舒心康對(duì)垂體后葉素致大鼠急性心肌缺血的影響

于瑩，顧媛媛，張虎娟，張曉燕，周忠光

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040）

心肌缺血（myocardial Ischemia，MI）是指心臟的血液灌注減少，引起心肌缺氧、代謝改變、心臟功能障礙和心肌結(jié)構(gòu)破壞的病理狀態(tài)［1-2］。隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，國(guó)民生活方式的變化，缺血性心臟病的發(fā)病人數(shù)每年不斷增加，缺血性心臟病對(duì)居民健康的威脅愈加嚴(yán)重。缺血性心臟病是全球人口死亡的首位原因［3-4］。由于心血管病死亡的人口在農(nóng)村占比46.66%，在城市占比43.81%［5］。該病已成為我國(guó)僅次于腦血管病的第二大死亡原因［6］。本研究中的舒心康由廣棗15 g，丹參10 g，檀香10 g，木棉花10 g和訶子10 g組成。由內(nèi)蒙古民族大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院蒙醫(yī)科專(zhuān)家哈斯額爾登主任醫(yī)師在治療冠心病二十余年的實(shí)踐過(guò)程當(dāng)中，根據(jù)《蒙醫(yī)金匱》中的經(jīng)典方劑（由廣棗、木棉花、苦參、檀香、沉香5味中藥組成），結(jié)合當(dāng)代人的體質(zhì)以及方藥經(jīng)濟(jì)性等因素，將原方中苦參及沉香調(diào)整為丹參及訶子，并命名為舒心康，用以治療普行赫依偏盛，赫依、血運(yùn)行障礙，心脈循行受阻為主所致的疾病。目前，對(duì)該方的實(shí)驗(yàn)研究較少，為豐富該方治療缺血性心臟病的理論依據(jù)，本文研究了該方對(duì)垂體后葉素所致大鼠急性心肌缺血的影響。垂體后葉素（Pit）是強(qiáng)烈的血管收縮劑，內(nèi)含加壓素，能明顯使冠狀動(dòng)脈、毛細(xì)血管收縮，造成心肌缺血、缺氧［7-8］。本實(shí)驗(yàn)采用尾靜脈注射Pit的方法制備大鼠急性心肌缺血模型，通過(guò)監(jiān)測(cè)大鼠ECG 中S-T 段位移變化以及對(duì)大鼠血清中CK、LDH、SOD和MDA等生化指標(biāo)的檢測(cè)分析，對(duì)舒心康抗心肌缺血的機(jī)制進(jìn)行探究。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康SD大鼠60只，雌雄各半，體質(zhì)量220～250 g。由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥物安全性評(píng)價(jià)中心提供，許可證號(hào)：SCXK-（京）2009-0001。飼養(yǎng)條件：室溫18～22 ℃，濕度50%～60%動(dòng)物室內(nèi)飼養(yǎng)，光照12 h 明暗周期。

1.2 儀器、試劑與藥物

KY2000 半自動(dòng)生化分析儀（日本島津公司）；BL-420F 生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)；756PC Spectrum 紫外分光光度計(jì)（上海光譜儀器有限公司）。

LDH 試劑盒（批號(hào)：20181120）、CK 測(cè)試盒（批號(hào)：20181026）、SOD試劑盒（批號(hào)：20181105）、MDA試劑盒（批號(hào)：20181024），均購(gòu)于南京建成生物工程研究所。

垂體后葉素（批號(hào)：101101，規(guī)格：2 mL∶1 mg，上海禾豐制藥有限公司）；馬來(lái)酸依那普利（規(guī)格：5 mg ×16 s，揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)江蘇制藥股份有限公司）；舒心康所用廣棗、丹參、檀香、訶子、木棉花的水提物，均購(gòu)自哈爾濱市世一堂藥店。

1.3 分組及給藥

將大鼠依據(jù)隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為6 組，分別為正常組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組以及舒心康高、中、低劑量組。除正常組外，其余所有大鼠采用尾靜脈注射Pit（0.6 U/kg）制備急性心肌缺血模型，當(dāng)大鼠心電圖中S-T 段抬高趨勢(shì)≥0.1 mV 時(shí)，表示急性心肌缺血模型造模成功［9-10］。按藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法學(xué)計(jì)算舒心康高、中、低劑量組的給藥劑量分別為40、20、10 mg/kg；陽(yáng)性對(duì)照組給藥劑量為15 mg/kg；正常組和模型組灌胃等量蒸餾水，每天給藥1次，連續(xù)給藥15 d。

1.4 檢測(cè)指標(biāo)及方法

1.4.1 心電圖檢測(cè)

大鼠末次灌胃60 min 后，采用10% 水合氯醛（3 mL/kg）腹腔注射麻醉后，將大鼠固定，四肢連接BL-420F 生物記錄儀，記錄大鼠正常狀態(tài)下心電圖。隨后，大鼠尾靜脈注射垂體后葉素（0.6 U/kg）造模，測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)導(dǎo)聯(lián)心電圖S-T 段隨時(shí)間的變化幅度［11］，觀測(cè)大鼠注射垂體后葉素30 s 后心電圖的S-T 位移值（mV）。

1.4.2 大鼠血清中CK、LDH水平測(cè)定

大鼠腹主動(dòng)脈取血后，以3 500 r/min 的速度離心10 min，取大鼠血清。嚴(yán)格按照CK和LDH試劑盒的說(shuō)明書(shū)內(nèi)容測(cè)定其含量。

1.4.3 大鼠心肌組織中SOD、MDA含量測(cè)定

取大鼠心尖部位的組織，生理鹽水沖洗，冰水浴研磨，制備10%心肌組織勻漿。嚴(yán)格按SOD 和MDA 試劑盒說(shuō)明書(shū)操作測(cè)定其含量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 19.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05代表差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠ECG的變化比較

大鼠注射Pit 造模后，觀察其心電圖可以發(fā)現(xiàn)，大鼠心電圖的S-T 段較注射前顯著抬高，T 波明顯增大，心率加快，該現(xiàn)象表明Pit 對(duì)大鼠的心肌造成了損傷，造模前后心電圖對(duì)比見(jiàn)圖1 和圖2。通過(guò)對(duì)大鼠心電圖的觀察，發(fā)現(xiàn)各用藥組S-T 段位移幅度均相對(duì)較小，舒心康給藥組隨著給藥劑量的增加，降低趨勢(shì)也越明顯。與模型組相比，舒心康高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組S-T 段位移幅度差異顯著（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 各組急性心肌缺血大鼠心電圖S-T段位移的比較（±s）

表1 各組急性心肌缺血大鼠心電圖S-T段位移的比較（±s）

注：與正常組比較，▲P ＜0.05；與模型組比較，*P ＜0.05。

組別正常組模型組舒心康低劑量組舒心康中劑量組舒心康高劑量組陽(yáng)性對(duì)照組n 10 10 10 10 10 10 S-T段位移值（mV）0.06±0.03 0.25±0.09▲0.22±0.05 0.19±0.03 0.13±0.04*0.12±0.03*

2.2 各組大鼠血清CK和LDH水平比較

與正常組相比，模型組大鼠血清中CK 和LDH 含量明顯上升（P＜0.01）；與模型組相比，舒心康高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組血清中的CK 和LDH 明顯下降（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 舒心康對(duì)急性心肌缺血大鼠血清CK、LDH活性的影響（±s，n=10）

表2 舒心康對(duì)急性心肌缺血大鼠血清CK、LDH活性的影響（±s，n=10）

注：與正常組比較，▲▲P ＜0.01；與模型組比較，*P ＜0.05。

組別正常組模型組舒心康低劑量組舒心康中劑量組舒心康高劑量組陽(yáng)性對(duì)照組LDH（U/L）3 176.98±628.20 5 793.81±482.89▲▲5 155.93±913.29 4 578.35±935.99 4 131.96±754.45*4 061.86±555.93*CK（U/L）643.51±53.92 1 192.26±188.73▲▲960.10±212.01 846.13±328.28 741.28±346.08*701.75±339.91*

2.3 大鼠心肌組織中SOD和MDA含量比較

與正常組相比，模型組大鼠心肌組織中的SOD 活性降低（P＜0.05），MDA 含量升高（P＜0.01）。與模型組相比，舒心康高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組心肌組織中SOD 活力顯著升高（P＜0.05），MDA 含量顯著降低（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 舒心康對(duì)心肌缺血大鼠心肌組織中SOD、MDA 水平的影響（±s，n=10）

表3 舒心康對(duì)心肌缺血大鼠心肌組織中SOD、MDA 水平的影響（±s，n=10）

注：與正常組比較，▲P ＜0.05，▲▲P ＜0.01；與模型組比較，*P ＜0.05。

組別正常組模型組舒心康低劑量組舒心康中劑量組舒心康高劑量組陽(yáng)性對(duì)照組SOD（U/kg）223.42±40.94 155.73±28.30▲166.57±25.71 175.39±18.88 195.22±16.84*201.82±11.10*MDA（nmol/kg）2.85±0.48 5.99±0.85▲▲4.91±0.70 4.24±1.36 3.87±0.76*3.67±0.65*

3 討論

心臟的耗氧量較身體其他器官來(lái)說(shuō)比較大，所以對(duì)缺血、缺氧狀態(tài)很敏感，急性心肌缺血可導(dǎo)致心肌組織細(xì)胞損傷［12］?；钚匝踝杂苫≧OS）代謝紊亂是缺血性心臟病的病理機(jī)制之一，過(guò)量的ROS 攻擊生物膜后會(huì)誘發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化，這一過(guò)程會(huì)導(dǎo)致MDA 顯著增加。脂質(zhì)過(guò)氧化會(huì)改變脂質(zhì)的理化性質(zhì)和結(jié)構(gòu)，影響脂質(zhì)的生物學(xué)功能，導(dǎo)致心肌缺血性損傷。MDA 是ROS 脂質(zhì)過(guò)氧化的最終產(chǎn)物，MDA 水平能夠反映脂質(zhì)過(guò)氧化的程度以及細(xì)胞損傷程度［13-14］。SOD 是機(jī)體清除ROS的重要酶［15-16］，當(dāng)體內(nèi)ROS過(guò)多時(shí)，SOD既能清除過(guò)量的ROS，又能產(chǎn)生足夠量的氧分子，這個(gè)過(guò)程可以增加機(jī)體氧分子含量，改善缺氧狀態(tài)，保護(hù)心肌細(xì)胞免受損傷。SOD 既能反映出ROS 產(chǎn)生和消除的動(dòng)態(tài)平衡能力，也能反映ROS 濃度的改變［17-18］。CK 和LDH 在心肌細(xì)胞胞漿中廣泛存在，當(dāng)心肌細(xì)胞缺血時(shí)，細(xì)胞生物膜通透性增高，引起細(xì)胞胞漿中重要心肌酶CK 和LDH的釋放增加［19-20］。

本實(shí)驗(yàn)觀察到大鼠口服舒心康后能比較有效地改善垂體后葉素導(dǎo)致的心肌組織缺血，與正常組相比，模型組大鼠的CK、LDH 和MDA 含量明顯升高，SOD 活性降低，結(jié)合造模前后大鼠心電圖的對(duì)比，說(shuō)明模型組大鼠產(chǎn)生心肌損傷，造模成功。和模型組相比，舒心康高劑量組大鼠血清中的CK 和LDH 水平明顯降低，大鼠心肌組織勻漿中SOD 水平升高，MDA 水平降低，各組數(shù)值差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。同時(shí)，心電圖的變化反映心肌缺血的程度，觀察給藥后大鼠心電圖變化，可以發(fā)現(xiàn)舒心康高劑量組大鼠的心電圖中S-T段位移值明顯變小。

蒙藥復(fù)方舒心康在臨床治療的過(guò)程中，具有改善心肌缺血以及預(yù)防和治療冠心病的功效。綜合以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，本研究也表明舒心康對(duì)垂體后葉素導(dǎo)致的大鼠急性心肌缺血癥狀有一定的抑制作用。舒心康能保護(hù)心肌免受缺血性損傷，從而具有較好的治療缺血性心臟病的作用。