絞股藍(lán)皂苷對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的分子靶點(diǎn)及作用機(jī)制*

陳松， 劉云青， 張澤， 李豪， 謝振欣， 梁璽， 張俊， 孫見飛， 吳寧

(貴州醫(yī)科大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 化學(xué)與生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室， 貴州 貴陽 550025)

動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis, AS)是以動(dòng)脈內(nèi)膜形成粥糜樣斑塊為特征的慢性炎癥疾病，是動(dòng)脈硬化性心血管疾病最常見、最重要的病理類型[1]。AS主要累及冠狀動(dòng)脈、主動(dòng)脈等結(jié)構(gòu)，易造成器官梗死，已成為心血管意外事件的主要因素[2]。有研究表明，細(xì)胞凋亡不僅受其基因調(diào)控，在很大程度上還受到環(huán)境因素影響。血管內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞等AS相關(guān)細(xì)胞受各種理化因素影響而發(fā)生凋亡，其過程影響著粥樣斑塊的形成和穩(wěn)定性，是AS的始動(dòng)因素和關(guān)鍵環(huán)節(jié)[3]。中醫(yī)認(rèn)為，黃芪、水蛭、茯苓、絞股藍(lán)等中草藥材的活血、化淤、消積、降脂、通絡(luò)作用在防治動(dòng)脈粥樣性硬化斑塊形成、發(fā)展和脫落過程發(fā)揮獨(dú)特功效[4]。絞股藍(lán)為葫蘆科絞股藍(lán)屬植物，其有效成分由200余種絞股藍(lán)皂苷(gyrenosides, GPs)組成，具有調(diào)血脂、降血糖、抗氧化、抗凋亡等作用[5-7]。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是基于藥物生物信息學(xué)、分子生物學(xué)及各大數(shù)據(jù)庫信息，研究“藥物-基因-靶點(diǎn)-疾病”之間關(guān)系的一門交叉學(xué)科[8]；分子對(duì)接技術(shù)已成為作用機(jī)制預(yù)測(cè)和活性虛擬篩選的新興工具，通過此技術(shù)可明確配體、受體間相互作用，預(yù)測(cè)藥物機(jī)制，為新藥開發(fā)提供基礎(chǔ)。該技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于藥物發(fā)現(xiàn)、靶標(biāo)預(yù)測(cè)和機(jī)制研究等領(lǐng)域[9]。本研究利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)合體外試驗(yàn)與分子對(duì)接，探究GPs與AS之間的分子靶點(diǎn)與作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選用40只清潔級(jí)雄性SD(Sprague Dawley)大鼠，體質(zhì)量(210±10)g，由貴州醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心提供，合格證編號(hào)[SYXF(黔)2018-0001]。

1.1.2藥物 GPs粉末，純度≥98%(陜西中鑫生物有限公司)、辛伐他汀(每片5 mg, 海南海靈制藥廠有限公司)、高脂飼料(3%膽固醇、0.2%膽鹽、20%豬油、10%白糖及高蛋白飼料，重慶騰鑫公司)、維生素D3注射液(VitD3，海南海靈制藥廠有限公司)。

1.1.3主要試劑及儀器 一抗蛋白Bax(Cell Signaling Technology公司)、Bcl-2(Proteintech公司)、Caspase-3(Cell Signaling Technology公司)、彩虹蛋白Marker(北京索萊寶生物科技公司)、水平電泳槽DYY-Ⅲ 31D9(北京六一儀器廠)、Quanity One凝膠成像分析系統(tǒng)(美國(guó)BIO-RAD公司)。

1.2 研究方法

1.2.1絞股藍(lán)治療AS的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及生信分析 (1)絞股藍(lán)有效成分篩選及靶點(diǎn)獲取，在中藥系統(tǒng)藥理學(xué)分析平臺(tái) (traditional chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform,TCMSP,http://www.tcmspw.com/tcmsp.php)[10]中，參考藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，以口服利用度(OB)≥30%、類藥性(DL)≥0.18為標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行絞股藍(lán)有效成分篩選；在TCMSP數(shù)據(jù)庫及HERB本草組鑒數(shù)據(jù)庫(http://herb.ac.cn/)[11]中獲取絞股藍(lán)有效成分靶點(diǎn)，并在UniProt數(shù)據(jù)庫 (https://www.uniprot.org/)[12]對(duì)有效成分相關(guān)靶點(diǎn)進(jìn)行基因名的匹配及矯正;(2)AS差異基因篩選，從基因表達(dá)綜合數(shù)據(jù)庫(Gene expression omnibus database,GEO,https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/)[13]中獲取芯片GSE28829數(shù)據(jù)，對(duì)芯片表達(dá)矩陣進(jìn)行探針注釋及去除批次效應(yīng)后，按照樣本臨床信息對(duì)樣本進(jìn)行臨床信息注釋，分為早期動(dòng)脈粥樣硬化(early atherosclerotic,EAS)及晚期動(dòng)脈粥樣硬化(advanced atherosclerotic,AAS)組，使用RStudio 4.0.3中“l(fā)imma”包對(duì)其進(jìn)行差異分析，以P<0.05，|log(foldchange)|>log2(1.5)為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行差異基因篩選，并進(jìn)行可視化。

1.2.2“藥物靶點(diǎn)-疾病差異基因”關(guān)聯(lián)分析 將絞股藍(lán)有效成分靶點(diǎn)及AS差異基因交集獲得“藥物靶點(diǎn)-疾病差異基因”交集基因，并繪制Venn圖；將交集基因?qū)氲鞍谆プ骶W(wǎng)絡(luò)分析平臺(tái)(STRING, https://string-db.org/)[14]獲得靶點(diǎn)蛋白互作關(guān)系，并使用Cytoscape 3.8.0繪制PPI網(wǎng)絡(luò)；使用RStudio 4.0.3中"clusterProfiler"包對(duì)上述交集基因進(jìn)行GO富集分析。

1.2.3GPs成分靶點(diǎn)匹配 在絞股藍(lán)有效成分中提取GPs成分及對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)，將GPs成分靶點(diǎn)與“藥物靶點(diǎn)-疾病差異基因”交集基因進(jìn)行匹配，進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。

1.2.4造模分組及給藥干預(yù) 40只SD大鼠隨機(jī)均分為空白組、模型組、絞股藍(lán)組、辛伐他汀組，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，將模型組、絞股藍(lán)組、辛伐他汀組中每只大鼠1次腹腔注射VitD3(60萬IU/kg)，從第2周開始每2周注射1次VitD3(30萬IU/kg)，均按照2 mL/kg給予高脂飼料(3%膽固醇、0.2%膽鹽、20%豬油、10%白糖及高蛋白飼料)喂養(yǎng)；空白組大鼠腹腔注射相等量的生理鹽水，給予普通飼料喂養(yǎng)。絞股藍(lán)組給予GPs160 mg/(kg·d)，辛伐他汀組5 mg/(kg·d)進(jìn)行灌胃給藥處理，空白組與模型組給予生理鹽水10 mL/(kg·d)，連續(xù)喂養(yǎng)12周。末次灌胃給藥2 h后，隨機(jī)處死4只大鼠。取出大鼠主動(dòng)脈，制作切片、HE染色，觀察大鼠主動(dòng)脈根部AS程度，確定造模成功。

1.2.5取材 各組大鼠喂養(yǎng)12周、最后一次灌胃給藥后2 h時(shí)麻醉處死大鼠，取出主動(dòng)脈分段放入凍存管于液氮(-183 ℃)中迅速冷凍，后轉(zhuǎn)入-80 ℃冰箱保存待檢測(cè)。

1.2.6主動(dòng)脈HE染色病理切片 將分離的主動(dòng)脈弓并剪取0.5 cm，生理鹽水洗凈血跡后放入10%中性甲醛溶液固定，之后進(jìn)行石蠟包埋，間斷切片厚5 μm 、HE染色，在光鏡下觀察主動(dòng)脈根部組織及斑塊形態(tài)。

1.2.7Western blot檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3表達(dá) 取出凍存的動(dòng)脈組織，按組織凈重與RIRA裂解液1 ∶10加入PSMF蛋白提取劑，于冰上研磨成勻漿后離心-80 ℃?zhèn)溆谩Ｓ肳setern blot法檢測(cè)蛋白并定量，每個(gè)電泳孔上樣20 μg蛋白，經(jīng)10%聚丙烯胺凝膠電泳分離蛋白，并通過轉(zhuǎn)膜電泳將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜。用5%脫脂奶粉室溫封閉2 h，一抗室溫?fù)u床孵育1 h后轉(zhuǎn)4 ℃冰箱過夜孵育。經(jīng)1×TBST洗滌3次，每次10 min。二抗室溫?fù)u床孵育2 h、重復(fù)洗滌。經(jīng)ECL顯色液澆淋后曝光顯色。利用Imasge J軟件測(cè)定目的蛋白和內(nèi)參蛋白β-actin條帶灰度值，并用目的蛋白灰度值/內(nèi)參灰度值的比值表示該目的蛋白表達(dá)水平。

1.2.8GPs及Bcl-2、Bax、Caspase-3凋亡蛋白的分子對(duì)接 通過文獻(xiàn)查閱及絞股藍(lán)有效成分篩選，共選定5種絞股藍(lán)皂苷Gypenoside XXXV_qt、Gypentonoside A_qt、Gypenoside XXVIII_qt、Gypenoside XXVII_qt、Gypenoside XXXVI_qt，將Bcl-2、Bax、Caspase-3與上述活性成分進(jìn)行分子對(duì)接。從 TCMSP 數(shù)據(jù)庫中分別獲取以上5種GPs單體的活性成分。從 PDB 數(shù)據(jù)庫(http://www.rcsb.org/pdb/)中獲取Bcl-2、Caspase-3、Bax分子信息，用 Autodock 軟件對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行去水、加氫、電荷計(jì)算等預(yù)處理，同時(shí)使用Docking輸出為Vina Config的txt文件格式。使用記事本打開該txt文件調(diào)整參數(shù)后，利用Vina軟件直接處理txt文件。以導(dǎo)出的 affinity 為打分函數(shù)的結(jié)果并用pymol進(jìn)行蛋白質(zhì)和配體可視化分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 絞股藍(lán)有效成分及靶點(diǎn)篩選

在TCMSP數(shù)據(jù)庫中，按照藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，以口服利用度(OB)≥30%、類藥性(DL)≥0.18為標(biāo)準(zhǔn)，共篩選獲得絞股藍(lán)有效成分24種(表1)。在TCMSP數(shù)據(jù)庫及HERB數(shù)據(jù)庫種檢索以上24種有效成分的相關(guān)靶點(diǎn)，并在 UniProt數(shù)據(jù)庫對(duì)有效成分相關(guān)靶點(diǎn)進(jìn)行基因名的匹配矯正，共獲得有效成分靶點(diǎn)152個(gè)。

表1 絞股藍(lán)有效成分表Tab.1 Effective ingredients of Gynostemma

2.2 EAS及AAS差異基因篩選

使用RStudio 4.0.3中“l(fā)imma”包對(duì)芯片數(shù)據(jù)中EAS及AAS組進(jìn)行差異分析，以P<0.05，|log(foldchange)|>log2(1.5)為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行差異基因篩選，共獲得差異基因646個(gè)，其中438個(gè)基因上調(diào)，208個(gè)基因下調(diào)，按照P值降序排列，表2展示了分別位于上調(diào)下調(diào)基因中前10位的20個(gè)基因，并將部分標(biāo)記在火山圖中(圖1)。

表2 EAS和AAS差異表達(dá)基因(Top10)Tab.2 DEGs in EAS and AAS(Top10)

圖1 EAS和AAS差異表達(dá)基因火山圖Fig.1 Volcano plot showing DEGs in EAS and AAS

2.3 “絞股藍(lán)-動(dòng)脈粥樣硬化差異基因”關(guān)聯(lián)分析

將絞股藍(lán)有效成分靶點(diǎn)與動(dòng)脈粥樣硬化差異表達(dá)基因取交集(圖2A)，共獲得交集基因16個(gè)，分別為VEGFA、BCL2、PLAU、MMP9、NFKBIA、ODC1、ICAM1、VCAM1、HSPB1、PLAT、NCF1、SPP1、CTSD、IRF1、PCOLCE、HK2，提取上述交集基因并表達(dá)矩陣?yán)L制表達(dá)矩陣熱圖(圖2B)。通過STRING數(shù)據(jù)庫獲取交集基因連接關(guān)系，并使用Cytoscape 3.8.0繪制蛋白互作PPI網(wǎng)絡(luò)(圖2C)，位于互作網(wǎng)絡(luò)前5位的核心基因?yàn)镮CAM1、MMP9、NFKBIA、PLAU、VCAM1、VEGFA。GO富集分析分別從生物過程(Biological Process，BP)、細(xì)胞組分(Cellular Component，CC)、分子功能(Molecular Function，MF)3個(gè)角度對(duì)交集基因進(jìn)行功能注釋，“絞股藍(lán)-動(dòng)脈粥樣硬化差異基因”交集基因主要富集在乏氧、氧化、細(xì)胞基質(zhì)黏附、凋亡負(fù)向調(diào)節(jié)等生物過程(圖2D)。

注：A為絞股藍(lán)有效成分靶點(diǎn)與動(dòng)脈粥樣硬化差異表達(dá)基因交集Venn圖，B為交集基因表達(dá)矩陣熱圖，C為交集基因蛋白互作PPI網(wǎng)絡(luò)圖，D為交集基因GO生物過程富集分析氣泡圖。圖2 絞股藍(lán)-AS差異基因關(guān)聯(lián)分析Fig.2 Bioinformatics analysis of Gynostemma-AS DEGs

2.4 GPs靶點(diǎn)匹配

從TCMSP篩選獲得的絞股藍(lán)24種有效成分中，共含有11種皂苷成分，分別為Gypenoside XXXVI_qt、Gypenoside LXXIX、Gypenoside XXXV_qt、Gypenoside XII、ginsenoside f2、Gypentonoside A_qt、Gypenoside XXXII、Gypenoside LXXIV、Gypenoside XXVIII_qt、Gypenoside XL、Gypenoside XXVII_qt，將該11種GPs成分的靶點(diǎn)合并去重后，共獲得靶點(diǎn)8個(gè)NR3C1、AR、BCL2、CCNB1、STAT3、ESR1、NR3C2、NCOA2，其中BCL2為“絞股藍(lán)-AS差異基因”交集基因中的靶點(diǎn)，使用GPs對(duì)該靶點(diǎn)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。

2.5 大鼠主動(dòng)脈弓組織學(xué)觀察

光鏡下觀察大鼠主動(dòng)脈弓HE染色切片(400×)，可見空白組大鼠內(nèi)膜光滑完整，平滑肌層排列整齊，未見明顯纖維斑塊、膽固醇結(jié)晶及粥樣斑塊形成(圖3A)；模型組動(dòng)脈內(nèi)膜不平整且增厚，可見泡沫細(xì)胞及膽固醇結(jié)晶，血管平滑肌增生且排列紊亂輕微(圖3B)；通過辛伐他汀或GPs處理干預(yù)后的大鼠，可見其病理改變較模型組有不同程度的減輕；辛伐他汀組大鼠主動(dòng)脈內(nèi)膜較為完整、增厚，血管平滑肌排列較為整齊(圖3C)；絞股藍(lán)組可見內(nèi)膜較完整，輕度增生，內(nèi)膜下少量膽固醇結(jié)晶，血管平滑肌排列較整齊(圖3D)。

圖3 各組大鼠主動(dòng)脈弓組織學(xué)變化(HE，×400)Fig.3 Histological changes of rat aortic arches in each group (HE，×400)

2.6 大鼠血管中Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白表達(dá)水平

采用Western blot法檢測(cè)各組大鼠血管中上述3種蛋白的表達(dá)量。結(jié)果顯示(圖4)，與空白組相比較，模型組血管Bax、Caspase-3表達(dá)水平增高 (P<0.05)、Bcl-2降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組比較，絞股藍(lán)組Bax表達(dá)下調(diào)(P<0.05)、Bcl-2表達(dá)上調(diào)(P<0.05)，Bcl-2/Bax表達(dá)比值升高，Caspase-3表達(dá)下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

注：(1)與模型組相比，P<0.05；(2)與空白組相比，P<0.05。圖4 各組大鼠血管中Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白表達(dá)水平比較Fig.4 Protein expression levels of Bcl-2, Bax, and Caspase-3 in rat blood vessels in each group

2.7 分子對(duì)接

Bcl-2、Bax、Caspase-3是AS發(fā)生發(fā)展中調(diào)控細(xì)胞凋亡的重要靶點(diǎn)，通過文獻(xiàn)及有效成分篩選，本文擬定對(duì)接絞股藍(lán)單體分子5個(gè)，分別為Gypenoside XXXV_qt、Gypentonoside A_qt、Gypenoside XXVIII_qt、Gypenoside XXVII_qt、Gypenoside XXXVI_qt，將其與上述3個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行對(duì)接，認(rèn)為結(jié)合能小于-8 kcal/mol的配體-受體具有良好親和性。結(jié)果顯示，以上5個(gè)單體分子與3個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)均顯示出良好的親和性(表3)；其中Gypenoside

表3 絞股藍(lán)單體與作用靶點(diǎn)分子對(duì)接的結(jié)果Tab.3 The result of Gypenoside monomer docking with the action target molecule

XXXV_qt對(duì)3個(gè)靶點(diǎn)的親和性相較于其他單體而言更高，Gypenoside XXXV_qt與Bax對(duì)接結(jié)合能為-8.6 kcal/mol、與Bcl-2對(duì)接結(jié)合能為-9.8 kcal/mol、與Caspase-3對(duì)接結(jié)合能為-8.0 kcal/mol，提示Gypenoside XXXV_qt可能在抗細(xì)胞凋亡中發(fā)揮了重要作用。將Gypenoside XXXV_qt對(duì)接結(jié)果進(jìn)行可視化展示。見圖5。

注：A、B、C依次為Bcl-2、Bax、Caspase-3對(duì)接結(jié)果。圖5 Gypenoside XXXV_qt對(duì)接結(jié)果三維結(jié)構(gòu)模式Fig.5 Simulation diagram illustrating Gypenoside XXXV_qt docking with its target

3 討論

在本研究中，基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及芯片數(shù)據(jù)挖掘，探討了絞股藍(lán)中部分GPs有效對(duì)于預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)鍵靶標(biāo)及作用機(jī)制。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)能從分子水平對(duì)藥物、疾病、基因進(jìn)行系統(tǒng)關(guān)聯(lián)，預(yù)測(cè)藥物靶標(biāo)?；蛐酒臄?shù)據(jù)挖掘可以從特定角度找到疾病發(fā)生發(fā)展中基因的差異變化。通過以上兩種技術(shù)對(duì)絞股藍(lán)進(jìn)行靶點(diǎn)預(yù)測(cè)，能夠更加科學(xué)有效地篩選出藥物核心成分，有助于進(jìn)一步的科學(xué)研究及臨床應(yīng)用。

絞股藍(lán)常被人們制作為茶類飲品用于預(yù)防心血管疾病與糖尿病，GPs則是絞股藍(lán)中的重要提取物，有抗氧化應(yīng)激、降血糖、抗腫瘤、調(diào)節(jié)血脂等功效[15]。有研究表明，GPs能顯著降低血清中三酰甘油、總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇水平，調(diào)節(jié)膽固醇合成限速酶HMGGCR，提高高密度脂蛋白膽固醇水平[16]。此外，GPs可以在體內(nèi)上調(diào)超氧化物歧化酶的表達(dá)并且降低丙二醛、活性氧的水平，起到抗氧化應(yīng)激的作用[17]。

本研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及GEO芯片挖掘得到，絞股藍(lán)與EAS及AAS樣本差異基因交集基因16個(gè)，其中在BCL2、ODC1、HSPB1在EAS樣本中相較于AAS表達(dá)量上調(diào)。BCL-2蛋白家族是在細(xì)胞凋亡內(nèi)源性途徑中發(fā)揮關(guān)鍵作用，BCL2編碼的Bcl-2蛋白為抗細(xì)胞凋亡的重要蛋白，而由BAX編碼的Bax蛋白具有其拮抗作用，在正常細(xì)胞中Bax蛋白以非活性形式穿梭于細(xì)胞質(zhì)與線粒體之間，在誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡時(shí)，該蛋白聚集并插入線粒體膜中，形成孔狀結(jié)構(gòu)，釋放促細(xì)胞凋亡因子[18]。ODC1編碼的蛋白為一類鳥氨酸脫羧酶，是合成多胺途徑中的限速酶，負(fù)責(zé)鳥氨酸脫羧形成腐胺，ODC1常在腫瘤中表達(dá)升高[19]，鳥氨酸脫羧酶依賴的腐胺形成，可能促進(jìn)巨噬細(xì)胞對(duì)凋亡細(xì)胞的清除，有助于炎癥緩解[20]。HSPB1也稱為Hsp27，該基因編碼小熱休克蛋白蛋白家族的成員，小熱休克蛋白Hsp27是由各種應(yīng)激因素誘導(dǎo)的多功能蛋白，參與細(xì)胞凋亡和自噬的調(diào)節(jié)，且具有抗動(dòng)脈粥樣硬化作用[21-22]。對(duì)上述16個(gè)交集基因進(jìn)行GO富集分析時(shí)發(fā)現(xiàn)，交集基因主要富集在乏氧、氧化、細(xì)胞基質(zhì)黏附、凋亡負(fù)向調(diào)節(jié)等生物過程。且發(fā)現(xiàn)絞股藍(lán)中皂苷有效成分治療動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)鍵靶點(diǎn)為BCL2。后續(xù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果也表明，在GPs治療動(dòng)脈粥樣硬化過程中，可能通過調(diào)控細(xì)胞凋亡從而緩解動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)程。

細(xì)胞凋亡是一種程序性細(xì)胞死亡形式，對(duì)機(jī)體的內(nèi)環(huán)境平衡及生長(zhǎng)發(fā)育有著重要影響。在AS的發(fā)生發(fā)展過程中，平滑肌細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞均參與其中。動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定性極大程度取決于斑塊纖維帽的厚度及浸潤(rùn)情況，平滑肌細(xì)胞凋亡及膠原分解可能導(dǎo)致纖維斑塊變薄，增加破裂風(fēng)險(xiǎn)[23]。巨噬細(xì)胞凋亡在病變?cè)缙诰哂斜Ｗo(hù)作用，在疾病進(jìn)展至晚期，巨噬細(xì)胞凋亡可能導(dǎo)致清除凋亡細(xì)胞能力不足，從而促進(jìn)炎癥浸潤(rùn)及發(fā)展[24]。內(nèi)皮細(xì)胞常被認(rèn)為是AS的始動(dòng)因素，內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)于維持血管張力、細(xì)胞粘附、抗血小板聚集等正常血管生理功能具有重要作用，當(dāng)內(nèi)皮過度細(xì)胞凋亡，會(huì)損壞該血管屏障，且會(huì)釋放一些膜結(jié)合的細(xì)胞外囊泡，從而對(duì)AS發(fā)生發(fā)展產(chǎn)生一定影響[25]。

綜上所述，本研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)篩選出GPs與AS相關(guān)靶點(diǎn)BCL2，并通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證GPs可能通過影響細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)從而干預(yù)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展，同時(shí)利用分子對(duì)接技術(shù)，預(yù)測(cè)篩選出GPs中最可能影響細(xì)胞凋亡的核心成分，結(jié)果提示Gypenoside XXXV可能作為GPs影響AS細(xì)胞凋亡進(jìn)展中的關(guān)鍵分子。但本研究對(duì)于GPs通過細(xì)胞凋亡干預(yù)AS的具體探究其作用機(jī)制方面有所欠缺，仍有待進(jìn)一步研究。