披針葉茴香果實(shí)中1個(gè)新的異戊烯基取代C6-C3類化合物

聶 偉, 丁林芬, 雷 鐵, 保 義, 趙雪宇, 劉貞祥, 宋流東*, 吳興德1, *

?化學(xué)成分 ?

披針葉茴香果實(shí)中1個(gè)新的異戊烯基取代C6-C3類化合物

聶 偉1, 2, 3, 丁林芬2＃, 雷 鐵2, 保 義3, 趙雪宇2, 劉貞祥2, 宋流東2*, 吳興德1, 3*

1. 云南民族大學(xué) 民族藥資源化學(xué)國家民族事務(wù)委員會(huì)-教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南 昆明 650500 2. 昆明醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院暨云南省天然藥物藥理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南 昆明 650500 3. 中國科學(xué)院昆明植物研究所 植物化學(xué)與西部植物資源持續(xù)利用國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南 昆明 650201

對披針葉茴香果實(shí)的化學(xué)成分進(jìn)行研究。采用正相硅膠、MCI gel、RP-C18、Sephadex LH-20、HPLC等多種色譜技術(shù)進(jìn)行分離純化，根據(jù)波譜數(shù)據(jù)鑒定化合物的結(jié)構(gòu)。并對化合物進(jìn)行神經(jīng)保護(hù)活性評價(jià)。從披針葉茴香果實(shí)95%乙醇提取物中分離得到15個(gè)化合物，包括4個(gè)異戊烯基取代C6-C3類、3個(gè)苯丙素類、1個(gè)苯乙醇苷類、5個(gè)-prezizanne倍半萜類、2個(gè)脫落酸衍生物，分別鑒定為披針葉茴香酮A（1）、illioliganone C（2）、2-allyl-2-(3-methylbut- 2-enyl)-4,5-methylenedioxy-cyclohexa-3,5-dien-1-one（3）、4-allyl-2,6-dimethoxy-3-(3-methyl-2-butenyl)phenol（4）、3,4′-二羥基苯丙酮（5）、2,6-二甲氧基-4-烯丙基苯酚（6）、3,4′-二羥基苯丙酮-3--β--吡喃葡萄糖苷（7）、苯乙醇--β--吡喃葡萄糖苷（8）、2α-羥基莽草毒素（9）、2α-羥基新莽草毒素（10）、新莽草毒素（11）、莽草毒素（12）、2-氧代-6-去羥基新莽草素（13）、-5-(3,8-dihydroxy-1,5-dimethyl-7-oxa-6-oxobicyclo[3,2,1]-oct-8-yl)-3-methyl-2,4-pentadienoic acid（14）、紅花菜豆酸（15）?；衔?為新化合物，無明顯神經(jīng)保護(hù)活性；化合物5、7、8為首次從該屬植物中發(fā)現(xiàn)，化合物2～8、11、13～15為首次從該植物中分離得到。

披針葉茴香；-prezizaane型倍半萜；異戊烯基取代C6-C3類化合物；披針葉茴香酮A；3,4′-二羥基苯丙酮；苯乙醇--β--吡喃葡萄糖苷；新莽草毒素

八角屬Linn.是八角科（Illiciaceae）僅有的1個(gè)屬，該屬全球近50種，主要分布在亞洲東部和東南部，中國有28種，主要分布在我國南部和西南地區(qū)[1-2]。八角屬植物常以其果實(shí)，根皮入藥，用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、跌打損傷、外傷出血等癥，具有重要藥用價(jià)值，其中八角茴香和地楓皮被《中國藥典》收載。八角茴香為八角Hook. f.的干燥成熟果實(shí)，有溫中理氣、健胃止嘔、祛風(fēng)、祛痰、鎮(zhèn)痛之效，可用于治療嘔吐、腹脹、疝氣痛等病癥；地楓皮藥材為植物地楓皮B. N. Chang et al.的干燥樹皮，有驅(qū)風(fēng)除濕、行氣止痛之效，可用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腰肌勞損等癥[3]。國內(nèi)外學(xué)者對八角屬植物展開了較為系統(tǒng)的化學(xué)成分研究，發(fā)現(xiàn)-prezizaane、-cedrane、anislactone型高氧化度倍半萜和異戊烯基取代的C6-C3類化合物為主要特征成分，并且發(fā)現(xiàn)部分化合物具有顯著神經(jīng)營養(yǎng)、抗乙酰膽堿酯酶、抗病毒等活性[4-8]。

披針葉茴香A. C. Smith. 為八角屬植物，又名紅毒茴、莽草，為我國特有植物，主要分布在我國江西、湖南、湖北、貴州等地?！吨腥A本草匯編》記載，披針葉茴香根和根皮入藥，主治跌打損傷、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎[9]。文獻(xiàn)研究報(bào)道該植物中富含單萜、高氧化度倍半萜、異戊烯基取代的C6-C3類化合物等成分[10-14]。同時(shí)本課題組前期對披針葉茴香果實(shí)進(jìn)行研究，從中發(fā)現(xiàn)1個(gè)具有5/5/6三環(huán)骨架的新型-prezizaane倍半萜和2個(gè)10,14-cyclo--prezizaane倍半萜[11]。為進(jìn)一步深入探究該植物的化學(xué)成分，本實(shí)驗(yàn)繼續(xù)對披針葉茴香果實(shí)開展化學(xué)成分研究，從中分離得到15個(gè)化合物（圖1），分別鑒定為披針葉茴香酮A（illancinone A，1）、illioliganone C（2）、2-allyl-2-(3-methylbut- 2-enyl)-4,5-methylenedioxy-cyclohexa-3,5-dien-1-one（3）、4-allyl-2,6-dimethoxy-3-(3-methyl-2-butenyl) phenol（4）、3,4′-二羥基苯丙酮（3,4′-dihydroxy- propiophenone，5）、2,6-二甲氧基-4-烯丙基苯酚（2,6-dimethoxy 4-allylphenol，6）、3,4′-二羥基苯丙酮-3--β--吡喃葡萄糖苷（3,4′-dihydroxy-propio phenone-3--β--glucopyranoside，7）、苯乙醇--β--吡喃葡萄糖苷（phenylethyl--β--gluco- pyranoside，8）、2α-羥基莽草毒素（2α- hydroxyanisatin，9）、2α-羥基新莽草毒素（2α-hydroxy- neoanisatin，10）、新莽草毒素（neoanisatin，11）、莽草毒素（anisatin，12）、2-氧代-6-去羥基新莽草素（2-oxo-6-dehydroxy-neoanisatin，13）、-5- (3,8-dihydroxy-1,5-dimethyl-7-oxa-6-oxobicyclo [3,2,1]-oct-8-yl)-3-methyl-2,4-pentadienoic acid（14）、紅花菜豆酸（phaseic acid，15），其中化合物1～4為異戊烯基取代的C6-C3類，5～7為苯丙素類，8為苯乙醇苷類，9～13為莽草毒素亞型- prezizanne倍半萜，14和15為脫落酸衍生物?；衔?為新化合物，化合物5、7、8為首次從該屬植物中發(fā)現(xiàn)，化合物2～8、11、13～15為首次從該植物中分離得到。

圖1 化合物1～15的結(jié)構(gòu)

1 儀器與材料

Bruker Avance III 500 MHz、Avance III 600 MHz、AV 800 MHz核磁共振儀（德國Bruker公司）；Thermo NICOLET iS10中紅外光譜儀（美國Thermo公司）；Shimadzu UV-2700紫外可見分光光度儀（日本Shimadzu公司）；Jasco P-1020型全自動(dòng)數(shù)字旋光儀（日本Jasco公司）；Shimadzu UPLC-IT-TOF色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（日本Shimadzu公司）；Applied Photophysics V100圓二色譜儀（英國Applied Photophysics公司）；Multiskan FC酶標(biāo)儀（美國Thermo公司）；Agilent 1260高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；中壓液相色譜儀（上海利穗科技有限公司）；Zorbax SB-C18色譜柱（150 mm×9.4 mm，5 μm，美國Agilent公司）；柱色譜硅膠（200～300目，臨沂市海祥化工廠）；GF254薄層色譜硅膠板（臨沂市海祥化工廠）；制備薄層色譜硅膠板（臨沂市海祥化工廠）；Sephadex LH-20（瑞典Amersham Biosciences公司）；MCI gel（CHP 20P，75～150 μm；日本三菱化學(xué)株式會(huì)社）；RP-C18（50 μm，日本YMC公司）；色譜甲醇（北京百靈威科技有限公司）；分析甲醇（天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司）；所有溶劑均為工業(yè)溶劑重蒸后使用；1-甲基-4-苯基吡啶離子（MPP+，德國Sigma公司）；3-(4,5- dimethylthiazol- 2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)- 2-tetrazolium（MTS，美國Promega公司）；PC12細(xì)胞株（美國ATCC細(xì)胞庫）。

藥材于2019年8月采自廣西資源縣，并由中國科學(xué)院昆明植物研究所成曉副研究員鑒定為八角屬植物披針葉茴香A. C. Smith. 果實(shí)。標(biāo)本（20190807i）保存在昆明植物研究所植物化學(xué)與西部資源持續(xù)利用國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

2 提取與分離

披針葉茴香干燥果實(shí)8 kg，粉碎后用95%乙醇冷浸提?。看?8 h，共3次），合并提取液，減壓蒸餾濃縮得到總浸膏773 g，分散于水中用醋酸乙酯萃取3次得到醋酸乙酯萃取浸膏222 g。醋酸乙酯萃取浸膏經(jīng)中壓液相色譜（MCI gel），以甲醇-水（30∶70→100∶0）梯度洗脫經(jīng)TLC檢測，合并相同部分得Fr. 1～6。Fr. 1（10.2 g）經(jīng)反相柱色譜（RP-C18），以甲醇-水（5∶95→50∶50）梯度洗脫得到Fr. 1.1～1.7。Fr. 1.1（210 mg）經(jīng)正相硅膠柱色譜（石油醚-醋酸乙酯6∶4）分離得到化合物10（50 mg）。Fr. 1.3（330 mg）經(jīng)正相硅膠柱色譜，以二氯甲烷-醋酸乙酯（6∶4）洗脫得到化合物9（100 mg）。Fr. 2（5.6 g）經(jīng)正相硅膠柱色譜（石油醚-醋酸乙酯8∶2→6∶4）梯度洗脫，經(jīng)薄層色譜硅膠板檢測合并相同部分得到Fr. 2.1～2.4。Fr. 2.2（120 mg）經(jīng)正相硅膠柱色譜（石油醚-醋酸乙酯7.5∶2.5）分離得到化合物5（3.6 mg）。Fr. 2.4（350 mg）經(jīng)正相硅膠柱色譜（石油醚-異丙醇9∶1），再經(jīng)半制備HPLC（甲醇-水17∶83，體積流量3 mL/min），得到化合物14（20 mg，R＝29.1 min）。Fr. 3（8.8 g）經(jīng)正相硅膠柱色譜（氯仿-甲醇200∶1→50∶1）梯度洗脫，合并相同部分得到Fr. 3.1～3.3。Fr. 3.1（620 mg）經(jīng)正相硅膠柱色譜（氯仿-丙酮8.5∶1.5）得到2個(gè)組分Fr. 3.1.1和Fr. 3.1.2，再分別經(jīng)甲醇重結(jié)晶得到化合物12（166 mg）、13（1.6 g）。Fr. 4（16 g）經(jīng)反相柱色譜（RP-C18），以甲醇-水（40∶40→60∶40）梯度洗脫，經(jīng)薄層色譜硅膠板檢測合并為4個(gè)組分Fr. 4.1～4.4。Fr. 4.1經(jīng)正相硅膠柱色譜（石油醚-醋酸乙酯6.5∶3.5）得到化合物11（200 mg）。Fr4.3（180 mg）經(jīng)反復(fù)正相硅膠柱色譜（石油醚-丙酮9∶1、氯仿-丙酮20∶1）得到化合物1（2 mg）、2（5.6 mg）、15（11.6 mg）。Fr. 5（15 g）經(jīng)反相柱色譜（RP-C18），以甲醇-水（50∶50→70∶30）梯度洗脫，合并相同部分得到Fr. 5.1～5.5。Fr. 5.1（2.3 g）經(jīng)正相硅膠柱色譜（石油醚-醋酸乙酯20∶1→9∶1）梯度洗脫，分離得到Fr. 5.1.1～5.1.3。Fr. 5.1.1（340 mg）經(jīng)Sephadex LH-20（氯仿-甲醇1∶1），正相硅膠柱色譜（石油醚-醋酸乙酯20∶1）分離得到化合物6（121 mg）。Fr. 5.2（160 mg）經(jīng)正相硅膠柱色譜，以石油醚-丙酮（15∶1）洗脫得到化合物4（16 mg）。Fr. 5.3（106 mg）經(jīng)制備薄層色譜硅膠板（氯仿-甲醇9.8∶0.2）分離得到化合物3（10.4 mg）。

水層浸膏（551 g）經(jīng)D101大孔樹脂柱色譜分離，先用純水洗脫（20 L），然后用純甲醇洗脫（30 L），濃縮甲醇洗脫液得到浸膏62 g。甲醇洗脫部分浸膏經(jīng)中壓液相色譜（MCI gel），用甲醇-水（5∶95→60∶40）梯度洗脫，合并相同部分得到Fr. 7～14。Fr. 8（220 mg）經(jīng)正相硅膠柱色譜（醋酸乙酯-丙酮15∶1）得到化合物7（31 mg）。Fr. 11（120 mg）經(jīng)正相硅膠柱色譜，以氯仿-丙酮（5.5∶4.5）洗脫得到化合物8（11.1 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：無色油狀物，根據(jù)正離子HR-ESI-MS （/: 283.154 2 [M＋H]+，計(jì)算值283.154 0）確定分子式為C15H22O5，不飽和度為5。+208.7 (0.12, MeOH)；(nm): 249 (3.94); IR光譜中顯示該化合物中存在羥基(3440 cm?1)、羰基(1707 cm?1)、雙鍵(1644 cm?1) 官能團(tuán)。分析化合物1的1H-NMR (800 MHz, DMSO-6) 和13C-NMR (200 MHz, DMSO-6) 數(shù)據(jù)（表1），提示該化合物中存在2個(gè)甲基[H1.01 (3H, s, H3-13), 1.00 (3H, s, H3-14)；C27.3 (C-13), 24.6 (C-14)]，1個(gè)氧甲基[H3.67 (s);C56.3]，1個(gè)烯丙基[H2.45 (1H, dd,= 13.7, 8.6 Hz, H-7a), 1.97 (1H, dd,= 13.7, 8.6 Hz, H-7b), 5.61 (1H, m, H-8), 5.00 (2H, m, H-9)；C40.9 (C-7), 134.0 (C-8), 118.4 (C-9)]，1個(gè)β位有取代的α,β不飽和酮[H5.48 (1H, s, H-6)；C200.2 (C-1), 170.6 (C-5) , 103.9 (C-6)], 2個(gè)亞甲基[H1.95 (1H,= 12.5 Hz, H-3α), 1.44 (1H, d,= 12.5 Hz, H-3β), 1.36 (1H, dd,= 12.3, 3.2 Hz, H-10α), 1.28 (1H, t,= 12.3 Hz, H-10β)；C42.1 (C-3), 33.7 (C-10)]，1個(gè)被氧化的次甲基[H3.19 (1H,= dd, 12.3, 3.2 Hz，H-11)；C77.3 (C-11)]，1個(gè)半縮醛[H6.84 (s, 4-OH)；C93.4 (C-4)]，1個(gè)被氧化的叔碳[C70.2 (C-12)]，1個(gè)季碳[C46.0 (C-2)]。由于α, β不飽和酮和烯丙基占據(jù)3個(gè)不飽和度，結(jié)合上述波譜數(shù)據(jù)分析表明化合物1為具有雙環(huán)結(jié)構(gòu)的異戊烯基取代C6-C3類化合物。

表1 化合物1的1H-和13C-NMR數(shù)據(jù)

Table 1 1H- and 13C-NMR data for compound 1

碳位1a1bδHδCδHδC 1 200.2 201.3 2 46.0 47.5 3α1.95 (1H, d, J = 12.5 Hz)42.11.68 (1H, d, J = 12.7 Hz)41.3 3β1.44 (1H, d, J = 12.5 Hz) 2.25 (1H, d, J = 12.7 Hz) 4 93.4 94.4 5 170.6 168.8 65.48 (1H, s)103.95.53 (1H, s)104.8 7a2.45 (1H, dd, J = 13.7, 8.6 Hz)40.92.68 (1H, dd, J = 13.7, 8.6 Hz)41.9 7b1.97 (1H, dd, J = 13.7, 8.6 Hz) 2.07 (1H, dd, J = 13.7, 8.6 Hz) 85.61 (1H, m)134.05.68 (1H, m)133.6 95.00 (2H, m)118.45.09 (2H, m)119.5 10α1.36 (1H, dd, J = 12.3, 3.2 Hz)33.71.51 (2H, m)34.8 10β1.28 (1H, t, J = 12.3 Hz) 113.19 (1H, dd, J = 12.3, 3.2 Hz)77.33.41 (1H, dd, J = 9.3, 6.5 Hz)78.7 12 70.2 72.1 131.01 (3H, s)27.31.20 (3H, s)27.2 141.00 (3H, s)24.61.15 (3H, s)24.6 OCH33.67 (3H, s)56.33.80 (3H, s)57.2 12-OH4.23 (s) 4-OH6.84 (s)

氘代二甲基亞砜中測得的數(shù)據(jù)（800/200 MHz）；氘代氯仿中測得數(shù)據(jù)（600/150 MHz）

Data were recorded in DMSO-6(800/200 MHz);Data were recorded in CDCl3(600/150 MHz)

HMBC譜中（圖2），H-6與C-1, C-2, C-4, C-5；5-OCH3(H3.67) 與C-5，H2-3與C-1, C-4, C-5的相關(guān)，構(gòu)建了該化合物中的六元碳環(huán)，并且C-5和C-6位有雙鍵取代，C-1和C-5分別被羰基和甲氧基取代。1H-NMR譜中H4.23為單峰，同時(shí)該活潑氫與C-12, C-13, C-14存在HMBC相關(guān)，表明C-12連有羥基取代。HMBC譜中H-11與C-2, C-10相關(guān)，以及H2-10/H-11的1H-1H COSY相關(guān)，結(jié)合C-4位低場化學(xué)位移(C93.4) 分析表明C-2和C-11位通過氧橋相連，從而構(gòu)建該化合物中的哌啶環(huán)。H2-7與C-1和C-10的HMBC相關(guān)，以及H2-7/H-8/H-9的1H-1H COSY相關(guān)，說明C-2位有烯丙基取代。此外，12-OH, H-13, H-14與C-11的HMBC相關(guān)，表明2-羥基-異丙基在C-11位取代。最后，化合物1的相對構(gòu)型通過分析耦合常數(shù)和ROESY相關(guān)確定（圖2）。由于化合物1具有橋環(huán)剛性結(jié)構(gòu)，確定4-OH和C-2位烯丙基為β朝向。1H-NMR譜中H-11為雙重峰，耦合常數(shù)為12.3和3.2 Hz，表明H-11為α朝向的直立鍵，進(jìn)一步通過H-6/H-11, H-3β/H-10β, H-10β/H-13的ROESY相關(guān)得到證實(shí)。最后，通過計(jì)算ECD確定化合物1的絕對構(gòu)型。使用CONFLEX 8A軟件對化合物1（2,4,11）進(jìn)行構(gòu)象搜索，獲得7個(gè)構(gòu)象（Boltzmann distribution＞5%）。利用高斯09軟件根據(jù)密度泛函理論（DFT），采用B3LYP/6-31＋G (d) 在極化連續(xù)模型PCM （甲醇）中對初始構(gòu)象進(jìn)行優(yōu)化。優(yōu)化后的構(gòu)型根據(jù)含時(shí)密度泛函理論（TDDFT），采用B3LYP/6-311++G (2d, p) 在極化連續(xù)模型PCM（甲醇）中進(jìn)行ECD計(jì)算。運(yùn)用SpecDis 1.70.1軟件擬合，生成2,4,11-1和2,4,11-1的計(jì)算ECD圖。如圖3所示，2,4,11-1計(jì)算ECD譜圖與實(shí)測ECD譜圖非常吻合。因此，化合物1的絕對構(gòu)型確定為2,4,11經(jīng)檢索化合物1為新化合物，命名為披針葉茴香酮A。

圖2 化合物1的1H-1H COSY、HMBC及ROESY相關(guān)

圖3 化合物1的實(shí)測和計(jì)算ECD譜圖

化合物2：無色油狀物，ESI-MS/:303 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, acetone-6): 5.63 (1H, s, H-3), 5.47 (1H, s, H-6), 2.46 (1H, dd,= 13.2, 7.2 Hz, H-7a), 2.27 (1H, dd,= 13.2, 7.4 Hz, H-7b), 5.55 (1H, m, H-8), 4.94 (1H, d,= 16.0 Hz, H-9a), 4.89 (1H, d,= 10.0 Hz, H-9b), 2.15 (1H, d,= 13.9 Hz, H-10a), 1.50 (1H, dd,= 13.9, 9.4 Hz, H-10b), 3.07 (1H, m, H-11), 1.00 (3H, s, H-13), 1.01 (3H, s, H-14), 5.89 (1H, s, H-15a), 5.87 (1H, s, H-15b), 3.47 (1H, d,= 4.9 Hz, 11-OH), 3.23 (1H, s, 12-OH)；13C-NMR (125 MHz, acetone-6):202.1 (C-1), 53.6 (C-2), 110.7 (C-3), 143.6 (C-4), 165.5 (C-5), 99.0 (C-6), 46.8 (C-7), 134.1 (C-8), 117.9 (C-9), 43.5 (C-10), 76.3 (C-11), 72.7 (s, C-12), 25.6 (q, C-13), 24.2 (q, C-14), 102.5 (C-15)。以上譜學(xué)數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[15]，鑒定化合物2為illioliganone C。

化合物3：淡黃色油狀物，ESI-MS/:271 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3): 5.61 (1H, s, H-3), 5.42 (1H, s, H-6), 2.60 (1H, dd,= 13.3, 7.3 Hz, H-7a), 2.20 (1H, dd,= 13.3, 7.4 Hz, H-7b), 5.55 (1H, m, H-8), 4.98 (1H, d,= 16.0 Hz, H-9a), 4.95 (1H, d,= 10.0 Hz, H-9b), 2.52 (1H, dd,= 14.0, 7.5 Hz, H-10a), 2.24 (1H, dd,= 14.0, 7.5 Hz, H-10b), 4.92 (1H, t,= 7.5 Hz, H-11), 1.64 (3H, s, H-13), 1.58 (3H, s, H-14), 5.81 (2H, d,= 5.7 Hz, H-15)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3): 202.8 (C-1), 54.5 (C-2), 109.2 ( C-3), 144.3 (C-4), 164.4 (C-5), 100.0 (C-6), 45.1 (C-7), 133.5 (C-8), 118.4 (C-9), 39.7 (C-10), 118.8 (C-11), 135.3 (C-12), 18.4 (C-13), 26.3 (C-14), 101.7 (C-15)。以上譜學(xué)數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[16]，故鑒定化合物3為2-allyl-2-(3-methylbut- 2-enyl)-4,5-methylenedioxy-cyclohexa-3,5-dien-1-one。

化合物4：無色油狀物，ESI-MS/:285 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3): 6.49 (1H, s, H-5), 3.31 (4H, m, H-7, 10), 5.95 (1H, m, H-8), 5.04 (2H, m, H-9), 4.98 (1H, 1H, t,= 7.0 Hz, H-11), 3.85 (3H, s, OCH3), 3.84 (3H, s, OCH3), 1.76 (3H, s, H-13), 1.68 (3H, s, H-16)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3): 131.5 (C-1), 146.0 (C-2), 126.7 (C-3), 129.5 (C-4), 108.4 (C-5), 145.9 (C-6), 37.3 (C-7), 137.9 (C-8), 115.9 (C-9), 25.5 (C-10), 124.1 (C-11), 137.2 (C-12), 18.3 (C-13), 26.1 (C-14), 61.1 (OCH3), 56.5 (OCH3)。以上譜學(xué)數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[16]，鑒定化合物4為4-allyl-2,6-dimethoxy-3-(3-methyl- 2-butenyl)phenol。

化合物5：無色油狀物，ESI-MS/:189 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, pyridine-5): 3.38 (2H, t,= 6.2 Hz, H-2) 4.36 (2H, t,= 6.2 Hz, H-3), 8.16 (2H, d,= 8.6 Hz, H-2′, 6′), 7.16 (2H, d,= 8.4 Hz, H-3′, 5′)；13C-NMR (125 MHz, pyridine-5): 198.3 (C-1), 42.3 (C-2), 58.7 (C-3), 130.1 (C-1′), 131.6 (C-2′, 6′), 116.4 (C-3′, 5′), 164.0 (C-4′)。以上譜學(xué)數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[17]，鑒定化合物5為3, 4′-二羥基苯丙酮。

化合物6：白色粉末，ESI-MS/:217 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, CD3OD): 6.41 (2H, s, H-3, 5), 3.25 (2H, dd,= 6.8, 1.5 Hz, H-7), 5.92 (1H, m, H-8), 5.01 (2H, m, H-9), 3.77 (6H, s, OCH3)；13C-NMR (125 MHz, CD3OD): 132.0 (C-1), 149.1 (C-2, 6), 106.7 (C-3, 5), 134.7 (C-4), 41.2 (C-7), 139.2 (C-8), 115.6 (C-9), 56.6 (OCH3)。以上譜學(xué)數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[18]，鑒定化合物6為2,6-二甲氧基- 4-烯丙基苯酚。

化合物7：無色油狀物，ESI-MS/:351 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, CD3OD): 3.14 (2H, m, H-2), 3.29 (2H, m, H-3), 7.90 (2H, m, H-2′, 6′), 4.31 (1H, d,= 7.8 Hz, H-1′′)；13C-NMR (125 MHz, CD3OD): 199.5 (C-1), 39.5 (C-2), 66.6 (C-3), 130.2 (C-1′), 132.1 (C-2′, 6′), 116.4 (C-3′, 5′), 164.1 (C-4′), 104.8 (C-1′′), 75.2 (C-2′′), 78.1 (C-3′′), 71.7 (C-4′′), 78.1 (C-5′′), 62.8 (C-6′′)。以上譜學(xué)數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[19]，鑒定化合物7為3,4′-二羥基苯丙酮- 3--β--吡喃葡萄糖苷。

化合物8：無色油狀物，ESI-MS/:307 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, CD3OD): 7.27 (5H, m, H-2～6), 2.95 (2H, m, H-7), 4.10 (1H, m, H-8a), 3.74 (1H, m, H-8b), 4.32 (1H, d,= 7.7 Hz, H-1′′)；13C-NMR (125 MHz, CD3OD): 139.9 (C-1), 129.2 (C-2, 6), 129.9 (C-3, 5), 127.1(C-4), 37.1 (C-7), 71.6 (C-8), 104.2 (C-1′), 74.9 (C-2′), 77.8 (C-3′), 71.5 (C-4′), 77.9 (C-5′), 62.6 (C-6′)。以上譜學(xué)數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[20]，鑒定化合物8為苯乙醇--β--吡喃葡萄糖苷。

化合物9：無色針狀結(jié)晶（甲醇），ESI-MS/:367 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, CD3OD): 2.26 (1H, m, H-1), 3.82 (1H, dd,= 8.1, 6.6 Hz, H-2), 4.67 (1H, d,= 8.1 Hz, H-3), 4.26 (1H, dd,= 3.8, 2.1 Hz, H-7), 2.53 (1H, dd,= 14.8, 2.1 Hz, H-8a), 2.11 (1H, dd,= 14.8, 3.8 Hz, H-8b), 4.17 (1H, s, H-10), 1.52 (3H, s, H-12), 4.45 (1H, d,= 6.7 Hz, H-14b), 4.06 (1H, d,= 6.7 Hz, H-14a), 1.14 (3H, d,= 7.2 Hz, H-15)；13C-NMR (125 MHz, CD3OD): 48.3 (C-1), 77.1 (C-2), 70.6 (C-3), 84.9 (C-4), 65.4 (C-5), 75.3 (C-6), 82.4 (C-7), 27.5 (C-8), 48.5 (C-9), 69.8 (C-10), 175.7 (C-11), 21.8 (C-12), 169.2 (C-13), 65.5 (C-14), 11.7 (C-15)。以上譜學(xué)數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[21]，故鑒定化合物9為2α-羥基新莽草毒素。

化合物10：無色針狀結(jié)晶（甲醇）。ESI-MS/:351 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, acetone-6): 2.36 (1H, m, H-1), 4.08 (1H, m, H-2), 2.84 (1H, dd,= 14.0, 9.0 Hz, H-3a), 1.62 (1H, dt,= 14.0, 0.9 Hz, H-3b), 4.20 (1H, dd,= 3.7, 2.2 Hz, H-7), 2.57 (1H, dd,= 14.7, 2.2 Hz, H-8a), 2.08 (1H, dd,= 14.7, 3.7 Hz, H-8b), 4.24 (1H, d,= 3.5 Hz, H-10), 1.48 (3H, s, H-12), 4.28 (1H, d,= 6.5 Hz, H-14a), 3.99 (1H, d,= 6.5 Hz, H-14b), 1.14 (3H, d,= 7.2 Hz, H-15), 3.74 (1H, d,= 6.5 Hz, 2-OH), 5.18 (1H, d,= 3.5 Hz, 10-OH), 6.13 (1H, s, 4-OH), 5.55 (1H, s, 7-OH)；13C-NMR (125 MHz, acetone-6): 49.5 (C-1), 78.9 (C-2), 43.6 (C-3), 84.7 (C-4), 66.7 (C-5), 75.1 (C-6), 82.0 (C-7), 27.8 (C-8), 52.4 (C-9), 70.0 (C-10), 174.4 (C-11), 22.7 (C-12), 168.1 (C-13), 65.5 (C-14), 11.6 (C-15)。以上譜學(xué)數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的基本一致[22]，鑒定化合物10為2α-羥基新莽草毒素。

化合物11：白色粉末，ESI-MS/:335 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3): 4.60 (1H, m, H-7), 4.12 (1H, s, H-10), 4.34 (1H, d,= 6.4 Hz, H-14a), 4.19 (1H, d,= 6.4 Hz, H-14b), 1.35 (3H, s, H-12), 1.26 (3H, d,= 7.2 Hz, H-15)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3): 34.9 (C-1), 28.2 (C-2), 32.9 (C-3), 84.4 (C-4), 65.7 (C-5), 81.1 (C-6), 80.3 (C-7), 28.2 (C-8), 53.2 (C-9), 71.0 (C-10), 174.7 (C-11), 22.9 (C-12), 171.9 (C-13), 64.1 (C-14), 12.6 (C-15)。以上譜學(xué)數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的基本一致[23]，鑒定化合物11為新莽草毒素。

化合物12：無色針狀結(jié)晶（甲醇），ESI-MS/:351 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, acetone-6): 4.94 (1H, m, H-3), 4.17 (1H, dd,= 3.7, 2.1 Hz, H-7), 4.26 (1H, d,= 3.3 Hz, H-10), 4.39 (1H, d,= 6.6 Hz, H-14a), 3.97 (1H, d,= 6.6 Hz, H-14b), 1.44 (3H, s, H-12), 1.01 (3H, d,= 7.1 Hz, H-15), 4.76 (1H, d,= 5.9 Hz, 3-OH), 5.18 (1H, d,= 3.3 Hz, 10-OH)；13C-NMR (125 MHz, acetone-6): 37.9 (C-1), 41.9 (C-2), 71.6 (C-3), 85.4 (C-4), 65.4 (C-5), 75.0 (C-6), 82.1 (C-7), 27.4 (C-8), 50.8 (C-9), 70.4 (C-10), 174.3 (C-11), 22.0 (C-12), 168.0 (C-13), 65.0 (C-14), 13.7 (C-15)。以上譜學(xué)數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[22]，鑒定化合物12為莽草毒素。

化合物13：無色針狀結(jié)晶（甲醇），ESI-MS/:349 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, CD3OD): 4.57 (1H, m, H-7), 4.83 (1H, s, H-10), 4.36 (1H, d,= 6.7 Hz, H-14a), 4.16 (1H, d,= 6.7 Hz, H-14b), 1.21 (3H, d,= 7.3 Hz, H-12), 1.08 (3H, d,= 7.1 Hz, H-15)；13C-NMR (125 MHz, CD3OD): 48.7 (C-1), 216.6 (C-2), 46.2 (C-3), 77.7 (C-4), 66.4 (C-5), 35.7 (C-6), 80.1 (C-7), 31.3 (C-8), 50.8 (C-9), 70.0 (C-10), 175.8 (C-11), 12.5 (C-12), 171.8 (C-13), 64.2 (C-14), 7.2 (C-15)。以上譜學(xué)數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[24]，鑒定化合物13為2-氧代-6-去羥基新莽草素。

化合物14：無色油狀物，ESI-MS/:295 [M－H]?。1H-NMR (500 MHz, CD3OD): 5.83 (1H, br s, H-2), 8.01 (1H, d,= 16.0 Hz, H-4), 6.43 (1H, d,= 16.0 Hz, H-5), 2.09 (3H, s, H-6), 3.84 (1H, m, H-4′), 1.34 (3H, s, 7′-CH3), 1.07 (3H, s, 9′-CH3)；13C-NMR (125 MHz, CD3OD): 171.0 (C-1), 121.1 (C-2), 149.9 (C-3), 133.3 (C-4), 131.9 (C-5), 21.0 (3-CH3), 82.8 (C-1′), 89.9 (C-2′), 42.3 (C-3′), 65.2 (C-4′), 41.0 (C-5′), 53.5 (C-6′), 18.5 (C-7′), 181.0 (C-8′), 14.5 (C-9′)。以上譜學(xué)數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[25]，鑒定化合物14為-5-(3,8-dihydroxy-1,5-dimethyl- 7-oxa-6-oxobicyclo[3,2,1]-oct-8-yl)-3-methyl-2,4- pentadienoic acid。

化合物15：淡黃色油狀物，ESI-MS/:279 [M－H]?。1H-NMR (500 MHz, CD3OD): 5.77 (1H, s, H-2), 8.17 (1H, d,= 15.8 Hz, H-4), 6.64 (1H, d,= 15.8 Hz, H-5), 2.09 (3H, d,= 1.4 Hz, H-6), 3.92 (1H, dd,= 7.6, 3.0 Hz, H-8′a), 3.63 (1H, d,= 7.6 Hz, H-8′b), 1.18 (3H, s, H-7′), 1.00 (3H, s, H-9′)；13C-NMR (125 MHz, CD3OD): 167.2 (C-1), 118.7 (C-2), 151.2 (C-3), 131.9 (C-4), 134.3 (C-5), 21.2 (C-6), 82.9 (C-1′), 87.0 (C-2′), 52.9 (C-3′), 208.0 (C4′), 53.8 (C-5′), 49.4 (C-6′), 19.6 (C-7′), 78.0 (C-8′), 15.8 (C-9′)。以上譜學(xué)數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[26]，鑒定化合物15為紅花菜豆酸。

4 神經(jīng)保護(hù)活性評價(jià)

PC12細(xì)胞接種于含10% FBS及100 U/mL雙抗（青霉素-鏈霉素）的DMEM高糖溶液中，并于溫度37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至對數(shù)生長期，胰酶消化，制成細(xì)胞懸液。細(xì)胞懸液吸至15 mL離心管中，800 r/min，離心5 min棄上清液，然后加入新的培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞濃度至1×105個(gè)/mL。然后取此PC12細(xì)胞接種于96孔板中，每孔0.1 mL，并放入細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)23 h。將待測化合物（終濃度20 μmol/L）加入到含MPP+的96孔板中，同時(shí)設(shè)置空白對照組（培養(yǎng)基）和模型組（培養(yǎng)基及終濃度750 μmol/L MPP+），24 h后，加入MTS，繼續(xù)培養(yǎng)2 h，然后用酶標(biāo)儀于570 nm波長下測定吸光度（）值，并計(jì)算細(xì)胞存活率，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

細(xì)胞存活率＝各組細(xì)胞值/空白對照值

八角屬植物中異戊烯基取代的C6-C3類化合物報(bào)道有神經(jīng)營養(yǎng)和神經(jīng)保護(hù)活性[27-28]，因此對新化合物1開展MPP+誘導(dǎo)損傷的PC12保護(hù)活性研究。結(jié)果顯示，與模型組（68.09±0.78）%相比，化合物1對MPP+誘導(dǎo)PC12的存活率僅為（67.48±0.88）%，無明顯神經(jīng)保護(hù)活性。

5 討論

采用現(xiàn)代波譜技術(shù)對披針葉茴香干燥果實(shí)進(jìn)行較為系統(tǒng)的化學(xué)成分研究，從中分離得到15個(gè)化合物，包括4個(gè)異戊烯基取代的C6-C3類（1～4），3個(gè)苯丙素類（5～7），1個(gè)苯乙醇苷類（8），5個(gè)莽草毒素亞型-prezizanne倍半萜（9～13），2個(gè)脫落酸衍生物（14、15）。其中化合物1為新化合物，化合物5、7、8為首次從該屬植物中發(fā)現(xiàn)，化合物2～8、11、13～15為首次從該植物中分離得到。研究表明披針葉茴香果實(shí)化學(xué)成分與八角屬其他植物報(bào)道的一致，同樣是以特征的異戊烯基取代C6-C3類和-prezizanne倍半萜為主要成分。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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One new prenylated C6-C3compound from fruits of

NIE Wei1, 2, 3, DING Lin-fen2, LEI Tie2, BAO Yi3, ZHAO Xue-yu2, LIU Zhen-xiang2, SONG Liu-dong2, WU Xing-de1, 3

1. Key Laboratory of Ethnic Medicine Resource Chemistry, State Ethnic Affairs Commission & Ministry of Education, Yunnan Minzu University, Kunming 650500, China 2. School of Pharmaceutical Science and Yunnan Key Laboratory of Pharmacology for Natural Products, Kunming Medical University, Kunming 650500, China 3. State Key Laboratory of Phytochemistry and Plant Resources in Western China, Kunming Institute of Botany, Chinese Academy of Sciences, Kunming 650201, China

To study the chemical constituents from the fruits of.The chemical constituents were isolated and purified by column chromatography on silica gel, MCI gel, RP-C18, Sephadex LH-20, and HPLC. Their structures were elucidated on the basis of spectroscopic data.Fifteen compounds including four prenylated C6-C3compounds, three phenylpropanoids, one phenylethanol glycoside, five-prezizanne sesquiterpenes, and two abscisic acid derivatives were isolated from 95% ethanol aqueous extract of, and the structures were identified as illancinone A (1), illioliganone C (2), 2-allyl-2-(3-methylbut-2-enyl)-4,5-methylenedioxy-cyclohexa-3,5-dien-1-one (3), 4-allyl-2,6-dimethoxy-3- (3-methyl-2-butenyl)phenol (4), 3,4′-dihydroxy-propiophenone (5), 2,6-dimethoxy 4-allylphenol (6), 3,4′-dihydroxy-propiophenone- 3--β--glucopyranoside (7), phenylethyl--β--glucopyranoside (8), 2α-hydroxyanisatin (9), 2α-hydroxyneoanisatin (10), neoanisatin (11), anisatin (12), 2-oxo-6-dehydroxyneoanisatin (13),-5-(3,8-dihydroxy-1,5-dimethyl-7-oxa-6-oxobicyclo [3,2,1]-oct-8-yl)-3-methyl-2,4-pentadienoic acid (14) and phaseic acid (15).Compound 1 is a new compound named illancinone A, compounds 5, 7, and 8 are isolated fromgenus for the first time, and compounds 2—8, 11, and 13—15 are isolated from this plant for the first time.

A. C. Smith;-prezizaane sesquiterpenoid; prenylated C6-C3compound; illancinone A;3,4′-dihydroxy- propiophenone;3,4′-dihydroxy-propiophenone-3--β--glucopyranoside; neoanisatin

R284.1

A

0253 - 2670(2022)06 - 1671 - 09

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.06.009

2021-11-19

云南省創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)（202005AE160004）；云南省科技廳-昆明醫(yī)科大學(xué)英語基礎(chǔ)研究聯(lián)合專項(xiàng)基金（2019FE001-028）；云南省萬人計(jì)劃“教學(xué)名師”（宋流東）資助項(xiàng)目；云南省萬人計(jì)劃“青年拔尖人才”資助項(xiàng)目（吳興德）

聶 偉（1996—），女，從事藥物化學(xué)研究。E-mail: 3071999875@qq.com

吳興德（1984—），男，博士，副研究員，從事天然藥物化學(xué)研究。E-mail: wuxingde@mail.kib.ac.cn

宋流東（1966—），男，教授，博士生導(dǎo)師，從事天然藥物化學(xué)研究。E-mail: ynsld@126.com

#并列第一作者：丁林芬（1985—），女，在讀博士，高級實(shí)驗(yàn)師，從事天然藥物化學(xué)研究。E-mail: dinglinfen2007@163.com

[責(zé)任編輯 王文倩]