谷子HSP90基因家族鑒定及干旱脅迫下表達分析

顧鵬鵬 馬鑫磊 姚銳 高慧 林小虎

摘要：熱激蛋白90 （heat shock proteins 90，HSP90） 是廣泛存在于植物中的一種高度保守的細胞伴侶蛋白家族，參與調(diào)節(jié)和維持各種蛋白質(zhì)的構象，在植物的生物和非生物脅迫應激反應中起著重要作用。為探討谷子HSP90基因家族（SiHSP90s）在干旱脅迫下的潛在抗旱功能，對SiHSP90s進行鑒定，并分析其在干旱脅迫下的表達情況。共鑒定出9個SiHSP90基因分別位于谷子5條染色體上。理化性質(zhì)分析顯示SiHSP90s蛋白長度為403～817個氨基酸，分子量為46.1～92.7 ku。系統(tǒng)進化分析顯示SiHSP90s分為Ⅰ型和Ⅱ型2個亞家族?；蚪Y(jié)構與蛋白基序分析顯示，Ⅰ型和Ⅱ型亞族成員的外顯子數(shù)量分別在2～3個和12～20個之間，且均含有保守的HATPase_c（PF02518）和HSP90（PF00183）結(jié)構域。順式元件分析表明，SiHSP90s基因可以應對不同的非生物脅迫。qRT-PCR結(jié)果表明，干旱脅迫下SiHSP90.2和SiHSP90.3轉(zhuǎn)錄水平極顯著上調(diào)。這些結(jié)果為闡明SiHSP90家族的進化關系以及進一步研究SiHSP90基因的功能特性提供了有價值的信息。

關鍵詞：熱激蛋白90;基因家族;干旱脅迫;表達分析;谷子

中圖分類號： S515.01? 文獻標志碼： A

文章編號：1002-1302（2022）06-0045-08

收稿日期：2021-07-06

基金項目：國家“十三五”重點研發(fā)計劃（編號：2019YFD1001701-2）;河北省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術體系創(chuàng)新團隊（雜糧雜豆）項目（編號：HBCT2018070404）;河北省自然科學基金（編號：C2019407001）;河北省高等學校科學技術研究項目（編號：QN2020154）;河北省在讀研究生創(chuàng)新能力培養(yǎng)資助項目（編號：CXZZSS2021152）。

作者簡介：顧鵬鵬（1994—），男，山東濱州人，碩士研究生，主要從事植物分子遺傳與基因工程研究。E-mail：1006555310@qq.com。

通信作者：林小虎，博士，教授，主要從事植物遺傳學研究。E-mail：xiaohulin2008@163.com。

作物經(jīng)常遭受各種非生物脅迫，包括干旱[1]、鹽堿[2]、低溫[3]和高熱[4]等，其會對作物的產(chǎn)量和品質(zhì)產(chǎn)生嚴重影響。作物在長期進化過程中形成了完善的抵御非生物脅迫的應答機制。其中熱激蛋白（heat shock protein，HSP）被證實具有保護細胞抵御有害刺激的功能[5]，其按分子量大小可分為小分子HSP（sHSP）、HSP60、HSP70、HSP90和HSP100家族[6]。其中HSP90是一種腺苷三磷酸（ATP）依賴的分子伴侶蛋白，在原核和高等真核生物中均高度保守[7]。HSP90主要由3個高度保守的結(jié)構域組成：與底物結(jié)合的約25 ku的C端結(jié)構域、35 ku的中間結(jié)構域和與ATP結(jié)合的12 ku的N端結(jié)構域[8-9]。在真核生物中，HSP90的N端結(jié)構域和中間結(jié)構域之間有一個長的、高電荷的連接結(jié)構域[10]。HSP90中與ATP結(jié)合的區(qū)域通常處于閉合狀態(tài)[11]，N端ATP酶活性較低[12]。

HSP90具有穩(wěn)定蛋白的能力;在變性條件下，HSP90能防止功能蛋白失穩(wěn)聚集并促進非活性蛋白質(zhì)復性[13]。在真菌和動物中，HSP90在脅迫信號轉(zhuǎn)導中發(fā)揮廣泛的作用，如類固醇激素受體、蛋白激酶和轉(zhuǎn)錄因子的折疊，以及激活底物來啟動脅迫信號轉(zhuǎn)導[14-15]。在植物中，HSP90的研究主要集中在進化分析和生理功能方面[16-17]。研究表明，HSP90與生長素、油菜素類固醇、細胞分裂素和茉莉酸等激素信號轉(zhuǎn)導有直接的關系[18]。植物中HSP90不僅與多激素之間具有直接關系，同時與非生物脅迫響應密切相關。在擬南芥中，AtHSP90.2、AtHSP90.5和AtHSP90.7的過表達增強了植物對鹽和干旱脅迫的敏感性，但對高濃度Ca2+的耐受性提高[19];在煙草中部分NtHSP90在非生物脅迫響應調(diào)控中起重要作用，例如NtHSP90-4、NtHSP90-5和NtHSP90-9在脫落酸（ABA）、干旱、鹽、冷熱脅迫的誘導下表達上調(diào)，而NtHSP90-6和NtHSP90-7不受其誘導[20]。最近在植物中進行的蛋白質(zhì)組學和磷蛋白質(zhì)組學[21-23]分析表明，在干旱和鹽堿脅迫下都存在大量的HSP90蛋白，其可能參與了脅迫響應過程中的信號轉(zhuǎn)導。

谷子（Setaria italica L.）是一種耐旱、耐貧瘠的糧食作物，廣泛種植于世界干旱和半干旱地區(qū)[24]。因谷子具有C4光合特性;對干旱、高溫、鹽堿具有顯著的耐性;且與多種生物能源禾本科作物的遺傳關系密切，被認為是研究C4光合特性、非生物脅迫耐性和生物燃料特性的模式作物[25]。到目前為止，關于谷子HSP90基因家族成員的鑒定以及在干旱脅迫下的表達分析未見報道。本研究基于已測序的谷子基因組[26]，對谷子HSP90基因家族成員進行鑒定，并分析了干旱脅迫下HSP90家族成員的基因表達情況，為進一步探究HSP90的抗旱功能提供理論基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗材料與培養(yǎng)條件

供試谷子品種為豫谷1號，種植于智能人工氣候箱的育苗盆中，營養(yǎng)土、蛭石混合比例為2 ∶1。培養(yǎng)箱條件為溫度26/20 ℃，光周期16/8 h，濕度65%。

1.2 谷子HSP90基因家族鑒定

利用HSP90保守結(jié)構域的隱馬爾可夫模型文件（PF00183，http：//pfam.xfam.org/），從谷子全基因組（https：//phytozome.jgi.doe.gov/pz/portal.html#）篩選候選的HSP90基因家族成員。利用SMART （http：//smart.embl.de/smart/set_mode.cgi？GENOMIC=1）、Pfam和NCBI-CDD（https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/cdd/wrpsb.cgi）三大數(shù)據(jù)庫對候選的谷子HSP90基因家族成員進行驗證。利用UniProtKB/Swiss-Prot（https：//web.expasy.org/protparam/）對谷子HSP90基因家族成員理化性質(zhì)進行分析。

1.3 谷子近緣植物HSP90基因家族成員鑒定及系統(tǒng)發(fā)育分析

編輯 perl 腳本，提取擬南芥、谷子（豫谷1號）、二穗短柄草、水稻、玉米、高粱、萊茵衣藻的HSP90基因的氨基酸序列，利用 ClustalW 軟件對保守結(jié)構域進行序列比對，根據(jù)序列比對的結(jié)果以及擬南芥中HSP90基因的分類標準，將谷子中的 HSP90基因分為 2個亞型，同時根據(jù)保守結(jié)構域比對結(jié)果，利用 MEGA7構建了擬南芥、二穗短柄草、水稻、玉米、高粱、萊茵衣藻和谷子HSP90基因的 N-J 無根樹，bootstrap值設為 1000。

1.4 谷子HSP90基因結(jié)構和保守結(jié)構域分析

利用 GSDS（http：//gsds.gao-lab.org/）分析谷子中每個 HSP90基因 3′UTR、 5′UTR、內(nèi)含子和外顯子的組成，CDS 在基因組上的位置信息來自 JGI 數(shù)據(jù)庫，利用在線軟件MEME分析每個HSP90基因中存在的保守模體。

1.5 谷子HSP90基因家族染色體定位

根據(jù)谷子HSP90基因家族的基因號在Phytozome網(wǎng)站查詢谷子各HSP90家族成員位置信息，利用MapChart軟件繪制谷子HSP90基因家族染色體定位圖。

1.6 谷子HSP90基因啟動子區(qū)順式作用元件分析

在Phytozome中下載谷子的全基因組序列和基因結(jié)構注釋信息GFF3文件，通過Tbtools軟件的Gtf/Gff3 Sequences Extractor功能提取所有基因CDS序列上游2 000 bp的序列，再通過Fasta Extractor提取HSP90基因家族成員的啟動子區(qū)序列，提交至PlantCare（http：//bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/plantcare/html/）網(wǎng)站進行順式作用元件預測。將得到的預測信息分類匯總，并通過Tbtools軟件的Simple Biosequence Viewer將結(jié)果可視化。

1.7 干旱脅迫下谷子HSP90基因?qū)崟r熒光定量PCR

對照組正常澆水保持土壤濕潤;干旱組5葉期時停止?jié)菜寥篮实陀?0%時取材。取材后液氮速凍并于-80 ℃儲存?zhèn)溆谩Υ嬗?-80 ℃ 的對照組和干旱組的谷子幼苗取全植株，提取RNA（TaKaRa MiniBEST Plant RNA Extraction Kit試劑盒）并反轉(zhuǎn)錄為cDNA（UEIris II RT-PCR System for First-Strand cDNA Synthesis）-20 ℃保存?zhèn)溆?。對SiHSP90家族的所有成員編碼序列設計實時熒光定量PCR引物（表1），產(chǎn)物片段大小限定在80～200 bp 之間。實時熒光定量PCR使用 BIO-RAD CFX connect TM定量PCR儀進行擴增，以谷子 EF-1a-2 作為內(nèi)參。擴增體系10 μL，其中cDNA 0.5 μL，正反方向引物各0.3 μL，AugeGreenTM qPCR Master Mix 5 μL，ddH2O 3.9 μL。程序設定為95 ℃預變性2 min;95 ℃變性5 s，60 ℃退火和延伸30 s，共45個循環(huán)。試驗設置3次生物學重復且每個樣品設置3次技術重復。試驗數(shù)據(jù)采用2-△△CT法計算各基因表達量。

2 結(jié)果與分析

2.1 谷子HSP90家族成員鑒定及蛋白理化性質(zhì)分析

本研究利用隱馬爾可夫模型（PF00183）在谷子中共鑒定得到9個編碼HSP90的基因，分別命名為SiHSP90.1～SiHSP90.9（表2）。預測分析谷子HSP90蛋白序列的氨基酸數(shù)目、分子量、等電點等理化性質(zhì)參數(shù)，結(jié)果顯示SiHSP90家族蛋白的氨基酸殘基數(shù)目在403～817個之間，其中SiHSP90.1氨基酸數(shù)目最少，SiHSP90.3氨基酸數(shù)目最多;蛋白分子量在46.083 29～92.747 37 ku之間，其中SiHSP90.4最大，SiHSP90.1最小;等電點分析顯示，SiHSP90.1～SiHSP90.9均為酸性蛋白;不穩(wěn)定系數(shù)分析表明SiHSP90.3、SiHSP90.4、SiHSP90.7、SiHSP90.9為穩(wěn)定蛋白，SiHSP90.1、SiHSP90.2、SiHSP90.5、SiHSP90.6、SiHSP90.8為不穩(wěn)定蛋白;脂肪指數(shù)分析顯示SiHSP90蛋白家族成員的熱穩(wěn)定性均較強。

2.2 HSP90基因家族系統(tǒng)進化、基因結(jié)構和保守基序分析

為了探究谷子HSP90基因的起源和進化，本研究分別鑒定萊茵衣藻、擬南芥、二穗短柄草、水稻、高粱、玉米和谷子7個代表物種的HSP90基因家族成員并構建系統(tǒng)進化樹。在萊茵衣藻、擬南芥、二穗短柄草、水稻、高粱、玉米和谷子中分別鑒定出3、7、8、9、7、 11、 9個HSP90家族成員。根據(jù)進化樹的分支將7個代表物種中的HSP90基因分為Ⅰ和Ⅱ 2個亞家族（圖1）。在Ⅰ型亞族中萊茵衣藻、擬南芥、二穗短柄草、水稻、高粱、玉米和谷子分別鑒定出1、4、4、5、4、5、4個成員;在Ⅱ型亞族中萊茵衣藻、擬南芥、二穗短柄草、水稻、高粱、玉米和谷子分別鑒定出2、3、4、4、3、6、5個成員。本研究還發(fā)現(xiàn)了12個基因同源，占HSP90基因總數(shù)的22.22%。其中擬南芥1對（AtHSP90.2和AtHSP90.3），谷子2對（SiHSP90.1和SiHSP90.2，SiHSP90.6和SiHSP90.8），水稻1對（OsHSP90.6和OsHSP90.7），二穗短柄草1對（BdHSP90.3和BdHSP90.4），高粱1對（SbHSP90.1和SbHSP90.2）。

SiHSP90家族的基因結(jié)構和保守基序分析結(jié)果表明，Ⅰ型亞族成員的外顯子數(shù)量較少，在2～3個之間;Ⅱ型亞族成員的外顯子數(shù)量較多，在12～20個之間（圖2）。在Ⅰ型亞族中，SiHSP90.9基因結(jié)構與其他成員存在較大區(qū)別，其含有一個較長的內(nèi)含子序列，約占基因全長的70%。在Ⅱ型亞族中， SiHSP90.2和SiHSP90.5外顯子和內(nèi)含子排布最為相似;SiHSP90.1沒有UTR區(qū)，SiHSP90.4的5′UTR區(qū)最長。保守基序分析顯示，SiHSP90家族含有10個基序（Motif），這些Motif的長度為21～96個氨基酸。通過Pfam在線軟件對10個Motif的結(jié)構域進行分析，結(jié)果顯示Motif 7屬于HATPase_c結(jié)構域，其余Motif均屬于HSP90保守結(jié)構域。

2.3 谷子HSP90家族染色體定位分析

為了探究SiHSP90s在染色體上的位置，本研究繪制了SiHSP90s的染色體位置圖（圖3）。結(jié)果表明9個家族成員分別定位在谷子的第2、3、4、6和7號染色體上，其中SiHSP90.1和SiHSP90.2分別定位于第2號染色體上的6.01和34.60 Mb處;SiHSP90.3位于第3號染色體的45.08 Mb處，SiHSP90.4位于第4號染色體的39.62 Mb處;SiHSP90.5～SiHSP90.8位于第6號染色體的 31.46～32.08 Mb之間;SiHSP90.9定位在第7號染色體的1.56 Mb處。6號染色體上SiHSP90成員最多，有4個成員;3、4和7號染色體上SiHSP90成員最少，均為1個。

2.4 谷子HSP90啟動子區(qū)順式作用元件分析

為進一步探究SiHSP90在非生物脅迫中的調(diào)控機制，對SiHSP90基因啟動子區(qū)（2 000 bp）進行順式作用元件分析（圖4-A），發(fā)現(xiàn)SiHSP90家族啟動子區(qū)共存在237個順式作用元件，可以分為3類：非生物脅迫響應類元件、激素響應類元件和光響應類元件。對于每個SiHSP90而言，光響應類作用元件分布廣泛，同時每個基因都含有非生物脅迫響應類元件和激素響應類元件。非生物脅迫響應類元件主要有干旱誘導相關作用元件MBS（MYB binding site to drought-inducibitity）和低溫應激相關元件LTR（low temperature response element）。其中MBS位于除SiHSP90.4外的所有基因上，SiHSP90.2、SiHSP90.3、SiHSP90.6、SiHSP90.7、SiHSP90.8和SiHSP90.9啟動子區(qū)均含有1個MBS，SiHSP90.1和SiHSP90.5啟動子區(qū)分別含有3、2個MBS;LTR位于SiHSP90.5和SiHSP90.9基因上，元件的數(shù)量分別為1、3。激素響應類元件主要有脫落酸應答元件ABRE、生長素應答元件TGA-element和 AuxRR-core、茉莉酸甲酯應答元件CGTCA-motif/TGACG-motif、赤霉素應答元件GARE-motif和 P-box、水楊酸應答元件TCA-element。

對SiHSP90家族各成員上的3類順式作用元件的數(shù)量進行統(tǒng)計分析， 發(fā)現(xiàn)除SiHSP90.4外其他基因均含有非生物脅迫響應相關作用元件，且非生物脅迫響應相關元件的數(shù)量要遠低于激素響應類元件和光響應類元件（圖4-B）。圖4-C為各順式作用元件在SiHSP90的2個亞家族中的分布情況，（A）、（B）、（C）分別表示激素響應類、非生物脅迫響應類和光響應類作用元件。結(jié)果顯示除部分順式作用元件外，大部分元件在谷子HSP90上的2個亞家族中都有分布，且在Ⅱ型亞族中的數(shù)量多于Ⅰ型亞族。

2.5 谷子HSP90家族干旱脅迫下表達譜

為了驗證SiHSP90家族在干旱脅迫中的表達情況，通過qRT-PCR檢測了此基因家族成員在干旱脅迫下的表達模式。結(jié)果表明：SiHSP90.2和SiHSP90.3在干旱脅迫下的表達水平與對照相比極顯著上調(diào);SiHSP90.1、SiHSP90.4、SiHSP90.5、SiHSP90.6、SiHSP90.7、SiHSP90.8和SiHSP90.9的表達水平與對照相比未見顯著變化（圖5）。

3 討論與結(jié)論

HSP90s作為分子伴侶，可以抑制變性蛋白的不可逆聚集，從而增強植物的耐旱性[13]。目前，對HSP90家族成員鑒定及功能分析已在水稻[12]、二穗短柄草[27]、煙草[20]、大豆[28]、番茄[29]、黃瓜[30]等物種中報道，而谷子中HSP90家族成員鑒定及功能分析尚不清楚。本研究從谷子基因組中共鑒定到9個HSP90家族成員，根據(jù)理化性質(zhì)分析谷子HSP90家族成員編碼蛋白熱穩(wěn)定性均較強，推測可能與其獨特的基因功能相關。本研究發(fā)現(xiàn)一個有趣的現(xiàn)象，谷子中8個HSP90家族成員蛋白的分子量均在 90 ku 左右，而SiHSP90.1蛋白分子量只有46 ku，且該蛋白氨基酸序列的長度也比其他成員的氨基酸序列長度要小，推測該基因可能在進化過程中部分序列丟失，煙草HSP90-4[20]和番茄HSP90-6[31]蛋白分子量也在40 ku左右。在萊茵衣藻、擬南芥、二穗短柄草、水稻、高粱、玉米和谷子中鑒定到的HSP90家族成員數(shù)量差別較大，在萊茵衣藻中鑒定到的基因數(shù)量較少，這可能與其屬于較為低等的綠藻門植物且基因組小有關;而隸屬于被子植物門的擬南芥、二穗短柄草、水稻、高粱、玉米和谷子基因數(shù)量相似，但對于同樣是禾本科的玉米來說其HSP90家族成員的數(shù)量相比其他物種略高，推測這可能與玉米基因組較大有關，從總體上看高等植物HSP90家族成員數(shù)量多于低等植物。

為了進一步了解物種的進化關系，對7個代表物種HSP90氨基酸序列構建系統(tǒng)發(fā)育樹，發(fā)現(xiàn)谷子與水稻、高粱和二穗短柄草等物種親緣關系較近，與萊茵衣藻、擬南芥親緣關系較遠;推測高等植物（擬南芥、二穗短柄草、水稻、高粱、玉米和谷子）中的HSP90家族成員可能是從低等植物萊茵衣藻HSP90家族成員逐漸復制、進化而來。根據(jù)系統(tǒng)發(fā)育樹分支，可將谷子HSP90基因分為Ⅰ和Ⅱ2個亞家族。在擬南芥中，Ⅰ型亞族蛋白AtHSP90.1～AtHSP90.4定位于細胞質(zhì)中，而Ⅱ型亞族蛋白AtHSP90.5、AtHSP90.6和AtHSP90.7分別定位于葉綠體、線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中[32]。SiHSP90.6～SiHSP90.9與擬南芥Ⅰ型亞族蛋白同源，推測其定位于細胞質(zhì)中;SiHSP90.1～SiHSP90.5與擬南芥Ⅱ型亞族蛋白同源，推測其定位于細胞器中?；蚪Y(jié)構在多基因家族的進化中起到重要作用，其中內(nèi)含子的發(fā)育是基因組進化的一個重要過程，也是物種進化的一種適應性措施[33]。谷子HSP90s的Ⅰ型亞族成員擁有1～2個內(nèi)含子，而Ⅱ型亞族成員擁有11～19個內(nèi)含子。內(nèi)含子的數(shù)量越少，植物適應不同發(fā)育過程和環(huán)境刺激的能力就越強[34]。分析谷子HSP90家族成員的基因結(jié)構按照其差異的不同也可劃分為2個亞型，這與該家族系統(tǒng)發(fā)育進化樹結(jié)果一致。大多數(shù)SiHSP90家族成員間的保守基序分布類似，表明該家族成員間可能具有相似的功能。由Motif 7構成的HATPase_c結(jié)構域是ADP/ATP結(jié)合位點，具有ATPase活性[35]，其余9個Motif共同組成的HSP90保守結(jié)構域在維持HATPase_c結(jié)構域的完整活性中具有關鍵作用[36]。基因家族的擴展和基因組進化機制主要依賴于基因復制事件[37]，基因定位分析顯示SiHSP90.5～SiHSP90.8是串聯(lián)重復基因，推測基因的串聯(lián)重復導致SiHSP90家族成員的擴展，促進了該家族在谷子基因組進化中新生物學功能的出現(xiàn)。本研究在SiHSP90s啟動子區(qū)發(fā)現(xiàn)了脫落酸應答元件ABRE以及干旱誘導元件MBS，推測SiHSP90對干旱的響應可能是通過ABA途徑實現(xiàn)的[38]。利用qRT-PCR驗證干旱脅迫下SiHSP90家族的表達水平，結(jié)果顯示SiHSP90.2和SiHSP90.3表達水平與對照相比極顯著上調(diào)，推測這2個基因在參與谷子干旱脅迫的響應中發(fā)揮了一定的作用。

本研究共鑒定出9個SiHSP90基因，對其系統(tǒng)進化發(fā)育、基因結(jié)構、染色體位置、脅迫相關順式元件以及在干旱脅迫中的表達模式進行分析，這些結(jié)果可為闡明SiHSP90家族的進化關系以及進一步研究SiHSP90基因的功能特性提供有價值的信息。

參考文獻：

[1]Chaves M M，Maroco J P，Pereira J S. Understanding plant responses to drought-from genes to the whole plant[J]. Functional Plant Biology，2003，30（3）：239-264.

[2]Fatima A，Hussain S，Hussain S，et al. Differential morphophysiological，biochemical，and molecular responses of maize hybrids to salinity and alkalinity stresses[J]. Agronomy，2021，11（6）：1150.

[3]Nakashima K，Yamaguchi-Shinozaki K.Regulons involved in osmotic stress-responsive and cold stress-responsive gene expression in plants[J]. Physiologia Plantarum，2006，126（1）：62-71.

[4]Gao G Z，Hu J H，Zhang X J，et al. Transcriptome analysis reveals genes expression pattern of seed response to heat stress in Brassica napus L.[J]. Oil Crop Science，2021，6（2）：87-96.

[5]Sangster T A，Queitsch C.The HSP90 chaperone complex，an emerging force in plant development and phenotypic plasticity[J]. Current Opinion in Plant Biology，2005，8（1）：86-92.

[6]Al-Whaibi M H.Plant heat-shock proteins：a mini review[J]. Journal of King Saud University-Science，2011，23（2）：139-150.

[7]Pearl L H，Prodromou C.Structure and in vivo function of Hsp90[J]. Current Opinion in Structural Biology，2000，10（1）：46-51.

[8]Terasawa K，Minami M，Minami Y.Constantly updated knowledge of Hsp90[J]. Journal of Biochemistry，2005，137（4）：443-447.

[9]Pearl L H，Prodromou C.Structure and mechanism of the Hsp90 molecular chaperone machinery[J]. Annual Review of Biochemistry，2006，75：271-294.

[10]Hainzl O，Lapina M C，Buchner J，et al. The charged linker region is an important regulator of Hsp90 function[J]. Journal of Biological Chemistry，2009，284（34）：22559-22567.

[11]Sung N，Lee J，Kim J H，et al. Mitochondrial Hsp90 is a ligand-activated molecular chaperone coupling ATP binding to dimer closure through a coiled-coil intermediate[J]. PNAS，2016，113（11）：2952-2957.

[12]Raman S，Suguna K.Functional characterization of heat-shock protein 90 from Oryza sativa and crystal structure of its N-terminal domain[J]. Acta Crystallographica.Section F，Structural Biology Communications，2015，71（Pt 6）：688-696.

[13]Morán Luengo T，Mayer M P，Rüdiger S G D.The Hsp70-Hsp90 chaperone cascade in protein folding[J]. Trends in Cell Biology，2019，29（2）：164-177.

[14]Shinozaki F，Minami M，Chiba T，et al. Depletion of Hsp90 β induces multiple defects in B cell receptor signaling[J]. The Journal of Biological Chemistry，2006，281（24）：16361-16369.

[15]Zuehlke A，Johnson J L.Hsp90 and co-chaperones twist the functions of diverse client proteins[J]. Biopolymers，2010，93（3）：211-217.

[16]Agarwal G，Garg V，Kudapa H，et al. Genome-wide dissection of AP2/ERF and HSP90 gene families in five legumes and expression profiles in chickpea and pigeonpea[J]. Plant Biotechnology Journal，2016，14（7）：1563-1577.

[17]Grigorova B，Vaseva I，Demirevska K，et al. Combined drought and heat stress in wheat：changes in some heat shock proteins[J]. Biologia Plantarum，2011，55（1）：105-111.

[18]di Donato M，Geisler M.HSP90 and co-chaperones：a multitaskers view on plant hormone biology[J]. FEBS Letters，2019，593（13）：1415-1430.

[19]Song H M，Zhao R M，F(xiàn)an P X，et al. Overexpression of AtHsp90.2，AtHsp90.5 and AtHsp90.7 in Arabidopsis thaliana enhances plant sensitivity to salt and drought stresses[J]. Planta，2009，229（4）：955-964.

[20]Song Z P，Pan F L，Yang C，et al. Genome-wide identification and expression analysis of HSP90 gene family in Nicotiana tabacum[J]. BMC Genetics，2019，20（1）：35.

[21]Lv D W，Subburaj S，Cao M，et al. Proteome and phosphoproteome characterization reveals new response and defense mechanisms of Brachypodium distachyon leaves under salt stress[J]. Molecular & Cellular Proteomics，2014，13（2）：632-652.

[22]Hao P C，Zhu J T，Gu A Q，et al. An integrative proteome analysis of different seedling organs in tolerant and sensitive wheat cultivars under drought stress and recovery[J]. Proteomics，2015，15（9）：1544-1563.

[23]Nadeem F，Ahmad Z，Ul Hassan M，et al. Adaptation of foxtail millet （Setaria italica L.） to abiotic stresses：a special perspective of responses to nitrogen and phosphate limitations[J]. Frontiers in Plant Science，2020，11：187.

[24]Lata C R，Gupta S，Prasad M.Foxtail millet：a model crop for genetic and genomic studies in bioenergy grasses[J]. Critical Reviews in Biotechnology，2013，33（3）：328-343.

[25]Muthamilarasan M，Prasad M.Advances in Setaria genomics for genetic improvement of cereals and bioenergy grasses[J]. Theoretical and Applied Genetics，2015，128（1）：1-14.

[26]Bennetzen J L，Schmutz J，Wang H，et al. Reference genome sequence of the model plant Setaria[J]. Nature Biotechnology，2012，30（6）：555-561.

[27]Zhang M，Shen Z W，Meng G Q，et al. Genome-wide analysis of the Brachypodium distachyon （L.） P. Beauv. Hsp90 gene family reveals molecular evolution and expression profiling under drought and salt stresses[J]. PLoS One，2017，12（12）：e0189187.

[28]Xu J Y，Xue C C，Xue D，et al. Overexpression of GmHsp90s，a heat shock protein 90 （Hsp90） gene family cloning from soybean，decrease damage of abiotic stresses in Arabidopsis thaliana[J]. PLoS One，2013，8（7）：e69810.

[29]Zai W S，Miao L X，Xiong Z L，et al. Comprehensive identification and expression analysis of Hsp90s gene family in Solanum lycopersicum[J]. Genetics and Molecular Research，2015，14（3）：7811-7820.

[30]Zhang K J，He S S，Sui Y H，et al. Genome-wide characterization of HSP90 gene family in cucumber and their potential roles in response to abiotic and biotic stresses[J]. Frontiers in Genetics，2021，12：584886.

[31]劉云飛，萬紅建，楊悅儉，等. 番茄熱激蛋白90的全基因組鑒定及分析[J]. 遺傳，2014，36（10）：1043-1052.

[32]Yamada K，F(xiàn)ukao Y，Hayashi M，et al. Cytosolic HSP90 regulates the heat shock response that is responsible for heat acclimation in Arabidopsis thaliana[J]. The Journal of Biological Chemistry，2007，282（52）：37794-37804.

[33]Liu H，Lyu H M，Zhu K K，et al. The emergence and evolution of intron-poor and intronless genes in intron-rich plant gene families[J]. The Plant Journal，2021，105（4）：1072-1082.

[34]Jin Z W，Chandrasekaran U，Liu A Z.Genome-wide analysis of the Dof transcription factors in Castor bean （Ricinus communis L.）[J]. Genes & Genomics，2014，36（4）：527-537.

[35]LaPointe P，Mercier R，Wolmarans A.Aha-type co-chaperones：the alpha or the Omega of the Hsp90 ATPase cycle？[J]. Biological Chemistry，2020，401（4）：423-434.

[36]Meyer P，Prodromou C，Hu B，et al. Structural and functional analysis of the middle segment of Hsp90：implications for ATP hydrolysis and client protein and cochaperone interactions[J]. Molecular Cell，2003，11（3）：647-658.

[37]Yang Z F，Zhou Y，Wang X F，et al. Genomewide comparative phylogenetic and molecular evolutionary analysis of tubby-like protein family in Arabidopsis，rice，and poplar[J]. Genomics，2008，92（4）：246-253.

[38]Muppala S，Gudlavalleti P K，Malireddy K R，et al. Development of stable transgenic maize plants tolerant for drought by manipulating ABA signaling through Agrobacterium-mediated transformation[J]. Journal，Genetic Engineering & Biotechnology，2021，19（1）：96.