原兒茶酸對脂多糖誘導(dǎo)的人牙周膜成纖維細(xì)胞炎癥反應(yīng)的保護(hù)作用及機(jī)制▲

馬 濤 時 婧 張 蕾 沈鵬鵬

(1 新疆烏魯木齊市口腔醫(yī)院藥劑科,烏魯木齊市 830002，電子郵箱：kraa9673@163.com； 2 新疆醫(yī)科大學(xué)第五附屬醫(yī)院老年病科，烏魯木齊市 830011； 3 新疆醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，烏魯木齊市 830011)

牙周炎是一種由菌斑微生物感染引起的慢性炎癥性疾病，隨著疾病的進(jìn)展，最終可導(dǎo)致牙周結(jié)締組織和牙槽骨的破壞[1]。研究表明，牙周炎可能是糖尿病、動脈粥樣硬化性心血管疾病、嬰兒出生低體重、代謝綜合征、慢性腎功能衰竭、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和神經(jīng)退行性疾病的危險因素[2]。因此，探討更有效的牙周炎治療策略對于改善人類疾病現(xiàn)狀具有重要意義。最近的研究表明，脂多糖可誘導(dǎo)人牙周膜成纖維細(xì)胞(human periodontal ligament fibroblast，HPDLF)中NOD樣受體蛋白3(NOD-like receptor protein 3，NLRP3)炎癥小體活化，促進(jìn)白細(xì)胞介素(interleukin，IL)-1β的分泌[3]。此外，NLRP3炎癥小體受多種上游信號的調(diào)控，包括沉默信息調(diào)節(jié)因子1(sirtuin 1，SIRT1)的負(fù)調(diào)控和硫氧還蛋白相互作用蛋白(thioredoxin-interacting protein，TXNIP)的正調(diào)控[4-5]。原兒茶酸是一種酚類化合物，是花青素的主要代謝物，存在于多種水果、蔬菜和易腐爛的植物，如橄欖、白葡萄和玫瑰茄。它具有多種有益的生物學(xué)效應(yīng)，包括抗炎、抗氧化和抗凋亡作用[6]。已有研究表明，原兒茶酸可通過調(diào)控SIRT1/核因子κB (nuclear factor κB,NF-κB)途徑抑制脂多糖誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥介質(zhì)的釋放[7]。但原兒茶酸是否可以改善牙周炎，其相關(guān)機(jī)制如何，目前尚未清楚。本研究采用脂多糖誘導(dǎo)建立HPDLF炎癥模型，探究原兒茶酸對炎癥性HPDLF的保護(hù)作用及其機(jī)制，以期為開發(fā)治療牙周炎的新藥物提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試劑與材料 HPDLF購自武漢普諾賽公司；脂多糖(美國Sigma公司，批號：L2880)；原兒茶酸(質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：高效液相色譜純度≥98%;大連美侖生物技術(shù)有限公司，貨號：MB7050)；活性氧簇檢測試劑盒(北京索萊寶科技有限公司，批號：100T)；IL-1β和IL-18檢測試劑盒(上海紀(jì)寧實(shí)業(yè)，批號：20200318)；細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cell counting kit-8， CCK-8)試劑盒(日本同仁，批號：202)；Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染試劑(美國賽默飛世爾，批號：11668)；NLRP3(武漢三鷹，批號：22006)、TXNIP(武漢三鷹，批號：66005)、激活型天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶1(cysteinyl aspartate specific proteinase 1，Caspase1;英國Abcam公司，批號：P42574)、SIRT1(武漢三鷹，批號：33002)和甘油醛-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH；武漢三鷹，批號：33004)抗體；SYBR? Premix Ex TaqTMⅡ 試劑盒(日本TaKaRa公司，批號：DRR041A)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)：HPDLF用含10%胎牛血清的杜氏改良伊格爾培養(yǎng)基(Dulbecco′s modified Eagle medium，DMEM;賽默飛世爾公司，批號：A4192101)，于37℃、5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細(xì)胞密度達(dá)到80%～90%時，用0.25%胰酶液消化細(xì)胞，進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 原兒茶酸給藥濃度的篩選：將對數(shù)生長期的HPDLF接種于96孔板，接種密度為5×103個/孔，于37℃、5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12 h后，添加相應(yīng)濃度原兒茶酸(0 μmol/L、1.25 μmol/L、2.50 μmol/L、5.00 μmol/L、10.00 μmol/L、20.00 μmol/L、40.00 μmol/L、80.00 μmol/L和160.00 μmol/L)，繼續(xù)培養(yǎng)24 h后，向各組細(xì)胞中加入CCK-8試劑，10 μL/孔，37℃條件下孵育3 h。采用酶標(biāo)儀測定各孔在450 nm波長處的光密度(optical density,OD)值。細(xì)胞活力=給藥組OD450 nm/0 μmol/L原兒茶酸組OD450 nm×100%。

1.2.3 細(xì)胞分組與干預(yù)：(1)原兒茶酸對脂多糖誘導(dǎo)的HPDLF炎癥反應(yīng)的影響。取對數(shù)生長期的HPDLF接種于96孔板，接種密度為5×103個/孔，于37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)12 h后，將細(xì)胞分為空白對照組、脂多糖組、脂多糖+5.00 μmol/L原兒茶酸組和脂多糖+10.00 μmol/L原兒茶酸組。除空白對照組外，其他3組均加入脂多糖(10 μg/mL)[8]及不同濃度的原兒茶酸(0 μmol/L、5.00 μmol/L、10.00 μmol/L),在37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)24 h?？瞻讓φ战M加磷酸緩沖鹽溶液，每組設(shè)置3個復(fù)孔。(2)敲低SIRT1后原兒茶酸對脂多糖誘導(dǎo)的HPDLF的影響。①取對數(shù)生長期的HPDLF按4×105個/孔接種于6孔板，于37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12 h后，將細(xì)胞分為空白對照組、si-NC組、si- SIRT1組，按Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染試劑的說明書將si-NC和si- SIRT1轉(zhuǎn)染至HPDLF，空白對照組只加入Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染試劑，37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)48 h后，觀察轉(zhuǎn)染效果，轉(zhuǎn)染率達(dá)到80%后對各組細(xì)胞進(jìn)行藥物干預(yù)。②取對數(shù)生長期的HPDLF按4×105個/孔接種于6孔板，于37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12 h后，將細(xì)胞分為si-NC組、脂多糖+si-NC組、脂多糖+原兒茶酸+si-NC組、脂多糖+原兒茶酸+si-SIRT1組。按上述方法轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，除si-NC組外，其他3組均加入脂多糖(10 μg/mL)，在此基礎(chǔ)上，脂多糖+原兒茶酸+si-NC組、脂多糖+原兒茶酸+si- SIRT1組同時加入原兒茶酸(10 μmol/L)。藥物處理細(xì)胞24 h后檢測指標(biāo)，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.4 CCK-8法檢測細(xì)胞增殖：按1.2.3方法處理細(xì)胞24 h后，向各組細(xì)胞中加入CCK-8試劑，10 μL/孔，37℃條件下孵育3 h。采用酶標(biāo)儀測定各孔在450 nm波長處的OD值。細(xì)胞活力=實(shí)驗(yàn)組OD450 nm/空白對照組OD450 nm×100%。

1.2.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞活性氧簇水平：按1.2.3方法處理細(xì)胞后，按照活性氧簇檢測試劑盒說明書，分別向各組HPDLF中加入10 μmol/L的活性氧簇?zé)晒馓结槻⑹蛊渫耆采w細(xì)胞，37℃條件下孵育30 min，磷酸緩沖鹽溶液洗滌細(xì)胞3次，3～5 min/次。0.25%胰酶液消化細(xì)胞，磷酸緩沖鹽溶液洗滌細(xì)胞2～3次，3～5 min/次，重懸細(xì)胞，使用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞活性氧簇水平。

1.2.6 蛋白質(zhì)印跡法檢測細(xì)胞NLRP3、TXNIP、激活型Caspase1和SIRT1蛋白表達(dá)：按1.2.3方法處理細(xì)胞后，收集各組HPDLF，RIPA裂解液裂解細(xì)胞，4℃下12 000 r/min離心5 min后取上清，二喹啉甲酸法測定蛋白濃度。取30 μg蛋白上樣進(jìn)行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白并將其轉(zhuǎn)至聚偏氟乙烯膜上。10%脫脂奶粉于室溫?fù)u床上封閉2 h，加入NLRP3(1 ∶3 000)、TXNIP(1 ∶5 000)、激活型Caspase1(1 ∶1 000)、SIRT1(1 ∶3 000)和GAPDH(1 ∶5 000)抗體，4℃條件下孵育過夜，加入二抗(1 ∶5 000)室溫孵育1 h后，滴加BeyoECL Star工作液到膜上，采用化學(xué)發(fā)光成像儀(廠家：美國Alpha公司;型號：FluorChem FC3)檢測蛋白表達(dá)水平。以目的蛋白條帶灰度值與內(nèi)參蛋白條帶灰度值比值為目的蛋白相對表達(dá)水平。

1.2.7 酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測細(xì)胞IL-1β和IL-18含量：按1.2.3方法處理細(xì)胞后，收集各組HPDLF，1 000 r/min離心5 min，取上清液。根據(jù)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒說明書，檢測上清液中IL-1β和IL-18的水平。

1.2.8 實(shí)時熒光定量PCR檢測SIRT1 mRNA相對表達(dá)水平：按1.2.3方法處理細(xì)胞后，收集各組HPDLF，采用TRIzol法提取細(xì)胞總RNA，測定RNA濃度，按照SYBR?Premix Ex TaqTMⅡ試劑盒說明書將RNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。以cDNA為模板，以GAPDH為內(nèi)參，采用實(shí)時熒光定量PCR對cDNA進(jìn)行擴(kuò)增，反應(yīng)條件為95℃、30 s；95℃、5 s，60℃、34 s，40個循環(huán)。SIRT1上游引物為5′-TGCTGGCCTAATAGAGTGGCA-3′， 下游引物為5′-CTCAGCGCCATGGAAAATGT-3′； GAPDH上游引物為5′-GCACCGTCAAGGCTGAGAAC-3′， 下游引物為5′-TGGTGAAGACGCCAGTGGA-3′。采用2-ΔΔCt法計(jì)算SIRT1 mRNA相對表達(dá)水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以(x±s)表示，多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，以P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 原兒茶酸對脂多糖誘導(dǎo)的HPDLF活力的影響 與0 μmol/L組相比，20.00 μmol/L組、40.00 μmol/L組、80.00 μmol/L組和160.00 μmol/L組細(xì)胞活力顯著降低(均P<0.05)，見表1。這提示劑量≥20.00 μmol/L時原兒茶酸已對細(xì)胞產(chǎn)生毒性，0 μmol/L、1.25 μmol/L和2.50 μmol/L組可能由于劑量過小未對細(xì)胞活力產(chǎn)生影響，因此，本研究選擇5.00 μmol/L和10.00 μmol/L濃度原兒茶酸進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。與空白對照組相比，脂多糖+5.00μmol/L原兒茶酸組和脂多糖+10.00 μmol/L原兒茶酸組細(xì)胞活力降低(均P<0.05)，但脂多糖組的細(xì)胞活力與空白對照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表2。

表1 不同原兒茶酸給藥濃度下HPDLF的活力(x±s，%)

表2 原兒茶酸對脂多糖誘導(dǎo)的HPDLF活力的影響(x±s，%)

2.2 原兒茶酸對脂多糖誘導(dǎo)的HPDLF活性氧簇水平的影響 與空白對照組相比，其他3組細(xì)胞活性氧簇水平升高(均P<0.05)；與脂多糖組相比，脂多糖+5.00 μmol/L原兒茶酸組和脂多糖+10.00 μmol/L原兒茶酸組細(xì)胞活性氧簇水平降低(均P<0.05)。見圖1及表3。

圖1 原兒茶酸對脂多糖誘導(dǎo)的HPDLF活性氧簇水平的影響

表3 原兒茶酸對脂多糖誘導(dǎo)的HPDLF活性氧簇水平的影響(x±s)

2.3 原兒茶酸對脂多糖誘導(dǎo)的HPDLF的TXNIP-NLRP3軸的影響 與空白對照組相比，脂多糖組細(xì)胞TXNIP、NLRP3和激活型Caspase1蛋白表達(dá)水平升高(均P<0.05)；與脂多糖組相比，脂多糖+5.00 μmol/L原兒茶酸組和脂多糖+10 μmol/L原兒茶酸組細(xì)胞TXNIP和激活型Caspase1蛋白表達(dá)水平降低,且脂多糖+10 μmol/L原兒茶酸組細(xì)胞NLRP3蛋白表達(dá)水平低于脂多糖組(均P<0.05)。見圖2和表4。

圖2 各組細(xì)胞TXNIP、NLRP3和激活型Caspase1蛋白的表達(dá)情況

表4 原兒茶酸對脂多糖誘導(dǎo)的HPDLF中TXNIP、NLRP3和激活型Caspase1蛋白表達(dá)的影響(x±s)

2.4 原兒茶酸對脂多糖誘導(dǎo)的HPDLF的IL-1β和IL-18水平的影響 與空白對照組相比，脂多糖組細(xì)胞IL-1β和IL-18水平升高(均P<0.05)；與脂多糖組相比，脂多糖+5.00 μmol/L原兒茶酸組和脂多糖+10.00 μmol/L原兒茶酸組細(xì)胞IL-1β和IL-18水平降低(均P<0.05)。見表5。

表5 原兒茶酸對脂多糖誘導(dǎo)的HPDLF的IL-1β和IL-18水平的影響(x±s，pg/mL)

2.5 原兒茶酸對脂多糖誘導(dǎo)的HPDLF的SIRT1表達(dá)水平的影響 與空白對照組相比，脂多糖組細(xì)胞SIRT1 mRNA和蛋白表達(dá)水平降低(均P<0.05)；與脂多糖組相比，脂多糖+5.00 μmol/L原兒茶酸組和脂多糖+10.00 μmol/L原兒茶酸組細(xì)胞SIRT1 mRNA和蛋白表達(dá)水平升高(均P<0.05)。見圖3和表6。

圖3 各組HPDLF細(xì)胞SIRT1蛋白表達(dá)的情況

表6 原兒茶酸對脂多糖誘導(dǎo)的HPDLF的SIRT1表達(dá)水平的影響(x±s)

2.6 敲低SIRT1逆轉(zhuǎn)原兒茶酸對脂多糖誘導(dǎo)的HPDLF的TXNIP-NLRP3軸的抑制作用 si-SIRT1干擾效率檢測結(jié)果顯示，與si-NC組相比，si-SIRT1組細(xì)胞SIRT1 mRNA和蛋白表達(dá)水平降低(均P<0.05)，見圖4和表7，提示采用 si-SIRT1干擾細(xì)胞成功。與si-NC組相比，脂多糖+si-NC組細(xì)胞SIRT1蛋白表達(dá)水平降低，TXNIP和NLRP3蛋白表達(dá)水平升高(均P<0.05)；與脂多糖+si-NC組相比，脂多糖+原兒茶酸+si-NC組細(xì)胞SIRT1蛋白表達(dá)升高，TXNIP和NLRP3蛋白表達(dá)水平降低(均P<0.05)；與脂多糖+原兒茶酸+si-NC組相比，脂多糖+原兒茶酸+si-SIRT1組細(xì)胞SIRT1蛋白表達(dá)水平降低，TXNIP和NLRP3蛋白表達(dá)水平升高(均P<0.05)。見圖5和表8。

圖4 si-SIRT1干擾效率檢測結(jié)果

表7 si-SIRT1干擾效率檢測結(jié)果(x±s)

圖5 敲低SIRT1后各組細(xì)胞SIRT1、TXNIP、NLRP3蛋白表達(dá)的情況

表8 敲低SIRT1逆轉(zhuǎn)原兒茶酸對TXNIP-NLRP3軸的抑制作用(x±s)

2.7 敲低SIRT1后原兒茶酸對脂多糖誘導(dǎo)的HPDLF活性氧簇、IL-1β和IL-18水平的影響 與si-NC組相比，脂多糖+si-NC組細(xì)胞活性氧簇、IL-1β和IL-18水平升高(均P<0.05)；與脂多糖+si-NC組相比，脂多糖+原兒茶酸+si-NC組細(xì)胞活性氧簇、IL-1β和IL-18水平降低(均P<0.05)；與脂多糖+原兒茶酸+si-NC組相比，脂多糖+原兒茶酸+si-SIRT1組細(xì)胞活性氧簇、IL-1β和IL-18水平升高(均P<0.05)。見圖6和表9。

圖6 敲低SIRT1后原兒茶酸對脂多糖誘導(dǎo)的HPDLF活性氧簇水平的影響

表9 敲低SIRT1后原兒茶酸對脂多糖誘導(dǎo)的HPDLF 活性氧簇、IL-1β和IL-18水平的影響(x±s)

3 討 論

牙周炎是一種牙周組織(包括牙齦、牙周膜、牙槽骨和牙骨質(zhì))的炎癥性疾病，最終可導(dǎo)致牙齒脫落[9]。牙周膜是位于下頜骨牙骨質(zhì)和牙槽骨之間的一種結(jié)締組織，其在維持牙周組織的完整性和促進(jìn)組織再生中起著關(guān)鍵作用[10]。牙周膜成纖維細(xì)胞(periodontal ligament fibroblast，PDLF)是牙周膜中最常見的細(xì)胞，在維持組織完整性方面具有明顯的功能活性。此外， PDLF還參與牙周病的免疫和炎癥反應(yīng)[11]。原兒茶酸因具有潛在的神經(jīng)保護(hù)作用，并作為治療神經(jīng)退行性疾病的藥物而受到廣泛關(guān)注。研究表明，原兒茶酸可減少阿爾茨海默病、帕金森病、腦缺血和創(chuàng)傷性腦損傷等神經(jīng)退行性疾病動物模型中的神經(jīng)毒性和神經(jīng)元細(xì)胞死亡[12]。而關(guān)于原兒茶酸在牙周炎中的作用還尚未可知，本研究旨在探究原兒茶酸在牙周炎中的作用及其機(jī)制。

牙齦卟啉單胞菌是最常見的牙周病原菌。牙齦卟啉單胞菌脂多糖通過激活NF-κB途徑，促進(jìn)炎癥介質(zhì)的釋放，引起牙周膜炎癥反應(yīng)[13]。眾所周知，炎性小體作為細(xì)胞內(nèi)的傳感器，對各種病原體相關(guān)和損傷相關(guān)的分子模式起著重要的作用[14]。已有研究表明，NLRP3炎性小體及其下游因子IL-1β和IL-18在牙周病進(jìn)展中發(fā)揮重要作用[15]。本研究結(jié)果顯示，與空白對照組相比，脂多糖組細(xì)胞NLRP3蛋白表達(dá)水平IL-1β和IL-18水平升高(均P<0.05)，提示脂多糖可誘導(dǎo)HPDLF中NLRP3炎性小體活化，并促進(jìn)IL-1β和IL-18的釋放；與脂多糖組相比，脂多糖+5.00 μmol/L原兒茶酸組和脂多糖+10.00 μmol/L原兒茶酸組細(xì)胞IL-1β和IL-18水平降低(均P<0.05)，脂多糖+10.00 μmol/L原兒茶酸組細(xì)胞NLRP3蛋白表達(dá)水平低于脂多糖組(均P<0.05)，提示采用原兒茶酸處理可抑制脂多糖誘導(dǎo)的HPDLF的NLRP3炎性小體活化，抑制IL-1β和IL-18的產(chǎn)生。

研究表明，活性氧簇作用于NLRP3炎癥小體上游相關(guān)因子，引起炎性小體的活化，高濃度葡萄糖和脂多糖以活性氧簇敏感的方式促進(jìn)腎小球系膜細(xì)胞中TXNIP和NLRP3的表達(dá)，從而促進(jìn)炎癥的發(fā)生[16]。另有研究表明，抑制活性氧簇/TXNIP/NLRP3炎癥信號，可逆轉(zhuǎn)高血糖對視網(wǎng)膜Müller細(xì)胞增殖和促血管生成因子生成的促進(jìn)作用[17]。由此可見，活性氧簇/TXNIP/NLRP3炎癥信號在不同疾病中均發(fā)揮著重要的作用。本研究結(jié)果顯示，與空白對照組相比，脂多糖組細(xì)胞活性氧簇水平、TXNIP蛋白表達(dá)水平升高(均P<0.05)，提示脂多糖可促進(jìn)HPDLF中活性氧簇的產(chǎn)生和TXNIP的表達(dá)，而與脂多糖組相比，脂多糖+5.00 μmol/L原兒茶酸組和脂多糖+10.00 μmol/L原兒茶酸組細(xì)胞活性氧簇水平、TXNIP蛋白表達(dá)水平降低(均P<0.05)，提示原兒茶酸可抑制脂多糖誘導(dǎo)的HPDLF活性氧簇的產(chǎn)生和TXNIP的表達(dá)，其可能通過抑制活性氧簇的產(chǎn)生，從而抑制TXNIP-NLRP3軸介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。

SIRT1在抑制細(xì)胞炎癥中起重要作用。研究表明，SIRT1過表達(dá)可抑制脂多糖和腺嘌呤核苷三磷酸聯(lián)合誘導(dǎo)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞中NLRP3炎性小體的活化以及激活型Caspase1的表達(dá)和IL-1β的分泌，而敲除SIRT1則促進(jìn)NLRP3的活化[18]。另有研究表明，敲低SIRT1可逆轉(zhuǎn)粉防己堿抑制NLRP3炎性小體活化，以及IL-1β和IL-18表達(dá)的作用，減弱粉防己堿對腦缺血再灌注小鼠的保護(hù)作用[19]。此外，姜黃素可通過上調(diào)SIRT1的表達(dá)，抑制活性氧簇和腫瘤壞死因子α的產(chǎn)生，以劑量依賴的方式減輕失血性休克和輸血復(fù)蘇所致的肺屏障功能損害[20]。以上研究表明，SIRT1通過抑制活性氧簇的產(chǎn)生和NLRP3炎性小體的活化，在不同疾病中發(fā)揮保護(hù)作用。本研究結(jié)果顯示，與空白對照組相比，脂多糖組細(xì)胞SIRT1 mRNA和蛋白表達(dá)水平降低(均P<0.05)；與脂多糖組相比，脂多糖+5.00 μmol/L原兒茶酸組和脂多糖+10.00 μmol/L原兒茶酸組細(xì)胞SIRT1 mRNA和蛋白表達(dá)水平升高(均P<0.05)。這提示脂多糖可抑制HPDLF中SIRT1的表達(dá)，而原兒茶酸可逆轉(zhuǎn)該作用。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，與脂多糖+原兒茶酸+si-NC組相比，脂多糖+原兒茶酸+si-SIRT1組細(xì)胞活性氧簇IL-1β和IL-18水平升高(均P<0.05)，提示敲低SIRT1后，原兒茶酸逆轉(zhuǎn)脂多糖誘導(dǎo)HPDLF炎癥反應(yīng)的作用減弱，提示SIRT1可能參與原兒茶酸對HPDLF炎癥反應(yīng)的保護(hù)作用。

綜上所述，原兒茶酸可能通過上調(diào)SIRT1的表達(dá)，抑制脂多糖誘導(dǎo)的HPDLF中TXNIP-NLRP3軸的活化，減輕細(xì)胞炎癥反應(yīng)。這為明確原兒茶酸在牙周炎中的作用機(jī)制及開發(fā)治療牙周炎的新藥物提供新的依據(jù)。