貴州地區(qū)105例血脂異常人群ApoE和SLCO1B1基因多態(tài)性及血脂特征分析*

駱姝琳， 任凌雁， 陳琨， 令狐克燕， 卓召振， 靳倩， 安宇， 黃盛文**

(1.貴州省人民醫(yī)院 產(chǎn)前診斷中心， 貴州 貴陽 550002； 2.貴州省人民醫(yī)院 中心實驗室， 貴州 貴陽 550002)

血脂異常通常指血總膽固醇(total cholesterol，TC)、甘油三酯(triglyceride，TG)的水平升高，廣義上還包括低高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein-cholesterol，HDL-C)血癥在內(nèi)的各種異常[1]。以低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein-cholesterol，LDL-C)或TC升高為特點的血脂異常是動脈粥樣硬化性心血管疾病的重要危險因素[2]。隨著行為生活方式的改變，血脂異常人群逐漸增多，動脈粥樣硬化和隨后進展的心肌梗死的風(fēng)險也隨之增加[3]。在動脈粥樣硬化性心血管疾病(atherosclerotic cardiovascular disease，ASCVD)一級和二級預(yù)防中，他汀類藥物能夠顯著降低心血管事件的發(fā)生率[4]。藥物基因組學(xué)研究表明，遺傳基因多態(tài)性會造成不同個體對于藥物療效和不良反應(yīng)的差異[5]，參與他汀類藥物肝臟代謝的關(guān)鍵性轉(zhuǎn)運蛋白陰離子轉(zhuǎn)運多肽1B1 (organic anion transporting polypeptide 1B1 ，OATP1B1)和載脂蛋白E(apolipoprotein E，ApoE)的基因多態(tài)性可影響他汀類藥物的血漿及肝臟濃度，從而影響他汀類藥物的療效和安全性[6-7]。OATP1B1由溶質(zhì)載體有機陰離子轉(zhuǎn)運體1B1(solute carrier organic anion transporter 1B1，SLCO1B1)基因編碼，SLCO1B1基因存在多態(tài)性，可形成9種基因型和3種基因表型[8]。突變的SLCO1B1基因引起編碼的OATP1B1轉(zhuǎn)運活力減弱，表現(xiàn)為肝臟攝取他汀能力降低，引起他汀類藥物血藥濃度上升，從而增加患者橫紋肌溶解癥或肌病的發(fā)生風(fēng)險[9]。ApoE基因多態(tài)性被認為是高脂蛋白血癥及動脈粥樣硬化性血管病的易感候選基因，其可形成6種基因型和3種基因表型[10]。有研究顯示，ApoE4攜帶者患冠心病的風(fēng)險要高40%，并且他汀類藥物對ApoE4攜帶者療效往往不佳或無療效，而對ApoE2攜帶者的降脂作用最強[11]。目前研究較多的與他汀藥物不良反應(yīng)及療效相關(guān)的基因位點主要是SLCO1B1基因上的c.521T>C(Val174Ala)、c.388A>G(Asn130Asp)位點和ApoE基因c.388T>C(Cys130Arg)、c.526C>T(Arg176Cys)位點[9]，本研究通過檢測105例貴州地區(qū)37～84歲血脂異常人群上述相關(guān)位點，分析其在該類人群中多態(tài)性分布情況，為臨床他汀類藥物的合理應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1樣本人群來源 選取2017年6月—2020年9月就診的血脂異?；颊邽檠芯繉ο?，血脂異常診斷參考《中國成人血脂異常防治指南(2016年修訂版)》[1]中相關(guān)規(guī)定，共納入血脂異?；颊?05例，男性69例、女性36例，年齡37～84歲、平均(63±9.81)歲。本研究所有參加者均為來自貴州地區(qū)，研究前均簽署知情同意書。

1.1.2普通人群數(shù)據(jù)來源 來源于“The 1 000 Genomes Project”中千人基因組南方人群數(shù)據(jù)，網(wǎng)址https://www.internationalgenome.org/。

1.2 研究方法

1.2.1血脂指標(biāo)檢測 所有血脂異?；颊呖崭?2 h，清晨抽取靜脈血，1 500 r/min離心5 min，取上清；采用全自動生化分析儀[雅培貿(mào)易(上海)有限公司]檢測測血清中的TG、TC、HDL-C、LDL-C、載脂蛋白A1 (apolipoprotein- A1，Apo-A1) 和Apo-B水平，規(guī)定血脂異常分為高TG(≥1.70 mmol/L)、高TC(≥5.17 mmol/L)、高LDL-C(≥3.37 mmol/L)、低HDL-C(<1.04 mmol/L)及混合型高脂血癥(TG≥2.26 mmol/L和TC≥6.22 mmol/L)[12]。

1.2.2ApoE和SLCO1B1基因位點檢測 采用連接酶介導(dǎo)的熒光探針技術(shù)(ligase Mediate Fluorescence Probe，LMFP) 對ApoE基因c.388T>C(Cys130Arg)、c.526C>T(Arg176Cys)和SLCO1B1基因c.521T>C(Val174Ala)、c.388A>G(Asn130Asp)進行基因分型。所有血脂異?；颊叱槿§o脈血2 mL，乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA)抗凝，在Fascan 48E多通道熒光定量分析儀(西安天隆科技有限公司)上進行檢測；取全血樣本10 μL加測序反應(yīng)通用試劑盒[西安天隆科技有限公司(SNP-U4)]樣本稀釋液290 μL處理，根據(jù)研究需要預(yù)留8聯(lián)管數(shù)n，相鄰4孔為一完整檢測(A4、B4、C4、D4)，將處理好的全血樣本2 μL加到A4、B4、C4、D4預(yù)留孔位中，試劑盒陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品無需稀釋處理，直接加2 μL到對應(yīng)的A4、B4、C4及D4孔位中，蓋緊8聯(lián)管，37 ℃溫浴3 min，6 000 r/min離心40 s，試劑管再次渦旋3 s混勻，6 000 r/min離心5 s，上機檢測。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 血脂異常

女性血脂異常人群血清中TC、HDL-C及Apo-A1水平均高于男性，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)；女性血脂異常類型中高TG、高TC及低HDL-C占比低于男性，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。見表1。

表1 貴州地區(qū)105例血脂異常人群各項血脂指標(biāo)Tab.1 The blood lipid concentration in 105 cases with dyslipidemia from Guizhou

2.2 ApoE基因多態(tài)性分布

針對血脂異?；颊叩腁poE基因上388T>C位點和526C>T位點多態(tài)性進行檢測，這2個位點的不同基因型可組成E2(E2/E2，E2/E3)、E3(E2/E4，E3/E3)及E4(E3/E4，E4/E4)3個基因表型組，性別比較結(jié)果表明，526C>T位點基因型頻率及等位基因頻率在血脂異常患者男女間比較、差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，ApoE基因3個基因表型組E2、E3、E4在不同性別間比較、差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，其中女性E2型占比高于男性、E4型占比低于男性。見表2。

表2 貴州地區(qū)105例血脂異常人群ApoE基因位點的多態(tài)性分布[n(%)]Tab.2 The polymorphism distribution of ApoE in 105 cases with dyslipidemia from Guizhou[n(%)]

2.3 SLCO1B1基因多態(tài)性分布

針對血脂異?；颊逽LCO1B1基因388A>G、521T>C進行檢測，這2個位點的不同基因型可組成Ⅰ類(*1a/*1a，*1a/*1b，*1b/*1b)、Ⅱ類(*1a/*5，*1b/*15，*1a/*15 或 *1b/*5)、Ⅲ類(*5/*5，*5/*15，*15/*15)3個基因表型組，結(jié)果顯示，388A>G位點基因型頻率及等位基因頻率在血脂異?；颊吣信g差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，SLCO1B1各基因表型組Ⅰ類、Ⅱ類、Ⅲ類在血脂異?；颊吣信g差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，其中未檢出*5相關(guān)基因頻率。見表3。

2.4 與普通人群的比較

血脂異常患者ApoE、SLCO1B1基因頻率與千人基因組南方人群數(shù)據(jù)作比較，結(jié)果表明，526C>T位點基因型頻率在血脂異常人群和普通人群比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；其他基因多態(tài)性位點分布頻率與普通人群比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表4。

2.5 ApoE及SLCO1B1基因不同表型血脂異常人群的血脂水平

血脂異常人群中不同ApoE、SLCO1B1基因型的血脂水平比較結(jié)果顯示，ApoE基因E4型人群LDL-C、Apo-B濃度均高于E2型，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義；E2型人群TG、TC、HDL-C、Apo-A1濃度均高于E4型，其中TG指標(biāo)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；SLCO1B1基因Ⅰ類人群的TG、TC、HDL-C、LDL-C、Apo-A1和Apo-B的濃度和Ⅱ類比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。Ⅲ類人群僅有1位男性患者數(shù)據(jù)，未做統(tǒng)計分析。見表5。

表3 貴州地區(qū)105例血脂異常人群SLCO1B1基因位點的多態(tài)性分布[n(%)]Tab.3 The polymorphism distribution of SLCO1B1 in 105 cases with dyslipidemia from Guizhou[n(%)]

表4 貴州地區(qū)105例血脂異常人群和普通人群的基因頻率[n(%)]Tab.4 Gene frequency of 105 cases with dyslipidemia from Guizhou and general population[n(%)]

表5 貴州地區(qū)105例血脂異常人群中ApoE及SLCO1B1基因不同表型者的血脂水平Tab.5 Blood lipid levels of ApoE and SLCO1B1 genes in 105 cases with different phenotypes of

3 討論

心血管事件的發(fā)生是多種危險因素導(dǎo)致，其中血脂異常是重要的一項危險因素[13]。近年來，由高脂血癥引起的動脈粥樣硬化、心血管病的發(fā)病人數(shù)持續(xù)增加，已嚴(yán)重威脅著患者的生命健康和生活質(zhì)量。監(jiān)測血脂異常患者的血脂水平變化是有效實施ASCVD防止措施的重要基礎(chǔ)，其中LDL-C或TC水平對個體或群體ASCVD發(fā)病危險具有獨立的預(yù)測作用[14]。國內(nèi)相關(guān)血脂異常防治指南也提倡以降低血清LDL-C水平來防控ASCVD危險[15]。本研究中貴州地區(qū)105例不同血脂異常類型人群分別占比例依次為低HDL-C、高TG、高TC及高LDL-C，其中高LDL-C水平患者可作為后續(xù)血脂異常重點干預(yù)人群進行監(jiān)測。有研究表明雌激素具有血脂調(diào)節(jié)作用，可降低LDL-C水平，增加HDL-C水平，女性絕經(jīng)后雌激素水平下降，LDL-C水平升高風(fēng)險增加；中老年女性的飽和脂肪酸攝入量與TC水平增加正相關(guān)；Apo-A1主要存在于HDL中，與HDL-C水平正相關(guān)[16]。本研究中女性患者TC、HDL-C、Apo-A1濃度比男性患者高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，該結(jié)果與上述報道基本相符，推測該結(jié)果和雌激素對于血脂代謝的影響有關(guān)系，即是構(gòu)成同一地區(qū)男女血脂異常類型有差異的原因之一。

有效的降低血脂,尤其是降低血漿TC和LDL-C己成為防治心血管疾病的重要手段之一[17]。血脂異?；颊吲R床治療常用藥物為他汀類藥物，然而他汀藥物療效與個體遺傳背景密切相關(guān)[18]。目前研究結(jié)論表明，ApoE基因與SLCO1B1基因與他汀藥物的療效及不良反應(yīng)風(fēng)險有關(guān)[7，19]。

ApoE基因定位于19號染色體長臂13 區(qū)2帶(13q13.2)，基因全長3,611bp，共有6個外顯子，mRNA長1180 nt，編碼由317個氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì)[20]。其編碼的載脂蛋白與血脂代謝有直接關(guān)系，ApoE基因E4型血脂代謝能力低于E2、E3型人群[21]，且他汀藥物療效下降[22]，同時該基因型還與冠心病[23]、阿爾茨海默病的發(fā)病風(fēng)險相關(guān)[24]。本研究中貴州地區(qū)105例血脂異常人群ApoE基因分型中E3型頻率最高，E2型頻率最低，這與文獻報道大體相符[19，25]。有研究表明E3型人群罹患腦梗死、冠心病、老年癡呆風(fēng)險正常，E2型人群發(fā)病風(fēng)險低，E4型人群發(fā)病風(fēng)險高[26]。本研究中E2型在男性中占比低于女性,而 E4型在男性中占比高于女性，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，推測貴州地區(qū)105例血脂異常人群中男性罹患這些疾病的風(fēng)險要顯著高于女性，同時他汀藥物使用效果相比女性患者較差，需定期隨訪。本研究中貴州地區(qū)105例血脂異常人群的ApoE基因526C>T位點的基因型突變頻率與甘肅、重慶地區(qū)血脂異常人群的頻率分布基本一致[13,25]。但與普通人群相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，尤其是TT突變純合型比例高于普通人群，表明該位點突變或與血脂水平升高有關(guān)。

SLCO1B1基因定位于12 號染色體短臂12 區(qū)(12p12)，基因全長約109 kb，有14 個編碼外顯子和一個非編碼外顯子[26]。SLCO1B1基因3種型別與他汀的肌病風(fēng)險密切相關(guān)，Ⅱ類風(fēng)險增高，Ⅲ類風(fēng)險最高[27]，與機體脂代謝相關(guān)性較小[28]。本次研究中SLCO1B1三種基因型，在不同性別間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，推測他汀藥物應(yīng)用后的肌病發(fā)生風(fēng)險可能與性別無關(guān)。本文中貴州地區(qū)105例血脂異常人群中SLCO1B1Ⅰ類基因型頻率最高，Ⅱ類基因型頻率居中，Ⅲ類基因型頻率最低，該結(jié)果與甘肅、重慶地區(qū)血脂異常人群頻率分布基本一致[13,25]。同時，由于Ⅰ類基因型人群存在較低橫紋肌溶解癥或肌病風(fēng)險，Ⅲ類基因型存在高度風(fēng)險[27]，推測此次研究的貴州地區(qū)血脂異常人群服用他汀類藥物后出現(xiàn)橫紋肌溶解癥的風(fēng)險較小。

此外，ApoE基因E2與E4型的TG濃度差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，與劉國棟等[29]研究結(jié)果相近，E2型TG濃度高于E4型，推測在血脂異常人群中ApoE不同基因型與TG濃度可能具有一定相關(guān)性，大量研究均表明ApoE基因型與血脂水平存在差異[30-32]，因此臨床可根據(jù)基因型差異來評估指導(dǎo)臨床的治療方案。而SLCO1B1基因不同表型組的 TG、TC、HDL-C、LDL-C、Apo-A1及Apo-B的濃度差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)， 推測SLCO1B1基因與個體血脂水平無直接聯(lián)系。本研究初步探討了貴州地區(qū)105例血脂異常人群的ApoE基因、SLCO1B1基因多態(tài)性分布，同時針對該人群血脂水平特征進行基本分析，對于該地區(qū)人群他汀藥物使用提供了有益參考。但由于本研究入組人群較少，且患者均為血脂異常人群，相關(guān)基因突變情況及其血脂異常人群的血脂指標(biāo)特征具有一定局限，后期研究需增加樣本量，旨在為血脂異?；颊哂盟幥闆r作出合理評價并提供個性化用藥指南。