湖北荊州地區(qū)193例地中海貧血基因型分析

劉薈敏 張江召 臧思斌

地中海貧血(簡稱地貧)為常染色體隱性遺傳性血紅蛋白病，主要包括α-地貧和β-地貧，廣泛分布在全球地中海地區(qū)，我國多見于廣東、廣西、海南、云南、貴州等沿海地區(qū)[1]。關(guān)于地貧在湖北武漢地區(qū)有相關(guān)報(bào)道，但湖北其他地區(qū)報(bào)道較少。其發(fā)病機(jī)制是α-及β-珠蛋白基因的先天性缺陷，造成α-及β-珠蛋白肽鏈合成減少或缺失，從而引起血紅蛋白生成障礙，導(dǎo)致無效造血和溶血性貧血。隨著檢測技術(shù)發(fā)展及人口遷移，越來越多內(nèi)地地區(qū)檢測出地貧患者。本研究主要通過統(tǒng)計(jì)分析湖北荊州地區(qū)地貧發(fā)病率及其基因類型和構(gòu)成，旨在了解該地區(qū)α、β-地貧基因突變類型的分布情況，為預(yù)防地貧患兒的出生提供有效指導(dǎo)依據(jù)，同時(shí)可針對性地指導(dǎo)遺傳咨詢與產(chǎn)前診斷。

對象與方法

1.對象：收集2017年1月～2019年12月于我院門診就診或住院的地貧初篩陽性患者2 272例。平均紅細(xì)胞體積<80 fl或平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量<27 pg且血清鐵蛋白>12 μg/L定義為地貧初篩陽性。納入標(biāo)準(zhǔn)：血常規(guī)檢查符合貧血診斷標(biāo)準(zhǔn)(血紅蛋白男性<120 g/L、女性<110 g/L)且地貧初篩陽性患者。排除標(biāo)準(zhǔn):除貧血外還患有其他類型的血液系統(tǒng)疾病。所有患者均知情同意。

2.方法：所有患者均使用乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝管采血3 ml送檢我院實(shí)驗(yàn)室行地貧基因檢測。α-和β-地中海貧血基因檢測試劑盒購自于廣州達(dá)安檢測中心。采用跨躍斷裂點(diǎn)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)檢測中國人群中常見的3種α-地貧缺失型突變(--SEA、-α3.7、-α4.2),采用PCR結(jié)合反向斑點(diǎn)雜交技術(shù)檢測17種β-地貧點(diǎn)突變(CD41-42、CD71-72、CD17、-28、βE、IVS-II-654、IVS-I-1、IVS-I-5、CD43、CD31、CD27/28、-32、-29、CD30、CD14-15、CAP和Int)。

3.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：計(jì)數(shù)資料以例和百分比表示。

結(jié) 果

1.地貧基因檢測結(jié)果陽性患者各疾病類型發(fā)病率情況：2 272例患者中共193例地貧基因檢測結(jié)果陽性，其中男54例，女139例，男女比例為1∶2.57，發(fā)病率為8.49%。在193例地貧患者中，其中α-地貧64例，占33.2%(64/193)，β-地貧127例，占65.8%(127/193)，αβ復(fù)合型地貧2例，占1.0%(2/193)。

2.α-地貧基因型分布情況：在檢出的64例α-地貧基因攜帶者中，以東南亞型(--SEA/αα)基因型突變?yōu)橹?37例，57.8%),其次為-α3.7/αα型(11例，17.2%)。在不同臨床表型地貧中，以輕型表型為主(37例，57.8%),其次是靜止型(19例，29.8%)。見表1。

表1 α-地貧基因型情況

3.β-地貧基因型分布情況：在檢出的127例β-地貧基因攜帶者中，共檢出6種基因型，分別為IVS-Ⅱ-654(51例，40.2%)、CD17(34例，26.8%)、CD41-42/N(29例，22.8%)、CD27-28/N(9例，7.1%)、CD71-72(2例，1.6%)及CAP(2例，1.6%)。未發(fā)現(xiàn)CD31、-30、-32和Int基因型。本次檢測所有基因型中均為雜合子，未見純合子和雙重雜合子基因型。

4.αβ復(fù)合型地貧基因型分布情況：193例患者中共檢出2例αβ復(fù)合型地貧攜帶者，基因型均為CD41-42并WS點(diǎn)突變。

討 論

地貧是一組發(fā)病率非常高的單基因遺傳性慢性溶血性疾病，其發(fā)病率在所有小細(xì)胞低色素性貧血中僅次于缺鐵性貧血。重型地貧具有較高的致殘性、致死性，可導(dǎo)致出生死亡或缺陷，嚴(yán)重威脅生命健康。因此防止此類新生兒出生、做好產(chǎn)前診斷尤為重要。

大量研究數(shù)據(jù)結(jié)果表明，不同國家地區(qū)、不同省份的地貧攜帶率及基因突變型均有明顯差異[2-3]，即使是同一省份，不同地區(qū)之間的發(fā)病率亦不盡相同。本研究中地貧基因突變總檢出率達(dá)8.49%，高于目前報(bào)道的湖北省其他地區(qū)，低于南方各省份[4-7]。在檢出的193例地貧基因攜帶者中，以β-地貧最為多見，占65.8%，其次為α-地貧，占33.2%，而αβ復(fù)合型地貧較為少見，占1.0%。

本研究人群的α-地貧突變類型與國內(nèi)其他地區(qū)類似,均以--SEA/αα、α3.7/αα型為主，且占α-地貧的70%以上。其中以--SEA/αα(57.80%)基因型突變最為常見，與湖北武漢(54.80%)地區(qū)[6]報(bào)道結(jié)果相似，但高于湖北夷陵地區(qū)(23.68%)[7],低于福建福州地區(qū)(76.54%)[8]和重慶地區(qū)(63.45%)[9]。荊州地區(qū)α-地貧臨床表型多為輕型，其次為中間型和靜止型，未見嚴(yán)重類型α-地貧攜帶者。

在β-地貧攜帶者中共檢出6種基因型，以IVS-Ⅱ-654和CD41-42、CD17基因突變類型為主，突變頻率分別為40.2%、22.8%、26.8%,與湖北武漢地區(qū)(構(gòu)成比分別為42.93%、22.36%和14.13%)報(bào)道結(jié)果相似[10]，但與湖北夷陵地區(qū)(IVS-Ⅱ-654和CD17基因型為主，分別占26.32%、15.79%)、廣東地區(qū)(CD41-42、IVS-Ⅱ基因型為主，各占37.79%、29.92%)、福建地區(qū)(IVS-Ⅱ-654基因型為主，占45.69%)報(bào)道明顯不同[5,7,11]。與南方各省份、地區(qū)間基因型比較略有差異[8-9]。荊州地區(qū)β-地貧攜帶者中未發(fā)現(xiàn)少見基因型，更未發(fā)現(xiàn)罕見基因型，地域特色比較明顯。本研究中αβ復(fù)合型地貧共檢出2例，均為CD41-42并WS點(diǎn)突變基因型，類型相對單一，沒有其他地區(qū)突變類型多樣化[8,10]。

地貧的臨床表現(xiàn)主要為小細(xì)胞低色素性貧血，即平均紅細(xì)胞體積和平均紅細(xì)胞血紅蛋白水平偏低，這與缺鐵性貧血相似，且輕型或中間型地貧患者一般無明顯臨床表現(xiàn)，因此此類患者容易被誤診為缺鐵性貧血而不被重視。同型輕型地貧患者生育后代，有1/4機(jī)率會(huì)生下重型地貧患兒[12]。據(jù)報(bào)道，每年約有30萬重型地貧患兒出生，這對整個(gè)家庭會(huì)造成重大的經(jīng)濟(jì)及心理負(fù)擔(dān)。雖然荊州地區(qū)未見重型地貧患者，但加強(qiáng)地貧防控仍然重要。尤其是伴有小細(xì)胞低色素性貧血但不伴缺鐵、輕度黃疸的兒童及育齡期女性，應(yīng)該嚴(yán)格篩選，預(yù)防重型地貧患兒出現(xiàn)。隨著檢測技術(shù)的發(fā)展，地貧檢測技術(shù)有了突飛猛進(jìn)的發(fā)展，目前比較先進(jìn)的技術(shù)有高通量測序(NGS)、γ-珠蛋白形成的γ4(Hb Bart’s)含量分析、LUMINEX MAGPIX液相芯片懸浮技術(shù)等[6,13]。這次檢測技術(shù)可發(fā)現(xiàn)更多的地貧攜帶者，能更加精確地檢測出重型地貧患者,為預(yù)防重癥地貧患兒出生有重要指導(dǎo)意義。

湖北荊州地區(qū)屬于中部內(nèi)陸地區(qū)，不是地貧高發(fā)區(qū)域，但由于經(jīng)濟(jì)發(fā)展，受人口流動(dòng)及遷移影響，地貧攜帶者發(fā)生率明顯增加?；驒z測技術(shù)可精準(zhǔn)檢測出地貧的類型，為地貧的診斷提供科學(xué)依據(jù)。由于地貧目前無特效治療手段，相關(guān)知識(shí)宣傳及防控尤為重要，本研究通過分析荊州地區(qū)地貧發(fā)生率及基因型，有助于全面了解荊州地區(qū)地貧基因分布情況，對促進(jìn)荊州地區(qū)地貧防控，進(jìn)一步指導(dǎo)優(yōu)生優(yōu)育提供相關(guān)理論依據(jù)。同時(shí)，對提高當(dāng)?shù)厝丝谫|(zhì)量有著重大的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益。