不同加工方法對雪峰山天麻主要成分含量的影響研究

◎ 范煒平，陳妮妮，伍賢進(jìn)，方 偉,3

（1.懷化學(xué)院 生物與食品工程學(xué)院，湖南 懷化 418008；2.山地生態(tài)食品精深加工湖南省普通高等學(xué)校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南 懷化 418008；3.民族藥用植物資源研究與利用湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南 懷化 418008）

天麻（Gastrodia elata）為蘭科植物天麻的干燥塊莖，具有息風(fēng)止痙、平抑肝陽、祛風(fēng)通絡(luò)、神經(jīng)保護(hù)、降血壓和抗驚厥等功效[1-2]。天麻主要含天麻素、對羥基苯甲醇、蛋白質(zhì)、多糖以及微量元素等化學(xué)成分。目前對于天麻加工方法多為蒸煮或硫磺熏蒸后干燥或直接干燥。本實(shí)驗(yàn)采取4種加工方法進(jìn)行對比，首先是傳統(tǒng)的煮制與蒸制工藝，其操作簡單成本低，其中蒸制工藝較其他研究略有不同，是采取蒸汽滅菌鍋蒸制?？紤]到這2種加工方法都會使天麻與水接觸后再進(jìn)行干燥，所以增加直接殺青干燥方法作對比。此外，本實(shí)驗(yàn)還采用一種貴州民間糯米合蒸法。這4種方法較為全面且糯米合蒸法現(xiàn)無人研究，遂將其加入本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行研究，與其他幾種方法進(jìn)行比較，以期為雪峰山天麻的綜合深加工利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料和設(shè)備

新鮮天麻樣品，2019年11月采自湖南省綏寧市，經(jīng)懷化學(xué)院伍賢進(jìn)教授鑒定為蘭科植物天麻G. elata的塊莖。101-3A型電熱鼓風(fēng)干燥箱、循環(huán)水真空泵、UV-1800紫外分光光度計(jì)和中草藥粉碎機(jī)等。

1.2 天麻預(yù)處理

首先將新鮮天麻清洗晾干切片處理，取3 kg左右的天麻進(jìn)行120 ℃殺青30 min、70 ℃恒溫干燥箱烘干至恒重（A組）。取3組3 kg左右的天麻分別放入高壓蒸汽滅菌鍋蒸40 min（B組）、沸水煮24 min（C組）、放于泡了12 h的8 kg糯米中蒸90 min（D組），70 ℃烘干至恒重后粉碎，過60目篩，得到天麻樣品粉末放入干燥器中備用。

1.3 多糖提取實(shí)驗(yàn)

每組精密稱取3份干燥天麻粉末約0.25 g，放入圓底燒瓶內(nèi)加150 mL 80%的乙醇混勻，將圓底燒瓶放入恒溫水浴鍋中進(jìn)行回流，1 h后取出燒瓶趁熱過濾，倒掉廢棄濾液，吸取10 mL 80%的熱乙醇清洗燒瓶內(nèi)的殘?jiān)?次后再次過濾，將濾紙與殘?jiān)徊⒘粼趫A底燒瓶內(nèi)，加入150 mL的蒸餾水再次回流1 h，取出趁熱過濾后用10 mL熱蒸餾水洗滌燒瓶內(nèi)殘?jiān)?次，丟棄殘?jiān)鼘V液與洗液合并，放冷后轉(zhuǎn)移至250 mL容量瓶內(nèi)并定容，搖勻待測。

1.4 蛋白質(zhì)提取實(shí)驗(yàn)

每組精密稱取3份干燥天麻粉末約0.1 g，放入干燥研缽中，加幾滴磷酸緩沖液均勻研磨至勻漿后轉(zhuǎn)移至平底抽濾瓶中抽濾。抽濾過后再用少許磷酸緩沖液進(jìn)行沖洗再次抽濾，將濾液取出置于25 mL容量瓶中，用磷酸緩沖液定容，搖勻待測。

1.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

1.5.1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

精確吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液0 mL、0.l mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL和0.6 mL分別置于7個(gè)10 mL具塞刻度試管中，蒸餾水定容至2 mL，搖勻后浸于冰水浴，分別滴加0.2%的蒽酮-硫酸溶液8 mL，搖勻，沸水浴加熱10 min，再冰水浴冷卻10 min，于582 nm處測定吸光值。以吸光值為縱坐標(biāo)y，葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)x，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程y=3.540 3x+0.039 3，r=0.999 1。

1.5.2 蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

在試管中分別加入 0.1 mL 0 μg·mL-1、20 μg·mL-1、40 μg·mL-1、60 μg·mL-1、80 μg·mL-1和 100 μg·mL-1的牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后再避光加入5 mL考馬斯亮藍(lán)G-250溶液。充分搖勻后，避光靜置2 min，于595 nm處測定吸光值。以吸光值作為縱坐標(biāo)y，牛血清蛋白濃度作為橫坐標(biāo)x，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出回歸方程y=0.005 3x+0.081 4，r=0.999 1。

1.6 天麻多糖與蛋白含量測定

1.6.1 天麻多糖含量測定

精密量取上述1.3方法制得的多糖溶液1 mL，置10 mL具塞干燥試管中（平行3組），加水1 mL，搖勻，冰水浴中緩緩滴加0.2%蒽酮-硫酸各8 mL，混勻，后置于沸水浴中加熱10 min，再置于冰水浴中冷卻10 min，在582 nm波長處測得吸光值。將吸光值代入1.5.1回歸方程，即得所測天麻樣品中多糖含量。

1.6.2 天麻蛋白含量測定

精密量取上述1.4方法制得的蛋白溶液1 mL，置10 mL具塞干燥試管中（平行3組），加水1 mL，然后再避光加入5 mL考馬斯亮藍(lán)G-250溶液。充分搖勻后，避光靜置2 min，于595 nm處測得吸光值。將吸光值代入1.5.2回歸方程，即得所測天麻樣品中蛋白含量。

1.7 天麻素與對羥基苯甲醇測定

色譜條件：色譜柱為Wondasil C18柱，以乙腈-0.05%磷酸溶液（3∶97）為流動相；檢測波長為220 nm；進(jìn)樣體積為5 μL。

標(biāo)準(zhǔn)品制備：取天麻素和對羥基苯甲醇對照品，加乙腈-水（3∶97）混合溶液制成每1 mL含天麻素50 μg、對羥基苯甲醇25 μg的混合溶液。

供試品制備：精密稱取天麻粉末約2 g置于具塞錐形瓶中，加入稀乙醇50 mL，稱定重量后超聲處理（功率120 W，頻率40 kHz）30 min，放冷后再次稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減少的重量，抽濾，取續(xù)濾液10 mL，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中濃縮至近干無醇味，殘?jiān)眠m量乙腈-水（3∶97）混合溶液進(jìn)行溶解，轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中，用乙腈-水（3∶97）混合溶液稀釋至刻度，搖勻抽濾（0.45 μm微孔濾膜），取濾液。將各樣品的濾液用EP管保存并貼好標(biāo)簽。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同加工方法對天麻多糖與蛋白含量的影響

由表1可知，在多糖含量的測定中，C組的多糖含量最高，其次是A組、B組、D組，且組間兩兩比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，所以就多糖含量來看，煮制法優(yōu)于其他方法。在蛋白質(zhì)含量的測定中，A組＞D組＞B組和C組，除B組和C組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義之外（p＞0.05），其余各組間比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05），就蛋白質(zhì)含量這一因素來看，直接殺青干燥法優(yōu)于其他方法。

表1 不同加工方法對天麻多糖與蛋白含量影響表

2.2 不同加工方法對天麻的天麻素與對羥基苯甲醇含量的影響

根據(jù)1.7的色譜條件，記錄天麻素和對羥基苯甲醇標(biāo)準(zhǔn)品及各組天麻樣品在30 min內(nèi)的高效液相色譜圖（圖1）。其中天麻素的出峰時(shí)間為12.5 min，對羥基苯甲醇出峰時(shí)間為24 min。利用峰面積計(jì)算出所測樣品中天麻素和對羥基苯甲醇的含量。

由表2可知，從對羥基苯甲醇含量來看，C組最高，A組最低；然而從天麻素含量來看，A組最高，D組最低。其原因可能是由于天麻中的酚類成分，如對羥基苯甲醇，會在一定的溫度、濕度和壓力條件下發(fā)生降解反應(yīng)，轉(zhuǎn)化形成天麻素，從而使得測定的天麻素含量A組要高于D組，而對羥基苯甲醇含量A組卻低于D組[3]。

表2 各組天麻素與對羥基苯甲醇的含量表

3 結(jié)論與討論

本實(shí)驗(yàn)4組樣品中天麻素和對羥基苯甲醇含量之和均達(dá)到《中華人民共和國藥典》的標(biāo)準(zhǔn)（即天麻素和對羥基苯甲醇含量之和不小于0.25%）。其中以多糖含量為指標(biāo)時(shí)得出的結(jié)論與周碧乾等[4]一致，均為煮制法優(yōu)于蒸制法。但在以天麻素和對羥基苯甲醇為指標(biāo)的檢測中，周碧乾等[4]實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示蒸制和煮制這兩組天麻素含量分別為（4.57±0.65）mg·g-1和（3.45±1.16）mg·g-1，對羥基苯甲醇含量分別為（0.74±0.28）mg·g-1和（1.03±0.82）mg·g-1，可見天麻素和對羥基苯甲醇含量均低于周碧乾等的結(jié)果?？赡苁怯捎谥鼙糖炔捎玫氖翘荻认疵撉疫M(jìn)樣量為本實(shí)驗(yàn)的兩倍，而本實(shí)驗(yàn)采用的色譜條件為《中華人民共和國藥典》規(guī)定條件。

此外本實(shí)驗(yàn)采用新加工方法糯米合蒸法，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明此法除含水量較其他幾種方法較少外，在4種成分含量指標(biāo)上均無優(yōu)勢。但與天麻合蒸的糯米是否具有某種有益的功能也有待研究，可以針對糯米合蒸法設(shè)置其他多個(gè)指標(biāo)進(jìn)行詳細(xì)研究。經(jīng)過分析對比，本實(shí)驗(yàn)中采用的多糖提取法與陳琛等[5]采用的提取方法類似，得出的多糖含量也與之相近。但王銳等[6]測得的天麻多糖含量為10%～20%，與其相比，本實(shí)驗(yàn)多糖含量偏少，推測可能是在第2次回流后過濾環(huán)節(jié)損失了較多的多糖，以至于最后測定的結(jié)果偏低。