辛酰水楊酸納米膠束制劑的制備及其含量測(cè)定

潘繼飛，薛 松，王 鑫，渠廣民，封 靜，陳建英*

（1.山東省藥學(xué)科學(xué)院 山東省皮膚與黏膜給藥工程技術(shù)研究中心，山東 濟(jì)南 250101；2.山東福瑞達(dá)醫(yī)藥集團(tuán)有限公司 山東省黏膜與皮膚給藥技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 濟(jì)南 250101；3.山東省食品藥品審評(píng)查驗(yàn)中心，山東 濟(jì)南 250014）

辛酰水楊酸（capryloyl salicylic acid，簡(jiǎn)稱CSA），化學(xué)名為2-羥基-5-（1-氧代辛基）苯甲酸，是近年來由國外開發(fā)，在化妝品和皮膚外用制劑中應(yīng)用的活性化合物[1]。CSA既保持了水楊酸剝除老化角質(zhì)的功效，又增強(qiáng)了與皮膚細(xì)胞的親和力，更容易滲透入角質(zhì)層，可作為美白淡斑、延緩衰老、治療黑頭粉刺的外用成分[2]。CSA具有較強(qiáng)的疏水性，在制劑中通常溶于油相中，經(jīng)乳化后配制為膏霜或乳液，痤瘡的產(chǎn)生多與皮脂分泌旺盛和毛孔堵塞有關(guān)，含油脂的產(chǎn)品無疑加劇這一誘因。

膠束屬于膠體分散體系，粒徑較脂質(zhì)體和微粒更小，一般在5～100 nm，聚合物膠束疏水內(nèi)核和親水外殼的載藥體系具有增溶難溶藥物、提高生物利用度、靶向和緩釋等優(yōu)點(diǎn)，目前廣泛應(yīng)用于抗腫瘤藥物的研究開發(fā)[3-5]。在日化領(lǐng)域，聚合物膠束可包載疏水性成分用于在駐留型護(hù)膚品中，避免油脂成分的使用，賦予產(chǎn)品清爽、滋潤(rùn)的膚感[6-8]。

目前，CSA納米膠束制劑尚未見研究報(bào)道，CSA的含量測(cè)定方法國內(nèi)僅見報(bào)道采用反相色譜測(cè)定法[9-10]，但該方法成本高，耗時(shí)長(zhǎng)，不利于推廣應(yīng)用。本研究采用直接溶解法制備了CSA納米膠束，同時(shí)建立了一種更簡(jiǎn)捷的測(cè)定含量的高效液相色譜法（HPLC），用于檢測(cè)納米膠束型制劑中辛酰水楊酸的含量，以期為拓展CSA的應(yīng)用及CSA納米膠束制劑產(chǎn)品的質(zhì)量控制奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

高效液相色譜儀（LC-20AT型泵、SPD-M20A型檢測(cè)器、Lab Solution液相色譜數(shù)據(jù)工作站，日本島津公司）；XA105DU分析天平（Mettler Toledo）；PB-10 pH計(jì)（賽多利斯）；Nano-ZS90馬爾文動(dòng)態(tài)激光光散射粒度儀（馬爾文帕納科）；ZEISS EVO 鎢燈絲掃描電子顯微鏡（卡爾蔡司）。

1.2 材料

辛酰水楊酸（上海麥克林C860254，純度≥98 %）；乙腈、甲醇為色譜純?cè)噭?；其余為分析純?cè)噭?/p>

2 方法與結(jié)果

2.1 CSA納米膠束制劑的制備

取CSA原料2.5～5.0 g，溶于20 ml丙二醇和40 ml PEG30蓖麻油，加入適量防腐劑，緩慢加入純化水至1000 ml，0.45 μm微孔濾膜過濾，獲得自組裝納米膠束溶液。

2.2 CSA納米膠束的粒徑測(cè)定

按照2.1項(xiàng)中CSA膠束的制備方法，制備0.25 %和0.5 %的CSA膠束溶液及空白膠束溶液，采用激光粒度分布儀測(cè)定膠束的粒徑分布及Zeta電位。空白膠束、0.25 %和0.50 %的CSA膠束平均粒徑（Di）值分別為11.30，8.86和7.96 nm，多分散系數(shù)（PDI）值分別為0.112，0.164和0.157，粒徑分布2～12 nm，不同CSA濃度的膠束Zeta電位均呈現(xiàn)負(fù)值，且隨著CSA濃度的增加膠束的粒徑減?。▓D1和表1）。

圖1 不同濃度CSA納米膠束及空白膠束的粒徑分布圖

表1 不同濃度CSA納米膠束及空白膠束的表征

2.3 CSA納米膠束的SEM

將制備得到的CSA膠束稀釋5倍后滴在銅網(wǎng)上，靜置10 min，用濾紙從銅網(wǎng)的底部將溶液吸走。待銅網(wǎng)干燥后，噴金，置掃描電鏡下觀察膠束的形態(tài)。圖2中A、B、C圖分別是空白膠束、CSA濃度為0.25 %和0.5 %膠束的SEM照片。

圖2 自組裝CSA納米膠束的SEM照片（A：空白膠束；B：0.25 %CSA膠束；C：0.5 %CSA膠束）

2.4 納米膠束中CSA的含量測(cè)定

2.4.1 溶液制備 空白溶液：照CSA溶液劑處方配制不含CSA的空白供試品溶液。精密量取0.2 ml置入50 ml量瓶，加入甲醇流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。

對(duì)照品溶液制備：精密稱取CSA約20 mg置入100 ml量瓶，加入適量甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 ml置入10 ml量瓶，加入甲醇稀釋至刻度，搖勻。制成每1 ml中含有CSA約0.02 mg的對(duì)照品溶液。供試品溶液制備：精密量取CSA納米膠束溶液0.4 ml置入100 ml量瓶，加入甲醇并稀釋至刻度，搖勻。

2.4.2 色譜條件 色譜柱：Waters XBridge C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）。流動(dòng)相：甲醇-乙腈-0.1 mol/L磷酸溶液（48:30:22），檢測(cè)波長(zhǎng)225 nm，柱溫40 ℃，流速1.0 ml/min，進(jìn)樣體積10 μl。理論板數(shù)按CSA峰計(jì)算應(yīng)不低于3000，拖尾因子不高于1.5。

2.4.3 波長(zhǎng)選擇 取CSA對(duì)照品溶液，DAD檢測(cè)器在190～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描，見圖2，結(jié)果表明，CSA有兩個(gè)紫外吸收峰，波長(zhǎng)分別為225 nm和269 nm，225 nm的吸收值高于269 nm，因此選擇225 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.4.4 專屬性試驗(yàn) 分別取空白溶液、對(duì)照品溶液及供試品溶液各10 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明，CSA保留時(shí)間約4.8 min，空白溶液在CSA出峰位置無干擾，表明本色譜條件專屬性良好。見圖3～5。

圖3 空白溶液HPLC圖譜

圖4 辛酰水楊酸對(duì)照品溶液HPLC圖譜

圖5 供試品溶液HPLC圖譜

2.4.5 線性試驗(yàn) 精密稱取CSA對(duì)照品約20 mg，置入100 ml量瓶，加入適量甲醇使完全溶解，并稀釋至刻度，搖勻；精密量取0.5，1，2，3，4，5 ml分別置入10 ml量瓶，加入甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取上述溶液各10 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖及峰面積，以濃度C為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)做線性回歸，求得CSA的線性回歸方程為A=50483C+10595，相關(guān)系數(shù)r=0.9997，結(jié)果表明，CSA濃度在4.10～41.14 μg/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4.6 精密度試驗(yàn) 精密量取CSA對(duì)照品溶液10 μl注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖及峰面積，計(jì)算RSD為0.15 %，表明儀器精密度良好。取同一批樣品，連續(xù)配制6份供試品溶液，記錄色譜圖及峰面積，計(jì)算含量RSD為0.56 %，表明方法精密度良好。

2.4.7 回收率試驗(yàn) 精密稱取CSA對(duì)照品適量（約相當(dāng)于CSA處方量的80 %，100 %，120 %），按處方加入其它輔料，分別平行配制3份，照2.1項(xiàng)下配制成供試品溶液。依法測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表2。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.4.8 樣品含量測(cè)定 按照2.1項(xiàng)下制備本品3批樣品，按照2.2.1項(xiàng)下制備供試品及對(duì)照品溶液，按照2.2.2項(xiàng)下色譜條件，分別取10 μl注入色譜儀，記錄色譜圖及峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算含量，含量結(jié)果分別為102.90 %，99.60 %，104.85 %。

3 討論

本研究首次制備了自組裝CSA納米膠束制劑，獲得了粒徑小于20 nm、粒徑分布均勻的納米膠束溶液。CSA的加入使膠束粒徑減小，高濃度CSA納米膠束粒徑小于低濃度CSA納米膠束。目前國內(nèi)已報(bào)道的CSA含量測(cè)定方法流動(dòng)相為乙腈-5 mmol/L癸烷磺酸鈉（含質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1 %磷酸），其中的離子對(duì)試劑癸烷磺酸鈉和色譜柱的固定相結(jié)合產(chǎn)生不可逆吸附，進(jìn)而影響固定相活性位點(diǎn)，從而達(dá)到分析樣品的作用，該方法中離子對(duì)試劑較難從色譜柱上沖洗干凈而造成色譜柱使用壽命的縮短，大大提高了該分析方法的耗材成本；此外，該方法需要較長(zhǎng)的平衡時(shí)間使流動(dòng)相中的離子對(duì)和硅羥基發(fā)生作用，色譜柱需要較長(zhǎng)的清洗時(shí)間也提高了該分析方法的時(shí)間成本。本研究建立了納米膠束制劑中CSA的HPLC含量測(cè)定方法，采用甲醇-乙腈-0.1 mol/L磷酸溶液（48:30:22）為流動(dòng)相，經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，該方法專屬性好、準(zhǔn)確度和精密度高，具有方便、快捷、適用性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，填補(bǔ)了現(xiàn)行檢測(cè)方法的空白，為CSA制劑產(chǎn)品的質(zhì)量控制提供依據(jù)。CSA納米膠束制劑的長(zhǎng)期穩(wěn)定性和安全性有待進(jìn)一步試驗(yàn)研究。