乙型肝炎病毒感染肝硬化患者肝功能與腸道菌群的相關(guān)性

聞慧，史玉領(lǐng)

（項(xiàng)城市第一人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科，河南 周口 466200）

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染為臨床常見疾病，我國是HBV感染流行較為嚴(yán)重的國家之一，HBV感染防治工作嚴(yán)峻。HBV感染會持續(xù)破壞患者的肝功能，若不加以控制，多數(shù)患者會進(jìn)展為肝硬化甚至肝癌等難治性肝病，嚴(yán)重影響患者生命健康。有研究指出，內(nèi)毒素可誘發(fā)肝炎癥反應(yīng)，促使肝纖維化進(jìn)展，加重肝硬化程度，與肝功能損傷存在密切關(guān)系［1］。但臨床經(jīng)驗(yàn)表明，內(nèi)毒素水平正常的乙型肝炎患者仍會進(jìn)展為肝硬化及肝功能損傷，說明存在其他因素參與肝功能損傷［2］。腸道菌群是人體最大的微生態(tài)系統(tǒng)，腸黏膜內(nèi)各種益生菌共同維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，參與機(jī)體免疫調(diào)節(jié)。近年來有研究指出，乙肝肝硬化患者腸道菌群水平變化與正常人相比更明顯［3］。但腸道菌群變化與肝功能是否存在直接相關(guān)性，仍需進(jìn)一步研究證實(shí)?；诖耍狙芯窟x取67例HBV感染肝硬化患者，以分析肝功能指標(biāo)與腸道菌群的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2019年4月至2021年4月項(xiàng)城市第一人民醫(yī)院收治的67例HBV感染肝硬化患者為研究組，另選取同期健康體檢者64例為對照組。研究組：男38例，女29例；年齡37～73（54.96±8.04）歲；病程1～9（4.12±1.27）a；未婚5例，已婚47例，離異或喪偶15例；體質(zhì)量指數(shù)（body mass index，BMI）19.5～28.4（23.89±2.11）kg·m-2；肝功能Child-Pugh分級［4］A級21例，B級28例，C級18例。對照組：男36例，女28例；年齡36～75（56.14±8.25）歲；未婚3例，已婚50例，離異或喪偶11例；BMI 19.0～28.9（24.01±2.18）kg·m-2。兩組性別、年齡、BMI、婚姻狀況比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 選例標(biāo)準(zhǔn)（1）納入標(biāo)準(zhǔn)：①研究組患者符合HBV感染肝硬化診斷標(biāo)準(zhǔn)［5］；②對照組為項(xiàng)城市第一人民醫(yī)院健康體檢人群，與研究組無血緣關(guān)系，生化指標(biāo)無異常；③年齡＞18歲；④臨床資料完善；⑤簽署知情同意書。（2）排除標(biāo)準(zhǔn)：①近1個(gè)月服用益生菌藥物；②近6個(gè)月中重大手術(shù)史；③合并其他嚴(yán)重肝?。虎芎喜⒄J(rèn)知障礙、聽力障礙、失語癥、精神疾病。

1.3 檢測方法（1）肝功能指標(biāo)檢測：兩組均于入院時(shí)抽取空腹?fàn)顟B(tài)下外周靜脈血6 mL，離心處理（半徑為13.5 cm，轉(zhuǎn)速3 000 r·min-1，離心10 min），取上清液，以貝克曼庫爾特商貿(mào)（中國）有限公司生產(chǎn)的AU5821型全自動(dòng)生化分析儀及其配套試劑盒檢測血清谷草轉(zhuǎn)氨酶（glutamic-oxalacetic transaminase，GOT）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（glutamic-pyruvic，GPT）、堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）水平。（2）腸道菌群檢測：以無菌杯采集清晨糞便10 g，30 min內(nèi)送檢，取1／10標(biāo)本置入試管，加入生理鹽水9.9 mL，10倍稀釋法稀釋，常規(guī)離心，洗滌，采用Sigma公司的DNA試劑盒提取樣本中細(xì)菌總DNA，行聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增，將糞便細(xì)菌DNA樣本與相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)，經(jīng)系統(tǒng)軟件自動(dòng)計(jì)算出Ct值，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，使用Ct值與標(biāo)準(zhǔn)曲線定量測定乳桿菌、雙歧桿菌、腸球菌、腸桿菌數(shù)量，單位logN·g-1。

1.4 觀察指標(biāo)（1）兩組肝功能（GOT、GPT、ALP）水平及腸道菌群（乳桿菌、雙歧桿菌、腸球菌、腸桿菌）水平。（2）不同肝功能Child-Pugh分級HBV感染肝硬化患者肝功能（GOT、GPT、ALP）水平及腸道菌群（乳桿菌、雙歧桿菌、腸球菌、腸桿菌）水平。（3）HBV感染肝硬化患者肝功能指標(biāo)（GOT、GPT、ALP）與腸道菌群（乳桿菌、雙歧桿菌、腸球菌、腸桿菌）的相關(guān)性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較行單因素方差分析；采用Pearson進(jìn)行相關(guān)性分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α＝0.05。

2 結(jié)果

2.1 肝功能研究組GOT、GPT、ALP水平較對照組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組肝功能指標(biāo)水平比較（±s，U·L-1）

表1 兩組肝功能指標(biāo)水平比較（±s，U·L-1）

注：GOT為谷草轉(zhuǎn)氨酶；GPT為谷丙轉(zhuǎn)氨酶；ALP為堿性磷酸酶；1 U＝16.67 nkat。

組別 例數(shù)GOT GPT ALP對照組64 29.87±4.16 32.76±4.53 85.69±10.44研究組67 54.32±7.15 55.84±7.46 154.15±21.05 t 23.779 21.283 23.410 P ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001

2.2 腸道菌群水平研究組乳桿菌、雙歧桿菌水平較對照組低，腸球菌、腸桿菌水平較對照組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組腸道菌群水平比較（±s，logN·g-1）

表2 兩組腸道菌群水平比較（±s，logN·g-1）

組別 例數(shù) 乳桿菌 雙歧桿菌 腸球菌 腸桿菌對照組64 9.28±1.02 9.96±1.07 7.17±0.83 8.02±0.93研究組 67 7.51±0.75 7.31±0.82 9.45±1.14 9.91±1.05 t 11.351 16.424 13.036 10.887 P ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001

2.3 不同肝功能Child-Pugh分級患者肝功能指標(biāo)水平不同肝功能Child-Pugh分級患者GOT、GPT、ALP水平不同（P＜0.05）。見表3。

表3 不同肝功能Child-Pugh分級患者肝功能指標(biāo)水平比較（±s，U·L-1）

表3 不同肝功能Child-Pugh分級患者肝功能指標(biāo)水平比較（±s，U·L-1）

注：GOT為谷草轉(zhuǎn)氨酶；GPT為谷丙轉(zhuǎn)氨酶；ALP為堿性磷酸酶；1 U＝16.67 nkat。

Child-Pugh分級 例數(shù)GOT GPT ALP A級21 45.92±5.11 40.88±6.55 140.66±15.23 B級 28 56.48±6.03 59.64±6.92 153.91±16.27 C級 18 60.75±6.41 67.39±7.51 170.26±17.36 F 34.239 77.231 16.076 P ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001

2.4 不同肝功能Child-Pugh分級患者腸道菌群水平不同肝功能Child-Pugh分級患者腸道菌群水平不同（P＜0.05）。見表4。

表4 不同肝功能Child-Pugh分級患者腸道菌群水平比較（±s，logN·g-1）

表4 不同肝功能Child-Pugh分級患者腸道菌群水平比較（±s，logN·g-1）

Child-Pugh分級 例數(shù) 乳桿菌 雙歧桿菌 腸球菌 腸桿菌A級21 8.25±0.48 8.42±0.51 8.12±0.63 8.84±0.69 B級 28 7.61±0.44 7.33±0.43 9.64±0.68 9.91±0.74 C級 18 6.50±0.42 5.99±0.40 10.70±0.73 11.15±1.49 F 75.153 141.854 71.943 26.673 P ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001

2.5 HBV感染肝硬化患者肝功能指標(biāo)與腸道菌群的相關(guān)性Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，HBV感染肝硬化患者乳桿菌、雙歧桿菌水平與GOT、GPT、ALP呈負(fù)相關(guān)，腸球菌、腸桿菌水平與GOT、GPT、ALP呈正相關(guān)（P＜0.05）。見表5。

表5 HBV感染肝硬化患者肝功能指標(biāo)與腸道菌群的相關(guān)性

3 討論

肝具有肝門靜脈、肝動(dòng)脈雙重血供系統(tǒng)，而肝門靜脈血液的3／4來自系膜靜脈，因此，肝在接收腸道吸收的營養(yǎng)物質(zhì)的同時(shí)，還會受到腸道抗原刺激［6］。肝與腸道在解剖學(xué)關(guān)系上存在緊密聯(lián)系，二者共同構(gòu)成可防御腸道細(xì)菌產(chǎn)物等抗原刺激的過濾器，一般情況下，門靜脈含有少量腸源性內(nèi)毒素，可維持肝網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)處于激活狀態(tài)［7］。但肝硬化導(dǎo)致肝功能損傷，降低肝細(xì)胞清除內(nèi)毒素能力，免疫功能下降，造成腸-肝屏障受損，若腸道菌群失調(diào)，有害菌群通過肝進(jìn)入血液循環(huán)，則可誘發(fā)肝性腦病、細(xì)菌性腹膜炎、內(nèi)毒素血癥等嚴(yán)重并發(fā)癥，威脅患者生命［8-9］。因此，分析患者肝功能與腸道菌群的關(guān)系有助于為肝病相關(guān)并發(fā)癥防治提供參考。

肝是以代謝為主的器官，HBV感染肝硬化損傷肝功能，造成肝分泌、代謝功能受損，影響腸源性內(nèi)毒素處理，進(jìn)而造成腸道菌群紊亂［10-11］。相關(guān)研究指出，乙肝肝硬化患者腸道微生態(tài)平衡與肝功能關(guān)系密切，肝硬化病情加重可造成腸道菌群失調(diào)［12-13］。本研究結(jié)果顯示，研究組GOT、GPT、ALP水平較對照組高，乳桿菌、雙歧桿菌水平較對照組低，腸球菌、腸桿菌水平較對照組高，表明HBV感染肝硬化患者腸道菌群處于紊亂狀態(tài)，且存在一定程度肝功能損傷。健康人群腸道微生態(tài)處于平衡狀態(tài)，是腸道菌群的免疫反應(yīng)、代謝活動(dòng)、腸道屏障保護(hù)、營養(yǎng)作用等共同作用所致。腸道屏障功能完整時(shí)，菌群與內(nèi)毒素?zé)o法通過腸壁進(jìn)入機(jī)體其他組織或器官，但腸道菌群紊亂后大量內(nèi)毒素可誘導(dǎo)炎癥因子破壞腸壁及腸道屏障功能，提高腸黏膜通透性，導(dǎo)致部分分子物質(zhì)以被動(dòng)擴(kuò)散方式通過［14］。同時(shí)，本研究結(jié)果顯示，乳桿菌、雙歧桿菌水平與GOT、GPT、ALP呈負(fù)相關(guān)，腸球菌、腸桿菌水平與GOT、GPT、ALP呈正相關(guān)，提示臨床在治療HBV感染肝硬化患者時(shí)應(yīng)注意腸道菌群水平變化，預(yù)防相關(guān)并發(fā)癥。乳桿菌、雙歧桿菌為益生菌，數(shù)量較多表示腸道菌群紊亂程度較輕，腸道屏障功能受損輕微，不會導(dǎo)致大量內(nèi)毒素、炎癥因子擴(kuò)散進(jìn)入肝，而腸球菌、腸桿菌為致病菌，數(shù)量越多表示腸道屏障功能受損越嚴(yán)重，炎癥反應(yīng)擴(kuò)散越快［15-16］，從而導(dǎo)致肝功能不斷損傷。由此可見，腸道菌群紊亂可在一定程度上促進(jìn)肝損傷，通過改善患者腸道菌群或許能為臨床治療HBV感染肝硬化提供新方法。

綜上，HBV感染肝硬化患者肝功能指標(biāo)與腸道菌群水平變化存在相關(guān)性，腸道菌群紊亂可作為肝功能損傷程度的輔助判定標(biāo)準(zhǔn)，不同腸道菌群水平變化與肝功能各指標(biāo)間的關(guān)系值得臨床重視。