糞菌移植對不同潰瘍性結(jié)腸炎小鼠的療效及其中藥性味研究

馬曉飛，胡家麗，崔曼曼，葛巍，楊蘇琴，丁成華，張磊昌*

潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）是一種慢性非特異性免疫性疾病，隸屬于炎癥性腸?。╥nflammatory bowel disease，IBD）的范疇，是消化系統(tǒng)的常見病及疑難病[1-2]，主要以腹痛、腹瀉、黏液膿血便、里急后重等臨床表現(xiàn)為主[3]，反復發(fā)作是該疾病特點，多見于直腸和乙狀結(jié)腸，青壯年為好發(fā)人群。UC的發(fā)病目前在全世界呈逐年上升的趨勢，但UC的病因、發(fā)病機制尚不明確。現(xiàn)代醫(yī)學認為與遺傳、環(huán)境、心理等因素相關(guān)，進而導致腸黏膜屏障受損，神經(jīng)內(nèi)分泌功能失調(diào)和免疫失衡，從而引起腸黏膜局部潰瘍而發(fā)病[4]。

UC目前還沒有治愈的方法，基本治療原則以控制癥狀為主，治療藥物包括氨基水楊酸制劑、糖皮質(zhì)激素類、免疫抑制劑及生物制劑等[5-6]。常規(guī)藥物不良反應較強，且病情容易反復，生物制劑價格昂貴，經(jīng)濟成本太高。近年來，糞菌移植（fecal microbiota transplantation，F(xiàn)MT）成為研究熱門話題，其原理為將健康人糞便中的功能菌群，移植入患者胃腸道內(nèi)，重建具有正常功能的腸道菌群，治療腸道及腸道外某些疾病。該方法由來已久，2013年美國食品藥品監(jiān)督管理局將治療難辨梭狀芽孢桿菌感染寫入指南，是對其安全性及有效性的認證，適應證得到進一步擴展[7-8]。多數(shù)學者雖已經(jīng)證實FMT治療UC療效的可靠性，但仍有部分學者對FMT治療UC的療效提出質(zhì)疑，說其總體有效率偏低。

針對FMT治療UC療效參差不齊的原因，筆者基于中醫(yī)理論，發(fā)現(xiàn)金汁與FMT有異曲同工之效[9]。本研究基于此，以陽性藥物5-氨基水楊酸（5-ASA）為實驗對照，通過FMT治療普通型潰瘍性結(jié)腸炎模型（CUCM）與濕熱型潰瘍性結(jié)腸炎模型（DUCM），驗證其療效，通過治療前后疾病活動指數(shù)、腸組織HE染色、腸組織透射電鏡、血常規(guī)及菌群多樣性分析等探究FMT（新金汁）的中藥性味。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 雄性SPF級C57BL/6小鼠（4周齡）：湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，許可證號：SCXK（湘）2019-0004，平均體質(zhì)量（18.0±1.2）g。本研究經(jīng)江西中醫(yī)藥大學醫(yī)學倫理審查委員會審批通過。

1.2 實驗試劑與儀器 葡聚糖硫酸鈉（DSS）（9011-18-1，上海源葉生物科技有限公司）；5-ASA（貨號：89-57-6，上海源葉生物科技有限公司）；高脂高糖飼料（配方：糖15%、豬油10%、膽固醇4%、膽鹽0.3%、蛋黃粉10%、基礎飼料60.7%，南京盛民科研動物養(yǎng)殖場）；便隱血（OB）試劑（B200101，珠海貝索生物）；水合氯醛（119957，上海展云化工有限公司）；異氟烷（S10010533，上海玉研科學儀器有限公司）；干擾素 γ（IFN-γ）PE（505808，Biolegend）；CD4 APCCY7（100460，Biolegend）；白介素（IL）-4 PE（504104，Biolegend）；小鼠IL-2試劑盒（MM-0701M1）；小鼠IL-4試劑盒（MM-0165M1）；蘇木素染液（ZLI-9610，北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）；伊紅染色液（G1100，Solarbio）；超凈高級封片膠（YZB，BASO）；Scott藍化液（G1865，Solarbio）；人工氣候箱（PRX-80A，江蘇天翎儀器有限公司）；動物呼吸麻醉機（ABM-100，上海玉研科學儀器有限公司）；透射電鏡（JEM-1230，JEOL）；多功能酶標儀（S/N502000011，TECAN）；顯微鏡（CX41 OLYMPUS）；切片機（BQ-318D，伯納）；動物血液細胞分析儀（XFA6030 普朗醫(yī)療）[10]。

1.3 模型建立

1.3.1 CUCM 將小鼠適應性飼養(yǎng)7 d后，置于鼠籠飼養(yǎng)IVC系統(tǒng)（設置參數(shù)如下：溫度20 ℃、濕度45%，每日持續(xù)12 h）中飼養(yǎng)，給予普通飼料喂養(yǎng)并給予小鼠自由飲含2% DSS蒸餾水，連續(xù)飼養(yǎng)10 d即可。

1.3.2 DUCM 將小鼠適應性飼養(yǎng)7 d后，置于鼠籠飼養(yǎng)IVC系統(tǒng)（設置參數(shù)如下：溫度36 ℃、濕度80%，每日持續(xù)12 h）中飼養(yǎng)，給予高脂高糖飼料（配方：糖15.0%、豬油10.0%、膽固醇4.0%、膽鹽0.3%、蛋黃粉10.0%、基礎飼料60.7%），并給予小鼠自由飲含2%DSS蒸餾水，連續(xù)飼養(yǎng)10 d即可。

造模后，CUCM與DUCM分別取2只小鼠進行觀察，取樣進行模型驗證，通過小鼠疾病活動指數(shù)評分（體質(zhì)量下降分數(shù)、大便性狀分數(shù)、便血分數(shù)）和小鼠的一般情況變化（體質(zhì)量、便血、腹瀉、背毛無光澤、拱背、懶動及肛溫升高等）來判斷造模是否成功。

1.3.3 糞菌制備 取正常對照小鼠的5 g新鮮晨便標本溶于10 ml無菌PBS中充分混勻，分別用2.0、1.0、0.5、0.25 mm的不銹鋼篩過濾，6 000×g離心15 min，取菌體，用無菌PBS清洗3次，重懸于25 ml PBS中4 ℃冰箱保存。

1.4 實驗分組 于2019年12月9—28日，根據(jù)造模需求進行針對性造模，再分為7組，每組各5只小鼠。

1.4.1 正常對照組（Control組） Control組不做任何干預處理，給予小鼠自由飲用正常水，普通飼料喂養(yǎng)，常溫、常態(tài)下飼養(yǎng)（溫度、濕度設置同CUCM組），不做其他特殊處理。

1.4.2 CUCM組 CUCM造模成功后，常溫、常態(tài)下采用普通飼料、正常飲水飼養(yǎng)，采用磷酸鹽緩沖液（PBS）0.2 ml/次對小鼠進行灌腸，1次/2 d，持續(xù)10 d，共計5次。

1.4.3 CUCM+FMT組 CUCM造模成功后，常溫、常態(tài)下采用普通飼料、正常飲水飼養(yǎng)，給予制備的糞菌液0.2 ml對小鼠進行灌腸，1次/2 d，持續(xù)10 d，共計5次。

1.4.4 CUCM+5-ASA組 CUCM造模成功后，常溫、常態(tài)下采用普通飼料、正常飲水飼養(yǎng)，按0.195 g/kg的劑量，藥物濃度為0.019 5 g/ml，即20 g小鼠灌腸0.2 ml，1次/2 d，持續(xù)10 d，共計5次。

1.4.5 DUCM組 DUCM造模成功后，常溫、常態(tài)下采用普通飼料、正常飲水飼養(yǎng)，采用PBS 0.2 ml/次對小鼠進行灌腸，1次/2 d，持續(xù)10 d，共計5次。

1.4.6 DUCM+FMT組 DUCM造模成功后，常溫、常態(tài)下采用普通飼料、正常飲水飼養(yǎng)，給予制備的糞菌液0.2 ml對小鼠進行灌腸，1次/2 d，持續(xù)10 d，共計5次。

1.4.7 DUCM+5-ASA組 DUCM造模成功后，常溫、常態(tài)下采用普通飼料、正常飲水飼養(yǎng)，按0.195 g/kg的劑量，藥物濃度為0.019 5 g/ml，即20 g小鼠灌腸0.2 ml，1次/2 d，持續(xù)10 d，共計5次。

1.5 動物取樣 給藥結(jié)束后，將各組大鼠用10%水合氯醛按400 mg/kg腹腔注射麻醉，打開動物的腹腔及胸腔；將結(jié)腸和盲腸取出，表面血跡沖洗干凈，用無菌棉簽擠出腸道內(nèi)容物，采用16S rRNA高通量測序技術(shù)測定菌群多樣性。內(nèi)容物取出后切去盲腸，將剩余的結(jié)腸和直腸分為3份，分別用于HE染色、透射電鏡檢測、流式細胞檢測。

1.6 HE染色 取出各組組織樣品流水沖洗數(shù)小時，經(jīng)70%、80%、90%各級乙醇溶液脫水，純乙醇、二甲苯等量混合液15 min，二甲苯Ⅰ 15 min、Ⅱ 15 min（至透明為止）。放入二甲苯和石蠟各半的混合液15 min，再放入石蠟Ⅰ、石蠟Ⅱ透蠟各50～60 min。石蠟包埋，切片。將石蠟切片進行烤片，然后脫蠟，水化。將已入蒸餾水的切片放入蘇木素水溶液中染色3 min，鹽酸乙醇分化液分化15 s，稍水洗，返藍液返藍15 s，流水沖洗，伊紅染色3 min，流水沖洗，脫水，透明，封片，鏡檢。

1.7 透射電鏡觀察 各組組織樣品2.5%戊二醛固定2 h以上，用0.1 mmol/L PBS漂洗，1%鋨酸固定液固定2 h，0.1 mmol/L磷酸漂洗梯度乙醇（50%～90%）溶液脫水，再丙酮脫水，包埋固化，切片切成厚度為70 nm薄片。3%醋酸鈾-枸櫞酸鉛雙染，透射電鏡觀察。

1.8 流式細胞檢測 輔助性T細胞（Th）1細胞檢測：各組取100 μl血液至于12孔板中，加入150 μl 1640完全培養(yǎng)基，加入1 μl PMA/Ionomycin mixture佛波酯/離子霉素混合物，放入培養(yǎng)箱中孵育30 min后加入1 μl BFA/Monensin Mixture，放入培養(yǎng)箱中孵育24 h。結(jié)束后，將血液轉(zhuǎn)至EP管中離心，棄150 μl上清，將細胞吹勻加入CD4 APC-CY7各5 μl，避光孵育15 min，1 ml PBS，400×g離心5 min洗2次，棄上清。加入500 μl Fixation and Permeabilization Solution避 光 固 定破膜40 min，400×g離心5 min后，加入1 ml 1×BD Perm/WashTMbuffer，清洗2次，再100 μl 1×BD Perm/WashTMbuffer重懸細胞，加入5 μl IFN-γ PE，避光孵育15 min。1 ml 1×BD Perm/WashTMbuffer，清洗2次，再500 μl 1×BD Perm/WashTMbuffer重懸細胞，上流式儀檢測。Th2細胞檢測步驟同上，CD4 APC-CY7孵育重懸后，Th2檢測加入IL-4 PE孵育。

1.9 血常規(guī)檢測 取各組血液充分抗凝后，室溫條件下，采用動物血液細胞分析儀4 h內(nèi)完成血常規(guī)上機檢測，主要檢測白細胞計數(shù)（WBC）、紅細胞計數(shù)（RBC）、血小板計數(shù)（PLT）和血紅蛋白（HGB）。

1.10 療效指數(shù)評估 比較各組UC小鼠FMT干預前后疾病活動指數(shù)的變化，疾病活動指數(shù)從體質(zhì)量變化（體質(zhì)量不變：0分，體質(zhì)量下降1%～5%：1分，體質(zhì)量下降6%～10%：2分，體質(zhì)量下降11%～15%：3分，體質(zhì)量下降＞15%：4分）、大便性狀（大便正常：0分，大便松散：2分，腹瀉：4分）、便血（無便血：0分，隱血陽性：2分，顯性出血：4分）3方面進行綜合評價。疾病活動指數(shù)=（體質(zhì)量下降分數(shù)+大便性狀分數(shù)+便血分數(shù)）/3。計算CUCM及DUCM的療效指數(shù)，依據(jù)尼莫地平法：療效指數(shù)=（治療后疾病活動指數(shù)-治療前疾病活動指數(shù)）/治療前疾病活動指數(shù)×100%，比較FMT干預CUCM及DUCM的療效指數(shù)差別。

1.11 16 S rRNA高通量測序技術(shù)測定菌群多樣性 各組小鼠腸道內(nèi)容物過濾后，分為3個測量組，分別為1、2、3，提取總DNA分光光度計進行定量。通常以微生物核糖體RNA等能夠反映菌群組成和多樣性的目標序列為靶點，根據(jù)序列中的保守區(qū)域設計相應引物，進行PCR擴增。PCR擴增產(chǎn)物通過2%瓊脂糖凝膠電泳進行檢測，并對目標片段進行切膠回收，將PCR擴增回收產(chǎn)物進行熒光定量，之后進行高通量測序。使用QIIME軟件，調(diào)用UCLUST這一序列比對工具，高通量測序所得的序列按97%的序列相似度進行歸并和OTU劃分，并選取每個OTU中豐度最高的序列作為該OTU的代表序列，然后比對RDP（Ribosomal Database Project）數(shù)據(jù)庫得到分類鑒定結(jié)果。

無菌環(huán)境下，采集患病雞的少量新鮮糞便，放置在載玻片上，滴加1滴生理鹽水，混合均勻后蓋上蓋玻片，在低倍顯微鏡下觀察，可觀察到呈現(xiàn)卵圓形的球蟲卵囊。采集上述病死雞典型病變腸道組織，輕輕刮取病變較為明顯的腸道黏膜表層物放置在載玻片上，加同等量的甘油和生理鹽水混合物，蓋上蓋玻片后，在低倍顯微鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)存在圓形的裂殖體和裂殖子[2]。無菌環(huán)境下采集患病雞排出的新鮮糞便10 g，用10倍飽和食鹽水稀釋，充分混合后，靜置30 min，用玻璃棒蘸取表面液膜，抖落在載玻片上，在低倍顯微鏡下觀察，可以發(fā)現(xiàn)有卵圓形的球蟲卵囊存在。

1.12 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 19.0軟件進行統(tǒng)計學分析，計量資料以（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

各組小鼠均造模成功。

2.1 HE染色分析 各組小鼠腸組織HE染色顯示：Control組大鼠結(jié)腸黏膜完整，腺體排列整齊，無炎性細胞浸潤，層次緊密，結(jié)構(gòu)清晰；CUCM組與DUCM組腸黏膜表面出現(xiàn)不同程度的缺損或脫落壞死，部分形成潰瘍，隱窩消失，固有層大量炎性細胞浸潤，黏膜肌層增厚水腫，黏膜下層血管擴張，較多紅細胞、嗜酸粒細胞浸潤；CUCM+FMT組、CUCM+5-ASA組、DUCM+FMT組、DUCM+5-ASA組腸黏膜基本完整，極少數(shù)仍見殘缺斷裂，腺體增生，排列尚整齊，杯狀細胞增多，出血點消失，可見少量炎性細胞浸潤，并且DUCM+FMT組與CUCM+FMT組相比，前者腺體較后者排列整齊并緊密，殘缺斷裂也較后者少，見圖1。

圖1 各組小鼠腸組織HE染色（×200）Figure 1 Morphology of intestinal tissue of mice in each group stained with H&E

2.2 透射電鏡分析 各組腸組織透射電鏡超微結(jié)構(gòu)顯示：Control組微絨毛形態(tài)規(guī)則，排列整齊，較多杯狀細胞，線粒體豐富，嵴結(jié)構(gòu)清楚，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)未見改變；CUCM組與DUCM組上皮細胞表面微絨毛稀疏，長短不一，形態(tài)不規(guī)則，細胞連接間隙增寬，杯狀細胞減少，胞漿內(nèi)有空泡，線粒體腫脹，部分嵴消失，個別內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張或呈空泡變化；CUCM+FMT組、CUCM+5-ASA組、DUCM+FMT組、DUCM+5-ASA組微絨毛較為致密，形態(tài)正常，杯狀細胞數(shù)目較多，線粒體輕微腫脹，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)病變不明顯，并且DUCM+FMT組與CUCM+FMT組相比，前者的微絨毛較后者緊密，杯狀細胞也較后者多，見圖2。

圖2 各組小鼠腸組織透射電鏡超微結(jié)構(gòu)觀察（×13 000）Figure 2 Ultrastructural observation of intestinal tissues of mice in each group by transmission electron microscope

2.3 流式細胞檢測 各組小鼠Th1、Th2細胞含量比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.001），見表1。

表1 各組小鼠腸組織Th1、Th2細胞含量比較（±s，%）Table 1 Comparison of Th1 and Th2 cell contents in intestinal tissues of mice in each group

表1 各組小鼠腸組織Th1、Th2細胞含量比較（±s，%）Table 1 Comparison of Th1 and Th2 cell contents in intestinal tissues of mice in each group

注：Control=正常對照，CUCM=普通型潰瘍性結(jié)腸炎模型，DUCM=濕熱型潰瘍性結(jié)腸炎模型，F(xiàn)MT=糞菌移植，5-ASA=5-氨基水楊酸，Th=輔助性T細胞；a表示與Control組相比P＜0.05；b表示與CUCM組相比P＜0.05；c表示與CUCM+FMT組相比P＜0.05；d表示與CUCM+5-ASA組相比P＜0.05；e表示與DUCM組相比P＜0.05

組別 例數(shù) Th1 Th2 Control組 5 10.88±2.02 4.95±2.10 CUCM 組 5 17.20±3.60 3.46±1.31 CUCM+FMT 組 5 17.23±3.77 3.33±1.35 CUCM+5-ASA 組 5 13.69±5.09 5.72±1.57 DUCM 組 5 24.53±6.39abcd 1.78±0.68d DUCM+FMT組 5 13.55±2.35e 2.17±0.98d DUCM+5-ASA 組 5 14.65±2.99e 2.33±1.33d F值 5.97 5.61 P值 ＜0.001 ＜0.001

2.4 血常規(guī)檢測 各組小鼠WBC、RBC、PLT、HGB比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.001），見表2。

表2 各組小鼠血常規(guī)比較（±s）Table 2 Comparison of routine blood of mice in each group

表2 各組小鼠血常規(guī)比較（±s）Table 2 Comparison of routine blood of mice in each group

注：WBC=白細胞計數(shù)，RBC=紅細胞計數(shù)，PLT=血小板計數(shù)，HGB=血紅蛋白；a表示與Control組相比P＜0.05；b表示與CUCM組相比P＜0.05；c表示與CUCM+FMT組相比P＜0.05；d表示與CUCM+5-ASA組相比P＜0.05；e表示與DUCM組相比P＜0.05

組別 例數(shù) WBC（×109/L） RBC（×1012/L） PLT（×109/L） HGB（g/L）Control組 5 3.54±0.74 5.38±0.20 264.20±37.16 109.92±4.35 CUCM 組 5 9.64±1.32a 3.57±0.18a 333.00±29.34 90.50±5.65a CUCM+FMT 組 5 7.16±0.86ab 5.05±0.30b 322.00±25.40 108.00±7.84b CUCM+5-ASA 組 5 4.35±0.44bc 4.98±0.27b 310.00±30.70 103.80±6.26b DUCM 組 5 7.74±0.88abd 3.65±0.35acd 392.20±45.79abcd 91.38±7.86acd DUCM+FMT 組 5 4.42±0.56bce 5.55±0.15be 302.00±41.36e 110.00±5.61be DUCM+5-ASA 組 5 5.13±0.43bce 5.90±0.46bcde 300.60±34.30e 108.00±5.52be F值 38.47 49.34 6.13 9.30 P值 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001

2.5 療效指數(shù)分析 CUCM+FMT組療效指數(shù)為（-31.03±4.71）%，CUCM+5-ASA組療效指數(shù)為（-62.53±7.53）%，DUCM+FMT組療效指數(shù)為（-56.58±13.29）%，DUCM+5-ASA組療效指數(shù)為（-50.47±20.86）%，各組療效指數(shù)比較，差異有統(tǒng)計學意義（F=5.41，P=0.009）；其中CUCM+5-ASA組、DUCM+FMT組、DUCM+5-ASA組療效指數(shù)高于CUCM+FMT組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

2.6 菌群多樣性分析 對各組小鼠腸內(nèi)容物進行菌群多樣性分析，其中Rank-abundance曲線表示物種的豐富程度（圖3a），曲線越寬，表示物種的組成越豐富，曲線越平坦，表示物種組成的均勻程度越高；非度量多維尺度分析（圖3b）、Beta多樣性PCA成分分析（圖3c）、PCoA主坐標分析（圖3d）表示微生物群落相似度，樣品彼此之間靠得越近，表示微生物群落相似度越高。結(jié)果顯示，CUCM+FMT組、DUCM+FMT組經(jīng)治療后有逐步向Control組靠攏的趨勢，表明腸道菌群正在改善。對各組樣本屬水平分類差異統(tǒng)計與相對豐度分析，結(jié)果顯示，相較于Control組，CUCM組中豐度顯著降低的屬分別是 Ruminococcus、Unclassfied_Lachnospiraceae，顯著升高的屬分別是Akkermansia、Clostridium_XIVa、Unclassfied_Porphyromonadaceae； 相較于 Control組，DUCM組中豐度顯著降低的屬分別是Helicobacter、Saccharibacteria_genera_incertae_sedis、Ruminococcus，DUCM組中豐度顯著升高的屬分別是Akkermansia、Bacteroides、Parabacteroides、Klebsiella。經(jīng)過FMT治療后，CUCM+FMT組、DUCM+FMT組有逐步向Control組靠攏的趨勢，表明腸道菌群正在改善，見圖4。

圖3 各組小鼠腸內(nèi)容物菌群多樣性分析Figure 3 Diversity analysis of intestinal microbiota in mice in each group

圖4 小鼠腸內(nèi)容物菌群屬水平差異分析Figure 4 Comparative analysis of intestinal microbiota of mice in each group at the genus level

3 討論

目前關(guān)于FMT治療UC的機制認為可能與改善腸道菌群結(jié)構(gòu)，酸化腸道抑制致病菌生長，提高腸道抗炎代謝物如短鏈脂肪酸水平，增加有益菌豐度，改善Th1/Th2細胞平衡，調(diào)節(jié)促炎因子與抗炎因子的平衡，誘導機體免疫系統(tǒng)對腸道菌群產(chǎn)生免疫耐受等多方面有關(guān)[11-12]。

根據(jù)本研究HE染色病理學、透射電鏡超微結(jié)構(gòu)結(jié)果分析，F(xiàn)MT對CUCM與DUCM兩種UC模型小鼠均有顯著的療效，且對DUCM效果優(yōu)于CUCM。流式細胞檢測結(jié)果表明FMT可以使DUCM模型組中Th1細胞減少，Th2細胞增多。血常規(guī)表明FMT可以使UC模型中WBC、PLT下調(diào)，RBC、HGB上調(diào)，并且DUCM組的各項指標改善均優(yōu)于CUCM組。療效指數(shù)分析表明DUCM組的療效指數(shù)高于CUCM組。同時菌群多樣性結(jié)果也顯示FMT可以使UC模型中的菌群趨于正常。

T淋巴細胞在機體的免疫應答和免疫調(diào)節(jié)作用中占據(jù)著中心地位，Th細胞為初始CD4+T細胞活化后分化而成的效應細胞，其通過釋放細胞因子、輔助B細胞活化產(chǎn)生抗體，以及和細胞間直接接觸的方式發(fā)揮免疫效應[13]。在受到不同性質(zhì)抗原和局部微環(huán)境中細胞因子調(diào)控后，Th細胞主要可分化為Th1、Th2等兩個亞型。Th1細胞以分泌IL-2、IFN-γ等為主，參與細胞免疫應答、炎性反應和急性排斥反應過程；Th2細胞以分泌IL-4、IL-5為主，參與體液免疫應答[14-15]。根據(jù)研究UC模型中Th1細胞及Th2細胞，經(jīng)FMT治療后，DUCM模型組Th1/Th2平衡更趨于Control組。

腸道菌群紊亂與多種疾病的發(fā)生有密切聯(lián)系，如哮喘、肥胖、糖尿病等，尤其是胃腸類疾病[16]。有研究表明，大腸濕熱證UC患者與健康人腸道菌群的差異明顯：其中，大腸濕熱證UC患者的Bacteroidetes和Firmicutes的細菌均低于健康人，但是Proteobacteria和Verrucomicrobia的比例高于健康人且大腸濕熱證UC患者的多樣性均高于健康人腸道樣本[17]。根據(jù)本研究的菌群差異結(jié)果顯示，屬水平差異顯著的是Ruminococcus與Akkermansia，推測可能與疾病的發(fā)生及治療有關(guān)。

綜上可知，F(xiàn)MT治療UC模型小鼠效果明顯，并且針對DUCM優(yōu)于CUCM。反之，苦味具有清瀉、燥濕作用，一般清熱、瀉火、燥濕、通便藥物均具有苦味，苦味藥物主治熱證、火證及濕證。根據(jù)中醫(yī)八綱辨證施治理論“寒者熱之，熱者寒之”，即熱證、火證均可以使用具有寒涼屬性的藥物治之。根據(jù)本研究證實FMT對DUCM療效優(yōu)于CUCM，進而根據(jù)中醫(yī)藥理論推導，新金汁屬于中藥中的苦寒之物。本研究為FMT治療UC提供了理論依據(jù)，也為FMT（新金汁）的中藥性味苦寒提供了理論依據(jù)，但還需深入研究。

作者貢獻：張磊昌提出論文思路、實驗設計方案，對文章整體負責，監(jiān)督管理；丁成華進行動物造模及取樣處理、實驗指標檢測；胡家麗、崔曼曼進行數(shù)據(jù)收集及數(shù)據(jù)整理；葛巍進行統(tǒng)計學處理；楊蘇琴進行結(jié)果解讀；馬曉飛撰寫論文初稿、繪制圖表；馬曉飛、張磊昌進行論文的修訂；丁成華、張磊昌負責文章的質(zhì)量控制及審校。

本文無利益沖突。