絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥與氧化應(yīng)激的相關(guān)性研究

鄧若塵 房慶城 方 睿

廣東省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院 廣東廣州 528200

絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥 (postmenopausal osteoporosis，PMOP) 是一種常見的代謝性骨骼疾病，其特征是骨礦物質(zhì)密度(bone mineral density，BMD)低和絕經(jīng)后婦女骨折風(fēng)險(xiǎn)增加。PMOP 的發(fā)病機(jī)制尚不清楚，近年來，遺傳因素與PMOP易感性之間的關(guān)聯(lián)性得到了關(guān)注[1]。現(xiàn)探究絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥中雌激素水平與氧化應(yīng)激在絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松發(fā)生發(fā)展中的機(jī)制作用，選自2018年6月—2021年6月期間，在廣東省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院住院及門診的患者進(jìn)行研究，研究結(jié)果如下。

1 資料與方法

1.1 資料來源

選自2018年6月—2021年6月期間，在廣東省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院住院及門診的患者作為研究對(duì)象。

絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥患者納入標(biāo)準(zhǔn)：髖部或腰椎骨密度T值小于-2.5的45周歲以上絕經(jīng)后婦女，基本資料、骨密度檢查等資料完整。

排除標(biāo)準(zhǔn)：合并嚴(yán)重肝、腎疾病；合并甲狀腺、甲狀旁腺等內(nèi)分泌系統(tǒng)疾?。缓喜⑻悄虿〉却x性疾?。婚L期應(yīng)用雌激素或雄激素者；長期使用抗凝藥物者，長期臥床者；嚴(yán)重畸形、殘廢；老年癡呆或精神病患者及其他不能配合者；不愿意參加本研究者。

非骨質(zhì)疏松癥患者納入標(biāo)準(zhǔn)：髖部或腰椎骨密度T值大于-2.5的45周歲以上絕經(jīng)后婦女，基本資料、骨密度檢查等資料完整。

排除標(biāo)準(zhǔn)：合并嚴(yán)重肝、腎疾??；合并甲狀腺、甲狀旁腺等內(nèi)分泌系統(tǒng)疾?。缓喜⑻悄虿〉却x性疾??；長期應(yīng)用雌激素或雄激素者；長期使用抗凝藥物者，長期臥床者；嚴(yán)重畸形、殘廢；老年癡呆或精神病患者及其他不能配合者；不愿意參加本研究者。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)

①骨質(zhì)疏松癥的診斷參照WHO骨質(zhì)疏松癥標(biāo)準(zhǔn)及中華醫(yī)學(xué)會(huì)骨質(zhì)疏松及《原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥診療指南 (2017年)》[2]、《基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)骨質(zhì)疏松癥診斷和治療專家共識(shí)(2021)》[3]。②骨密度用T-Score (T值) 表示，T= (測定值-骨峰值) /正常成人骨密度標(biāo)準(zhǔn)差。

1.3 調(diào)查內(nèi)容

①調(diào)查研究對(duì)象的基本情況，包括年齡，絕經(jīng)年齡，絕經(jīng)年限，閉經(jīng)情況。②進(jìn)行體質(zhì)量、身高測量，計(jì)算記錄體質(zhì)量指數(shù) (BMI) 值。③調(diào)查患者既往病史、服藥史、家族史。④記錄患者的骨密度檢查結(jié)果，包括髖部和腰椎骨密度。

1.4 ELISA法檢測人血細(xì)胞線粒體8羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)、血清雌二醇(E2)水平

①標(biāo)準(zhǔn)品加樣：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50 μL；②加樣：分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40 μL，然后再加待測樣品10 μL(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻；③加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑100 μL，空白孔除外；④溫育：用封板膜封板后置37 ℃溫育60 min；⑤配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用；⑥洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 s后棄去，如此重復(fù)5次，拍干；⑦顯色：每孔先加入顯色劑A 50 μL，再加入顯色劑B 50 μL，輕輕震蕩混勻，37 ℃避光顯色15 min；⑧終止：每孔加終止液50 μL，終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)；⑨測定：以空白孔調(diào)零，450 nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)，測定應(yīng)在加終止液后15 min以內(nèi)進(jìn)行；⑩以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 一般情況比較

選自2018年6月—2021年6月期間，在廣東省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院住院及門診的符合診斷標(biāo)準(zhǔn)、納入標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)的絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥患者(PMOP組)68例，非骨質(zhì)疏松癥患者(非OP組)61例，平均年齡(51.40±3.46)歲，平均絕經(jīng)年齡(46.96±1.88)歲，平均絕經(jīng)年限(4.43±3.01)年。

非OP組與PMOP組的年齡相比沒有明顯差異，組間具有可比性。與非OP組相比，PMOP組的絕經(jīng)年齡較小，骨密度T值減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；絕經(jīng)年限上升，但差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 納入患者總體情況表

2.2 絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥和非骨質(zhì)疏松癥患者BMI情況比較

納入樣本的平均BMI為(20.94±3.09) kg/m2；與非OP組相比，PMOP組的BMI明顯降低(P<0.05)(見表2)。

表2 絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥和非骨質(zhì)疏松癥患者BMI情況對(duì)比

2.3 血清E2、8-OHdG在絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥和非骨質(zhì)疏松癥患者體內(nèi)的表達(dá)水平比較

與非OP組相比，PMOP組的8-OHdG明顯降低(P<0.05)、E2有所降低，但沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表2，圖1、2)。

表3 E2、8-OHdG在絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥和非骨質(zhì)疏松癥患者體內(nèi)的表達(dá)水平

注：與非OP組相比，PMOP組的血細(xì)胞線粒體中8-OHdG水平顯著降低(P<0.01)。

注：與非OP組相比，PMOP組的血清E2水平降低，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

3 討論

婦女在圍絕經(jīng)期激素水平開始紊亂，絕經(jīng)后雌激素水平迅速降低，這段時(shí)間內(nèi)骨量快速丟失，研究表明[4]，在絕經(jīng)后骨量丟失的速度為平均每年1%。骨吸收增加90%，而骨形成只增加45%，骨重塑是骨吸收與新骨形成的過程，研究發(fā)現(xiàn)雌激素可以調(diào)控骨重塑率進(jìn)而調(diào)節(jié)骨骼狀態(tài)。絕經(jīng)初期雌激素迅速減少，對(duì)成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞調(diào)控作用減弱，骨重塑失衡，進(jìn)而發(fā)展為骨質(zhì)疏松。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與非OP組相比，PMOP組的絕經(jīng)年齡較小，骨密度T值減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說明絕經(jīng)年齡是影響骨質(zhì)疏松發(fā)生發(fā)展的原因之一。有研究顯示，隨絕經(jīng)年限的延長，骨質(zhì)疏松患病率升高[5]，目前較少針對(duì)絕經(jīng)年齡與雌激素水平的相關(guān)性研究，暫未有充足的證據(jù)說明絕經(jīng)年限的延長伴隨著雌激素水平的下降，本實(shí)驗(yàn)中PMOP組的E2較非OP組低，PMOP組的絕經(jīng)年限比非OP組延長，但均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，分析可能是本次樣本量不足或樣本年齡段跨度過小所致。

體質(zhì)量與身高決定BMI的值，體質(zhì)量與體內(nèi)肌肉、脂肪、骨密度等緊密相關(guān)，故骨密度下降，體質(zhì)量指數(shù)亦會(huì)下降。值得注意的是，骨質(zhì)疏松癥患者常伴有身高縮短，調(diào)查[6]顯示，身高降低幅度越大，骨密度指標(biāo)越低，體質(zhì)量過輕和肥胖都可能加劇絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松的發(fā)生[7]；本次納入樣本的平均BMI為(20.94±3.09)kg/m2，與非OP組相比，PMOP組的BMI明顯降低(P<0.05)；這說明骨密度與BMI成正相關(guān)關(guān)系，但不排除身高降低為本次分析的混雜因素。

8-OHdG是核苷酸氧化應(yīng)激反應(yīng)的產(chǎn)物，代表機(jī)體代謝和修復(fù)能力下降的程度。作為內(nèi)外源DNA氧化損傷的標(biāo)志物，8-OHdG可阻滯細(xì)胞增殖，還可激活氧自由基或羥基自由基，誘導(dǎo)發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng)，促使細(xì)胞線粒體受損，造成細(xì)胞凋亡。8-OHdG在體內(nèi)集聚，成為病理損傷的誘發(fā)因子，其水平升高與多種疾病相關(guān)，其中包括癌癥、動(dòng)脈粥樣硬化和糖尿病等[8-9]，有研究表明[10]，原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥中，骨質(zhì)疏松癥組的8-OHdG濃度小于非骨質(zhì)疏松組，8-OHdG濃度與腰椎平均骨密度呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與非OP組相比，PMOP組的8-OHdG明顯降低(P<0.05)，與前人研究結(jié)果相符。

骨質(zhì)疏松癥是老年人的常見病和多發(fā)病，是當(dāng)今全球僅次于心腦血管疾病的受害人群最多、最具危險(xiǎn)性且尚未能治愈的慢性非傳染性疾病[11-12]。早期患者往往無任何癥狀，嚴(yán)重的骨質(zhì)疏松癥可導(dǎo)致椎骨、髖骨、腕骨、肱骨、脛骨骨折，給個(gè)人和社會(huì)帶來沉重的負(fù)擔(dān)[13]。目前我國對(duì)骨質(zhì)疏松癥的防治大多以內(nèi)科方法為主。由于內(nèi)科治療使用雌激素、鈣劑、活性維生素D、降鈣素和氟化物等藥物[14-16]。研究表明，自我管理的健康管理方式對(duì)骨質(zhì)疏松癥高危人群疾病防治起重要作用[17-18]。西醫(yī)防治PMOP的方法主要包括基礎(chǔ)措施、藥物干預(yù)及物理治療?；A(chǔ)措施主要通過運(yùn)動(dòng)飲食療法和改變不良生活習(xí)慣，提高骨密度，避免加劇骨質(zhì)疏松。藥物干預(yù)和物理治療針對(duì)性強(qiáng)，根據(jù)作用效果或機(jī)制，選擇相應(yīng)的治療藥物[19-20]。

8-OHdG則屬于活性氧族, 是導(dǎo)致DNA氧化損傷的產(chǎn)物之一，也是DNA突變的標(biāo)志。當(dāng)患者出現(xiàn)缺血、缺氧問題, 8-OHdG含量將出現(xiàn)一定程度的上升。而8-OHdG的產(chǎn)生主要依賴于患者體內(nèi)的活性氧，當(dāng)活性氧不斷增加時(shí)，氧化應(yīng)激過程所產(chǎn)生的ROS將會(huì)直接攻擊mtDNA，并生成8-OHdG。此時(shí)，由于mtDNA自我修復(fù)能力較差，且缺乏組蛋白的保護(hù)，因此容易導(dǎo)致退行性疾病[21]。

綜上所述，絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生與氧化應(yīng)激息息相關(guān)，其通過調(diào)節(jié)線粒體8羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)和血清雌二醇(E2)水平有關(guān)。