)為DN潛在靶點(diǎn)，如靶點(diǎn)數(shù)目多可進(jìn)行2次或以上取中位數(shù)，通過(guò)GeneCards得到Score最大值190.56，最小值0.58，2次取中位數(shù)結(jié)果為9.02，故選擇Score大于9.02的靶點(diǎn)作為DN的重要靶點(diǎn)。利用OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)相關(guān)靶點(diǎn)進(jìn)一步補(bǔ)充。

1.3黃葵膠囊成分-DN靶點(diǎn)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建為明確黃葵膠囊藥物相關(guān)靶點(diǎn)與DN靶點(diǎn)之間的作用關(guān)系，通過(guò)Venny2.1.0網(wǎng)站（https：//bioinfogpcnb.csic.es/tools/venny/index.html）制作韋恩圖將二者靶點(diǎn)取交集。將共同靶基因錄入String數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//string-db.org/）創(chuàng)立蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（Protein-protein Interaction，PPI）網(wǎng)絡(luò)[7]，平臺(tái)物種選擇設(shè)置為“Homo sapiens”，互相作用最小閾值設(shè)置為“highest confidence”（>0.9），去除獨(dú)立基因，獲取PPI的關(guān)系，同時(shí)制作PPI網(wǎng)絡(luò)圖。得到的分析結(jié)果另存為tsv文件，運(yùn)用Cytoscape 3.7.2軟件中的NetworkAna1yzer插件對(duì)結(jié)果進(jìn)行參數(shù)分析。

1.4黃葵膠囊活性成分-DN靶點(diǎn)功能和通路富集分析功能富集分析主要是將列表中的基因或蛋白分成多個(gè)部分，即將獲得的基因按照功能或其他標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分類，把具有相似功能的基因放到一起，并將其與生物學(xué)表型關(guān)聯(lián)起來(lái)[8]。將獲得的疾病-藥物交集基因，通過(guò)R3.6.2軟件對(duì)交集基因進(jìn)行ID轉(zhuǎn)換及功能富集分析，包括基因本體（Gene Ontology，GO）富集分析及京都基因和基因組百科全書（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）通路富集分析，根據(jù) P <0.05并使用Bonferroni檢驗(yàn)法進(jìn)行校正，篩選出具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的生物過(guò)程和信號(hào)通路，并將結(jié)果運(yùn)用R3.6.2軟件可視化。

1.5黃葵膠囊活性成分-DN靶點(diǎn)-通路圖的建立 通過(guò)Cytoscape 3.7.2軟件，建立“藥物成分-關(guān)鍵靶點(diǎn)-通路”關(guān)聯(lián)圖，同時(shí)利用該軟件中的NetworkAna1yzer插件計(jì)算黃葵膠囊有效成分及關(guān)鍵靶點(diǎn)的連接度（Degree）及介度（Betweenness）等系統(tǒng)參數(shù)。最終根據(jù)NetworkAna1yzer計(jì)算結(jié)果總結(jié)出起主要治療作用的藥物活性成分及作用的核心靶點(diǎn)。13394B73-CB2C-4322-A0A1-5D8D25E41881

1.6分子對(duì)接驗(yàn)證 分子對(duì)接對(duì)象選取PPI網(wǎng)絡(luò)中連接度（Degree）值最大的5個(gè)靶點(diǎn)。分子對(duì)接是驗(yàn)證藥物活性成分和藥物作用靶點(diǎn)結(jié)合能力的重要方法。通過(guò)AutoDock軟件對(duì)黃葵膠囊核心化合物和度值排名前5的靶點(diǎn)進(jìn)行分子對(duì)接。將蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)庫(kù)（Protein Data Bank，PDB）（https：//www.rcsb.org/）下載的靶蛋白的三維結(jié)構(gòu)（PDB ID分別是5UBR、5M6U、4HXJ、1UNQ、1HCQ，pbd格式），通過(guò)PyMol對(duì)其進(jìn)行分離原配體和去水的操作后，繼續(xù)AutoDockTools軟件進(jìn)行蛋白加氫和計(jì)算電荷，結(jié)果保存為PDBQT格式的文件。將Pubchem數(shù)據(jù)庫(kù)中下載的主要活性成分三維結(jié)構(gòu)的sdf文件，利用OpenBabel將其全部置換成3D的MOL2格式文件。再次利用AutoDockTools對(duì)MOL2格式文件進(jìn)行同樣處理，結(jié)果保存為PDBQT格式文件并作為配體參與分子對(duì)接。通過(guò)AutoDock軟件完成黃葵膠囊核心化合物與重要靶點(diǎn)分子對(duì)接，最后通過(guò)GraphPad Prism 8.0.1將分子對(duì)接得到的結(jié)合能數(shù)值可視化。當(dāng)受體與配體分子對(duì)接中結(jié)合的構(gòu)象越穩(wěn)定時(shí)能量越低，發(fā)生作用的可能性越大。通常結(jié)合能≤-5.0 kcal/mol（1 cal=4.185 J）時(shí)，藥物活性成分與靶點(diǎn)具有較好的結(jié)合活性。

2結(jié)果

2.1黃葵膠囊活性成分篩選及靶點(diǎn)獲取共有6個(gè)活性成分符合條件，分別為4′，5，7，8-四甲氧基黃酮、槲皮素、煙酰胺、沒(méi)食子酸、原兒茶酸及尿嘧啶。共獲得116個(gè)成分靶點(diǎn)。

2.2DN靶點(diǎn)獲取對(duì)GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)和OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)相關(guān)DN進(jìn)行篩選以及并集共獲得1 055個(gè)DN疾病靶點(diǎn)。

2.3藥物活性成分-疾病靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建獲得黃葵膠囊-DN共同靶點(diǎn)50個(gè)。見(jiàn)圖1。排名前20黃葵膠囊和DN關(guān)鍵靶點(diǎn)信息見(jiàn)表1。PPI網(wǎng)絡(luò)中節(jié)點(diǎn)面積最大的靶點(diǎn)分別是PIK3CA和PIK3R1，其次為SRC1。見(jiàn)圖2。

2.4靶點(diǎn)功能與通路的富集結(jié)果顯示，黃葵膠囊參與的生物過(guò)程主要涉及氧化應(yīng)激反應(yīng)、氧代謝及細(xì)胞化學(xué)應(yīng)激反應(yīng)等。GO生物過(guò)程富集分析前20條富集基因通路見(jiàn)圖3。KEGG信號(hào)通路富集分析結(jié)果顯示參與的信號(hào)通路主要有內(nèi)分泌抵抗、EGFR酪氨酸激酶抑制劑耐藥機(jī)制、缺氧誘導(dǎo)因子-1（HIF-1）信號(hào)通路、磷脂酶D信號(hào)通路等。前20條富集基因通路見(jiàn)圖4，表2。

2.5藥物重要活性成分-DN靶點(diǎn)-通路圖的建立主要藥物重要活性成分-DN靶點(diǎn)見(jiàn)圖5。Cytoscape拓?fù)浞治鼋Y(jié)果顯示4′，5，7，8-四甲氧基黃酮連接度為23，介度0.22，緊密度0.58，其次為槲皮素連接度為20，介度0.15，緊密度0.55，預(yù)測(cè)4′，5，7，8-四甲氧基黃酮和槲皮素為黃葵膠囊治療DN主要成分。見(jiàn)表3。PIK3CA在網(wǎng)絡(luò)中的連接度為20，介度0.10，緊密度0.58，PIK3R1的連接度為20，介度0.10，緊密度0.57，預(yù)測(cè)PIK3CA和PIK3R1為黃葵膠囊治療DN的最主要靶點(diǎn)。SRC、AKT1、EGFR、IGF1R等亦為相對(duì)重要靶點(diǎn)。

2.6分子對(duì)接與黃葵膠囊的4個(gè)主要活性成分見(jiàn)圖6。主要活性成分4′，5，7，8-四甲氧基黃酮與4種度值（Degree）較高靶點(diǎn)蛋白結(jié)合能均接近-5.0 kcal/mol，槲皮素與SRC、AKT1結(jié)合能優(yōu)于沒(méi)食子酸及原兒茶酸但后二者結(jié)合能亦接近-5.0 kcal/mol。黃葵膠囊和靶點(diǎn)蛋白間具有較好的結(jié)合能力。4′，5，7，8-四甲氧基黃酮、槲皮素為黃葵膠囊治療DN主要成分，PIK3CA、SRC、AKT1為其可能作用的主要靶點(diǎn)蛋白。

3討論

DN發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，除常見(jiàn)高血壓、高糖、代謝異常、血流動(dòng)力學(xué)改變、免疫炎癥反應(yīng)以及氧化應(yīng)激外，非編碼RNA及纖維化亦共同作用導(dǎo)致DN的發(fā)生發(fā)展[9-10]。臨床治療除常規(guī)RAAS阻滯劑外，2020年改善全球腎臟病預(yù)后組織指南推薦SGLT2抑制劑作為DN治療的一線用藥，能夠預(yù)防或減少蛋白尿，改善腎小球高濾過(guò)等延緩DN進(jìn)展[11]，但并不適用于重度腎功能不全患者。臨床常規(guī)應(yīng)用黃葵膠囊治療DN，能一定程度降低蛋白尿，保護(hù)腎功能，改善患者臨床癥狀。

黃葵膠囊提取自單味中藥黃蜀葵花，醫(yī)書《嘉祐本草》提及，黃蜀葵花作為錦葵科秋葵屬植物黃蜀葵的花朵，具有清熱除濕、消腫解毒等作用。根據(jù)化源網(wǎng)結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道共收集到黃葵膠囊活性成分47種[12-13]，本研究通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法篩選出黃葵膠囊治療DN的活性成分為4′，5，7，8-四甲氧基黃酮、槲皮素、沒(méi)食子酸及原兒茶酸等。其中主要活性成分4′，5，7，8-四甲氧基黃酮和槲皮素均屬于黃酮類化合物。既往研究證實(shí)黃酮類化合物可通過(guò)抑制氧化應(yīng)激、改善免疫炎癥、調(diào)節(jié)腎間質(zhì)纖維化等多種途徑治療DN，能有效降低血糖、尿蛋白和提高腎小球?yàn)V過(guò)率[14-15]。槲皮素具有良好抗炎、抗氧化等作用。研究發(fā)現(xiàn)槲皮素可通過(guò)Hippo途徑抑制DN系膜細(xì)胞增殖，延緩DN進(jìn)展[16]，還可以通過(guò)減少轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β的表達(dá)，延緩腎間質(zhì)纖維化[17]。分子對(duì)接結(jié)果亦證實(shí)，4′，5，7，8-四甲氧基黃酮、槲皮素與主要靶點(diǎn)（PIK3CA、AKT1、SRC）的結(jié)合能力較強(qiáng)，因此黃葵膠囊可能主要通過(guò)4′，5，7，8-四甲氧基黃酮、槲皮素等治療DN。

本研究結(jié)果表明，黃葵膠囊治療DN的靶點(diǎn)主要集中在PIK3R1、PIK3CA，而AKT1、SRC亦為重要靶點(diǎn)。PIK3R1、PIK3CA均為磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）蛋白家族成員，分別是PI3K的調(diào)節(jié)亞基、催化亞基。通過(guò)上游通路激活PI3K，PI3K活化后引起AKT的結(jié)構(gòu)改變，而后者可經(jīng)磷酸化作用進(jìn)一步促進(jìn)或抑制下游的底物如凋亡蛋白的改變，進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞的增殖、凋亡等。在DN動(dòng)物模型中激活PI3K/AKT途徑可促進(jìn)系膜細(xì)胞增殖，加速DN進(jìn)展[18]，而下調(diào)PI3K/AKT通路可減輕足細(xì)胞凋亡，增加腎病蛋白表達(dá)[19]。13394B73-CB2C-4322-A0A1-5D8D25E41881

對(duì)黃葵膠囊治療DN的重要靶點(diǎn)進(jìn)行GO生物通路富集分析發(fā)現(xiàn)，關(guān)鍵靶點(diǎn)參與的生物過(guò)程包括：氧化應(yīng)激反應(yīng)、氧代謝、化學(xué)應(yīng)激與氧化應(yīng)激對(duì)細(xì)胞影響等。KEGG通路富集分析發(fā)現(xiàn)，黃葵膠囊對(duì)內(nèi)分泌抵抗、EGFR酪氨酸激酶抑制劑耐藥機(jī)制、HIF-1信號(hào)通路、雌激素信號(hào)通路、磷脂酶D信號(hào)通路等多條通路具有調(diào)控作用。HIF-1是迄今發(fā)現(xiàn)的唯一一個(gè)缺氧狀態(tài)下能特異性發(fā)揮活性的轉(zhuǎn)錄因子，由HIF-1α和HIF-1β 2個(gè)亞基組成，與微循環(huán)功能中的血管新生及炎癥反應(yīng)密切相關(guān)，可調(diào)節(jié)血管的生成，葡萄糖代謝及細(xì)胞的凋亡和自噬，HIF-1α表達(dá)增加可減輕糖尿病引起的腎臟結(jié)構(gòu)和功能的改變，從而改善腎缺氧和蛋白尿，保護(hù)腎功能，體外實(shí)驗(yàn)表明激活HIF-1有助于減少腎小球系膜細(xì)胞炎癥介質(zhì)（趨化因子2/單核細(xì)胞趨化蛋白-1）和巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)[20-21]。雌激素特別是17β-雌二醇是由ERα和ERβ 2個(gè)亞基組成的轉(zhuǎn)錄因子，具有抗氧化，抗凋亡和抗炎等作用，并促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖和血管生成，雌激素水平的升高有助于改善DN血管內(nèi)皮[22]。內(nèi)分泌抵抗和磷脂酶D與DN發(fā)病關(guān)系具體作用機(jī)制尚不清楚，仍須進(jìn)一步研究。

綜上所述，本研究通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法，初步探究了黃葵膠囊治療DN的藥理學(xué)機(jī)制。黃葵膠囊可能通過(guò)PIK3R1、PIK3CA、AKT1、SRC、ESR1等靶點(diǎn)作用于內(nèi)分泌抵抗、EGFR酪氨酸激酶抑制劑耐藥機(jī)制、HIF-1信號(hào)通路、雌激素信號(hào)通路等多條信號(hào)通路發(fā)揮作用，為黃葵膠囊治療DN的進(jìn)一步研究提供了理論依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1] Global，regional，and national burden of chronic kidney disease，1990-2017：a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2017[J].Lancet，2020，395（10225）：709-733.

[2]王美子，岳麗軍，萬(wàn)毅剛，等.葛根芩連湯加味方改善糖尿病腎病模型鼠足細(xì)胞焦亡和胰島素抵抗的作用和機(jī)制[J].中國(guó)中藥雜志，2021，46（17）：4471-4479.

[3]KDIGO 2020 Clinical Practice Guideline for Diabetes Management in Chronic Kidney Disease[J].Kidney Int，2020，98（4S）：S1-S115.

[4]Guo JC，Pan HC，Yeh BY，et al.Associations Between Using Chinese Herbal Medicine and Long-Term Outcome Among Pre-dialysis Diabetic Nephropathy Patients：A Retrospective Population-Based Cohort Study[J].Front Pharmacol，2021，12：616522.

[5]李雪俠，王鋒，陳剛，等.黃葵膠囊聯(lián)合纈沙坦治療臨床期糖尿病腎病的療效及機(jī)制[J].中國(guó)老年學(xué)雜志，2020，40（3）：495-497.

[6]世界中醫(yī)藥學(xué)會(huì)聯(lián)合會(huì).網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)評(píng)價(jià)方法指南[J].世界中醫(yī)藥，2021，16（4）：527-532.

[7]Snel B，Lehmann G，Bork P，et al.STRING：a web-server to retrieve and display the repeatedly occurring neighbourhood of a gene[J].Nucleic Acids Res，2000，28（18）：3442-3444.

[8]Boezio B，Audouze K，Ducrot P，et al.Network-based Approaches in Pharmacology[J].Mol Inform，2017，36（10）：1700048.

[9]Tang S，Yiu WH.Innate immunity in diabetic kidney disease[J].Nat Rev Nephrol，2020，16（4）：206-222.

[10] Gu YY，Lu FH，Huang XR，et al.Non-Coding RNAs as Biomarkers and Therapeutic Targets for Diabetic Kidney Disease[J].Front Pharmacol，2020，11：583528.

[11]Leslie BR，Gerwin LE.Canagliflozin and Renal Outcomes in Diabetic Nephropathy[J].N Engl J Med，2019，381（11）：1087-1088.

[12]黎晶晶，徐柏頤.黃蜀葵花黃酮類化合物的化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，45（7）：120-124.

[13]夏昆瑜，張春磊，曹征宇，等.黃蜀葵花的化學(xué)成分研究[J].海峽藥學(xué)，2019，31（9）：58-61.

[14]Caro-Ordieres T，Marín-Royo G，Opazo-Ríos L，et al.The Coming Age of Flavonoids in the Treatment of Diabetic Complications[J].J Clin Med，2020，9（2）：346.

[15]Vargas F，Romecín P，García-Guillén AI，et al.Flavonoids in Kidney Health and Disease[J].Front Physiol，2018，9：394.13394B73-CB2C-4322-A0A1-5D8D25E41881

[16]Lei D，Chengcheng L，Xuan Q，et al.Quercetin inhibited mesangial cell proliferation of early diabetic nephropathy through the Hippo pathway[J].Pharmacol Res，2019，146：104320.

[17]Cao Y，Hu J，Sui J，et al.Quercetin is able to alleviate TGF-β-induced fibrosis in renal tubular epithelial cells by suppressing miR-21[J].Exp Ther Med，2018，16（3）：2442-2448.

[18]Qian X，He L，Hao M，et al.YAP mediates the interaction between the Hippo and PI3K/Akt pathways in mesangial cell proliferation in diabetic nephropathy[J].Acta Diabetol，2021，58（1）：47-62.

[19]Zhang Y，Chen X，Yuan L，et al.Down-regulation of IRAK1 attenuates podocyte apoptosis in diabetic nephropathy through PI3K/Akt signaling pathway[J].Biochem Biophys Res Commun，2018，506（3）：529-535.

[20]Allison SJ.Diabetic nephropathy：HIF activation in prevention of diabetic nephropathy[J].Nat Rev Nephrol，2014，10（11）：612.

[21]Sugahara M，Tanaka S，Tanaka T，et al.Prolyl Hydroxylase Domain Inhibitor Protects against Metabolic Disorders and Associated Kidney Disease in Obese Type 2 Diabetic Mice[J].J Am Soc Nephrol，2020，31（3）：560-577.

[22]Maric-Bilkan C.Sex differences in micro-and macro-vascular complications of diabetes mellitus[J].Clin Sci（Lond），2017，131（9）：833-846.

（2021-05-27收稿本文編輯：王明）

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（81870495）;北京市自然科學(xué)基金項(xiàng)目（7202179）;中國(guó)健康促進(jìn)基金會(huì)（DKD-MBD，2018-2022）作者簡(jiǎn)介：焦圓圓（1990.01—），女，博士研究生在讀，研究方向：糖尿病腎病，E-mail：18801060951@126.com通信作者：李文歌（1966.12—），男，博士，教授，主任醫(yī)師，研究方向：慢性腎臟病臨床與科研，E-mail：wenge_lee2002@126.com13394B73-CB2C-4322-A0A1-5D8D25E41881