新疆小枝玫瑰醇提物對脂肪酸誘導的HepG2細胞脂質(zhì)蓄積的改善作用

候欣啟，王秋雨，陳立格,3，馬紅梅*，蘭衛(wèi)*

（1.新疆醫(yī)科大學中醫(yī)學院,新疆烏魯木齊 830017）（2.新疆醫(yī)科大學藥學院,新疆烏魯木齊 830017） （3.江蘇省鹽城市第一人民醫(yī)院，江蘇鹽城 224000）

隨著經(jīng)濟和生活水平逐年提高，國人的生活方式、飲食結(jié)構(gòu)和運動狀況也在發(fā)生重大變化。這些年來，我國代謝性疾病的患病率居高不下，非酒精性脂肪性肝?。╪on-alcohol fatty liver disease，NAFLD）、高脂血癥（hyperlipidemia，HLP）、糖尿病、代謝綜合征、肥胖癥等占比持續(xù)增加。中國已經(jīng)成為是世界上NAFLD人數(shù)最多的國家，患病率為29.2%，NAFLD干預治療和藥物研發(fā)工作緊急而重要[1]。NAFLD是一種與胰島素抵抗相關(guān)的代謝應激性肝損傷的疾病，它也是糖尿病和心血管等疾病進程的危險因素之一，嚴重危害公眾健康[2-5]。高脂血癥是人體內(nèi)脂代謝及轉(zhuǎn)運異常導致血清中脂質(zhì)水平異常的一種代謝性疾病，是NALFD和心血管疾病等的重要致病因素[6,7]。截止目前，市面上還未出現(xiàn)針對NALFD的藥物，患病群體之龐大和臨床需求之迫切使得NAFLD的藥物研發(fā)成為熱點[8]。對于改善人體血脂水平或者改善肝臟脂變性等，臨床上常用他汀類藥物進行干預，他汀類藥物可引起橫紋肌溶解或增加糖尿病患病風險，因此開發(fā)具有降血脂功能的療效安全可靠的天然藥物顯得十分必要[9]。

新疆小枝玫瑰（Branchlets Rosa rugosaThunb.）是紫紅花重瓣玫瑰（Rosa rugoeaThunb.）的亞種玫瑰。新疆小枝玫瑰主要分布在新疆和田地區(qū)，因其光照充沛，無霜期長，生長于沙漠邊緣等地理環(huán)境，故玫瑰精油產(chǎn)量和品質(zhì)均優(yōu)于其他玫瑰，被譽為“液體黃金”[10,11]。新疆小枝玫瑰屬國家藥典收載品種[12]，其制劑玫瑰花口服液、玫瑰花糖膏已作為單方制劑收載于《國家衛(wèi)生部藥品標準（維吾爾藥分冊）》。小枝玫瑰是玫瑰花其中一種的分支，系藥食兩用植物，其味甘，性溫，具有疏肝解郁，活血化瘀調(diào)經(jīng)之功效[13]。在新疆南部，小枝玫瑰花在民間常常作為餐桌上各類食材的配料，它們被制作為玫瑰花茶、玫瑰花馕、玫瑰花醬、各類民族風味甜品的餡料等。新疆小枝玫瑰的活性成分有總黃酮、多糖、多酚和揮發(fā)性成分等[14]。課題組前期研究表明[15-19]，小枝玫瑰提取物具有很好的降血脂、降血糖和抗氧化作用，實驗結(jié)果顯示，小枝玫瑰醇提物、水提物、總多酚等均可顯著改善高脂血癥大鼠的肝臟脂肪變性和血清脂質(zhì)生化指標。新疆小枝玫瑰具有降低高脂血癥大鼠血脂作用，但具體降脂機制不明確，且尚未開展體外細胞層面的機制研究。本實驗以新疆小枝玫瑰醇提物為對象，通過建立HepG2細胞體外脂肪酸負荷模型，研究小枝玫瑰醇提物對細胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積的影響，完善小枝玫瑰醇提物對脂質(zhì)代謝影響研究的基本數(shù)據(jù)，為開發(fā)新疆小枝玫瑰作為治療NALFD、高脂血癥等相關(guān)疾病的藥物提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

小枝玫瑰醇提物（依照前期課題研究[20]，小枝玫瑰總黃酮提取工藝：50%乙醇，料液比1:16，采用紫外分光光度法測定總黃酮純度為29.02%。課題組成員對小枝玫瑰醇提物進行液質(zhì)聯(lián)用分析，其主要成分為二水槲皮素、木犀草素、鞣花酸、黃酮沒食子酸、沒食子酸等18種化學成分）；HepG2細胞系，上海細胞庫；DMEM高糖培養(yǎng)基、胎牛血清（FBS）、雙抗（青霉素-鏈霉素溶液）、0.25%胰蛋白酶溶液，美國Gibco公司；二甲基亞砜（DMSO）、噻唑蘭（MTT）、油紅O染液、油酸（OA）、棕櫚酸（PA），美國Sigma公司；25 cm2細胞培養(yǎng)瓶、96孔板和6孔板，美國Corning公司；牛血清蛋白（BSA），Biofroxx公司；磷酸鹽緩沖液（PBS），美國Hyclone公司；甘油三酯（TG）檢測試劑盒，中生北控公司；非諾貝特膠囊，法國利博福尼制藥公司；ACOX1多克隆兔抗體、CPT1A多克隆兔抗體，北京博奧森生物技術(shù)有限公司；PPARα單克隆鼠抗體，武漢三鷹生物技術(shù)有限公司；GAPDH多克隆抗體，Affinity生物科學公司。

1.2 主要儀器設(shè)備

MultiskanGo酶標儀、PowerPacTMHC電泳儀、BIO-RAD蛋白顯色儀（ChemiDOC MP全自動成像系統(tǒng)），美國Bio-Rad公司；SW-CJ-2F超凈工作臺，美國Airtech公司；371型直熱式CO2恒溫培養(yǎng)箱，美國Thermo scientific；5424R低溫高速離心機，德國Eppendorf公司；IX73熒光倒置顯微鏡，日本Olympus公司；IMS-300制冰機，美國Scotsman公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 細胞培養(yǎng)[21]

取HepG2細胞用含1%青霉素-鏈霉素溶液，10%胎牛血清的DMEM完全培養(yǎng)基接種于25 cm2無菌培養(yǎng)瓶中，在5% CO2培養(yǎng)箱中，37 ℃飽和濕度培養(yǎng)，熒光倒置顯微鏡下觀察細胞密度。細胞正常生長后，可繼續(xù)實驗。

1.3.2 HepG2細胞體外脂肪酸負荷模型的建立

1.3.2.1 FFAs造模液對HepG2細胞活力的影響

參考文獻方法[22]，按油酸:棕櫚酸=2:1的比例進行混合，即可將其制成2.0、1.5、1.0、0.5、0.25 mmol/L的脂肪酸造模液。取HepG2細胞接種至96孔板培養(yǎng)24 h，設(shè)立空白組、對照組、不同濃度FFAs（0.25、0.5、1.0、1.5、2.0 mmol/L）誘導細胞，每組設(shè)立6個復孔，干預24 h后，每孔分別加入10 μL MTT溶液，孵育4 h，加250 μL的DMSO溶解，用酶標儀測定490 nm波長處的OD值，確定脂肪酸造模液對HepG2細胞活力的影響[23]。

1.3.3.2 油紅O染色確定脂肪酸造模濃度及細胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積情況

參照油紅O染液說明書，按體積比油紅O染液:蒸餾水＝3:2配制工作液，避光操作，雙層中性濾紙過濾，即得。細胞在6孔板培養(yǎng)24 h后，分別加入不同濃度FFAs（0、0.25、0.5、1.0、1.5、2.0 mmol/L）誘導細胞，37 ℃培養(yǎng)箱孵育24 h，加入組織細胞專用固定液固定細胞，PBS洗2次，油紅O孵育30 min，PBS洗2次，60%異丙醇脫色，PBS洗2次，鏡下觀察細胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積情況，拍片記錄[24]。參照1.3.3.1的安全濃度，同時結(jié)合各組油紅O染色結(jié)果，確定脂肪酸最佳造模濃度。

1.3.3 確定小枝玫瑰醇提物的安全濃度[23]

HepG2細胞培養(yǎng)24 h（96孔板，接種密度為5×104cells/mL），設(shè)立空白對照組、小枝玫瑰醇提物組（稀釋儲備液至50、100、200、400、600、800 μg/mL），加入不同處理組樣品，繼續(xù)培養(yǎng)24 h后，每孔加入10 μL MTT溶液，培養(yǎng)4 h，棄上清，加DMSO 100 μL，酶標儀測定490 nm波長的OD值，計算細胞存活率，確定小枝玫瑰醇提物的安全濃度。

1.3.4 小枝玫瑰醇提物清除HepG2細胞脂肪堆積實驗[25]

1.3.4.1 油紅O染色及細胞內(nèi)脂質(zhì)含量的測定

HepG2細胞接種到24孔板培養(yǎng)24 h，設(shè)立空白對照組（DMEM完全培養(yǎng)基）、模型組（1.5 mmol/L FFA）、非諾貝特組（1.5 mmol/L FFA+100 μmol/L非諾貝特）、小枝玫瑰醇提物組（1.5 mmol/L FFA+50 μg/mL，1.5 mmol/L FFA+100 μg/mL，1.5 mmol/L FFA+200 μg/mL），每組設(shè)立4個復孔，干預24 h，然后按1.3.3.2方法進行油紅O染色，鏡下觀察脂滴大小及數(shù)量，拍片記錄。

按上述方法處理后，加60%異丙醇脫色，PBS清洗，用100%異丙醇溶解，490 nm處測得吸光度值。

1.3.4.2 細胞內(nèi)TG含量測定

將HepG2細胞接種到培養(yǎng)瓶中，37 ℃，5% CO2培養(yǎng)24 h，按上步方法分組并加入不同濃度藥物干預24 h后，常規(guī)細胞消化步驟操作，離心后得細胞沉淀，棄上清，加細胞裂解液（RIPA:PMSF=100:1），用TG試劑盒方法測定細胞內(nèi)TG的含量。

1.3.5 Western Blot檢測各組PPARα、ACOX1、CPT1A蛋白的表達

參考BCA蛋白定量試劑盒方法測定蛋白濃度[26]。根據(jù)10% SDS-PAGE凝膠快速制備試劑盒說明書制膠，等量蛋白樣品（上樣量統(tǒng)一為10 μL），電泳結(jié)束后，電轉(zhuǎn)至PVDF膜上。5%脫脂奶粉封閉，一抗孵育過夜。二抗室溫孵育50 min，電化學發(fā)光（ECL）顯色拍照，GAPDH為內(nèi)參。

1.4 統(tǒng)計學處理

利用SPSS 25.0軟件對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。數(shù)值以ˉx±S表示，多組間比較采用單因素方差分析和LSD法統(tǒng)計。p<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果與討論

2.1 小枝玫瑰醇提物對HepG2細胞存活率的影響

以小枝玫瑰醇提物為研究對象，評價在24 h內(nèi)，小枝玫瑰醇提物（0、50、100、200、400、600、800 μmol/L）對HepG2細胞活性的影響，結(jié)果如圖1所示。不同濃度的小枝玫瑰醇提物處理HepG2細胞24 h后，與正常組細胞相比較，當干預濃度小于等于200 μmol/L時，細胞存活率高于95%，保持著良好的生長活性；但當干預濃度為400、600 μmol/L和800 μmol/L時，與空白對照組相比，HepG2細胞存活率顯著下降（p<0.01），細胞存活率已低于70%。本實驗中為了避開小枝玫瑰醇提物本身對細胞造成抑制作用，后續(xù)藥物干預實驗采用的梯度濃度為（50、100、200 μmol/L）。

2.2 FFAs誘導HepG2細胞建立體外脂肪酸負荷模型

2.2.1 不同濃度FFAs對HepG2細胞活性的影響

采用飽和或者不飽和FFAs孵育細胞建立脂肪堆積模型（脂肪酸負荷模型）是目前NAFLD的體外研究普遍采用的方法，以HepG2細胞最為常見。如圖2所示，本實驗借助MTT法考察FFAs在24 h內(nèi)對HepG2細胞存活率的影響，分別設(shè)置濃度為0、0.25、0.5、1.0、1.5、2.0 mmol/L。實驗結(jié)果顯示隨著FFAs濃度的增大，HepG2細胞存活率逐漸加大，直到1.5 mmol/L時細胞的存活率仍處于90%以上，細胞活性良好；而當達到2.0 mmol/L時，與空白對照組相比細胞存活率大大降低（p<0.01）。因此FFAs的造模的安全濃度小于等于1.5 mmol/L，最終造模的濃度的選擇還需結(jié)合參考不同濃度FFAs誘導HepG2細胞的油紅O染色結(jié)果。

關(guān)于HepG2細胞用FFAs造體外脂肪酸負荷模型，不同的文獻[27-29]中造模濃度（0.5、1.0、1.5 mmol/L）不盡相同，為了保證本次實驗結(jié)果的準確可靠，對FFAs的濃度進行考察，并得到安全濃度范圍（0～1.5 mmol/L）。

2.2.2 不同濃度FFAs干預HepG2細胞后脂滴形成情況

如圖3所示，正常組（圖3a）HepG2細胞大多呈短梭形或菱形，結(jié)構(gòu)完整，形態(tài)規(guī)則，分布均勻，生長狀態(tài)良好，胞漿內(nèi)無明顯脂滴，邊界清晰。FFAs誘導的各組細胞，隨著FFAs濃度的增加，有不同程度的脂變性，倒置顯微鏡下觀察可見各組細胞形成了不同程度的紅色脂滴；在濃度為0.25 mmol/L至1.5 mmol/L時（圖3b～3e），隨著FFAs濃度增大，紅色脂滴數(shù)量開始逐漸增加并呈現(xiàn)連續(xù)排列成環(huán)狀，常常圍繞在細胞核周圍；但當FFAs濃度增大2.0 mmol/L時，脂滴融合，界限不清，排列無序，乃至出現(xiàn)細胞破損狀況。由圖2的結(jié)果可知細胞在FFAs濃度為2.0 mmol/L時存活率低于70%，影響了細胞正常生長。因此，為了實驗結(jié)果的準確可靠，結(jié)合圖2的MTT結(jié)果和油紅O染色形態(tài)學指標，最終選擇1.5 mmol/L的FFAs作為HepG2細胞脂肪堆積模型的造模濃度。

2.3 小枝玫瑰醇提物對FFAs誘導HepG2細胞脂質(zhì)蓄積和TG的影響

2.3.1 小枝玫瑰醇提物對脂肪堆積HepG2細胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積的抑制作用

本實驗中用油紅O染色定性和定量的表征小枝玫瑰醇提物對HepG2細胞脂肪堆積模型脂滴的影響。油紅O染色已經(jīng)成為研究動物組織和細胞中脂質(zhì)代謝的常規(guī)定性和半定量的分析方法[30,31]，半定量的方法有些是借助圖譜ImageJ軟件對各組細胞的平均光密度分析或是異丙醇溶解油紅O后在490 nm處測定OD值各組進行比較分析。油紅O染色和細胞TG含量測定評估細胞脂質(zhì)積累的經(jīng)典指標[32]。

各組細胞油紅O染色結(jié)果如圖4所示，與正常組相比，模型組細胞中顯示大量紅色脂滴，成串珠樣或者脂滴融合為不規(guī)則形狀，肉眼可見脂變程度明顯。隨著小枝玫瑰醇提物濃度的增加（50、100、200 μg/mL），細胞內(nèi)紅色脂滴數(shù)量大大減少，脂變性狀況得到緩解（圖4d～4f）。與模型組相比，陽性藥非諾貝特組和小枝玫瑰醇提物高、中、低濃度組的脂滴數(shù)量和密度均顯著減少，細胞內(nèi)脂滴融合情況減少，這表明陽性藥物組和各給藥組均能不同程度地對抗FFAs誘導的肝細胞的脂肪堆積，抑制細胞內(nèi)脂滴的形成。如圖5所示，細胞內(nèi)脂質(zhì)含量：模型組細胞為1.12（OD值），正常組細胞為0.10（OD值），兩組相比，差異顯著（p<0.01）；隨著小枝玫瑰醇提物濃度的增加，HepG2細胞內(nèi)脂質(zhì)含量呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢。與模型組相比，陽性藥組（OD值為0.88）和小枝玫瑰低中高劑量組（OD值分別為0.84、0.75、0.71）的細胞內(nèi)脂質(zhì)含量均明顯減少（p<0.01）；當小枝玫瑰醇提物濃度達到200 μg/mL，細胞內(nèi)脂質(zhì)含量降低了36.61%。這說明小枝玫瑰醇提物具有清除細胞脂肪累積的能力，能夠顯著緩解FFAs誘導細胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積。

2.3.2 小枝玫瑰醇提物對FFAs誘導細胞內(nèi)TG含量的影響

肝臟是脂肪酸代謝的中樞器官，通過復雜而精確調(diào)控生化、信號和細胞通路來控制脂質(zhì)穩(wěn)態(tài)的中心器官。肝臟發(fā)生著眾多的生理生化和代謝反應，肝臟的細胞類型有很多種，其中肝實質(zhì)細胞，也是我們常說的肝細胞是其中最重要的細胞類型之一，它是多種生化反應和代謝（如：糖脂代謝）場所。脂肪酸在細胞和血液中常常以TG的形式存在，而TG的合成貯存和代謝轉(zhuǎn)運等常常在肝細胞中進行[33]。肝細胞可從血液中攝取脂肪酸，也可以通過脂肪從頭合成過程而產(chǎn)生。脂肪酸的消除形式有兩種，一是組裝到極低密度脂蛋白（very low density lipoprotein，VLDL）中分泌出到血液中而消除，一是在細胞內(nèi)通過氧化分解而消除。VLDL的蛋白組裝和功能關(guān)系到TG能否順利轉(zhuǎn)出肝細胞[34]。肝細胞內(nèi)TG的含量是檢測NAFLD脂變性的重要指標。

關(guān)于玫瑰提取物的動物實驗，有研究報道[18]，玫瑰花多酚可以降低高脂血癥大鼠血清TG水平，同時顯著改善高脂血癥大鼠肝臟脂肪變性，抑制脂肪酸合成酶的形成，但在此研究中并未開展對大鼠肝臟TG的檢測和機制研究，只是形態(tài)學指標上觀察到玫瑰多酚可以改善肝臟脂肪變性。另有研究指出[15]，玫瑰黃酮提取物可改善高脂血癥大鼠血脂四項指標并抑制單核細胞趨化因子1的表達，研究結(jié)果顯示，大鼠血清TG水平，模型組TG含量4.98 mmol/L顯著高于玫瑰黃酮高劑量組TG含量3.25 mmol/L（p<0.05）。本課題組前期發(fā)現(xiàn)[16,17]：動物實驗結(jié)果顯示，小枝玫瑰水提物和醇提物對四氧嘧啶糖尿病小鼠均有降血糖作用，同時可改善小鼠糖耐量；體外實驗，小枝玫瑰醇提物可抑制α-葡萄糖苷酶活性（其IC50為11.35 μg/mL），其抑制活性超過陽性藥阿卡波糖（其IC50為15.92 μg/ mL）。這些研究表明，玫瑰提取物對于糖代謝和脂代謝均有非常好的調(diào)節(jié)作用，為開發(fā)小枝玫瑰醇提物對糖脂代謝類疾病的研究奠定了基礎(chǔ)。

小枝玫瑰醇提物對FFAs誘導細胞內(nèi)TG含量的影響，結(jié)果如圖6所示，模型組TG含量為0.53 mmol/L極顯著高于正常組TG含量0.05 mmol/L（p<0.01）；隨著小枝玫瑰醇提物濃度的逐漸增加，與模型組相比，小枝玫瑰各濃度組細胞內(nèi)TG含量顯著減少（p<0.01），中濃度組TG含量降低了49.06%，低濃度組TG含量降低了47.17%；當小枝玫瑰醇提物為200 μg/mL時，細胞內(nèi)TG含量降低至0.21 mmol/L。與模型組TG含量（0.53 mmol/L）相比，陽性藥非諾貝特組TG含量（0.29 mmol/L）明顯降低（p<0.01）。在本實驗中，小枝玫瑰醇提物能夠顯著降低FFAs誘導細胞內(nèi)TG和脂質(zhì)含量，改善肝細胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積情況。

2.4 小枝玫瑰醇提物對FFAs誘導的HepG2細胞PPARα通路蛋白表達的影響

肝臟脂肪酸代謝失衡導致肝細胞內(nèi)TG的過度積累。代謝相關(guān)脂肪性肝病表現(xiàn)為TG以脂滴的形式在肝細胞中異常蓄積，肝臟脂肪變性嚴重可發(fā)展為NASH、肝硬化和肝癌。肝臟脂質(zhì)異常沉積，大多是因為脂肪酸β氧化不足或脂質(zhì)合成過度導致，受損肝細胞的PPARα失去了對下游參與脂質(zhì)合成、脂肪酸氧化等相關(guān)靶基因調(diào)控作用[35-37]。脂肪酸氧化分解代謝過程，根據(jù)脂肪酸鏈的長短不同，發(fā)生場所不同，主要是在線粒體和過氧化物酶體中進行。脂肪酸氧化發(fā)生的關(guān)鍵酶是CPT1A和ACOX1。PPARα是一種通過調(diào)控其下游靶基因CPT1A和ACOX1來發(fā)揮影響脂肪酸氧化的[38]。機體PPARα的異常會導致脂質(zhì)代謝的紊亂，從而引發(fā)脂代謝障礙等相關(guān)疾病，如：非酒精性脂肪肝、高脂血癥、心血管疾病等。在生理條件下，人們通過飲食攝入的脂肪酸可在細胞內(nèi)轉(zhuǎn)換為脂酰輔酶A，然后再進入線粒體中氧化分解釋放能量，以便機體利用。脂酰輔酶A由于分子量較大，不能直接進入線粒體，此時需要和肉堿結(jié)合促進其轉(zhuǎn)運，CPT1A是催化脂酰輔酶A結(jié)合的酶，因此其含量的高低直接決定長鏈脂肪酸是進入線粒體還是存儲于胞質(zhì)[39]。在脂肪酸進入線粒體后，β氧化酶系之一ACOX1又在其中占有重要地位，有文獻報道ACOX1-/-小鼠表現(xiàn)出脂肪性肝炎、肝臟H2O2水平升高，廣泛的自發(fā)性過氧化物酶體增殖的增加，證明了ACOX1在PPARα生理調(diào)節(jié)功能中的必不可少的作用[40]。脂肪酸氧化代謝通路在抗肝臟脂變性研究中顯得尤為重要。

鑒于前期實驗中發(fā)現(xiàn)小枝玫瑰醇提物對FFAs誘導的HepG2細胞中TG的改善作用顯著，我們選擇研究從脂肪酸氧化代謝途徑探究小枝玫瑰醇提物。因此在本實驗中，我們考察了脂肪酸β-氧化的關(guān)鍵蛋白PPARα及其下游的ACOX1、CPT1A。如圖7所示，與正常組相比，模型組細胞PPARα、ACOX1、CPT1A的蛋白表達明顯下調(diào)（p<0.01）。與模型組相比，小枝玫瑰醇提物中、高濃度組的PPARα、ACOX1的蛋白表達顯著上調(diào)，中濃度組（p<0.05），高濃度組（p<0.01），呈現(xiàn)劑量依賴性；小枝玫瑰醇提物低、中、高濃度組的CPT1A的蛋白表達顯著上調(diào)，低濃度組（p<0.05），中、高濃度組（p<0.01），呈現(xiàn)劑量依賴性；陽性藥非諾貝特組PPARα、ACOX1、CPT1A的蛋白表達明顯上調(diào)（p<0.05）。此外，實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，小枝玫瑰醇提物不同劑量組對于HepG2細胞中相關(guān)蛋白表達水平的影響同樣呈現(xiàn)濃度依賴性。

本文研究顯示，F(xiàn)FAs孵育HepG2細胞建立的脂肪酸負荷模型，模型組細胞的脂肪酸分解代謝相關(guān)蛋白PPARα、CPT1A和ACOX1的表達顯著下調(diào)。這表明，HepG2細胞中脂肪酸的積累可能導致肝臟脂肪酸氧化分解途徑受阻或影響相關(guān)的代謝通路，使得肝細胞中脂質(zhì)蓄積，脂變性嚴重。經(jīng)小枝玫瑰醇提物干預后后，PPARα、CPT1A和ACOX1的表達均升高，提示小枝玫瑰醇提物可通過上調(diào)PPARα及其轉(zhuǎn)錄靶基因CPT1A和ACOX1的蛋白表達水平，促進肝細胞內(nèi)脂肪酸β-氧化，在一定程度上減輕肝細胞脂質(zhì)累積。

3 結(jié)論

本實驗以小枝玫瑰醇提物為原料，以FFAs誘導HepG2細胞建立體外脂肪堆積模型，研究了小枝玫瑰醇提物對FFAs誘導HepG2細胞脂肪變性的改善作用及相關(guān)作用機制。小枝玫瑰醇提物通過激動PPARα信號通路，上調(diào)了PPARα的表達，并上調(diào)了由其調(diào)控的下游CPT1A和ACOX1的表達，促進脂肪酸氧化分解，改善FFAs誘導的肝細胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積，減少細胞內(nèi)TG蓄積，進而達到改善NAFLD作用。小枝玫瑰或可成為改善NAFLD的候選植物藥，為治療提供新的選擇。