土鱉蟲藥理作用研究進(jìn)展△

韓迪，程永現(xiàn)，晏永明*

1.成都中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，四川 成都 611137；

2.深圳大學(xué) 醫(yī)學(xué)部 藥學(xué)院 中醫(yī)藥守正創(chuàng)新研究院，廣東 深圳 518060

動(dòng)物藥中的蟲類中藥最早記載于《五十二病方》中，直至《本草綱目》已記載了128 種，目前可應(yīng)用于臨床的有40 多種[1]。中醫(yī)歷代都有善用蟲藥克頑疾的配方，如張仲景的著名方劑抵當(dāng)湯、大黃?蟲丸、下瘀血湯等，表明蟲類中藥臨床療效獨(dú)特，異于植物來源中藥，故有“蟲類通絡(luò)”理論[2]。從物種多樣性而言，昆蟲種類繁多，且繁殖力強(qiáng)，已逐漸受到世界醫(yī)藥和營養(yǎng)領(lǐng)域的青睞，有很大的開發(fā)前景。目前，對(duì)于蟲類中藥的研究還非常薄弱，藥效物質(zhì)不明確導(dǎo)致其質(zhì)量控制、相關(guān)新藥研發(fā)、臨床應(yīng)用推廣及國際化認(rèn)可都受到了嚴(yán)重的制約?！吨腥A人民共和國藥典》（以下簡稱《中國藥典》）2020年版（一部）收載的常用蟲類中藥僅有22 種[3]，這也說明了蟲類中藥研究的匱乏。因此，在目前中藥現(xiàn)代化研究的浪潮中，蟲類中藥研究也需要更多關(guān)注。

土鱉蟲作為歷版《中國藥典》中蟲類中藥的典型代表，長期以來受到眾多研究人員的關(guān)注。土鱉蟲為鱉蠊科昆蟲地鱉Eupolyphaga sinensisWalker 或冀地鱉Polyphaga plancyiBoleny的雌蟲干燥體[3]，又稱為?蟲、土元、地鱉蟲等，具有破血逐瘀、續(xù)筋接骨的功效。最早在《神農(nóng)本草經(jīng)》中記載：“?蟲，主心腹寒熱洗洗，血積癥瘕，破堅(jiān)下血閉，生子，尤良。”[4]《神農(nóng)本草經(jīng)疏》中也提到土鱉蟲“治跌撲傷，續(xù)筋骨有奇效。乃足顧陰經(jīng)藥也。咸能入血而軟堅(jiān)，故主心腹血積癥瘕血閉諸證，血和而營衛(wèi)通暢，寒熱自除，經(jīng)脈調(diào)勻，月事時(shí)至而令婦人生子也。亦治瘧母必用之藥?！盵5]土鱉蟲化學(xué)成分的研究主要集中在氨基酸、蛋白質(zhì)、脂肪酸、無機(jī)元素、脂溶性維生素等[6-7]，小分子化學(xué)成分的研究并不多，近年少量的報(bào)道主要發(fā)現(xiàn)了生物堿類、苯丙素類及蟲類中普遍存在的多巴胺類化合物[8-11]。臨床上土鱉蟲常用于治療骨折、急慢性腰扭傷、肺纖維化、冠心病、高血壓、腫瘤等，應(yīng)用和開發(fā)日益廣泛，對(duì)于土鱉蟲的藥理作用研究也在不斷深入。因此，本文對(duì)國內(nèi)外文獻(xiàn)中報(bào)道的土鱉蟲藥理作用進(jìn)行綜述，以期為其進(jìn)一步研究提供思路與方向，也為其他蟲類中藥的研究提供參考。

1 抑制血管生成

李興暖等[12]研究發(fā)現(xiàn)，土鱉蟲纖溶活性蛋白組分可抑制人微血管內(nèi)皮細(xì)胞（MVEC）的增殖并促進(jìn)其凋亡，抑制雞胚尿囊膜新生血管形成。曹付春等[13]采用免疫組化法和雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附分析法（ELⅠSA）檢測土鱉蟲纖溶活性蛋白對(duì)肝癌細(xì)胞H22 和腹水瘤細(xì)胞S180 移植瘤模型小鼠腫瘤組織微血管密度（MVD）和血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）的影響，發(fā)現(xiàn)土鱉蟲纖溶活性蛋白作用后腫瘤組織MVD 明顯減小，VEGF 表達(dá)下調(diào)。同時(shí)，曹付春等[14]還發(fā)現(xiàn)土鱉蟲纖溶蛋白含藥血清對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞、肺癌細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞的VEGF 和堿性成纖維細(xì)胞生長因子（bFGF）表達(dá)均有抑制作用，表明土鱉蟲纖溶蛋白對(duì)腫瘤血管生成的抑制可能是通過抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、減少相關(guān)促血管生長因子表達(dá)及降低微血管通透性實(shí)現(xiàn)的。

2 抗腫瘤作用

2.1 土鱉蟲纖溶活性蛋白

林靜華等[15]研究發(fā)現(xiàn)，土鱉蟲纖溶活性蛋白對(duì)人食管癌細(xì)胞Ecal09和人宮頸癌細(xì)胞HeLa的增殖抑制率與質(zhì)量濃度和作用時(shí)間有關(guān)，增加土鱉蟲纖溶活性蛋白的濃度，可明顯減少G1期腫瘤細(xì)胞數(shù)量，增加G2/M 期腫瘤細(xì)胞數(shù)量，說明腫瘤細(xì)胞被阻斷在G2/M 期，細(xì)胞增殖受到抑制。李興暖等[16]也發(fā)現(xiàn)土鱉蟲纖溶活性蛋白（1.0、10.0 mg·L-1）作用于HeLa細(xì)胞后，腫瘤細(xì)胞也被阻斷在G2/M 期，最終誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

土鱉蟲纖溶活性蛋白能抑制腹水癌細(xì)胞S180 和肝癌細(xì)胞H22 的生長，降低端粒酶活性，提高半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）表達(dá)水平，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[17-19]。經(jīng)土鱉蟲纖溶活性蛋白灌胃和皮下注射給藥后，荷瘤小鼠的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)增加，抗H22 細(xì)胞抗體水平提高，丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（GPT）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（GOT）活性明顯增加，表明土鱉蟲纖溶活性蛋白誘導(dǎo)實(shí)體瘤細(xì)胞凋亡的原因可能是抑制了新生血管生成，導(dǎo)致實(shí)體瘤生長的營養(yǎng)供應(yīng)不足，即切斷了腫瘤營養(yǎng)、代謝和轉(zhuǎn)移的渠道，從而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，同時(shí)又通過增強(qiáng)荷瘤小鼠參與免疫抗體及相關(guān)酶的活性而發(fā)揮抗腫瘤作用。黎子蔚等[20]研究發(fā)現(xiàn)，土鱉蟲纖溶活性蛋白具有較強(qiáng)的溶解血栓活性和微弱的溶血性，且對(duì)小鼠S180細(xì)胞有一定的抑制作用，抑制率與質(zhì)量濃度呈正相關(guān)。

張東梅等[21]研究發(fā)現(xiàn)土鱉蟲蛋白可以抑制人舌癌細(xì)胞Tea-8113 增殖，且隨著藥物質(zhì)量濃度的升高和作用時(shí)間的延長，抑制率也逐漸升高。陳冰等[22]探討土鱉蟲纖溶蛋白對(duì)HepG2 細(xì)胞和乳腺癌細(xì)胞MCF-7 的影響，發(fā)現(xiàn)土鱉蟲纖溶蛋白直接給藥對(duì)HepG2細(xì)胞沒有抑制作用，而含藥血清給藥對(duì)HepG2細(xì)胞增殖有明顯的抑制作用；土鱉蟲纖溶蛋白直接給藥和含藥血清給藥均對(duì)MCF-7 細(xì)胞增殖有抑制作用。林澤飛等[23]發(fā)現(xiàn)不同質(zhì)量濃度土鱉蟲纖溶活性蛋白含藥血清作用48 h后，對(duì)肺癌細(xì)胞A549有一定的增殖抑制作用，并可能通過下調(diào)B 細(xì)胞淋巴瘤-2（Bcl-2）蛋白的表達(dá)和上調(diào)Bcl-2 相關(guān)X 蛋白（Bax）的表達(dá)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡。

從土鱉蟲中分離純化得到的抗癌蛋白EPS72 對(duì)人肝癌Bel-7402 細(xì)胞、肺癌A549 細(xì)胞、宮頸癌HeLa 細(xì)胞、結(jié)腸癌RKO 細(xì)胞及胰腺癌Panc-28 細(xì)胞均有增殖抑制作用，并且呈明顯的量效關(guān)系；EPS72 可以誘導(dǎo)A549 細(xì)胞脫離并凋亡，抑制細(xì)胞黏附纖維連接蛋白（FN）和Ⅳ型膠原（Col Ⅳ），抑制細(xì)胞遷移和侵襲，顯著降低整合素β1的表達(dá)水平[24-25]，表明EPS72 在體外具有抗癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移活性，有望發(fā)展成為一種新的抗癌藥物。

2.2 土鱉蟲多糖

羅志文等[26]通過酶解法提取得到土鱉蟲多糖，并研究該多糖對(duì)胃癌荷瘤鼠腫瘤的抑制作用，發(fā)現(xiàn)土鱉蟲多糖各劑量對(duì)胃癌細(xì)胞MGC803 實(shí)體瘤有不同程度的抑制作用。Xie等[27]通過噻唑藍(lán)（MTT）法和流式細(xì)胞術(shù)測定了1 種新的土鱉蟲水洗脫多糖對(duì)H22 荷瘤小鼠的抗腫瘤活性，發(fā)現(xiàn)該多糖對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞產(chǎn)生直接的促有絲分裂作用，并呈劑量依賴性；能促進(jìn)熒光染料CFSE 標(biāo)記的淋巴細(xì)胞增殖，提高了體外脾臟CD3+、CD4+和CD8+T 淋巴細(xì)胞的占比及體外自然殺傷細(xì)胞占比，并通過激活自然殺傷細(xì)胞明顯抑制H22和HepG-2細(xì)胞的生長；還能顯著提高H22 荷瘤小鼠的脾臟和胸腺指數(shù)，在體內(nèi)有效抑制H22 細(xì)胞的生長。表明該土鱉蟲多糖具有較高的抗肝癌活性，可以作為一種潛在的肝癌免疫治療候選藥物。

2.3 土鱉蟲醇提物

鄒璽等[28]發(fā)現(xiàn)土鱉蟲水提物對(duì)人胃腺癌（低分化）細(xì)胞BGC-823 增殖沒有抑制作用，反而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增長；而土鱉蟲醇提物對(duì)BGC-823 細(xì)胞生長的抑制作用具有濃度和時(shí)間依賴性。

土鱉蟲醇提物對(duì)H22 荷瘤小鼠有抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)作用，能夠促進(jìn)輔助性T細(xì)胞（Th）1型細(xì)胞因子 [腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和γ-干擾素（ⅠFN-γ）]的產(chǎn)生，并提高了Bax/Bcl-2比率和活化的Caspase-3水平，誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡[29]。土鱉蟲醇提物還可以抑制HepG2 和SGC-7901 細(xì)胞增殖，并誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡[30]。由于土鱉蟲醇提物毒性較小，有望作為腫瘤治療的免疫輔助劑。

Dai 等[31-32]研究發(fā)現(xiàn)，土鱉蟲醇提物通過抑制新血管生長、阻斷激酶插入?yún)^(qū)受體（KDR）信號(hào)通路、下調(diào)蛋白激酶B（Akt）磷酸化水平和細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶1/2（ERK1/2）活性，從而有效抑制A549 細(xì)胞增殖；同時(shí)還發(fā)現(xiàn)土鱉蟲醇提物能夠顯著抑制S180 荷瘤小鼠腫瘤生長，并且通過上調(diào)細(xì)胞周期蛋白B1、細(xì)胞分裂周期蛋白2（CDC2）表達(dá)，下調(diào)細(xì)胞周期蛋白D1、細(xì)胞周期蛋白E1、CDC25c 和p53蛋白表達(dá)，誘導(dǎo)細(xì)胞G2/M 期停滯，抑制表皮生長因子（EGF）分泌和阻斷EGFR 信號(hào)傳導(dǎo)途徑抑制人慢性髓原白血病細(xì)胞K562 在體外的生長。Zhang等[33]發(fā)現(xiàn)土鱉蟲醇提物抑制了肝癌細(xì)胞的增殖和集落的形成，且對(duì)正常細(xì)胞沒有抑制作用。土鱉蟲醇提物對(duì)肝癌SMMC-7721細(xì)胞增殖抑制作用的機(jī)制為下調(diào)蛋白激酶C（PKCβ）、Akt、哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、ERK1/2、MEK-2、Raf和c-Jun氨基末端激酶1（JNK-1）信號(hào)通路表達(dá)及Akt和mTOR的磷酸化，降低細(xì)胞周期蛋白E、B1 和CDC2 的表達(dá)量，降低基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP2）、MMP9、趨化因子受體4（CXCR4）、血纖維蛋白溶酶原（PLG）、核轉(zhuǎn)錄因子-κB（NF-κB）及p53 蛋白的活性，提高了細(xì)胞周期蛋白D1水平。表明土鱉蟲醇提物可能通過阻斷對(duì)腫瘤發(fā)展至關(guān)重要的細(xì)胞增殖和腫瘤轉(zhuǎn)移2個(gè)過程影響肝癌細(xì)胞生長。

Zhan 等[34]通過傷口愈合實(shí)驗(yàn)和侵襲實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)土鱉蟲醇提物能有效抑制乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-435s和MDA-MB-231的增殖，并且對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞異種移植模型小鼠有明顯的抗腫瘤作用；土鱉蟲醇提物還通過抑制絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號(hào)通路關(guān)鍵分子ERK1/2的活性，下調(diào)CXCR4、MMP2、MMP9表達(dá)水平發(fā)揮抗腫瘤細(xì)胞增殖和抗侵襲作用；土鱉蟲醇提物對(duì)CXCR4 表達(dá)的影響可能與調(diào)節(jié)VEGF 的分泌有關(guān)，并且其抑制CXCR4 的表達(dá)與進(jìn)一步抑制基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1α（SDF-1α）誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞遷移和侵襲有關(guān)。

張?jiān)降萚35]研究發(fā)現(xiàn)土鱉蟲醇提物可以明顯抑制人前列腺癌細(xì)胞PC3 的轉(zhuǎn)移和侵襲，呈劑量依賴關(guān)系，可降低MMP2、MMP9 蛋白的表達(dá)水平，表明其對(duì)PC3 細(xì)胞的影響與下調(diào)MMP2、MMP9 蛋白表達(dá)水平有關(guān)。張慧明等[36]通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)土鱉蟲醇提取物通過整合素β1、整合素連接激酶（ⅠLK）、纖維型肌動(dòng)蛋白（F-actin）信號(hào)通路參與前列腺癌細(xì)胞的遷移與侵襲，影響骨架蛋白重新構(gòu)建，但并不影響其表達(dá)；同時(shí)ⅠLK 上調(diào)下游蛋白Caspase-3 的表達(dá)，促進(jìn)了細(xì)胞凋亡。

2.4 土鱉蟲血淋巴

張?jiān)降萚37-38]發(fā)現(xiàn)土鱉蟲血淋巴對(duì)PC3、HEL、WM9、MDA-MB-231細(xì)胞的增殖有抑制作用，尤其對(duì)HEL 細(xì)胞具有顯著的抑制，其機(jī)制可能是通過誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生G2/M 期阻滯實(shí)現(xiàn)的，阻滯了細(xì)胞的有絲分裂，上調(diào)了Bax、Cyt C mRNA 和蛋白的表達(dá)水平，下調(diào)了Bcl-2 mRNA和蛋白的表達(dá)水平。

2.5 土鱉蟲含藥血清

張微等[39-40]發(fā)現(xiàn)土鱉蟲含藥血清能夠顯著抑制HepG2 細(xì)胞增殖；可能通過阻止HepG2 細(xì)胞從G0期向S 期的轉(zhuǎn)化，進(jìn)而抑制DNA 合成，使細(xì)胞生長停滯；能夠下調(diào)HepG2 細(xì)胞中胸苷酸合成酶（TS）基因表達(dá)并上調(diào)核苷酸切除修復(fù)交叉互補(bǔ)組1（ERCC1）基因的表達(dá)。土鱉蟲含藥血清與化療藥物5-氟尿嘧啶（5-Fu）、順氯氨鉑（DDP）聯(lián)合用藥48 h后具有協(xié)同作用。

2.6 球孢白僵菌發(fā)酵土鱉蟲

王彥多等[41]利用球孢白僵菌為發(fā)酵菌，土鱉蟲粉為發(fā)酵基質(zhì)，以白僵菌的生長和代謝作用改造和修飾土鱉蟲體內(nèi)的化學(xué)成分，發(fā)現(xiàn)與發(fā)酵前相比，發(fā)酵土鱉蟲水提液對(duì)肝癌細(xì)胞Bel-7402、肺癌細(xì)胞A549和乳腺癌細(xì)胞MCF-7有明顯的抑制作用；但發(fā)酵后醇提液卻沒有很好的抗腫瘤作用。王立娜等[42]應(yīng)用新型固體雙向發(fā)酵模式研究球孢白僵菌與土鱉蟲粉相互作用后藥物的活性成分蛋白質(zhì)變化，發(fā)現(xiàn)發(fā)酵后土鱉蟲對(duì)肝癌細(xì)胞的抑制作用顯著高于發(fā)酵前，并且濃度越高抑制率越高。

2.7 土鱉蟲酶解液

毛會(huì)秀等[43]研究表明，土鱉蟲酶解液抑制肝癌細(xì)胞的最佳用酶是胰蛋白酶、彈性蛋白酶、胰凝乳蛋白酶；抑制喉癌細(xì)胞的最佳用酶是胰蛋白酶和彈性蛋白酶。

2.8 土鱉蟲多肽溶液

李興暖等[44]研究發(fā)現(xiàn)，土鱉蟲多肽溶液可以抑制H22 荷瘤小鼠腫瘤的生長且對(duì)其免疫器官影響較小。該多肽溶液能降低腫瘤小鼠肝臟MDA水平、提高SOD活性，表明其具有抗腫瘤和抗氧化作用。

2.9 土鱉蟲水提物

牛宗新等[45]發(fā)現(xiàn)單用環(huán)磷酰胺（CTX）組荷瘤小鼠的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)明顯下降，而土鱉蟲水提物與CTX 聯(lián)用組能提高H22 荷瘤小鼠的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)，與單用CTX 相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明土鱉蟲水提物可對(duì)抗CTX 所致的免疫抑制，發(fā)揮增效減毒的作用，提高了機(jī)體的抗腫瘤能力。

2.10 土鱉蟲中單體化合物

Jiang 等[8]從土鱉蟲乙酸乙酯提取物中分離鑒定了4 個(gè)化合物，通過對(duì)10 種腫瘤細(xì)胞株的細(xì)胞毒活性實(shí)驗(yàn)表明，發(fā)現(xiàn)3-乙基-6-O-(4′-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷)-8-羥基-7-甲基-3,4-二氫異香豆素對(duì)小鼠結(jié)腸腺癌細(xì)胞Colon 38、(3S,1′R)-3-(1-羥乙基)-6,8-二羥基-7-甲基-3,4-二氫異香豆素對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞L1210、N-乙酰多巴胺二聚體對(duì)人膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251N具有一定的細(xì)胞毒活性。Zhu等[9]從土鱉蟲中分離出10 個(gè)新木脂素或降木脂素，并對(duì)其進(jìn)行生物活性評(píng)價(jià)，其中新木脂素(+)-3和 (-)-3對(duì)人慢性髓原白血病K562、肺癌A549 和肝癌Huh-7 細(xì)胞系具有細(xì)胞毒性。

3 改善血液流變學(xué)及抗凝血、血栓形成

周春鳳等[46]研究發(fā)現(xiàn)，土鱉蟲水提液能顯著降低大鼠紅細(xì)胞（RBC）壓積，降低全血高切黏度、全血低切黏度、RBC 聚集指數(shù)、RBC 剛性指數(shù)，同時(shí)明顯提高了RBC 沉降率與血沉方程常數(shù)，降低血液黏度。土鱉蟲抗凝血作用實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，其可以減少大鼠實(shí)驗(yàn)性血栓質(zhì)量，延長大鼠凝血酶原時(shí)間（PT）及小鼠體外凝血時(shí)間[47]。

王怡等[48]用血液流變學(xué)方法對(duì)5種動(dòng)物類活血化瘀藥進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)土鱉蟲在各切速下均能有效降低兔的全血黏度，減少體外血栓的長度、濕質(zhì)量和干質(zhì)量，縮短血栓彈力圖中最大幅度和彈力度、最大凝固時(shí)間，減少血小板聚集的數(shù)量和黏附性，改善血小板聚集，改善紅細(xì)胞變形性和聚集性，提高紅細(xì)胞電泳速度，并降低血漿中纖維蛋白原含量，其改善血液流變性作用優(yōu)于其他4 種蟲類活血化瘀藥。郭慶民等[49]發(fā)現(xiàn)土鱉蟲可降低高脂大鼠紅細(xì)胞壓積，增強(qiáng)紅細(xì)胞變形能力并降低紅細(xì)胞膜MDA水平、膽固醇含量和膜膽固醇/磷脂比值。說明降低膜膽固醇/磷脂的比值可能是土鱉蟲改善紅細(xì)胞變形性及臨床上活血化瘀作用的機(jī)制之一。周瑞玲等[50]研究發(fā)現(xiàn)，土鱉蟲多肽能夠顯著降低血瘀模型家兔全血和血漿黏度，改善血液流動(dòng)性和黏滯性，抑制血小板聚集和體外血栓形成。賀衛(wèi)和等[51]研究發(fā)現(xiàn)，土鱉蟲提取液在家兔體內(nèi)外均能延長血漿凝血酶時(shí)間（KPTT）、PT 和凝血酶時(shí)間（TT），其作用隨土鱉蟲提取液濃度的增加而增強(qiáng)，且其抗凝血酶作用不依賴于抗凝血酶-Ⅲ（AT-Ⅲ），表明土鱉蟲可能是對(duì)凝血酶直接發(fā)揮抑制作用。

王征等[52]通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)土鱉蟲溶栓酶具有良好的抗凝血和抗血栓作用，初步探討其機(jī)制可能為土鱉蟲溶栓酶減少了纖維蛋白原的含量，抑制血液凝固過程和血小板的聚集，從而抑制血栓的形成。李興暖等[53]研究發(fā)現(xiàn)，土鱉蟲纖溶活性蛋白能顯著延長小鼠TT，增強(qiáng)組織型纖溶酶原激活物（t-PA）活性，降低纖溶酶原激活物抑制因子（PAⅠ）活性，抑制角叉菜膠形成的尾部血栓。郎杰等[54]發(fā)現(xiàn)土鱉蟲水提液和生藥粉懸液都未呈現(xiàn)阻礙大鼠體外血栓形成的效應(yīng)，表明土鱉蟲破血逐瘀的主要作用可能不在于抗凝血方面。后續(xù)抗凝實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，土鱉蟲在抗凝血方面沒有表現(xiàn)出明顯作用；在促纖溶方面，土鱉蟲提高了血液纖溶酶原（Plg）和t-PA 活性。實(shí)驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)提高Plg活性成分為非水溶性物質(zhì)，而提高t-PA 活性的成分存在于水提物中。表明土鱉蟲的活血化瘀作用并不是由單一成分完成，其作用主要在于促進(jìn)纖溶功能，而不在于抗凝血[55]。陳曉陽等[56]觀察冠蓋藤與土鱉蟲配伍對(duì)急性血瘀模型大鼠血液流變學(xué)及對(duì)膝骨性關(guān)節(jié)炎模型大鼠纖溶系統(tǒng)tPA、PAⅠ活性的影響，發(fā)現(xiàn)相伍用藥組優(yōu)于冠蓋藤單獨(dú)用藥組，能增加血漿中tPA的水平、降低PAⅠ的活性和PAⅠ/t-PA 值，對(duì)由膝骨性關(guān)節(jié)炎引起纖溶系統(tǒng)活性下降可起到一定程度的抑制作用，其機(jī)制可能與改善血液流變學(xué)及纖溶功能有關(guān)。

Yang 等[57]從土鱉蟲中發(fā)現(xiàn)了一種同時(shí)具有纖維蛋白溶解和纖溶酶原激活物（PA）活性的纖維蛋白Eupolytin1，其在體內(nèi)具有獨(dú)特的藥效動(dòng)力學(xué)，具有較強(qiáng)的快速溶栓能力和安全性，優(yōu)于尿激酶。在此基礎(chǔ)上，Wang 等[58]通過蛋白質(zhì)組學(xué)和轉(zhuǎn)錄組分析，從土鱉蟲中鑒定出4個(gè)蛋白酶家族的105種絲氨酸蛋白酶，并通過藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其中5 種具有水解纖維蛋白（原）和/或激活纖溶酶原的能力，而這些蛋白同時(shí)含有纖溶酶和類纖溶酶原活性，是抗血栓形成藥物的優(yōu)秀候選蛋白。曹艷玲等[59]采用溶劑萃取和凝膠柱色譜法對(duì)土鱉蟲胰酶解物進(jìn)行分離純化，得到的土鱉蟲胰酶酶解物部位Ⅳ有較強(qiáng)的抗凝活性，其抗凝活性強(qiáng)度與濃度相關(guān)，抗凝活性組分為小于1000 Da的小分子肽類。柴連琴等[60]利用兼并引物成功克隆到土鱉蟲類胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶基因，通過構(gòu)建該基因的原核重組表達(dá)載體及異丙基硫代半乳糖苷（ⅠPTG）體外誘導(dǎo)，包涵體蛋白復(fù)性，Ni2+柱親和色譜純化，獲得了重組表達(dá)目的蛋白。經(jīng)體外檢測，該蛋白具有較好的溶栓活性，將為今后開發(fā)新型高效抗血栓基因工程藥物提供參考。

黃鎮(zhèn)林等[61-62]通過大鼠體內(nèi)外抗凝實(shí)驗(yàn)，觀察土鱉蟲活性組分F2-2 的抗凝藥效，結(jié)果得到該活性組分在體內(nèi)外均能延長血漿活化部分凝血活酶時(shí)間（APTT）、PT、TT 和凝血啟動(dòng)時(shí)間，并降低血漿纖維蛋白原含量（FⅠB）、血小板聚集率和血液最大凝固程度，增加大鼠離體血管環(huán)張力的。姜珊等[63]經(jīng)仿生酶解、分離純化后制備得到土鱉蟲活性肽F2，并通過急性血瘀大鼠模型探討該組分對(duì)血液流變學(xué)、血脂4 項(xiàng)指標(biāo)及血液因子含量的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明土鱉蟲活性肽F2 組分能顯著降低大鼠血清內(nèi)三酰甘油（TG）、膽固醇（T-CHO）、高密度脂蛋白（HDL）和低密度脂蛋白（LDL）的含量，增加NO、t-PA、SOD 含量，減少FⅠB 含量，從而改善急性血瘀模型大鼠血液流動(dòng)性及血液因子含量、降低血脂4項(xiàng)指標(biāo)。

李友賓等[64]實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)土鱉蟲水提液中含有直接作用于凝血酶的成分，干燥后抗凝活性變化不大，但抗凝成分對(duì)熱不穩(wěn)定，加熱使其活性快速損失。馮光軍等[65]發(fā)現(xiàn)土鱉蟲的乙酸乙酯部位顯著地延長人PT、活化部分APTT、TT 和纖維蛋白原凝固時(shí)間（FCT）；石油醚部位、正丁醇部位也有抗凝活性，但作用較弱。王少平等[66]對(duì)土鱉蟲主要活性成分、生物功能及作用信號(hào)通路進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究分析，以口服生物利用度（OB）≥30%、類藥性（DL）≥0.18 為閾值得到土鱉蟲的活性成分，并篩選出與破血逐瘀功效相關(guān)的54個(gè)活性成分對(duì)應(yīng)的26個(gè)靶點(diǎn)。

4 保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞

于燕等[67-68]研究土鱉蟲水提物對(duì)高脂血癥大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞的影響，發(fā)現(xiàn)土鱉蟲水提液各劑量組均不同程度地減少循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞（CEC）數(shù)量，升高NO 而降低血漿內(nèi)皮素（ET）的水平，從而可維持兩者間的平衡；并且通過計(jì)數(shù)內(nèi)皮細(xì)胞和ET陽性細(xì)胞發(fā)現(xiàn)土鱉蟲組顯著降低了血漿ET 水平和ET 陽性細(xì)胞率，抑制了血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、ET 的合成和釋放，對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞有保護(hù)作用。杜清華等[69]通過研究土鱉蟲抗凝活性組分F2-2 對(duì)體外H2O2損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞的影響，發(fā)現(xiàn)F2-2 在一定濃度范圍內(nèi)能升高SOD、GSH-Px、NO 含量，降低乳酸脫氫酶（LDH）漏出率和MDA 含量，表現(xiàn)出保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞的作用。

5 調(diào)節(jié)血脂

趙德忠等[70]發(fā)現(xiàn)土鱉蟲粉可以降低高脂血癥大鼠血漿、肝臟TG 水平，提高高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）水平，降低全血黏度和RBC 聚集指數(shù)。張晶等[71]通過鏈脲佐菌素引起大鼠2 型糖尿病模型，發(fā)現(xiàn)土鱉蟲能有效調(diào)節(jié)2 型糖尿病大鼠的血糖值，降低膽固醇（TC）、TG、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平，升高HDL-C 水平；同時(shí)能改善由2型糖尿病引起的大鼠脾臟質(zhì)量減少，但不能糾正胸腺萎縮。王征等[72]從土鱉蟲中提取一種纖溶活性成分土鱉蟲溶栓酶，發(fā)現(xiàn)提取物高、中、低劑量均可明顯降低高脂血癥大鼠血清TC、TG、LDL-C、肝臟脂肪含量，提高HDL-C 水平，抑制胰脂肪酶活性。表明土鱉蟲提取物對(duì)高脂血癥大鼠有調(diào)血脂作用，并且其抑制胰脂肪酶活性作用很可能是調(diào)血脂作用機(jī)制之一。

任慧君[73]研究發(fā)現(xiàn)土鱉蟲凍干粉可以抑制因高脂飲食而引起的肉兔血脂TC、TG、LDL-C 水平的升高并顯著升高HDL-C 水平，機(jī)制可能與提高載脂蛋白E（ApoE）、LDL-C 基因的表達(dá)量有關(guān)。王慧[74]采用高、中、低劑量的土鱉蟲粉治療高脂血癥模型家兔，發(fā)現(xiàn)土鱉蟲粉能調(diào)節(jié)高脂血癥血脂代謝，上調(diào)與血脂代謝有關(guān)的ApoE、低密度脂蛋白受體（LDL-R）基因的表達(dá)，從而治療高脂血癥，以中劑量最適宜。從分子水平研究土鱉蟲對(duì)血脂異常的預(yù)防作用機(jī)制，發(fā)現(xiàn)土鱉蟲能調(diào)控ApoE、LDL-R基因的表達(dá)；通過降低肝臟中高密度脂蛋白受體（SR-BⅠ）mRNA 的表達(dá)量，從而升高血清中HDL 水平，調(diào)節(jié)血脂；可顯著上調(diào)Lxrα、Abca1和Cyp7a1基因轉(zhuǎn)錄和翻譯表達(dá)，促進(jìn)膽固醇外排和轉(zhuǎn)化；下調(diào)膽固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白2（SREBP-2）、羥甲基戊二酰輔酶A 還原酶（HMGCR）及法尼醇X 受體α（FXRα）基因轉(zhuǎn)錄和翻譯表達(dá)，減少膽固醇體內(nèi)合成[75-78]。

姜珊等[79]發(fā)現(xiàn)土鱉蟲活性肽DP17 口服給藥高脂血癥大鼠后，可減輕肝組織脂肪變性，提升高脂血癥大鼠肝內(nèi)一磷酸腺苷（AMP）、三磷酸腺苷（ATP）的含量，腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）磷酸化蛋白表達(dá)及糞便TG水平，降低肝臟乙酰輔酶A羧化酶（ACC）和羧甲戊二酸輔酶A 還原酶（HMGCR）mRNA 表達(dá)及雷帕霉素靶蛋白復(fù)合物1（mTORC1）蛋白表達(dá)，抑制大鼠肝臟脂肪堆積。董萍萍等[80]實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)土鱉蟲活性肽LL8 能夠顯著改善高脂血癥大鼠肝組織脂肪變性與肝臟病變，減少肝臟脂滴與脂質(zhì)空泡，表明LL8 具有抑制肝臟脂肪堆積、調(diào)血脂的作用，可以很好地保護(hù)肝臟。

6 抗氧化

已有研究利用引進(jìn)的Arazyme 高效蛋白酶（蜘蛛消化道共生微生物）對(duì)土鱉蟲進(jìn)行酶解，得到土鱉蟲短肽，并研究其抗氧化作用，發(fā)現(xiàn)土鱉蟲短肽對(duì)羥自由基、超氧陰離子自由基和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基有較強(qiáng)的清除作用，最高清除率分別為75.15%、31.72%、74.88%；在土鱉蟲短肽含量為2.0 mg 時(shí)，亞油酸自氧化抑制率為95%[81-82]。高穎暉等[83]采用常溫常壓冷浸法提取并獲得土鱉蟲浸膏，在大鼠每次訓(xùn)練后灌服，于訓(xùn)練最后一天進(jìn)行力竭游泳后切取其大腿部位骨骼肌，發(fā)現(xiàn)補(bǔ)充土鱉蟲浸膏能顯著提高大鼠運(yùn)動(dòng)能力，同時(shí)也提高了大鼠骨骼肌中SOD、過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶（GST）活性及mRNA 表達(dá)水平。謝夢蕊等[84-85]通過檢測小鼠體內(nèi)抗氧化酶活力，發(fā)現(xiàn)土鱉蟲多糖提取物和多肽提取物均能降低MDA 含量，提高SOD、CAT、GSH-Px活力，表現(xiàn)出增強(qiáng)小鼠機(jī)體抗氧化能力的作用。谷崇高等[86]研究發(fā)現(xiàn)，土鱉蟲多肽、多糖和水提物均可以有效清除超氧陰離子自由基、羥自由基和DPPH 自由基，并且還可有效抑制紅細(xì)胞氧化溶血，肝臟、腎臟和脾臟組織中MDA的產(chǎn)生及肝臟線粒體腫脹，表現(xiàn)出良好的體外抗氧化活性。

谷崇高等[87]發(fā)現(xiàn)土鱉蟲多肽可以顯著增加衰老小鼠的肝臟、脾臟和腎臟指數(shù)，延長耐缺氧、耐高溫和運(yùn)動(dòng)時(shí)間，顯著提高血液和不同組織中SOD、CAT、GSH-PX 活力及還原型谷胱甘肽（GSH）水平，降低MDA水平，并且土鱉蟲多肽組的結(jié)腸腺癌Caco-2 細(xì)胞胞質(zhì)及胞核內(nèi)核轉(zhuǎn)錄因子E2相關(guān)因子2（Nrf2）表達(dá)均明顯增多。徐小艾等[88]研究發(fā)現(xiàn)，土鱉蟲多肽能緩解H2O2對(duì)小鼠成肌細(xì)胞C2C12 活力的抑制作用，并且顯著促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)Nrf2 和血紅素氧合酶-1（HO-1）蛋白表達(dá)，進(jìn)而激活Nrf2-抗氧化反應(yīng)元件（ARE）信號(hào)通路。說明在細(xì)胞氧化損傷狀態(tài)下，土鱉蟲多肽可能是通過啟動(dòng)細(xì)胞Nrf2-ARE 信號(hào)通路關(guān)鍵分子，促進(jìn)抗氧化蛋白表達(dá)，增強(qiáng)抗氧化酶活性及上調(diào)其基因表達(dá)，最終實(shí)現(xiàn)抗氧化的作用。

Zhang等[89]通過土鱉蟲多肽在對(duì)光老化小鼠皮膚的保護(hù)作用實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)土鱉蟲多肽處理后的光老化皮膚皺紋和紅斑減少，表皮厚度增加，皮膚中的膠原纖維數(shù)量增加；且土鱉蟲多肽可以提高皮膚中SOD、CAT、GSH-Px 的活性，降低MDA 水平，顯著提高皮膚組織中羥脯氨酸（Hyp）水平。表明土鱉蟲多肽抑制了由紫外線輻射引起的彈性纖維的斷裂、減少和增厚，有效地保護(hù)皮膚免受紫外線照射引起的氧化損傷，恢復(fù)膠原蛋白的含量，可作為抗氧化劑有效地治療皮膚光老化。

7 抗缺氧

楊耀芳等[90]通過夾閉氣管、結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈制備小鼠心腦等重要器官缺血性缺氧模型，發(fā)現(xiàn)土鱉蟲總生物堿可以延長缺氧小鼠心電消失時(shí)間，延長異丙腎上腺素引起心肌耗氧量增加所致小鼠死亡的存活時(shí)間；同時(shí)明顯對(duì)抗垂體后葉素引起的大鼠急性心肌缺血，表明土鱉蟲總生物堿能直接作用于心肌，降低心肌耗氧量，改善心肌缺血，并對(duì)心腦缺氧有保護(hù)作用，其作用機(jī)制可能與增加心肌和大腦缺血耐受性或減少心臟和大腦組織的氧消耗量有關(guān)。黃金保等[91]制備清醒兔呼吸死腔耐缺氧模型，靜脈注射土鱉蟲水提物后發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)家兔的輕、中、重度缺氧現(xiàn)象出現(xiàn)時(shí)間推遲，且呼吸停止時(shí)間也明顯推遲，存活時(shí)間延長，表明土鱉蟲水提物能提高兔的缺氧耐受性，在缺氧環(huán)境下能較長時(shí)間維持正常的心功能，其作用強(qiáng)于普萘洛爾。也說明土鱉蟲水提物不僅能減輕心肌缺氧，還能改善心肌供氧和氧利用。賀衛(wèi)和等[92]研究發(fā)現(xiàn)土鱉蟲水提液能顯著提高缺血再灌注小鼠腦組織SOD 活性和GSH 水平，降低一氧化氮合酶（NOS）活性、MDA 水平和NO水平，明顯延長小鼠存活時(shí)間。

8 促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化

齊振熙等[93-94]探究土鱉蟲防治激素性股骨頭缺血壞死的作用機(jī)制，發(fā)現(xiàn)土鱉蟲含藥血清干預(yù)后體外培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞內(nèi)成脂標(biāo)志物過氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARγ）mRNA 和AP2 mRNA的表達(dá)均顯著降低，堿性磷酸酶活性均不同程度升高，Ⅰ型膠原mRNA 的表達(dá)也顯著升高，其作用機(jī)制可能與改善股骨頭的微循環(huán)、抑制了激素引起的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的成脂分化有關(guān)。李樹強(qiáng)等[95]發(fā)現(xiàn)土鱉蟲含藥血清可逆轉(zhuǎn)激素誘導(dǎo)下的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶含量，促進(jìn)骨鈣素（BGP）及Ⅰ型膠原mRNA 表達(dá)，說明土鱉蟲可阻止激素誘導(dǎo)下的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化減少，促進(jìn)其成骨分化。仲衛(wèi)紅[96]發(fā)現(xiàn)土鱉蟲含藥血清可以抑制骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的成脂分化，促進(jìn)成骨分化；并且熱休克蛋白1樣蛋白（Hspa1L）和過氧化物酶Prx V可能是土鱉蟲抗細(xì)胞凋亡的作用靶點(diǎn)，絲氨酸蛋白酶抑制劑Serpinh1 和ADP/ATP 轉(zhuǎn)位酶1 表達(dá)也可能是土鱉蟲促使成骨分化的作用靶點(diǎn)。

9 促進(jìn)骨骼愈合

羅佩強(qiáng)[97]制備了骨缺損家兔模型，觀察土鱉蟲對(duì)家兔骨痂形成及骨折愈合的影響，發(fā)現(xiàn)用藥組骨痂增長速度明顯快于對(duì)照組；擴(kuò)充的毛細(xì)血管提早出現(xiàn)，且血管形成速度加快；骨生成細(xì)胞、破骨細(xì)胞的數(shù)量、出現(xiàn)時(shí)間及部位均優(yōu)于對(duì)照組；骨基質(zhì)形成較好。表明土鱉蟲可促進(jìn)血管形成，從而為骨折部位提供良好的血液供應(yīng)，促進(jìn)了局部的血液循環(huán)，使肉芽組織能迅速生長，且為各細(xì)胞活動(dòng)提供了所需要的營養(yǎng)物質(zhì)，促使骨生成細(xì)胞活動(dòng)增強(qiáng)，鈣鹽沉積加速，促進(jìn)了骨骼的愈合。李慧麗等[98]研究結(jié)果表明，橈骨骨折模型兔給予土鱉蟲煎液灌胃治療后，其骨痂生成量、骨折端修復(fù)及髓腔再通等方面明顯優(yōu)于對(duì)照組。彭利偉等[99]制備右側(cè)兔下頜骨牽張成骨模型，每天喂食土鱉蟲粉，發(fā)現(xiàn)給藥組動(dòng)物牽張間隙區(qū)內(nèi)的新骨形成速度明顯快于對(duì)照組，成骨活動(dòng)更活躍，且骨形成蛋白（BMPs）及VEGF的表達(dá)明顯優(yōu)于對(duì)照組。表明土鱉蟲可顯著促進(jìn)骨的形成，其作用機(jī)制可能與促進(jìn)牽張間隙區(qū)BMPs及VEGF 的表達(dá)有關(guān)。王晶等[100]發(fā)現(xiàn)土鱉蟲水提物對(duì)成骨前體細(xì)胞MC3T3-E1、大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻瘤細(xì)胞PC12、人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞有明顯的促增殖作用及損傷修復(fù)作用，認(rèn)為土鱉蟲可能從多個(gè)方面加速骨折愈合，包括促進(jìn)新骨再生、神經(jīng)再生、骨折周圍新生血管再生及恢復(fù)損傷的成骨、神經(jīng)和血管。土鱉蟲水溶性成分可以促進(jìn)MC3T3-E1 細(xì)胞增殖，而脂溶性成分則具有抑制作用[101]。

10 免疫調(diào)節(jié)

土鱉蟲能提高環(huán)磷酰胺致“血虛”模型小鼠的紅細(xì)胞補(bǔ)體受體1（CR1）活性，提高紅細(xì)胞免疫黏附能力，抑制抗心磷脂抗體免疫球蛋白G（ⅠgGACA）和ⅠgA-ACA 水平，回調(diào)環(huán)磷酰胺引起的體質(zhì)量下降，增加脾臟及胸腺質(zhì)量[102]；能提高地塞米松（Dex）加腎上腺素（Adr）所致陰虛火旺慢性血瘀模型大鼠紅細(xì)胞C3b 受體花環(huán)率和紅細(xì)胞腫瘤花環(huán)率，降低血清ACA、ⅠgG-ACA、ⅠgA-ACA 和ⅠgMACA 的水平，降低血漿D-二聚體的含量，增加脾臟質(zhì)量[103]；與黃芪合用于2 型糖尿病大鼠能回調(diào)升高的ⅠgA 水平，恢復(fù)補(bǔ)體水平，降低補(bǔ)體成分C3 水平，提高機(jī)體免疫功能[104]。

有研究采用土鱉蟲水煎劑喂養(yǎng)小鼠4 周后，發(fā)現(xiàn)小鼠血清NO 含量、酸性磷酸酶和堿性磷酸酶的活性提高，且小鼠內(nèi)臟指數(shù)未受到影響，碳驅(qū)逐指數(shù)和吞噬細(xì)胞指數(shù)明顯提高；還可以刺激延遲超敏反應(yīng)，在伴刀豆球蛋白A（ConA）誘導(dǎo)的脾臟淋巴細(xì)胞的有絲分裂反應(yīng)也得到了提高；與對(duì)照組相比，小鼠血清中的溶血性抗體增加[105-106]。嚴(yán)夢思等[107]將土鱉蟲多肽給予正常和免疫抑制小鼠灌胃后，發(fā)現(xiàn)土鱉蟲多肽可提高正常小鼠的胸腺和脾指數(shù)，抵抗環(huán)磷酰胺引起的免疫抑制小鼠的胸腺和脾臟萎縮；增強(qiáng)免疫抑制小鼠的單核巨噬細(xì)胞吞噬功能；升高正常和免疫抑制小鼠血清中白細(xì)胞介素-2（ⅠL-2）水平。Liu 等[108]研究發(fā)現(xiàn)，土鱉蟲凍干粉（0.5、1.0、2.0 g·kg-1）提高了環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的免疫抑制小鼠免疫器官指數(shù)、單核巨噬細(xì)胞功能和自然殺傷細(xì)胞水平，同時(shí)增加3+T 細(xì)胞、CD4+T 細(xì)胞數(shù)量和CD4+/CD8+比例，促進(jìn)ⅠL-2、ⅠL-6、ⅠL-16 和TNF-α的分泌，抑制了JNK 的磷酸化和Bax 的表達(dá)，上調(diào)了Bcl-2 的表達(dá)，下調(diào)了Bax/Bcl-2。表明土鱉蟲凍干粉可以通過調(diào)節(jié)氧化系統(tǒng)和先天免疫細(xì)胞有效地改善小鼠免疫功能。

11 保肝

土鱉蟲多肽能夠降低CCl4急性肝損傷模型小鼠血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）活力及肝組織中MDA 含量，提高抗氧化酶SOD、CAT、GSH-Px 活力，降低炎癥因子[TNF-α、ⅠL-6和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）] 蛋白與基因表達(dá)水平，降低促凋亡因子（Bax、Caspase-3）、纖維化因子 [α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）、轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）] 基因表達(dá)水平；隨土鱉蟲多肽劑量增加，小鼠肝組織細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)損傷程度明顯減弱，臟器指數(shù)顯著降低[109-111]。表明土鱉蟲多肽對(duì)CCl4導(dǎo)致的小鼠急性肝損傷有一定的保護(hù)作用，其作用機(jī)制可能是通過提高抗氧化酶活力，減少過氧化物產(chǎn)生，抑制炎癥因子及凋亡因子生成，維持肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整性。

12 鎮(zhèn)痛

汪梅姣等[112]通過熱板法和醋酸扭體法對(duì)比了3種動(dòng)物藥水提取物的鎮(zhèn)痛效果，發(fā)現(xiàn)土鱉蟲短效鎮(zhèn)痛作用顯著。丁志軍等[113]采用無菌鉻腸線結(jié)扎致大鼠坐骨神經(jīng)慢性壓迫性神經(jīng)病理性疼痛模型和醋酸致小鼠扭體模型研究土鱉蟲酶解提取物的鎮(zhèn)痛作用，發(fā)現(xiàn)其能顯著減少小鼠扭體次數(shù)、增加大鼠壓力痛閾值，且呈明顯的量效關(guān)系。陳昭等[114]采用高效毛細(xì)管電泳法（HPCE）結(jié)合醋酸致小鼠扭體實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，土鱉蟲鎮(zhèn)痛活性與尿囊素和氯氮卓的含量成正比，原因可能與尿囊素和氯氮卓的生物活性有關(guān)，如鎮(zhèn)痛、促進(jìn)皮膚潰瘍面和傷口愈合等。

13 調(diào)節(jié)腸道菌群

張晶等[115]采用高脂飼料自然喂養(yǎng)SD大鼠誘導(dǎo)形成高脂血癥大鼠模型，運(yùn)用16S rDNA高通量測序技術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組比較，模型組大鼠腸道中擬桿菌門、螺旋體門、乳酸桿菌屬、普氏菌屬等豐度較低，厚壁菌門、變形菌門、放線菌門、擬桿菌屬、嗜膽菌屬、布老特氏菌屬豐度明顯增加，表明高脂飲食可以改變大鼠腸道菌群的豐度及結(jié)構(gòu)，而土鱉蟲能使部分益生菌比例升高，改善大鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)。王少平等[116]測定土鱉蟲生物活性肽干預(yù)模型大鼠腸道微生物菌群的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)給予土鱉蟲生物活性肽后，厚壁菌門中的柔菌屬、乳酸桿菌屬、雙歧桿菌屬的相對(duì)豐度增加，擬桿菌門、軟壁菌門的瘤胃球菌屬、普氏菌屬、普雷沃菌屬的相對(duì)豐度降低，表明土鱉蟲生物活性肽調(diào)血脂的同時(shí)也修復(fù)了高脂血癥大鼠腸道菌群譜。

14 抗菌

索相敏等[117]通過研磨法從土鱉蟲5 齡若蟲體內(nèi)提取得到抗菌肽，采用比濁法和菌碟法測定其抑菌活性，發(fā)現(xiàn)土鱉蟲抗菌肽對(duì)大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、白菜軟腐菌和枯草芽孢桿菌4 種細(xì)菌生長均有一定的抑制作用；對(duì)玉米莖基腐病菌、小麥根腐病菌、棉花枯萎病菌抑制效果較好；而對(duì)白菜黑斑病菌和玉米大斑病菌活性較差。代春迎等[118]對(duì)土鱉蟲雌蟲活體分別注射大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌，誘導(dǎo)后取血淋巴，通過濾紙片法測定誘導(dǎo)后土鱉蟲血淋巴的抑菌作用，發(fā)現(xiàn)經(jīng)過金黃色葡萄球菌誘導(dǎo)的土鱉蟲血淋巴抑菌作用最強(qiáng)，且隨著加樣量的增大誘導(dǎo)血淋巴的抑菌效果增強(qiáng)，表明在正常情況下，土鱉蟲血淋巴中有一定量的天然抗菌物質(zhì)，在外源性誘導(dǎo)劑的刺激下，其體內(nèi)的抗菌物質(zhì)明顯增加，從而產(chǎn)生了明顯的抗菌效果。趙紅玲等[119]通過Folin酚比色法測定采用不同蛋白酶酶解的土鱉蟲粉提取物，以金黃色葡萄球菌、白葡萄球菌和大腸埃希菌為受試菌株，發(fā)現(xiàn)土鱉蟲胃蛋白酶酶解提取物的肽含量最高，且對(duì)3種受試菌株均有不同程度的抑制作用，其中對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制作用最強(qiáng)。李娜等[120]從土鱉蟲腸道中分離出8 株內(nèi)生真菌，發(fā)現(xiàn)其中的深綠木霉菌Trichoderma atroviride對(duì)金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌和白色念珠菌都有一定的抑制作用。

15 其他

陳永培等[121]應(yīng)用Ames 試驗(yàn)法檢測致基因突變性，發(fā)現(xiàn)土鱉蟲表現(xiàn)出抗移碼型基因突變力。徐成鋼等[122]探究土鱉蟲對(duì)多囊腎病囊腫襯里上皮細(xì)胞增殖的影響，發(fā)現(xiàn)不論是否經(jīng)EGF 刺激，土鱉蟲含藥血清均能明顯抑制多囊腎病囊腫襯里上皮細(xì)胞增殖，提示土鱉蟲可能具有延緩多囊腎病發(fā)生與發(fā)展的作用。唐慶峰等[123]通過超臨界二氧化碳（SC-CO2）萃取工藝對(duì)土鱉蟲的活性物質(zhì)進(jìn)行研究，比較其萃取產(chǎn)物與水提物的藥效，發(fā)現(xiàn)土鱉蟲SC-CO2萃取產(chǎn)物具有較好的鎮(zhèn)痛、消炎和抗凝血作用，相對(duì)于水提物有更好的發(fā)展?jié)摿?。李靜怡等[124]采用兩步酶消化法體外分離培養(yǎng)雞骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞，研究土鱉蟲肽對(duì)H2O2刺激下衛(wèi)星細(xì)胞增殖的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，通過不同濃度土鱉蟲肽預(yù)處理細(xì)胞后，可以緩解H2O2引起的細(xì)胞中Pax7、Myf5、MyoD mRNA 相對(duì)表達(dá)量降低，不同程度地促進(jìn)增殖因子基因表達(dá)。王慧慧等[125]通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)土鱉蟲各部位水提物均能增強(qiáng)H2O2損傷的成骨前體細(xì)胞MC3T3-E1 和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的活力，同時(shí)還發(fā)現(xiàn)土鱉蟲不同部位促進(jìn)細(xì)胞活力的活性高低為背殼＞全體＞腹殼＞肉體。

Zhu 等[11]從土鱉蟲中分離出5 個(gè)新的化合物和3個(gè)已知化合物，進(jìn)行生物活性評(píng)價(jià)后發(fā)現(xiàn)化合物2和4抑制JAK3 的半數(shù)抑制濃度（ⅠC50）值分別為12.6、5.0 μmol·L-1；化合物4對(duì)盤狀結(jié)構(gòu)域受體1（DDR1）具有抑制活性，其ⅠC50值為4.87 μmol·L-1。Zhu等[9]進(jìn)一步從土鱉蟲中分離出10個(gè)新木脂素或降木脂素，并對(duì)其進(jìn)行生物活性評(píng)價(jià)，其中化合物1和7以劑量依賴的方式降低了TGF-β1誘導(dǎo)的NRK-52e 大鼠腎細(xì)胞中纖連蛋白表達(dá)；此外，化合物1可抑制Smad3 磷酸化，但不影響TGF-β1誘導(dǎo)的Smad2磷酸化，化合物7降低了Smad3和Smad2的磷酸化水平，在40 μmol·L-1時(shí)對(duì)Smad2 的影響比Smad3 更強(qiáng)，表明化合物1和7可以通過抑制Smad 發(fā)揮治療腎纖維化的潛在作用；化合物 (+)-3和 (-)-3對(duì)EV71有一定的抑制活性；化合物6對(duì)JAK3 和Rho 相關(guān)卷曲螺旋形成蛋白激酶2（ROCK2）表現(xiàn)出有效的抑制活性，ⅠC50值分別為9.17、27.10 μmol·L-1；化合物(+)-9和 (-)-9抑制了JAK3和DDR1激酶活性。此外，Zhu 等[10]從土鱉蟲乙醇提取物中分離出13 個(gè)化合物，除化合物2～4和9外，其余化合物在40 μmol·L-1時(shí)均能顯著降低纖連蛋白、Ⅰ型膠原蛋白或α-SMA 的表達(dá)；化合物7對(duì)環(huán)氧合酶-2（COX-2）和JAK3 具有較強(qiáng)抑制活性，ⅠC50值分別為1.22、7.16 μmol·L-1；而只有化合物9對(duì)肺結(jié)核有抑制活性，ⅠC50值為14.00 μmol·L-1；化合物6、8和13能顯著抑制細(xì)胞外基質(zhì)的表達(dá)，其中化合物8顯著抑制Smad3 磷酸化，對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的Smad2 磷酸化無影響，表明可以作為一種強(qiáng)效和選擇性的Smad3 磷酸化抑制劑，用于治療腎纖維化等慢性腎臟疾病。

16 結(jié)語與展望

土鱉蟲的藥用價(jià)值十分豐富，對(duì)其開發(fā)利用也越來越廣泛，如中華地鱉酒、地鱉蟲氨基酸口服液、中華地鱉膠囊等。眾多學(xué)者在抗腫瘤、抗凝血、抗血栓、調(diào)節(jié)免疫等方面進(jìn)行了大量的研究，同時(shí)在土鱉蟲與其他中藥、化學(xué)藥聯(lián)合用藥治療方面也做了相關(guān)研究，為土鱉蟲的臨床應(yīng)用和進(jìn)一步合理使用提供了更多的依據(jù)，也為蟲類中藥的開發(fā)提供了更多的參考。