霸王鞭乙酸乙酯部分化學(xué)成分研究

段云鳳，王計(jì)宏，婁嘉豪，趙紫艷，賴 祺，尹俊林，曾廣智

云南民族大學(xué)民族醫(yī)藥學(xué)院 民族藥資源化學(xué)國(guó)家民委-教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，昆明 650500

大戟屬(EuphorbiaL.)是大戟科(Euphorbiaceae)植物，該屬植物中多數(shù)種類屬于傳統(tǒng)中藥材[1]。霸王鞭(EuphorbiaroyleanaBoiss.)為大戟科大戟屬植物，有小毒[2]。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，該植物中含有二萜[3]、三萜[4]、甾體[5]和酚性成分[6]等次生代謝產(chǎn)物。有記載表明霸王鞭具有祛風(fēng)、消炎、防腐殺菌的功效，其乳膠還可以用來填補(bǔ)爛掉的牙齒和抵抗感染[7]；此外，文獻(xiàn)還報(bào)道過霸王鞭的乙酸乙酯提取物有顯著的抗炎[8]、鎮(zhèn)痛和解熱[9]等功效。

目前關(guān)于霸王鞭的化學(xué)成分研究主要集中在其乳膠上，報(bào)道的化合物主要是二萜和三萜類，而藥理活性的研究也相對(duì)較少。鹵蟲模型是Meyer等[10]開發(fā)的快速測(cè)定樣品毒性和篩選生物活性物質(zhì)的方法，具體方法是將鹵蟲的蟲卵在有光照的條件下，在海水中快速孵化，依照趨光性挑選孵化的鹵蟲幼蟲，放入孔板中并加入不同濃度的待測(cè)樣品對(duì)剛孵化的鹵蟲進(jìn)行致死性測(cè)試，從而得到半數(shù)致死量(LD50)，該模型被廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)的研究，有利于進(jìn)行大量樣品的初篩。Sasidharan等[11]同樣用鹵蟲模型，對(duì)大戟科藥用植物一品紅的甲醇提取物進(jìn)行了鹵蟲致死活性實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：一品紅的花和根的甲醇粗提物具有生物毒性，并且此研究也發(fā)現(xiàn)了鹵蟲致死率與一品紅甲醇粗提物的濃度呈正相關(guān)；Meyer[10]比較了41種大戟科植物種子的乙醇提取物對(duì)鹵蟲的作用，發(fā)現(xiàn)14種大戟科植物種子對(duì)鹵蟲具有細(xì)胞毒活性；Barth等[12]使用鹵蟲模型，對(duì)大戟科植物巴豆樹的乙醇提取物進(jìn)行了生物毒性評(píng)價(jià)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明巴豆樹的乙醇提取物具有明顯的生物毒性；但霸王鞭的次生代謝產(chǎn)物的鹵蟲致死活性未見報(bào)道。為了充分開發(fā)和利用霸王鞭資源，本實(shí)驗(yàn)對(duì)霸王鞭全株的化學(xué)成分及鹵蟲致死活性進(jìn)行研究。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

DRX-400共振儀(Bruker，瑞士)；NP7000泵-NU3000制備液相(江蘇漢邦，中國(guó))；BS124S型電子分析天平(Sartorius，德國(guó))；EYELA N-1300自動(dòng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海圣科，中國(guó))。

柱色譜用硅膠(100～400目；青島海洋，中國(guó))；Sephadex LH-20(GE Healthcare，美國(guó))；薄層色譜硅膠板GF254(青島海洋，中國(guó))；半制備色譜柱為Agilent Eclipse XDB-C18(9.4 mm× 250 mm，5 μm)；色譜級(jí)甲醇(霍尼韋爾，美國(guó))；純凈水(娃哈哈，中國(guó))；其他化學(xué)試劑均為分析純(上?？萍?，中國(guó))；顯色劑：5%硫酸-乙醇溶液(105 ℃加熱顯色)、10%磷鉬酸-乙醇溶液和茴香醛顯色劑。

1.2 植物材料

霸王鞭樣品于2019年03月購(gòu)于云南省昭通市巧家縣白鶴灘鎮(zhèn)巧家營(yíng)三家村，藥材經(jīng)昆明采智技術(shù)有限公司鑒定為霸王鞭(EuphorbiaroyleanaBoiss.)全株。標(biāo)本保存于云南民族大學(xué)民族藥資源化學(xué)國(guó)家民委-教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(樣品編號(hào)為201903BWB)。

1.3 提取與分離

取干燥的霸王鞭31 kg粉碎后，浸泡在95%甲醇溶液中，每24 h提取1次，共提取3次，合并濃縮后得到浸膏2.8 kg。將浸膏溶解在水相中，分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，合并濃縮得到石油醚部分365.5 g，乙酸乙酯部分485 g，正丁醇部分423.7 g。

乙酸乙酯部分用60～100目540 g硅膠拌樣后裝柱，洗脫體系為石油醚-乙酸乙酯(50∶1、25∶1、10∶1、5∶1、1∶1、0∶1)進(jìn)行洗脫，經(jīng)TLC檢測(cè)后合并，共得到7個(gè)組分，記為Fr.A～Fr.G。

Fr.C(47.1 g)用MCI樹脂(甲醇-水，50%→100%)梯度洗脫后，得到6個(gè)組分Fr.C-1～Fr.C-6。Fr.C-3(10.52 g)經(jīng)多次硅膠柱分離，洗脫體系為石油醚-乙酸乙酯(50∶1、25∶ 1、15∶1、10∶1、3∶1、0∶1)洗脫，得到4個(gè)組分Fr.C-3-1～Fr.C-3-4。Fr.C-3-2(2.3g)經(jīng)Sephadex LH-20分離，洗脫體系為二氯甲烷-甲醇(1∶1)，得到化合物1(6.9 mg)。Fr.C-3-3(3.6 g)硅膠柱層析后，用HPLC(流動(dòng)相甲醇-水70∶10，流速1.5 mL/min，保留時(shí)間分別為35 min和40 min)分離，經(jīng)凝膠、硅膠柱分離純化，得到化合物2(8.2 mg)、3(5.1 mg)。

Fr.D(38.8 g)經(jīng)硅膠柱色譜分離，石油醚-乙酸乙酯(50∶1→5∶1)梯度洗脫，得到7個(gè)組分Fr.D-1～Fr.D-7。Fr.D-1(8.2 g)經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱層層析分離，洗脫體系為二氯甲烷-甲醇(1∶1)，得到化合物4(11.2 mg)，剩余洗脫液再經(jīng)重結(jié)晶得到化合物5(20.4 mg)、化合物6(13.4mg)。將組分Fr.D-2(14.5 g)用硅膠進(jìn)行柱色譜(洗脫體系為石油醚-二氯30∶1→0∶1)分離，經(jīng)TLC檢測(cè)合并為得到4個(gè)組分(Fr.D-5-1～Fr.D-5-4)。組分Fr.D-5-2(4.2 g)用 Sephadex LH-20(甲醇體系)分離純化，洗脫液合并后經(jīng)反復(fù)硅膠柱分離純化，分別得到化合物7(11.3 mg)、化合物8(15.1 mg)。組分Fr.D-3(12.9 g)經(jīng)硅膠柱色譜分離，石油醚-乙酸乙酯(35∶1→1∶1)梯度洗脫，TLC檢測(cè)合并得到3個(gè)組分Fr.D-3-1～Fr.D-3-3。組分Fr.D-3-2(3.3 g)Sephadex LH-20(甲醇體系)分離純化，洗脫液合并后再經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜純化得到化合物9(5.4 mg)、化合物10(7.9 mg)和化合物11(6.2 mg)。

Fr.F(81.3 g)部分進(jìn)行硅膠柱色譜粗分離，依次用流動(dòng)相為石油醚-乙酸乙酯(50∶1、25∶1、10∶1、5∶1、2∶1、1∶1)進(jìn)行梯度洗脫，得到6個(gè)組分(Fr.F-1～Fr.F-6)。組分Fr.F-3(32.2 g)經(jīng)用硅膠柱色譜洗脫(洗脫體系為二氯-甲醇100∶1、50∶1、25∶1、10∶1、5∶1、1∶1)分離，TLC檢測(cè)合并相同組分，得到5個(gè)組分(Fr.F-3-1～Fr.F-3-5)。Fr.F-3-2(15.1 g)經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析得到化合物12(22.3 mg)、化合物13(37.8 mg)。Fr.F-3-3(4.7 g)經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析后重結(jié)晶(二氯甲烷)，得到化合物14(32.1 mg)，重結(jié)晶(甲醇)得到化合物15(17.9 mg)。

1.4 化合物的鹵蟲致死活性研究

取1 000 mg鹵蟲蟲卵于可樂瓶中，再加入500 mL海水于26 ℃光照條件下培養(yǎng)24 h。然后依照其趨光性取10只鹵蟲幼蟲放入96孔板中，96孔板的海水體積為90 μL，樣品初濃度為100 μmol/L稀釋到10 μmol/L，加樣體積為5 μL，將加樣的96孔板放在有光照并且恒溫為24 ℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程對(duì)于鹵蟲將不再進(jìn)行飼喂，24 h后，觀察鹵蟲的死亡情況，如果在10 s內(nèi)沒有觀察到鹵蟲有趨光性，則將鹵蟲記為死亡。以4%的二甲基亞砜(DMSO)水溶液為空白組，100 μmol/L的硫酸長(zhǎng)春新堿(vincristine sulfate)為陽(yáng)性對(duì)照，每組實(shí)驗(yàn)三次取平均值。對(duì)存活數(shù)和總數(shù)(全部殺死后計(jì)數(shù))來計(jì)算LD50值。LD50值計(jì)算方法參考文獻(xiàn)[13]。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1白色結(jié)晶；分子式C30H50O，EI-MS：m/z426 [M]+；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：0.83(s，3H，H-25)，0.96(s，3H，H-29)，0.99(s，3H，H-30)，1.03(s，3H，H-27)，1.06(s，3H，H-24)，1.09(s，3H，H-26)，1.13(s，3H，H-23)，1.16(s，3H，H-28)，3.46(br s，1H，H-3)，5.62(d，1H，J=8.7 Hz，H-6)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：16.2(C-25)，18.2(C-1)，18.4(C-26)，19.6(C-27)，23.6(C-7)，25.4(C-24)，27.8(C-30)，33.1(C-19)，34.5(C-29)，34.6(C-11)，34.8(C-9)，35.0(C-21)，36(C-22)，37.8(C-13)，38.9(C-16)，39.3(C-14)，40.8(C-4)，43(C-18)，47.4(C-8)，49.7(C-10)，76.3(C-3)，122.0(C-6)，141.6(C-5)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報(bào)道一致，確定化合物1為5(6)-gluten-3α-ol，結(jié)構(gòu)見圖1。

圖1 化合物1～15的化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig.1 Chemical structures of compounds 1-15

化合物2白色結(jié)晶；分子式C30H50O，EI-MS：m/z427 [M + H]+；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：0.74(s，3H，H-28)，0.76(s，3H，H-23)，0.85(s，3H，H-30)，0.85(s，3H，H-27)，0.87(s，3H，H-24)，0.89(s，3H，H-29)，0.91(s，3H，H-25)，1.03(s，3H，H-26)，3.12(m，1H，H-3)，5.47(dd，J=8.2，3.1 Hz，1H，H-15)。13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：15.4(C-25)，15.5(C-24)，17.5(C-11)，18.8(C-6)，21.3(C-30)，27.1(C-27)，28.0(C-2)，28.8(C-28)，29.7(C-23)，29.8(C-26)，29.9(C-29)，33.0(C-22)，33.3(C-21)，33.7(C-7)，35.0(C-12)，35.8(C-16)，36.7(C-13)，37.5(C-10)，37.7(C-17)，38.0(C-1)，38.8(C-8)，39.0(C-4)，41.3(C-19)，48.7(C-9)，49.3(C-18)，55.5(C-5)，79.0(C-3)，116.9(C-15)，158.0(C-14)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]報(bào)道一致，確定化合物2為蒲公英賽醇。

化合物3白色結(jié)晶；分子式C30H50O，EI-MS：m/z426 [M]+；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：0.82(s，3H，H-28)，0.85(s，3H，H-23)，0.91(s，3H，H-27)，0.91(s，3H，H-30)，0.94(s，3H，H-24)，0.95(s，3H，H-25)，0.95(s，3H，H-29)，1.09(s，3H，H-26)，3.40(t，1H，J=2.6 Hz，H-3)，5.52(dd，1H，J=8.1，3.1 Hz，H-15)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：15.2(C-25)，17.4(C-11)，18.7(C-6)，21.2(C-27)，22.2(C-24)，25.0(C-2)，26.0(C-26)，28.2(C-23)，28.8(C-20)，29.8(C-28)，29.9(C-30)，32.2(C-1)，33.0(C-21)，33.3(C-29)，35.0(C-12)，35.1(C-22)，35.8(C-10)，36.6(C-19)，37.3(C-4)，37.5(C-13)，37.7(C-16)，38.0(C-17)，39.1(C-8)，41.2(C-7)，48.7(C-18)，48.9(C-9)，49.2(C-5)，76.2(C-3)，116.7(C-15)，158.1(C-14)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]報(bào)道一致，確定化合物3為異蒲公英賽醇。

化合物4白色結(jié)晶；分子式C30H48O3，ESI-MS：m/z456.4 [M]+；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：0.67(s，3H，H-25)，0.74(s，3H，H-24)，0.80(d，3H，J=6.5 Hz，H-30)，0.86(s，3H，H-26)，0.89(s，3H，H-23)，0.90(d，3H，J=6.5 Hz，H-29)，1.03(s，3H，H-27)，2.98(t，1H，J=5.0 Hz，H-3)，5.12(br s，1H，H-12)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：15.1(C-26)，16.0(C-25)，16.9(C-24)，17.0(C-6)，17.9(C-29)，21.0(C-16)，22.8(C-2)，23.2(C-11，23)，23.8(C-30)，26.9(C-27)，27.5(C-21)，28.2(C-20)，30.1(C-19)，32.7(C-15)，36.3(C-7)，36.5(C-22)，38.2(C-10)，38.4(C-1)，38.4(C-8)，38.5(C-4)，41.6(C-14)，46.8(C-17)，47.0(C-9)，52.3(C-5)，54.7(C-18)，76.8(C-3)，124.5(C-12)，138.1(C-13)，178.3(C-28)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17]報(bào)道一致，確定化合物4為熊果酸。

化合物5白色結(jié)晶；分子式C30H48O3，EI-MS：m/z456 [M]+；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：0.73(s，3H，H-25)，0.76(s，3H，H-29)，0.77(s，3H，H-24)，0.92(s，3H，H-30)，0.98(s，3H，H-26)，1.08(s，3H，H-23)，1.11(s，3H，H-27)，3.15(dd，J=9.0，7.2 Hz，H-18)，3.21(dd，J=11.4，3.6 Hz，H-3α)，5.28(t，J=5.4 Hz，H-12)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：15.3(C-25)，15.5(C-24)，17.1(C-26)，18.3(C-6)，22.9(C-11)，23.4(C-16)，23.6(C-30)，25.9(C-27)，27.2(C-2)，27.7(C-15)，28(C-23)，30.7(C-20)，32.4(C-22)，32.6(C-7)，33.0(C-29)，33.8(C-21)，37.0(C-10)，38.4(C-1)，38.8(C-8)，39.2(C-4)，40.9(C-14)，41.6(C-18)，45.9(C-19)，46.5(C-17)，47.6(C-9)，55.2(C-5)，79.0(C-3)，122.6(C-12)，143.6(C-13)，183.2(C-28)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[18]報(bào)道一致，確定化合物5為齊墩果酸。

化合物6淡黃色結(jié)晶；分子式C16H14O6，EI-MS：m/z302 [M]+；1H NMR(400 MHz，C5D5N)δ：3.86(s，3H，8-OCH3)，3.92(s，3H，7-OCH3)，3.98(s，3H，3-OCH3)，6.25(d，1H，J=2.1 Hz，H-2)，6.30(d，1H，J=2.1 Hz，H-4)，7.13(d，1H，J=8.4 Hz，H-5)，7.34(d，1H，J=8.4 Hz，H-6)；13C NMR(100 MHz，C5D5N)δ：55.9(3-OCH3)，56.7(7-OCH3)，61.6(8-OCH3)，92.3(C-4)，97.4(C-2)，104.4(C-8b)，113.1(C-5)，116.0(C-8a)，120.8(C-6)，148.9(C-7)，149.3(C-4b)，151(C-8)，157.5(C-4a)，164.3(C-1)，166.9(C-3)，181.5(C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[19]報(bào)道一致，確定化合物6為1-羥基-3，7，8-三甲氧基黃酮。

化合物7淡黃色粉末；分子式C15H12O6，ESI-MS：m/z289 [M + H]+；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：3.84(s，3H，3-OCH3)，3.89(s，3H，7-OCH3)，6.39(d，1H，J=2.0 Hz，H-2)，6.60(d，1H，J=2.0 Hz，H-4)，6.98(d，1H，J=9.2 Hz，H-5)，7.51(d，1H，J=9.2 Hz，H-6)，11.80(s，1H，8-OH)，11.82(s，1H，1-OH)。13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：55.9(7-OCH3)，57.0(3-OCH3)，92.9(C-4)，97.2(C-2)，102.4(C-8b)，105.6(C-5)，107.8(C-8a)，120.4(C-6)，142.9(C-7)，149.6(C-8)，150.1(C-4b)，158.0(C-4a)，162.9(C-1)，167.5(C-3)，185.0(C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[20]報(bào)道一致，確定化合物7為甲基獐牙菜素。

化合物8黃色結(jié)晶；分子式C15H10O7，EI-MS：m/z302 [M]+；1H NMR(400 MHz，CD3OD)δ：6.19(d，1H，J=2.4 Hz，H-6)，6.41(d，1H，J=2.4 Hz，H-8)，6.89(d，1H，J=8.4 Hz，H-5')，7.55(dd，1H，J=2.4，8.4 Hz，H-6')，7.69(d，1H，J=2.4 Hz，H-2')，12.50(s，1H，5-OH)。13C NMR(100 MHz，CD3OD)δ：94.4(C-8)，99.3(C-6)，104.5(C-10)，115.9(C-2′)，116.2(C-5′)，121.7(C-6′)，124.1(C-1′)，137.3(C-3)，146.2(C-3′)，147.9(C-2)，148.8(C-4′)，158.2(C-9)，162.5(C-5)，165.7(C-7)，177.3(C-4)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[21]報(bào)道一致，確定化合物8為槲皮素。

化合物9白色粉末；分子式C35H60O6，ESI-MS：m/z599.4 [M + Na]+；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：0.65(s，3H，H-18)，0.79(d，3H，J=6.9 Hz，H-27)，0.81(d，3H，J=7.0 Hz，H-26 )，0.83(t，3H，J=6.2 Hz，H-29)，0.90(d，3H，J=6.5 Hz，H-21)，0.95(s，3H，H-19)，4.22(d，1H，J=7.8 Hz，H-1')，4.42(t，1H，J=5.8 Hz，H-3)，5.33(s，1H，H-6)。13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：11.7(C-18)，11.8(C-29)，18.6(C-21)，18.9(C-19)，19.0(C-26)，19.7(C-27)，20.6(C-11)，22.6(C-28)，23.8(C-15)，25.4(C-23)，27.8(C-16)，28.6(C-25)，29.2(C-2)，31.4(C-7，8)，33.3(C-22)，35.5(C-20)，36.2(C-10)，36.8(C-1)，38.3(C-4)，41.8(C-13)，45.0(C-24)，49.6(C-9)，55.4(C-17)，56.1(C-14)，61.0(C-6′)，70.0(C-4′)，73.4(C-2′)，76.7(C-3，3′)，76.8(C-5′)，100.7(C-1′)，121.2(C-6)，140.4(C-5)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[22]報(bào)道一致，確定化合物9為胡蘿卜苷。

化合物10白色絮狀物；分子式C29H50O，ESI-MS：m/z437.3 [M +Na]+；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ:0.68(s，3H，H-18)，0.81(d，3H，J=6.9 Hz，H-27)，0.83(d，3H，J=7.0 Hz，H-26)，0.84(t，3H，J=7.6 Hz，H-29)，0.92(d，3H，J=6.5 Hz，H-21)，1.00(s，3H，H-19)，3.52(m，1H，H-3α)，5.35(d，1H，J=5.2 Hz，H-6)。13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：11.9(C-18)，12.0(C-26)，18.8(C-29)，19.0(C-25)，19.4(C-21)，19.8(C-19)，21.0(C-27)，23.0(C-28)，24.3(C-23)，26.0(C-15)，28.3(C-11)，29.1(C-16)，31.7(C-2)，31.9(C-7)，33.9(C-8、C-20)，36.1(C-22)，36.5(C-10)，37.2(C-1)，39.8(C-24)，42.2(C-12)，42.3(C-13)，45.8(C-4)，50.1(C-9)，56.0(C-17)，56.8(C-14)，71.8(C-3)，121.7(C-6)，140.8(C-5)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[23]報(bào)道一致，確定化合物10為β-谷甾醇。

化合物11白色結(jié)晶；分子式C29H48O，ESI-MS：m/z435 [M + Na]+；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：0.79(d，3H，J=5.5 Hz，H-27)，5.36(br d，1H，J=5.0 Hz，H-6)，3.55(m，1H，H-3)，0.69(s，3H，H-18)，0.81(t，3H，J=7.4 Hz，H-29)，0.83(s，3H，H-19)，0.84(d，3H，J=6.3 Hz，H-26)，0.91(d，3H，J=6.0 Hz，H-21)，5.01(dd，1H，J=8.0，15.1 Hz，H-23)，5.13(dd，1H，J=8.0，15.1 Hz，H-22)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：11.9(C-18)，12.0(C-29)，18.8(C-21)，19.0(C-27)，19.1(C-19)，19.4(C-26)，19.8(C-11)，21.1(C-28)，23.1(C-15)，24.3(C-23)，26.1(C-16)，28.3(C-25)，29.1(C-2)，31.6(C-7)，31.9(C-8)，33.9(C-22)，36.2(C-20)，36.5(C-10)，37.3(C-1)，39.8(C-12)，42.2(C-13)，42.3(C-4)，45.8(C-24)，50.1(C-9)，56.1(C-17)，56.8(C-14)，71.7(C-3)，121.7(C-6)，140.8(C-5)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[23]報(bào)道一致，確定化合物11為豆甾醇。

化合物12黃色粉末；分子式C8H8O4，ESI-MS:m/z167 [M -H]-；1H NMR(400 MHz，CD3OD)δ：3.96(s，3H，3-OCH3)，6.13(s，1H，4-OH)，7.03(d，1H，J=8.4 Hz，H-5)，7.41(d，1H，J=1.8 Hz，H-2)，7.42(dd，1H，J=8.4，1.8 Hz，H-6)，9.81(s，1H，1-CHO)；13C NMR(100 MHz，CD3OD)δ：56.3(OCH3)，111.2(C-2)，116.4(C-5)，128.0(C-6)，130.6(C-1)，149.8(C-3)，154.9(C-4)，191.9(C=O)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[24]報(bào)道一致，確定化合物12為香草醛。

化合物13白色油狀物；分子式C12H26O，EI-MS：m/z185 [M -H]-；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：0.88(t，3H，J=6.9Hz，H-12)，1.22～1.39(br s，18H，H3～H11)，1.57(m，2H，H-2)，3.64(t，2H，J=6.6Hz，H-1)。13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：14.2(C-12)，22.7(C-11)，25.8(C-10)，29.4(C-9)，29.5(C-8)，29.6(C-7)，29.7(C-6)，29.7(C-5)，29.7(C-4)，31.9(C-3)，32.8(C-2)，63.1(C-1)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[25]報(bào)道一致，確定化合物13為十二烷醇。

化合物14淡黃色油狀物；分子式C20H40O，EI-MS：m/z296 [M]+；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：0.83～0.87(12H，H-16，18，19，20)，1.66(s，3H，H-17)，2.02(m，2H，H-4)，4.15(d，2H，J=7.0 Hz，H-1)，5.41(t，1H，J=7.0 Hz，H-2)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：16.2(C-20)，19.7(C-18)，19.7(C-19)，22.6(C-16)，22.7(C-17)，24.5(C-9)，24.8(C-13)，25.2(C-5)，27.9(C-15)，32.7(C-11)，32.8(C-7)，36.7(C-6)，37.3(C-12)，37.4(C-8)，37.4(C-10)，39.4(C-14)，39.9(C-4)，59.4(C-1)，123.1(C-2)，140.3(C-3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[25]報(bào)道一致，確定化合物14為植物醇。

化合物15白色油狀物；分子式C60H108O5，EI-MS：m/z933.1 [M + Na]+；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：0.89(m，9H，3×-CH3)，1.27(m，58H，29×-CH2)，1.61(br s，6H，3×β-CH2)，2.04(m，12H，6×C=C-CH2)，2.30(m，6H，3×α-CH2)，2.77(t，2H，J=5.9Hz，C=C-CH2-C=C)，4.14(dd，2H，J=4.3，11.9Hz，H-3或H-1)，4.31(dd，2H，J=4.3，11.9 Hz，H-1或H-3)，5.27(m，1H，H-2)，5.34(m，8H，4×CH=CH)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：14.1，14.2，22.6，22.7，24.8，24.9，25.6，27.2，27.2，27.2，29.0，29.1，29.1，29.2，29.2，29.2，29.3，29.4，29.4，29.4，29.5，29.6，29.6，29.7，29.7，29.8，31.5，31.9，31.9，34.0，34.0，34.2，62.1(C-1)，68.8(C-2，3)，127.9，129.7，129.7，129.9，130.0，130.0，130.2，172.9，173.3，173.4。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[26]報(bào)道一致，確定化合物15為1-[(12E,16E)-12,16-二十碳二烯?；鵠-2-[(E,E)-7,11-十八碳二烯?；鵠-3-硬脂?；视?。

2.2 化合物的鹵蟲致死活性研究結(jié)果

通過鹵蟲致死活性測(cè)試，致死試驗(yàn)為24 h，使用存活數(shù)和總數(shù)(全部殺死后計(jì)數(shù))來計(jì)算LD50值。LD50值計(jì)算方法參考文獻(xiàn)[13]?；衔?表現(xiàn)出較強(qiáng)的鹵蟲致死活性，其LD50為7.687 μM(見表1)。

表1 化合物1～14的鹵蟲致死活性Table 1 Brine shrimp lethal activity of compounds 1～14

3 討論與結(jié)論

該研究對(duì)霸王鞭的化學(xué)成分及藥理活性進(jìn)行了研究，從其甲醇提取物的乙酸乙酯萃取部分中分離得到了15個(gè)化合物，化合物類型包括三萜(1～5)、黃酮(6～8)、甾體(9～11)、酚類(12)、脂肪醇(13)、鏈狀二萜(14)和脂肪酸(15)。對(duì)化合物1～14進(jìn)行了鹵蟲致死活性研究，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示化合物1～14均具有鹵蟲致死活性，其中化合物4活性較強(qiáng)，LD50為7.687 μM，且化合物8(甾體)、14(鏈狀二萜)的效果要好于化合物3(三萜)。相較于前人只對(duì)霸王鞭的乳膠部分進(jìn)行了化學(xué)成分的研究，并且大戟科植物的鹵蟲致死活性也只局限在甲醇或乙醇提取物上，本研究對(duì)霸王鞭的其他部分也進(jìn)行了化學(xué)成分的研究，而鹵蟲致死活性也針對(duì)單體化合物進(jìn)行了初步的研究，一定程度上豐富了霸王鞭的化學(xué)成分以及大戟科植物的藥理活性研究。為了合理開發(fā)利用該植物資源，有必要對(duì)霸王鞭中的活性成分開展進(jìn)一步的系統(tǒng)研究，深入探討其活性機(jī)理及開展其體內(nèi)活性驗(yàn)證。本研究為后續(xù)關(guān)于霸王鞭及大戟屬植物的生物活性研究提供了物質(zhì)及理論支持。