• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    木薯炭疽病拮抗木霉菌篩選與室內(nèi)防效研究

    2022-04-22 08:39:24張靜雅李欣雨王偉偉侯巨梅
    中國生物防治學(xué)報 2022年1期
    關(guān)鍵詞:炭疽炭疽病木薯

    張靜雅,李欣雨,張 成,王偉偉,張 鵬,侯巨梅,劉 銅,?

    (1.海南大學(xué)植物保護學(xué)院/熱帶農(nóng)林生物災(zāi)害綠色防控教育部重點實驗室,???570228;2.海南省綠色農(nóng)用生物制劑創(chuàng)制工程研究中心(海南大學(xué)),???570228)

    木薯ManihotesculentaCrantz為大戟科木薯屬植物,是非洲、亞洲、美洲和拉丁美洲、熱帶和亞熱帶地區(qū)數(shù)百萬人的主要糧食作物[1]。隨著經(jīng)濟的增長和能源缺口的不斷加大,木薯作為一種糧食作物和能源材料,其種植面積在不斷地擴大[2]。然而,在我國廣西、廣東、海南等木薯主產(chǎn)區(qū),炭疽病發(fā)生普遍[3],成為木薯產(chǎn)業(yè)發(fā)展的限制因素之一。木薯炭疽病由Colletotrichumgloeosporioidesf.sp.manihotisHenn(Penz)Sacc侵染引起[4],主要危害木薯莖部、葉片和果實,常在多雨季節(jié)發(fā)生[5],嚴重影響木薯產(chǎn)量和品質(zhì)。目前,對木薯炭疽病的防治主要以化學(xué)防治為主[6],然而長期使用化學(xué)農(nóng)藥會導(dǎo)致病原菌出現(xiàn)抗藥性以及農(nóng)藥殘留、環(huán)境污染等問題。因此,篩選和使用高效、無殘留的生物菌劑進行防治尤為重要。

    木霉菌Trichodermaspp.適應(yīng)性廣、生長繁殖能力強,在自然界各種生態(tài)環(huán)境中廣泛分布[7]。它可以產(chǎn)生多種拮抗病原物物質(zhì)、細胞壁降解酶類和促生因子。因此,木霉菌作為重要的生防菌,被廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中[8]。木霉菌對炭疽病的防治已有較多報道。如棘孢木霉GYSW-6m1對草莓炭疽菌LC0220具有較強的競爭、抗生和重寄生作用,同時對草莓幼苗也表現(xiàn)出較好的促生作用[9];長枝木霉SMF2孢子懸浮液噴施和灌根處理葫蘆,可以顯著降低葫蘆炭疽病的發(fā)生[10],利用哈茨木霉GZ-5可以有效地防治菩提樹炭疽病[11],但目前應(yīng)用于防治木薯炭疽病的木霉菌鮮有報道。因此,本研究擬從木薯根際土壤分離獲得的木霉菌中,篩選出對木薯炭疽病菌具有較強拮抗作用的菌株,進行室內(nèi)防效測定,以期開發(fā)為防治該病害的生防菌劑。

    1 材料與方法

    1.1 供試材料與培養(yǎng)基

    木薯炭疽病病葉從海南省儋州木薯種質(zhì)資源圃采集;15株木霉菌分離自木薯根際土壤樣品,由海南省綠色農(nóng)用生物制劑創(chuàng)制工程研究中心提供;用于室內(nèi)致病性檢測和防效的木薯葉片為華南9號品種。

    PDA培養(yǎng)基:馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g,蒸餾水定容至1 L;PSA培養(yǎng)基:馬鈴薯200 g,蔗糖20 g,瓊脂20 g,蒸餾水定容至1 L;CMA培養(yǎng)基:玉米粉25 g,瓊脂20 g,蒸餾水定容至1 L;OA培養(yǎng)基:燕麥粉60 g,瓊脂15 g,蒸餾水定容至1 L;CMD培養(yǎng)基:玉米粉50 g,葡萄糖10 g,瓊脂18 g,蒸餾水定容至1 L;SNA培養(yǎng)基:KH2PO41.0 g,KCl 0.5 g,KNO31.0 g,MgSO4.7H2O 0.5 g,葡萄糖0.2 g,蔗糖0.2 g,瓊脂18 g,蒸餾水定容至1 L。

    1.2 病原菌的分離、致病性分析及鑒定

    從海南儋州木薯種質(zhì)資源圃選擇新鮮、病斑清晰的木薯病葉,利用手術(shù)剪刀在病健交界處剪取約0.5 cm×0.5 cm病葉組織,采用組織分離法[12]進行病原菌分離。待病斑周圍長出菌絲后,挑取菌絲轉(zhuǎn)接于新鮮的 PDA平板上,采用單孢分離法[13]對病原菌進行純化。將純化的菌株接種于新鮮木薯葉片進行致病性檢測,根據(jù)柯赫氏法則,等葉片發(fā)病后與自然發(fā)病葉片癥狀進行比較,重新分離病原菌,與原接種菌進行比較分析。病原菌的鑒定采用形態(tài)學(xué)和分子鑒定的方法相結(jié)合進行。將病原菌接于 PSA、PDA、CMA和OA培養(yǎng)基上進行菌落形態(tài)和顏色特征觀察,收集在PDA培養(yǎng)基上產(chǎn)生的分生孢子,進行分生孢子形態(tài)觀察。采用CTAB法[14]提取病原菌DNA,參考林春花[15]報道的引物序列,分別擴增rDNA-ITS、GAPDH、ACT、CHS-1和TUB2基因序列,將PCR產(chǎn)物回收后克隆進行測序,序列提交GenBank中進行比對,手動修正錯誤序列后,下載相似性高的菌株及模式菌的相關(guān)序列,用ClustalX軟件進行比對后,將不同序列拼接在一起,利用MEGA 7.0進行多基因聯(lián)合系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建,通過自展法(Bootstrap)進行檢驗,設(shè)置1000次重復(fù),進行病原菌的分子鑒定。

    1.3 對峙培養(yǎng)

    拮抗木薯炭疽病菌的木霉菌篩選參照趙玳琳等[9]方法。分別將15株木霉菌與木薯炭疽菌進行平板對峙培養(yǎng),即取5 mm菌餅接種于直徑為90 mm的培養(yǎng)皿兩端,兩菌餅相距5 cm。以只接木薯炭疽病菌的平板作為對照,每個處理3次重復(fù)。放置于28 ℃培養(yǎng),并于接種后3、5、7 d測量菌落半徑,計算抑制率。抑制率(%)=(對照組半徑-處理組半徑)/對照組半徑×100。

    1.4 木霉菌揮發(fā)性物質(zhì)對炭疽病菌的抑制作用

    將木霉菌LG004-52、ZJB3-12和LS073-23的菌餅(5mm)接種于PDA培養(yǎng)基中間,于28 ℃培養(yǎng)2 d后,將木薯炭疽病菌接種于另一個 PDA培養(yǎng)基中間,然后將與接種木霉菌株的培養(yǎng)皿對扣以滅菌玻璃紙隔開,避免菌絲和孢子干擾。以空白培養(yǎng)基與炭疽病菌對扣為對照,每個處理設(shè)置3次重復(fù),培養(yǎng)3、5、7 d后測量病原菌菌落直徑,計算抑制率。抑制率(%)=(對照組直徑-處理組直徑)/對照組直徑×100。

    1.5 木霉菌發(fā)酵液對炭疽病菌的抑制作用

    將木霉菌LG004-52、ZJB3-12和LS073-23菌餅(5 mm)轉(zhuǎn)接含150 mL PD培養(yǎng)基的250 mL錐形瓶中,于28 ℃、180 r/min培養(yǎng)7 d后用滅菌濾紙過濾,將濾液用0.22 μm過濾膜除菌2次后即為無菌發(fā)酵液。取無菌發(fā)酵液與PDA培養(yǎng)基按1:1比例混合倒平板,待其冷卻后,將木薯炭疽病菌轉(zhuǎn)接培養(yǎng)基中央,分別于3、5和7 d測量菌落直徑,計算抑制率。

    1.6 木霉菌的鑒定

    1.6.1 木霉菌形態(tài)學(xué)鑒定 將木霉菌分別轉(zhuǎn)接于PDA、SNA和CMD培養(yǎng)基上,參考木霉菌種群分類系統(tǒng)以及《真菌鑒定手冊》[16-19],根據(jù)菌株在SNA培養(yǎng)基上培養(yǎng)72 h時菌落形態(tài)、分生孢子梗、瓶梗以及分生孢子的特征對木霉菌進行形態(tài)學(xué)鑒定。

    1.6.2 木霉菌分子鑒定 采用CTAB法提取木霉菌基因組DNA[20],利用引物rpb2-5f(5′-GAYGAYMGW GATCAYTTYGG-3′)和 rpb2-7cr(5′-CCCATRGCTTGYTTRCCCAT-3′),擴增rpb2 基因序列。PCR 反應(yīng)體系(25 μL):2×GreenTaqMix 12.5 μL、10 μmol/L 上下游引物各 0.5 μL,模板 DNA 1 μL,ddH2O 10.5 μL。反應(yīng)程序:95 ℃預(yù)變性10 min;95 ℃變性1 min,59 ℃退火90 s,72 ℃延伸90 s,35個循環(huán);72 ℃延伸10 min。利用DNA純化回收試劑盒(天根生化科技)回收PCR產(chǎn)物,連接到pBM16A載體(北京博邁德基因技術(shù)有限公司),挑選陽性克隆送往生工生物工程(上海)股份有限公司測序。將序列提交 NCBI數(shù)據(jù)庫進行比對,下載相似性高的菌株序列,采用MEGA 7.0構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹,進行木霉菌分子鑒定。

    1.7 室內(nèi)防效試驗

    制備木霉菌孢子懸浮液(5×106孢子/mL),將孢子懸浮液均勻噴施在大小一致的木薯葉片上,以噴施無菌水為對照,每個處理20片葉片。待葉片晾干后,用無菌針刺傷葉片并在傷口上放置一個直徑為5 mm的木薯炭疽病菌菌塊,每片葉子中央接種1個菌塊,保濕培養(yǎng)4 d后,將發(fā)病木薯葉片和標尺一起拍照,使用軟件IMAGE J(Wayne Rasband,National Institute of Health,USA)按照圖片中標尺大小設(shè)定尺度,測量病斑面積,計算抑制率。抑制率(%)=(對照組面積-處理組面積)/對照組面積×100。

    1.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

    利用Excel 2010軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析,SPSS 25對抑菌率數(shù)據(jù)進行差異顯著性分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 木薯炭疽病菌分離與鑒定

    通過組織分離法和致病性檢測,獲得3株疑似炭疽病菌的分離物(DZT-1,DZT-2和DZT-3)(圖1A,B),將其中菌株DZT-1轉(zhuǎn)接于PSA、PDA、CMA和OA培養(yǎng)基上進行形態(tài)學(xué)觀察,其菌落為圓形,邊緣齊整(圖1C);病菌在PDA和PSA培養(yǎng)基上氣生菌絲旺盛,產(chǎn)孢時呈現(xiàn)黑褐色,但產(chǎn)孢時間不規(guī)律(圖1C);分生孢子呈圓柱形,有1個隔,無色;附著孢無色,圓柱形(圖1D、E);其形態(tài)特征與蔡吉苗[21]描述的膠孢炭疽菌形態(tài)一致,因此推測可能為膠孢炭疽菌。

    圖1 菌株DZT-1致病性檢測與形態(tài)學(xué)鑒定Fig.1 Pathogenicity test and morphological identification of strain DZT-1

    通過擴增克隆獲得該菌rDNA-ITS(登錄號:MZ373236)、基因GAPDH(登錄號:MZ403777)、ACT(登錄號:MZ403778)、CHS-1(登錄號:MZ403779)和TUB2(登錄號:MZ403780)片段序列,將序列按ITS-GAPDH-ACT-CHS-1-TUB2的順序分別首尾相連,以NJ法構(gòu)建菌株的多基因系統(tǒng)發(fā)育樹(圖2)結(jié)果顯示,菌株DZT-1與膠孢炭疽菌C.gloeosporioidesCORCG4和IMI356878聚類同一支,表明DZT-1可能為膠孢炭疽菌。因此,通過形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)的鑒定,該病原菌被鑒定為膠孢炭疽菌。

    圖2 基于ITS、GAPDH、ACT、CHS-1和TUB2基因序列聯(lián)合構(gòu)建的多基因系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.2 A polygenic phylogenetic tree was constructed based on ITS, GAPDH, ACT, CHS-1 and TUB2 gene sequences

    2.2 對峙培養(yǎng)

    通過平板對峙試驗,15株供試木霉菌株對木薯炭疽病菌DZT-1均表現(xiàn)一定抑制作用(表1,圖3),其中菌株LG004-52、ZJB3-12和LS073-23培養(yǎng)7 d時,對膠孢炭疽病菌DZT-1的抑制率分別為82.69%、82.69%和83.45%,均高于其他菌株(P<0.05),表明這3株木霉具有對木薯膠孢炭疽菌具有較強的拮抗作用,并進一步開展抑菌和室內(nèi)防效試驗。

    圖3 不同木霉菌株與木薯膠孢炭疽菌DZT-1的對峙培養(yǎng)Fig.3 Confrontation culture of different Trichoderma strains against C.gloeosporioides DZT-1

    表1 15株木霉菌對木薯膠孢炭疽菌的抑制作用Table 1 Inhibitory effect of 15 Trichoderma strains isolates against C.gloeosporioides

    2.3 木霉菌揮發(fā)性物質(zhì)的抑菌作用

    通過揮發(fā)性物質(zhì)的拮抗試驗,木霉菌株LG004-52對炭疽菌DZT-1的抑制率顯著高于菌株LS073-23和ZJB3-12;但隨著培養(yǎng)時間延長,3株木霉菌株的抑制率差異不顯著(表2,圖4)。木霉菌株ZJB3-12產(chǎn)生的揮發(fā)性代謝產(chǎn)物在前期抑制炭疽菌氣生菌絲生長,DZT-1菌餅周圍出現(xiàn)圓形空洞(圖4)。

    圖4 3株木霉菌揮發(fā)性物質(zhì)對木薯膠孢炭疽菌的抑制作用Fig.4 Inhibition of volatile substances of 3 Trichoderma strains against C.gloeosporioides

    表2 3株木霉菌揮發(fā)性物質(zhì)對木薯膠孢炭疽菌的抑制作用Table 2 Inhibitiory of volatile substances of 3 Trichoderma strains against C.gloeosporioides

    2.4 木霉菌株發(fā)酵液抑菌作用

    通過發(fā)酵液的抑菌試驗,在 3株木霉菌中,菌株 ZJB3-12的發(fā)酵液呈金黃色,對膠孢炭疽菌 DZT-1抑菌作用最強,可完全抑制炭疽菌菌絲的生長,抑制率為100%;其次是菌株LS073-23的發(fā)酵液,抑制率為83.70%;菌株LG004-52發(fā)酵液對病原菌菌絲半徑無影響,但菌絲生長稀疏。因此,木霉菌ZJB3-12發(fā)酵液中可能產(chǎn)生了較強的抑菌活性物質(zhì),抑制了膠孢炭疽病菌的生長(表3,圖5)。

    圖5 3株木霉菌的發(fā)酵液對木薯膠孢炭疽菌的抑制作用Fig.5 Growth inhibition of 3 Trichoderma strains against C.gloeosporioides

    表3 3株木霉菌發(fā)酵液對木薯膠孢炭疽菌的抑制作用Table 3 Inhibitory of metabolites of 3 Trichoderma strains against C.gloeosporioides

    2.5 木霉菌株的鑒定

    2.5.1 形態(tài)學(xué)鑒定 菌株LG004-52在PDA培養(yǎng)基上氣生菌絲茂盛,長而呈絨毛狀,接種點中心具有環(huán)狀的不育區(qū)域;在SNA培養(yǎng)基上,其氣生菌絲稀疏,在接種點周圍有少量淡綠色孢子堆;在CMD培養(yǎng)基上,氣生菌絲茂盛,可見淺綠色的孢子堆。分生孢子梗側(cè)枝短,不分枝,壺腹型或瓶狀,單生,成對或3個輪生,分生孢子綠色,平滑,球形(圖6A1-A6)。

    菌株LS073-23在PDA培養(yǎng)基上,氣生菌絲茂盛,分生孢子形成明顯的深綠色同心環(huán);在SNA培養(yǎng)基上,幾乎沒有氣生菌絲,分生孢子初期白色,后期變綠;在CMD培養(yǎng)基上氣生菌絲不明顯,淺綠色孢子堆離散分布于接種點對面。分生孢子梗金字塔型,具有輪生或經(jīng)常明顯配對的側(cè)枝,分支與主枝呈近直角,分生孢子近球形、粗糙、墨綠色(圖6B1-B6)。

    圖6 3株木霉菌的形態(tài)圖Fig.6 Morphology of 3 Trichoderma strains

    菌株ZJB3-12在PDA上培養(yǎng)基上,氣生菌絲茂盛,分生孢子豐富,分散均勻,呈同心環(huán)狀,產(chǎn)生黃色色素;在SNA培養(yǎng)基上,氣生菌絲稀疏,分生孢子豐富,淺綠色;在CMD培養(yǎng)基上,幾乎沒有氣生菌絲,分生孢子堆離散型分布。分生孢子梗長梗草型,可育枝通常由幾個層次的分枝組成,頂端附近的枝條上有單一的瓶梗,不再分枝;分生孢子圓柱狀,通常頂生于直的、鉤狀的或者彎曲單個瓶梗內(nèi)(圖6C1-C6)。2.5.2 分子生物學(xué)鑒定 通過PCR擴增,分別從菌株LG004-52、LS073-23和ZJB3-12獲得1294、1343和1291 bprpb2基因片段;經(jīng)過裁剪后利用MEGA7.0的NJ法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹,菌株LG004-52(登錄號:MZ361837)、LS073-23(登錄號:MZ361838)和ZJB3-12(登錄號:MZ361839)分別與短密木霉T.breve、棘孢木霉T.asperellum和長枝木霉T.longibrachiatum聚為同一分支。因此,結(jié)合形態(tài)學(xué)特征和分子鑒定結(jié)果,將3株木霉菌分別鑒定為短密木霉、棘孢木霉和長枝木霉。

    圖7 3株木霉菌基于rpb2序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.7 Phylogenetic tree of 3 Trichoderma strains based on rpb2 sequence

    2.6 木霉菌對炭疽病的室內(nèi)防效

    通過室內(nèi)保濕培養(yǎng)4 d后,木霉菌株LG004-52、LS073-23、ZJB3-12孢子懸浮液處理過的葉片的平均病斑面積分別為3.84、3.79和1.51 cm2,對照組平均病斑面積為6.13 cm2,3株木霉對炭疽病的抑制率分別為37.36%、38.17%和75.37%,其中木霉ZJB3-12對木薯葉片炭疽病的發(fā)生抑制作用最強(表4,圖8)。因此,該菌株可以作為木薯炭疽病生物防治的候選菌株。

    表4 3株木霉菌對木薯葉片炭疽病的防效Table 4 Control effect of 3 Trichoderma strains on cassava leaves of C.gloeosporioides

    圖8 3株木霉菌孢子懸浮液對木薯炭疽病的離體葉片防效Fig.8 The control effect of conidia suspension of 3 Trichoderma strains isolates to C.gloeosporioides on isolated leaves

    3 討論

    木薯炭疽病是木薯生產(chǎn)中危害非常嚴重的一種世界性病害[21]。中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院環(huán)境與植物保護研究所在對中國廣西、廣東、海南等木薯主產(chǎn)區(qū)的病害普查中,發(fā)現(xiàn)該病發(fā)生普遍[4]。1993年蔣冬榮[22]在廣西桂林木薯優(yōu)良品種“南植188”發(fā)現(xiàn)木薯炭疽病菌,初步鑒定該病病原是黑盤孢目的刺盤孢菌。2008年蔡吉苗等[23]在海南儋州發(fā)現(xiàn)木薯炭疽病,經(jīng)致病性測定,形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)合ITS序列分析確定其為膠孢炭疽菌。然而,單一的ITS序列只能鑒定少部分炭疽菌種,越來越多的研究采用多基因進行炭疽菌的鑒定與遺傳多樣性分析。本研究除了對炭疽菌DZT-1進行柯赫氏法驗證、形態(tài)學(xué)觀察以外,并采用ITS-GAPDH-ACTCHS-1-TUB2多基因聯(lián)合建樹分析,將該病原菌鑒定為膠孢炭疽菌。

    目前,對木薯炭疽病的防治主要是采用化學(xué)防治,對于利用木霉制劑來生物防治木薯炭疽病國內(nèi)外未見報道。但是利用木霉菌防治其他作物的炭疽病已有較多的報道。如張曉夢等[24]利用綠色木霉和棘孢木霉防治枸杞炭疽病菌,2株木霉菌株均表現(xiàn)抑菌作用和促進植物生長的能力,并存在多種生防因子。趙興麗等[25]發(fā)現(xiàn)棘孢木霉使茶炭疽病菌菌落萎縮,顏色變暗;其進發(fā)酵液也能有效抑制茶炭疽病菌菌絲生長,使菌絲表面皺縮。

    木霉菌對植物病原菌的作用機制并不是單一的,有時是兩種或幾種生防機制協(xié)同作用[26]。Lazazzara等[27]研究表明在木霉揮發(fā)性代謝產(chǎn)物(VOCs)中,α-farnesene、cadinene、1,3-octadiene、2-pentylfuran和6-pentyl-2H-pyran-2-one降低了葡萄葉片霜霉病的嚴重程度。王子晴等[28]研究結(jié)果顯示鉤狀木霉C6揮發(fā)性物質(zhì)對北細辛菌核病菌抑制率為53.73%,哈茨木霉A17、鉤狀木霉A26、擬康氏木霉B30、鉤狀木霉C6的發(fā)酵液對北細辛菌核病菌的抑制率分別為56.33%、77.22%、82.28%和46.20%。Xin等[29]研究發(fā)現(xiàn)木霉菌株T2發(fā)酵液中的活性代謝產(chǎn)物6-pentyl-2h-pyran2-one(6PP)擾亂了三七根腐病菌的代謝平衡,特別是氨基酸代謝。Mao等[30]對菌株MHT1134的抑菌能力進行了評價,發(fā)現(xiàn)滅菌和未滅菌處理的發(fā)酵液均能有效抑制病原菌的菌絲生長,抑菌效果分別達50.71%和74.01%。本研究通過平板對峙試驗,篩選到3株對木薯炭疽病菌表現(xiàn)較強抑菌作用的木霉菌株,其揮發(fā)性代謝產(chǎn)物及無菌發(fā)酵液對木薯炭疽病菌絲生長具有明顯的抑制作用,其中木霉菌株ZJB3-12揮發(fā)性代謝產(chǎn)物對病原菌菌落生長造成明顯“空洞”現(xiàn)象;且其發(fā)酵液可完全抑制木薯炭疽病菌菌絲的生長,推測該菌株的發(fā)酵液中可能存在對炭疽病菌具有高活性的物質(zhì)。通過室內(nèi)防效試驗,木霉菌株ZJB3-12分生孢子懸浮液降低木薯離體葉片上炭疽病的發(fā)生。因此,木霉菌株ZJB3-12具有良好的生防潛力,將是后續(xù)的田間應(yīng)用的候選菌株。目前關(guān)于該菌株無菌發(fā)酵液的抑菌活性成分正在進行分離鑒定,將明確其抑菌機制,為開發(fā)生物農(nóng)藥奠定基礎(chǔ)。

    猜你喜歡
    炭疽炭疽病木薯
    苦瓜長“雀斑” 警惕炭疽病
    刮木薯
    豬炭疽病的分析、診斷和防控
    帶你走進炭疽的世界(下)
    帶你走進炭疽的世界(上)
    2005-2018年中衛(wèi)市炭疽流行因素分析
    柬埔寨拜靈木薯喜獲大豐收,市場價格保持穩(wěn)定
    挖木薯
    油茶炭疽病菌拮抗木霉菌的分離與篩選
    辣椒炭疽病究竟該如何防治?
    營銷界(2015年23期)2015-02-28 22:06:16
    一本久久中文字幕| 日本精品一区二区三区蜜桃| 男女之事视频高清在线观看| 麻豆av噜噜一区二区三区| 国产伦精品一区二区三区四那| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 黄片wwwwww| 18禁在线播放成人免费| 美女高潮的动态| 亚洲三级黄色毛片| 国产精品一区二区性色av| 国产精品免费一区二区三区在线| 亚洲性久久影院| 久久久午夜欧美精品| 天堂动漫精品| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 午夜视频国产福利| 三级国产精品欧美在线观看| 国产一区二区在线av高清观看| 亚洲欧美清纯卡通| 99热这里只有是精品50| 亚洲专区国产一区二区| 国内揄拍国产精品人妻在线| 最后的刺客免费高清国语| 久久久久久久久久久丰满 | 97人妻精品一区二区三区麻豆| 久久精品综合一区二区三区| 在线免费观看不下载黄p国产 | 两个人视频免费观看高清| 成年免费大片在线观看| 日韩高清综合在线| 亚洲av成人精品一区久久| 99视频精品全部免费 在线| 精品一区二区免费观看| 一本久久中文字幕| 国产精品电影一区二区三区| 午夜福利在线在线| 亚洲七黄色美女视频| 成人鲁丝片一二三区免费| 18+在线观看网站| 日韩一本色道免费dvd| 床上黄色一级片| 精品欧美国产一区二区三| 久久人妻av系列| 欧美日韩综合久久久久久 | 国产视频内射| 亚洲人与动物交配视频| 国产伦一二天堂av在线观看| 欧美bdsm另类| a在线观看视频网站| 欧美国产日韩亚洲一区| 欧美三级亚洲精品| 哪里可以看免费的av片| 国产成人av教育| 日韩一区二区视频免费看| 12—13女人毛片做爰片一| 99在线人妻在线中文字幕| 一本一本综合久久| 真人做人爱边吃奶动态| 久久国产乱子免费精品| 俄罗斯特黄特色一大片| 又爽又黄无遮挡网站| 亚洲无线观看免费| 日本 av在线| 亚洲国产精品成人综合色| 亚洲美女搞黄在线观看 | 一进一出好大好爽视频| 简卡轻食公司| 国产激情偷乱视频一区二区| 国产男靠女视频免费网站| 欧美一区二区亚洲| 中文字幕免费在线视频6| 欧美精品啪啪一区二区三区| 99久久中文字幕三级久久日本| 美女cb高潮喷水在线观看| 国产大屁股一区二区在线视频| 精品不卡国产一区二区三区| 国产亚洲91精品色在线| 很黄的视频免费| netflix在线观看网站| 午夜影院日韩av| 搡老妇女老女人老熟妇| 久久久久久久久久久丰满 | 日韩av在线大香蕉| 天堂影院成人在线观看| 国产精品1区2区在线观看.| 精品国产三级普通话版| 欧美黑人巨大hd| 日本三级黄在线观看| 在线观看免费视频日本深夜| 国产精品免费一区二区三区在线| 国产成人aa在线观看| 久久久久久久久中文| 嫩草影视91久久| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 中文亚洲av片在线观看爽| 亚州av有码| 成年人黄色毛片网站| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 大型黄色视频在线免费观看| 国产伦人伦偷精品视频| 高清在线国产一区| 日韩一本色道免费dvd| 极品教师在线免费播放| 亚洲美女搞黄在线观看 | 欧美黑人欧美精品刺激| 日本黄色片子视频| .国产精品久久| 99热网站在线观看| 男插女下体视频免费在线播放| 最近最新中文字幕大全电影3| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 99热精品在线国产| 亚洲真实伦在线观看| а√天堂www在线а√下载| 亚洲av电影不卡..在线观看| 久久久精品大字幕| 一区二区三区高清视频在线| 国产高清有码在线观看视频| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 22中文网久久字幕| 亚洲七黄色美女视频| 精品乱码久久久久久99久播| 免费在线观看成人毛片| 国产亚洲精品av在线| 精品久久久久久,| 夜夜爽天天搞| 中文字幕av在线有码专区| 最好的美女福利视频网| 在线观看午夜福利视频| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 亚洲av中文av极速乱 | 亚洲成人免费电影在线观看| 欧美精品国产亚洲| 日韩 亚洲 欧美在线| 欧美激情国产日韩精品一区| 日本精品一区二区三区蜜桃| 免费看日本二区| h日本视频在线播放| 亚洲av免费在线观看| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 成人鲁丝片一二三区免费| 国产精品乱码一区二三区的特点| 日本精品一区二区三区蜜桃| 干丝袜人妻中文字幕| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 国产精品电影一区二区三区| 亚洲精品日韩av片在线观看| 国内精品宾馆在线| 91狼人影院| 少妇被粗大猛烈的视频| 性色avwww在线观看| 国产激情偷乱视频一区二区| 搡女人真爽免费视频火全软件 | xxxwww97欧美| 永久网站在线| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 十八禁国产超污无遮挡网站| av中文乱码字幕在线| 欧美在线一区亚洲| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 免费搜索国产男女视频| 免费在线观看日本一区| 精华霜和精华液先用哪个| 嫁个100分男人电影在线观看| 可以在线观看毛片的网站| 人人妻人人澡欧美一区二区| 久久久色成人| 黄色配什么色好看| 国产一区二区激情短视频| 免费看av在线观看网站| 色哟哟哟哟哟哟| 亚洲av一区综合| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 中文字幕av成人在线电影| av视频在线观看入口| 成人美女网站在线观看视频| avwww免费| 亚洲国产色片| 伦理电影大哥的女人| 欧美精品国产亚洲| 别揉我奶头 嗯啊视频| 欧美一区二区精品小视频在线| 日韩欧美免费精品| 国产探花在线观看一区二区| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 51国产日韩欧美| 成年版毛片免费区| 听说在线观看完整版免费高清| 亚洲第一电影网av| av天堂在线播放| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国产在线男女| 国产精品,欧美在线| 99热6这里只有精品| 欧美最新免费一区二区三区| 校园人妻丝袜中文字幕| 午夜视频国产福利| 黄色女人牲交| 国产精品久久久久久久久免| 男人舔奶头视频| 久久午夜福利片| 午夜日韩欧美国产| 色综合亚洲欧美另类图片| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 国产精品国产高清国产av| 亚洲内射少妇av| 特大巨黑吊av在线直播| 日韩一本色道免费dvd| 男女视频在线观看网站免费| 桃色一区二区三区在线观看| 中文字幕高清在线视频| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 深夜精品福利| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 嫩草影视91久久| 亚洲精华国产精华精| 日韩欧美在线乱码| 国产高清视频在线观看网站| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 国产三级中文精品| videossex国产| 欧美高清成人免费视频www| 91麻豆精品激情在线观看国产| 国产日本99.免费观看| 欧美最新免费一区二区三区| а√天堂www在线а√下载| 99热精品在线国产| 国产高清激情床上av| 可以在线观看的亚洲视频| 看十八女毛片水多多多| 天美传媒精品一区二区| 18+在线观看网站| 免费电影在线观看免费观看| 极品教师在线视频| 日韩一本色道免费dvd| 国模一区二区三区四区视频| 欧美精品啪啪一区二区三区| 深爱激情五月婷婷| 欧美潮喷喷水| 国产高清视频在线观看网站| 日韩欧美在线二视频| 亚洲精品在线观看二区| 人妻少妇偷人精品九色| 动漫黄色视频在线观看| 欧美成人一区二区免费高清观看| 看免费成人av毛片| 九九热线精品视视频播放| 99久久成人亚洲精品观看| 午夜影院日韩av| 亚洲欧美日韩高清专用| 九九在线视频观看精品| 天美传媒精品一区二区| 国产精品电影一区二区三区| 亚洲自偷自拍三级| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 国产三级中文精品| 人妻少妇偷人精品九色| 国内精品美女久久久久久| 亚洲av熟女| 免费一级毛片在线播放高清视频| 午夜福利欧美成人| 亚洲精品456在线播放app | 欧美丝袜亚洲另类 | 亚洲欧美激情综合另类| 全区人妻精品视频| 中国美女看黄片| 欧美+日韩+精品| 欧美精品国产亚洲| 国产精品一区二区免费欧美| 久久99热这里只有精品18| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 身体一侧抽搐| 欧美黑人欧美精品刺激| 乱码一卡2卡4卡精品| 亚洲成人精品中文字幕电影| 精品无人区乱码1区二区| 永久网站在线| 俺也久久电影网| 伦理电影大哥的女人| 俄罗斯特黄特色一大片| 亚洲成av人片在线播放无| 久久久久久伊人网av| 性欧美人与动物交配| 日韩一本色道免费dvd| 午夜免费激情av| 欧美不卡视频在线免费观看| 床上黄色一级片| 高清在线国产一区| 国产伦精品一区二区三区视频9| xxxwww97欧美| 精品人妻1区二区| 麻豆成人午夜福利视频| 国内精品美女久久久久久| 男女视频在线观看网站免费| 少妇高潮的动态图| 久久6这里有精品| 18+在线观看网站| 久久精品影院6| 老女人水多毛片| 免费看a级黄色片| 熟女人妻精品中文字幕| 22中文网久久字幕| 可以在线观看的亚洲视频| 亚洲第一区二区三区不卡| 最近最新免费中文字幕在线| 黄色日韩在线| 久久亚洲真实| 国产毛片a区久久久久| 一级毛片久久久久久久久女| 伦精品一区二区三区| 日韩强制内射视频| 午夜视频国产福利| 亚洲av成人av| 精品久久久噜噜| 免费av毛片视频| 午夜福利成人在线免费观看| 搡老岳熟女国产| 成年免费大片在线观看| 午夜影院日韩av| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 国内精品美女久久久久久| a在线观看视频网站| 日韩精品中文字幕看吧| 91久久精品国产一区二区成人| 国产精品人妻久久久久久| 变态另类丝袜制服| 国产探花在线观看一区二区| 久久久久久久久久黄片| 观看免费一级毛片| 精品一区二区免费观看| 乱码一卡2卡4卡精品| 99久久精品热视频| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 十八禁国产超污无遮挡网站| 国产成年人精品一区二区| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 在线观看一区二区三区| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| avwww免费| 特大巨黑吊av在线直播| 最新中文字幕久久久久| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 午夜福利欧美成人| 日韩欧美在线二视频| 男人舔女人下体高潮全视频| 久久精品国产亚洲av天美| 最新中文字幕久久久久| 国产精品永久免费网站| 99久久中文字幕三级久久日本| 国产精品永久免费网站| 国产91精品成人一区二区三区| 高清在线国产一区| 久久中文看片网| 直男gayav资源| 男女下面进入的视频免费午夜| 特大巨黑吊av在线直播| 亚洲美女视频黄频| 直男gayav资源| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 亚洲国产精品久久男人天堂| 丰满的人妻完整版| 级片在线观看| 精品午夜福利在线看| 久久人妻av系列| 99热只有精品国产| 观看免费一级毛片| 欧美黑人欧美精品刺激| 可以在线观看毛片的网站| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 黄色欧美视频在线观看| 99热只有精品国产| 国产精品电影一区二区三区| 成人特级av手机在线观看| 中文字幕高清在线视频| 一级毛片久久久久久久久女| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 91在线精品国自产拍蜜月| 少妇熟女aⅴ在线视频| 男女之事视频高清在线观看| 亚洲av五月六月丁香网| 夜夜爽天天搞| 成人特级黄色片久久久久久久| 桃红色精品国产亚洲av| 国产高潮美女av| 国产麻豆成人av免费视频| 久久热精品热| 免费在线观看成人毛片| 搡老岳熟女国产| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 精品一区二区免费观看| 成人美女网站在线观看视频| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 91狼人影院| 日本爱情动作片www.在线观看 | 日韩中字成人| 亚洲美女搞黄在线观看 | 男插女下体视频免费在线播放| 久久精品91蜜桃| 给我免费播放毛片高清在线观看| av在线蜜桃| 熟女人妻精品中文字幕| 久久人人精品亚洲av| 亚洲一区高清亚洲精品| 精品久久久久久久久亚洲 | 长腿黑丝高跟| 麻豆一二三区av精品| 亚洲无线在线观看| 国产精品99久久久久久久久| av视频在线观看入口| 亚洲经典国产精华液单| 男插女下体视频免费在线播放| 三级国产精品欧美在线观看| 午夜激情欧美在线| 午夜福利18| 人妻久久中文字幕网| 一a级毛片在线观看| 美女免费视频网站| 日本三级黄在线观看| 国产精品,欧美在线| 国内精品久久久久精免费| 变态另类丝袜制服| av在线亚洲专区| 91在线精品国自产拍蜜月| h日本视频在线播放| 一本久久中文字幕| 免费在线观看影片大全网站| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 亚洲美女黄片视频| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 久久精品国产自在天天线| 国产精品永久免费网站| 丰满的人妻完整版| 成人一区二区视频在线观看| 免费大片18禁| 婷婷精品国产亚洲av| 亚洲欧美清纯卡通| 91午夜精品亚洲一区二区三区 | 国产精品,欧美在线| 久久人妻av系列| 国产成人福利小说| 欧美日韩国产亚洲二区| 久久亚洲真实| av在线蜜桃| 麻豆成人午夜福利视频| 色在线成人网| 免费看日本二区| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 久久精品影院6| 欧美日本视频| 亚洲黑人精品在线| 三级国产精品欧美在线观看| 国产亚洲欧美98| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 亚洲无线在线观看| 国产精品国产高清国产av| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 很黄的视频免费| 欧美日韩精品成人综合77777| av黄色大香蕉| 精品久久久久久久久av| 日韩国内少妇激情av| 欧美成人a在线观看| 成人特级黄色片久久久久久久| bbb黄色大片| 搡老岳熟女国产| 亚洲天堂国产精品一区在线| 床上黄色一级片| 国产精品99久久久久久久久| 日韩高清综合在线| 日韩精品青青久久久久久| 国产v大片淫在线免费观看| 国产高清激情床上av| 久久久精品大字幕| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 国产精品1区2区在线观看.| 最近在线观看免费完整版| 国产三级在线视频| 又爽又黄a免费视频| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 久久久久免费精品人妻一区二区| 午夜福利在线观看吧| 亚洲成人久久性| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 男人舔女人下体高潮全视频| 亚洲三级黄色毛片| 日本免费a在线| 99视频精品全部免费 在线| 日韩 亚洲 欧美在线| 精品久久久久久久久亚洲 | av在线天堂中文字幕| 免费看光身美女| 午夜福利视频1000在线观看| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 亚洲自偷自拍三级| 国产精品99久久久久久久久| 99久久精品国产国产毛片| 亚洲真实伦在线观看| 欧美极品一区二区三区四区| 美女黄网站色视频| 成人欧美大片| 日日干狠狠操夜夜爽| 又紧又爽又黄一区二区| 很黄的视频免费| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 九色国产91popny在线| 久久久久久大精品| 亚洲经典国产精华液单| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 一区福利在线观看| 亚洲在线自拍视频| 校园人妻丝袜中文字幕| 身体一侧抽搐| 特大巨黑吊av在线直播| 变态另类丝袜制服| 亚洲av五月六月丁香网| 日韩亚洲欧美综合| 少妇人妻一区二区三区视频| 天堂网av新在线| 中文字幕熟女人妻在线| 欧美区成人在线视频| 久久精品国产亚洲网站| 99久久中文字幕三级久久日本| 成人欧美大片| 国产精品久久久久久av不卡| 欧美+亚洲+日韩+国产| 久久精品国产亚洲av天美| 久久人人爽人人爽人人片va| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 亚洲av熟女| 麻豆久久精品国产亚洲av| 国产精品久久久久久久久免| АⅤ资源中文在线天堂| 免费av观看视频| videossex国产| av天堂在线播放| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 99视频精品全部免费 在线| 韩国av在线不卡| 亚洲av.av天堂| 亚洲无线观看免费| 国内精品宾馆在线| 3wmmmm亚洲av在线观看| 99久久精品一区二区三区| 69av精品久久久久久| 国产乱人视频| 日本在线视频免费播放| 听说在线观看完整版免费高清| 日韩中文字幕欧美一区二区| 欧美丝袜亚洲另类 | 尾随美女入室| 日本欧美国产在线视频| eeuss影院久久| 精品国内亚洲2022精品成人| 男女视频在线观看网站免费| 亚洲精品在线观看二区| 十八禁国产超污无遮挡网站| 黄色视频,在线免费观看| 久久精品91蜜桃| 亚洲成a人片在线一区二区| 亚洲美女视频黄频| 欧美日本视频| 国模一区二区三区四区视频| 成人国产一区最新在线观看| 午夜久久久久精精品| 极品教师在线免费播放| 亚洲一区二区三区色噜噜| 美女高潮的动态| 香蕉av资源在线| 国产亚洲精品综合一区在线观看| a在线观看视频网站| 男人舔奶头视频| 国产 一区 欧美 日韩| 最近中文字幕高清免费大全6 | 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 免费看a级黄色片| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 欧美激情在线99| 波多野结衣高清无吗| 一本精品99久久精品77| 欧美性感艳星| 亚洲成人久久性| 别揉我奶头 嗯啊视频| 99九九线精品视频在线观看视频| 麻豆成人av在线观看| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 亚洲综合色惰| 内射极品少妇av片p| 国产淫片久久久久久久久| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 18+在线观看网站| 国模一区二区三区四区视频| 国产 一区精品| 可以在线观看毛片的网站| 在线观看午夜福利视频| 久久久午夜欧美精品| 精品久久久噜噜| 亚洲精华国产精华精| 日韩欧美精品v在线| 日韩一区二区视频免费看| 男女视频在线观看网站免费| 2021天堂中文幕一二区在线观| 欧美最黄视频在线播放免费| 97热精品久久久久久| 搡老岳熟女国产| 色综合婷婷激情| 性色avwww在线观看| 国产一区二区在线观看日韩|