基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討疏肝健脾方治療抑郁相關(guān)乳腺癌的分子生物學(xué)機(jī)制

吳靜遠(yuǎn)，許博文，李 杰，崔瑋璐，盧泰成，曹璐暢

（1.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院廣安門(mén)醫(yī)院腫瘤科，北京 100053；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)研究生學(xué)院，北京 100029）

2020 年全球最新癌癥負(fù)擔(dān)數(shù)據(jù)顯示，占據(jù)女性癌癥新發(fā)病例數(shù)1/4 和死亡病例數(shù)1/6 的乳腺癌已經(jīng)超過(guò)肺癌成為全球最常見(jiàn)的惡性腫瘤［1］。罹患乳腺癌給女性的生理和心理都帶來(lái)巨大壓力，對(duì)疾病和自身健康的恐慌、手術(shù)以及后續(xù)治療帶來(lái)的相貌損傷和暫時(shí)無(wú)法回歸社會(huì)導(dǎo)致自我價(jià)值上的落差都會(huì)使患者產(chǎn)生焦慮抑郁的情緒狀態(tài)［2］，而這種情緒狀態(tài)也會(huì)進(jìn)一步加重患者病情，影響患者的生存質(zhì)量甚至提高腫瘤復(fù)發(fā)率［3］。針對(duì)乳腺癌患者的焦慮抑郁狀態(tài)，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)多以抗抑郁藥治療為主，但相關(guān)藥物不良反應(yīng)多，有可能増加腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)，加之部分患者因抵觸情緒較重而依從性不佳，故臨床療效往往不穩(wěn)定［4］。

中醫(yī)藥重視整體調(diào)節(jié)、調(diào)和氣血陰陽(yáng)的特點(diǎn)對(duì)改善人體情志狀態(tài)、舒暢全身氣機(jī)有著一定的治療優(yōu)勢(shì)［5］，有利于乳腺癌患者術(shù)后整體康復(fù)及后續(xù)治療［6］。疏肝健脾法是中醫(yī)調(diào)暢情志、梳理氣機(jī)的重要治法之一，中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院廣安門(mén)醫(yī)院腫瘤科在此基礎(chǔ)上結(jié)合多位醫(yī)家臨床經(jīng)驗(yàn)擬定疏肝健脾方，臨床應(yīng)用治療乳腺癌效果頗佳，全方包括柴胡、杭白芍、郁金、預(yù)知子、生黃芪、夏枯草、三七粉、甘草等，具有調(diào)暢情志、理氣活血的功效，方中柴胡和杭白芍散收配伍，疏柔合法，補(bǔ)肝體疏肝氣，斂陰血助肝柔，郁金和預(yù)知子長(zhǎng)于理氣化瘀，生黃芪配伍三七粉補(bǔ)脾益氣、行氣行血，夏枯草清肝瀉火，甘草調(diào)和諸藥，全方既化裁于逍遙散有疏肝解郁、理氣健脾之意又寓抗癌清源、扶正培本之功。抑郁焦慮狀態(tài)可能通過(guò)炎性微環(huán)境促進(jìn)乳腺癌的發(fā)生與發(fā)展，筆者團(tuán)隊(duì)的前期基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)證明，疏肝健脾方能提高腦內(nèi)5-HT 的表達(dá)，恢復(fù)海馬等區(qū)域神經(jīng)元功能從而改善抑郁障礙型乳腺癌小鼠的持續(xù)抑郁狀態(tài)，通過(guò)介導(dǎo)細(xì)胞焦亡調(diào)控MicroRNA 并降低骨髓來(lái)源的抑制性細(xì)胞（myeloid-derived suppressor cells，MDSC）的含量，恢復(fù)T 細(xì)胞抗腫瘤免疫，重塑免疫微環(huán)境進(jìn)而控制腫瘤生長(zhǎng)、延緩乳腺癌進(jìn)展［6-8］。中藥復(fù)方是一個(gè)由多個(gè)成分和靶標(biāo)組成的復(fù)雜系統(tǒng)，它可以通過(guò)多靶點(diǎn)、多環(huán)節(jié)對(duì)人體生物多途徑進(jìn)行多種調(diào)節(jié)［9］。本文通過(guò)引入網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法，從分子角度發(fā)現(xiàn)和明確疏肝健脾方的活性成分，為理解中藥復(fù)方與機(jī)體間的相互作用及靶點(diǎn)在人體內(nèi)如何起效提供可能，也為后續(xù)深入挖掘相關(guān)基礎(chǔ)及臨床實(shí)驗(yàn)研究提供思路借鑒。

1 資料與方法

1.1 疏肝健脾方的活性化合物與靶點(diǎn)篩選

在中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)（traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform， TCMSP，http：//tcmspw.com/tcmsp.php）檢索疏肝健脾方中各中藥的化學(xué)成分。依據(jù)藥代動(dòng)力學(xué)（absorption，distribution，metabolism，elimination，ADME）原則，篩選出的化合物需滿(mǎn)足口服利用度（oral bioavailability，OB）≥30%且類(lèi)藥性（drug-likeness，DL）≥0.18 的條件［10］。雖部分化合物不滿(mǎn)足ADME 原則，但通過(guò)逐 一 查 看“Related diseases”，補(bǔ) 充 包 含“depression-related breast cancer”的候選化合物以完善結(jié)果。符合要求的活性化合物在DRUGBANK（https：//www.drugbank.ca/）中匹配蛋白質(zhì)靶點(diǎn)，并導(dǎo)入U(xiǎn)niprot（https：//www.uniprot.org/）數(shù)據(jù)庫(kù)校正為標(biāo)準(zhǔn)基因名稱(chēng)。在SwissTargetPrediction（http：//www.swisstargetprediction.ch/）依據(jù)Probability＝1 為條件對(duì)候選化合物進(jìn)行靶點(diǎn)預(yù)測(cè)，兩者匯總?cè)ブ睾蟮玫绞韪谓∑⒎街械乃幬锇袠?biāo)。

1.2 抑郁相關(guān)乳腺癌的疾病靶點(diǎn)收集

以“depression-related breast cancer”為關(guān)鍵詞在人類(lèi)基因注 釋 數(shù)據(jù)庫(kù)（GeneCards，https：//www.genecards.org/）、在線(xiàn)人類(lèi)孟德?tīng)栠z傳數(shù)據(jù)庫(kù)（online mendelian inheritance in man，OMIM，https：//omim.org/）中檢索抑郁相關(guān)乳腺癌的疾病靶點(diǎn)，匯總所有數(shù)據(jù)并刪除重復(fù)值得到所有疾病靶點(diǎn)。

1.3 構(gòu)建“中藥-化合物-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)與拓?fù)浞治?/h3>

利用R 語(yǔ)言對(duì)疏肝健脾方藥物靶點(diǎn)與抑郁相關(guān)乳腺癌疾病靶點(diǎn)取交集。將獲得的共同靶點(diǎn)輸入R 語(yǔ)言軟件包繪制韋恩圖。利用Excel 表將交集靶點(diǎn)數(shù)據(jù)與疏肝健脾方的中藥及活性成分一一對(duì)應(yīng)再導(dǎo)入Cytoscape3.7.2 軟件，構(gòu)建“中藥-化合物-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)以直觀(guān)展示每一味中藥活性成分所對(duì)應(yīng)的每種化合物靶標(biāo)。為全面了解化合物和靶點(diǎn)的特定屬性以進(jìn)一步分析各節(jié)點(diǎn)的重要性及節(jié)點(diǎn)間的相互關(guān)系，我們利用CytoNCA 插件進(jìn)行拓?fù)浞治龅玫皆摼W(wǎng)絡(luò)中所有節(jié)點(diǎn)的度中心性（degree centrality，DC）、中介中心性（betweenness centrality，BC）和接近中心性（closeness centrality，CC）。計(jì)算出以上節(jié)點(diǎn)屬性的中位數(shù)并篩選出滿(mǎn)足大于上述所有中位數(shù)的節(jié)點(diǎn)，即“Hit hubs”。

1.4 蛋白質(zhì)互作網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及關(guān)鍵靶點(diǎn)篩選

將韋恩圖中獲取的交集靶點(diǎn)輸入STRING（https：//string-db.org/）中的“Multiple Proteins”板塊，選擇“Homo sapiens”后篩選出置信度高于0.95的靶點(diǎn)，導(dǎo)入Cytoscape3.7.2 后構(gòu)建蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)，并通過(guò)MCODE 插件中的分子復(fù)合物檢測(cè)算法（MCODE）深度篩選出PPI 的潛在子網(wǎng)以聚焦疏肝健脾方中的活性起效成分，該密集連接的區(qū)域稱(chēng)為module［11］。

1.5 富集分析

借助Metascape（http：//metascape.org/）對(duì)疏肝健脾方干預(yù)抑郁相關(guān)乳腺癌的候選靶點(diǎn)行基因本位（gene ontology，GO）和京都基因與基因組百科全 書(shū)（kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG）分析。GO 包括細(xì)胞組成（cellular component，CC）、分子功能（molecular function，MF）和生物過(guò)程（biological process，BP），主要說(shuō)明候選靶點(diǎn)在起效時(shí)的具體作用和功能；KEGG 則側(cè)重于疏肝健脾方影響抑郁相關(guān)乳腺癌的信號(hào)通路。結(jié)合文獻(xiàn)各篩選出60 條GO 和20 條KEGG 結(jié)果，對(duì)這些差異顯著的富集分析繪制氣泡圖。利用Excel 表整理出KEGG 所映射的相關(guān)靶點(diǎn)，導(dǎo)入Cytoscape3.7.2構(gòu)建“基因-通路”網(wǎng)絡(luò)展示疏肝健脾方藥物靶點(diǎn)與抑郁相關(guān)乳腺癌之間的作用關(guān)系，幫助我們明晰藥物對(duì)疾病的影響以及在疾病網(wǎng)絡(luò)中研究靶標(biāo)。

2 結(jié)果

2.1 疏肝健脾方的活性化合物及藥病靶點(diǎn)的獲取

共獲得疏肝健脾方活性化合物181 個(gè)，其中甘草90 個(gè)、生黃芪20 個(gè)、柴 胡17 個(gè)、郁金15 個(gè)、杭白芍14 個(gè)、夏枯草11 個(gè)、三七粉8 個(gè)、預(yù)知子6 個(gè)。經(jīng)DrugBank 中匹配后得到藥物靶點(diǎn)652 個(gè)。在Genecards、OMIM 數(shù)據(jù)庫(kù)匯總并刪除重復(fù)值得到抑郁相關(guān)乳腺癌靶點(diǎn)3 838 個(gè)。疏肝健脾方干預(yù)抑郁相關(guān)乳腺癌的共同靶點(diǎn)有250 個(gè)，經(jīng)靶點(diǎn)映射后，實(shí)際獲得121 個(gè)有效化合物。見(jiàn)表1 及圖1。

圖1 韋恩圖Fig1 Venny diagram

表1 疏肝健脾方活性成分（Degree≥10）Tab1 Active ingredients of Shugan Jianpi Decoction（Degree≥10）

2.2 “中藥-成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建和拓?fù)浞治?/h3>

借助Cytoscape3.7.2 構(gòu)建“中藥-成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)，選取Degree≥10 的靶點(diǎn)進(jìn)行高頻展示，該網(wǎng)絡(luò)由179 個(gè)節(jié)點(diǎn)和492 條邊組成，見(jiàn)圖2。節(jié)點(diǎn)代表中藥、化合物或靶點(diǎn)，邊代表中藥-化合物或化合物-靶點(diǎn)間的相互關(guān)系。并在CytoNCA 插件中依據(jù)拓?fù)浞治鰠?shù)篩選出“Hit hubs”節(jié)點(diǎn)（表2），“Hit hubs”的值越大，互作的靶點(diǎn)就越多，越可能為該網(wǎng)絡(luò)的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)［12］，其中有效成分主要包括槲皮素（quercetin）、木犀草素（luteolin）、山奈酚（kaempferol）和柚皮素（naringenin）。

表2 拓?fù)浞治鯰ab 2 Topological analysis

圖2 “中藥-成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)（Degree≥10）Fig 2 “TCM-ingredient-target”Network

2.3 PPI 網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

在250 個(gè)候選基因的PPI 網(wǎng)絡(luò)圖中（圖3），TP53、MAPK1、MAPK3、JUN、AKT1、RELA 等存在較多的交互關(guān)系，為進(jìn)一步研究各靶點(diǎn)之間的相互作用，通過(guò)MCODE 插件得到module 網(wǎng)絡(luò)區(qū)域，并根據(jù)P值保留module 中3 個(gè)最佳評(píng)分的生物學(xué)進(jìn)程對(duì)其進(jìn)行功能描述。見(jiàn)圖4 及表3。

表3 PPI 內(nèi)部潛在module 功能描述（前3 位）Tab 3 Description of potential module functions within PPI（top 3）

圖3 PPI 網(wǎng)絡(luò)圖Fig 3 PPI network diagram

圖4 核心PPI 網(wǎng)絡(luò)內(nèi)部潛在module 網(wǎng)絡(luò)Fig 4 Latent module network inside the core PPI network

2.4 富集分析

GO 的富集分析結(jié)果顯示，2 357 個(gè)GO 術(shù)語(yǔ)中包含171 個(gè)MF，2 101 個(gè)BP 和85 個(gè)CC，KEGG 的通路富集結(jié)果有184 條。據(jù)negLog10（P）值排序，選取前20 位用R 語(yǔ)言繪制氣泡圖，見(jiàn)圖5。GO 涉及的主要過(guò)程有細(xì)胞對(duì)激素刺激的反應(yīng)（cellular response to hormone stimulus）、細(xì)胞對(duì)脂質(zhì)的反應(yīng)（cellular response to lipid）、細(xì)胞對(duì)氧化應(yīng)激的反應(yīng)（cellular response to oxidative stress）、轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物（transcription factor complex）、蛋白激酶復(fù)合物（protein kinase complex）、激 酶 綁 定（kinase binding）、蛋白絲氨酸/蘇氨酸激酶活性（protein serine/threonine kinase activity）等。從KEGG 的 圖 中 可知，疏肝健脾方作用于抑郁相關(guān)乳腺癌的通路可能為Pathways in cancer、HIF-1 signaling pathway、PI3K-Akt signaling pathway、MicroRNAs in cancer、Central carbon metabolism in cancer、FoxO signaling pathway 等。

圖5 富集分析氣泡圖Fig 5 Bubble chart of enrichment analysis

2.5 “基因-通路”網(wǎng)絡(luò)分析

經(jīng)靶點(diǎn)映射構(gòu)建了一個(gè)包含20 條信號(hào)通路、133 個(gè)基因和571 條相互作用關(guān)系的“基因-通路”網(wǎng)絡(luò)，見(jiàn)圖6。該網(wǎng)絡(luò)清楚地反映了疏肝健脾方中起效通路與成分之間的關(guān)系。 圖中MAPK1、MAPK3、NFKB1、RELA、IKBKB、AKT1、PIK3R1度值較大，可能是疏肝健脾方干預(yù)抑郁相關(guān)乳腺癌的關(guān)鍵靶基因。

圖6 “基因-通路”網(wǎng)絡(luò)Fig 6 “Gene-pathway”network

3 討論

情志障礙、抑郁焦慮狀態(tài)對(duì)乳腺癌患者的病情發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后影響甚大［13］，乳腺癌抑郁患者常常表現(xiàn)出抑郁情緒、軀體性焦慮、精神性焦慮、睡眠障礙、乏力等癥狀［14］，我們認(rèn)為肝郁脾虛是貫穿其病情全過(guò)程的核心病機(jī)［15］，以法立方，方隨證出，疏肝健脾、調(diào)暢情志的疏肝健脾方是我院腫瘤科的經(jīng)典方。依托既往研究，本文引入網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法從整體角度對(duì)其有效成分、作用靶點(diǎn)和富集通路等方面進(jìn)行分子生物學(xué)機(jī)制分析。

3.1 潛在有效成分

從“中藥-成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖的拓?fù)浞治龅玫骄佑谇? 位的化合物為槲皮素、木犀草素、山奈酚和柚皮素，主要通過(guò)影響乳腺癌細(xì)胞周期、促進(jìn)癌細(xì)胞凋亡發(fā)揮效應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)槲皮素單用及聯(lián)用化療藥物都顯示出良好的的抗癌活性，能通過(guò)介導(dǎo)EGFR /AKT /mTOR 信號(hào)通路促進(jìn)人乳腺癌細(xì)胞株T47D 的細(xì)胞凋亡［16］，通過(guò)降低細(xì)胞表面干性相關(guān)標(biāo)志物的蛋白表達(dá)有效抑制缺氧微環(huán)境中乳腺癌細(xì)胞的增殖［17］。木犀草素能發(fā)揮逆轉(zhuǎn)TAZ 誘導(dǎo)的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化、抑制乳腺癌細(xì)胞p-STAT3、p-EGFR、p-Akt 和p-Erk1/2 表達(dá)，從而抑制細(xì)胞遷移，阻斷乳腺癌細(xì)胞周期發(fā)育，引發(fā)凋亡［18］。山奈酚具有多種調(diào)節(jié)作用，可通過(guò)下調(diào)CDK1、Bcl2，上調(diào)Bax 等使乳腺癌細(xì)胞周期阻滯在G2/M 期抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡［19］。柚皮素是合成雌激素的天然替代物之一，能誘導(dǎo)表達(dá)ERα 或ERβ 的腫瘤細(xì)胞凋亡，將乳腺癌細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期［20］、G2期［21］，并 通 過(guò) 干 擾PI3K 和MAPK 通路抑制乳腺癌細(xì)胞增殖和運(yùn)動(dòng)［22］。

3.2 潛在作用靶點(diǎn)

結(jié)合PPI 網(wǎng)絡(luò)中的關(guān)鍵網(wǎng)絡(luò)節(jié)點(diǎn)和“基因-通路”網(wǎng)絡(luò)中度值較大的節(jié)點(diǎn)，疏肝健脾方作用于抑郁相關(guān)乳腺癌的潛在作用靶點(diǎn)可能為MAPK1、MAPK3、RELA、AKT1，主要通過(guò)影響乳腺癌細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移發(fā)揮作用。MAPK1 和MAPK3是MAPK 信號(hào)通路中重要的蛋白激酶與調(diào)控因子，據(jù)報(bào)道人乳腺上皮細(xì)胞KRAS 和PIK3CA 突變的體細(xì)胞敲入伴隨著MAPK1/3 磷酸化的增加［23］，并且MAPK1/3 的磷酸化會(huì)導(dǎo)致蛋白的激活和從細(xì)胞質(zhì)到細(xì)胞核的轉(zhuǎn)位［24］。Ramirez-Ardila 的研究證明，PIK3CA 突變的乳腺腫瘤標(biāo)本通過(guò)增加MAPK1/3磷酸化而表現(xiàn)出外顯子依賴(lài)性的特征，MAPK1/3磷酸化可能在PIK3CA 突變的腔內(nèi)乳腺癌患者中作為下游效應(yīng)的靶點(diǎn)發(fā)揮重要作用［25］。趨化因子CXCL13 及其受體CXCR5 的共表達(dá)與原發(fā)性乳腺腫瘤向淋巴結(jié)的致死性轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系，而RELA 的表達(dá)與乳腺癌患者腫瘤內(nèi)CXCL13 和CXCR5mRNA 的表達(dá)呈正相關(guān)，故在RERA 高條件下，低Nrf2 和缺乏CXCR5 啟動(dòng)子的DNA 甲基化控制了CXCL13-CXCR5 在乳腺腫瘤中的共表達(dá)，促使腫瘤向淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移推動(dòng)疾病的進(jìn)展［26］。AKT1 通過(guò)上調(diào)S6 和cyclinD1 促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞增殖，通過(guò)下調(diào)β-1 整合素和粘著斑激酶（FAK）抑制細(xì)胞的遷移和侵襲，即AKT1 的過(guò)表達(dá)會(huì)促進(jìn)局部腫瘤的生長(zhǎng)，AKT1 的下調(diào)會(huì)促進(jìn)瘤周浸潤(rùn)和肺轉(zhuǎn)移［27］。

3.3 相關(guān)富集通路

依據(jù)GO 和KEGG 富集結(jié)果，預(yù)測(cè)疏肝健脾方主要通過(guò)HIF-1、PI3K-Akt、MicroRNAs 和FoxO 信號(hào)通路及其交互作用共同發(fā)揮抗腫瘤作用。HIF-1是缺氧反應(yīng)的主要調(diào)節(jié)因子，在EMT、侵襲、外滲和轉(zhuǎn)移生態(tài)位的形成等乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的多步驟起關(guān)鍵作用［28］。HIF-1 信號(hào)通路通過(guò)介導(dǎo)缺氧調(diào)控的MicroRNAs 編碼基因表達(dá)在乳腺癌轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用，如在MCF-7 乳腺癌細(xì)胞中，缺氧使41 個(gè)MicroRNAs 表 達(dá) 顯 著 上 調(diào)，28 個(gè)MicroRNAs 表 達(dá)下調(diào)［29］。PI3K-Akt 信號(hào)通路是大多數(shù)實(shí)體瘤（包括乳腺癌）中常見(jiàn)的失控途徑，其常見(jiàn)的改變?nèi)鏟IK3CA 和PIK3R1 基 因 的 突 變，Akt 的 體 細(xì) 胞 突變、抑癌基因PTEN 的失活突變或缺失以及其下游靶點(diǎn)p70S6K、p-4EBP1 和eIF4E 的過(guò)度表達(dá)或異常磷酸化，這些突變會(huì)激活PI3K-Akt 信號(hào)通路，并通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞轉(zhuǎn)化、腫瘤的啟動(dòng)、進(jìn)展和抗凋亡而成為致癌的驅(qū)動(dòng)因素［30，31］。超過(guò)50%的人類(lèi)MicroRNAs 定位于與腫瘤發(fā)展過(guò)程中發(fā)生的擴(kuò)增、缺失或易位相關(guān)的脆弱染色體區(qū)域，致癌MicroRNAs 如miRNA-10 家族、miR-21、miR-17-92、miR-155 經(jīng)常在乳腺癌中過(guò)表達(dá)以及刺激致癌轉(zhuǎn)錄因子來(lái)發(fā)揮其致癌潛力；腫瘤抑制因子MicroRNAs 如Let-7 家族、miR-200 家 族、miR-205、miR-145 等［32，33］在 癌 細(xì)胞中表達(dá)不足，通過(guò)抑制癌基因的表達(dá)控制細(xì)胞分化、增殖等。FoxO 信號(hào)通路的表達(dá)受到MicroRNAs 的抑制［34］，乳腺癌細(xì)胞依賴(lài)FoxO 的存在來(lái)有效地生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移腫瘤，但同時(shí)FoxO3 水平的升高又可延緩轉(zhuǎn)移［35］。

本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法，在佐證我們既往研究中疏肝健脾方通過(guò)調(diào)控MicroRNAs 抑制癌細(xì)胞增殖的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)其有效化合物如槲皮素、山奈酚、木犀草素、柚皮素等多作用于乳腺癌的細(xì)胞周期影響癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和凋亡，相關(guān)靶點(diǎn)如MAPK1、MAPK3、RELA、AKT1 等 通 過(guò) 作 用 于HIF-1、PI3K-Akt、MicroRNAs 和FoxO 等信號(hào)通路介導(dǎo)缺氧環(huán)境、腫瘤微環(huán)境等環(huán)節(jié)阻滯細(xì)胞周期、抑制癌細(xì)胞增殖、阻止其復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。故疏肝健脾方可能通過(guò)多靶點(diǎn)、多通路的方式對(duì)抑郁相關(guān)乳腺癌協(xié)同起效，以上探討為深入挖掘中藥復(fù)方的藥物靶點(diǎn)及藥物組合提供了新的思路和方法，但上述猜想假設(shè)仍需后續(xù)進(jìn)一步的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)測(cè)試和臨床觀(guān)察驗(yàn)證。