土鱉蟲研究概述

楊 麗,蘇學(xué)秀，顧炳麟，王太生，呂益濤，吳兆蕃，武玉婧，王曉燕，石林凡，李普凡，滕澤學(xué)，楊世琴，楊 伍

(白銀市藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心,甘肅 白銀 730900)

1 人工養(yǎng)殖技術(shù)

土鱉蟲完成一個(gè)生命周期歷經(jīng)產(chǎn)卵、幼蟲、成蟲共三個(gè)階段。文獻(xiàn)記載[1]，20世紀(jì)60年代，我國(guó)就開始了以江蘇省為首的土鱉蟲人工養(yǎng)殖技術(shù)探索?；谝吧鷦?dòng)物保護(hù)政策，現(xiàn)藥用土鱉蟲絕大多數(shù)為人工養(yǎng)殖，其養(yǎng)殖方式有盆養(yǎng)、缸養(yǎng)、池養(yǎng)和立體飼養(yǎng)等，最大優(yōu)點(diǎn)表現(xiàn)為生長(zhǎng)周期短，投資少，見效快。

人工養(yǎng)殖需要考慮其生活習(xí)性、養(yǎng)殖方法、飼料組成、溫度控制以及敵害防治等多個(gè)方面外界因素。最初，北方人工養(yǎng)殖土鱉蟲的方法為用磚頭、水泥板(或木板、電阻絲)組成飼養(yǎng)柜，另取干凈的培養(yǎng)土(加入適量生石灰)、鋸術(shù)屑或稻殼灰進(jìn)行小范圍個(gè)體戶養(yǎng)殖[2]。后來，周維官等[3]選取不同地域土鱉蟲為試驗(yàn)基材，對(duì)飼養(yǎng)土、蛋白質(zhì)水平、溫度等多個(gè)飼養(yǎng)指標(biāo)進(jìn)行了詳細(xì)研究，選出了飼養(yǎng)土鱉蟲的適宜條件，發(fā)現(xiàn)優(yōu)化后的養(yǎng)殖法土鱉蟲產(chǎn)量提高 15.5%，耗料比降低10.9%。吳巧鳳等[4]以土鱉蟲幼蟲為載體，率先選用含富硒酵母或亞硒酸鈉等加富飼料進(jìn)行人工養(yǎng)殖，大大提高了土鱉蟲的品質(zhì)和市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力。至此，土鱉蟲的人工養(yǎng)殖技術(shù)取得突破性進(jìn)展，終于可以進(jìn)行大規(guī)模的養(yǎng)殖。

2 真?zhèn)舞b別

土鱉蟲真?zhèn)舞b別在其臨床應(yīng)用與基礎(chǔ)研究中占有重要地位，鑒別方法有經(jīng)驗(yàn)鑒別法、顯微法、光譜法、色譜法、生物鑒定法等。

早在2011年，張葉[5]就在《土鱉蟲及其偽品的鑒別》一文中詳細(xì)介紹了地鱉、冀地鱉、金邊土鱉及東方潛龍虱的性狀鑒別要點(diǎn)。鞠康等[6]借助多種儀器對(duì)土鱉蟲的不同部位進(jìn)行圖像采集，利用Photoshop CS5軟件景深合成高清晰度微性狀特征圖片對(duì)土鱉蟲進(jìn)行微性狀鑒定法研究，發(fā)現(xiàn)土鱉蟲口器、腹背板邊緣、肛上板、生殖板、觸角、單眼間距與復(fù)眼間距比例、單眼、復(fù)眼、前足脛節(jié)、跗節(jié)、爪、尾須、背甲及腹甲剛毛等方面與混淆品有比較明顯的區(qū)別。

近年來，陳偉韜等[7]通過改變供試品溶液的制備方法、薄層色譜展開劑、薄層板和檢視方法等條件，確定金邊土鱉的薄層色譜中存在混偽品沒有的橙黃色熒光斑點(diǎn)，可作為金邊土鱉混偽品的鑒別依據(jù)。

生物鑒定法中目前應(yīng)用較成熟的方法是分子生藥學(xué)技術(shù)。陳偉韜等[8]借助DNA條形碼通過基因數(shù)據(jù)庫可以有效的鑒別土鱉蟲及其混偽品。李娜等[9]借助線粒體 DNA 細(xì)胞色素氧化酶b( Cytb) 基因的分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)土鱉蟲及其混偽品炮制藥材進(jìn)行了分子鑒定，確定只有土鱉蟲帶有擴(kuò)增條帶，可以有效鑒別地鱉蟲及其混偽品。

3 化學(xué)成分

土鱉蟲作為傳統(tǒng)中藥動(dòng)物藥，含有豐富多樣的化學(xué)成分，有蛋白質(zhì)、氨基酸、脂肪酸、膽固醇、揮發(fā)油等，其中蛋白質(zhì)含量占總干重的50%以上[10]。土鱉蟲中還含有多種人體必需氨基酸，已發(fā)現(xiàn)18種[11-13]，其中組氨酸基于首位。此外，土鱉蟲中含有多種脂肪酸，包括3種飽和脂肪酸(軟脂酸、豆蔻酸、硬脂酸)和3種不飽和脂肪酸(棕櫚油酸、油酸、亞油酸)。見表1。

表1 土鱉蟲中的化學(xué)成分及其種類

4 臨床藥理

現(xiàn)代臨床研究表明，土鱉蟲對(duì)治療人體肝、腰、關(guān)節(jié)等多個(gè)臟器疾病有重要作用。土鱉蟲作為中藥動(dòng)物藥，與其他蟲類動(dòng)物藥合并可用于治療骨關(guān)節(jié)類疾病。王繼萱等[16]引用土鱉蟲能破血逐瘀中醫(yī)辨證治病，將其用于治療慢性肝炎、早期肝硬化和肝區(qū)有悶痛等癥效果顯著。金鑫[17]對(duì)100例血瘀型腰痛患者在常規(guī)治療的基礎(chǔ)上口服土鱉蟲中藥，發(fā)現(xiàn)能有效減輕患者的疼痛、改善血流動(dòng)力學(xué)、降低血液黏度。

近年藥理學(xué)研究顯示，土鱉蟲具有降低血脂、促進(jìn)骨細(xì)胞增殖、抗腫瘤等多種藥理作用。姜珊等[18]研究發(fā)現(xiàn)土鱉蟲活性肽DP17能夠調(diào)控高脂血癥SD大鼠體內(nèi)能量代謝平衡并激活A(yù)MPK/mTOR信號(hào)通路來抑制大鼠肝臟脂肪堆積現(xiàn)象，從而發(fā)揮降血脂的作用。王晶等[19]發(fā)現(xiàn)土鱉蟲的水溶性成分對(duì)MC3T3-E1成骨細(xì)胞有促增殖作用。馬家寶等[20]歸納總結(jié)了土鱉蟲抗腫瘤有效成分和抗腫瘤機(jī)制。發(fā)現(xiàn)土鱉蟲抗腫瘤有效成分為脂溶性脂肪酸、纖溶活性蛋白、多糖、多種提取物等，抗腫瘤機(jī)制則是通過抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡來實(shí)現(xiàn)的。

5 有害物質(zhì)及毒性

5.1 有害物質(zhì)

《中國(guó)藥典(2020年版)》已經(jīng)收錄了中藥土鱉蟲中有害物質(zhì)的檢測(cè)方法。有害物質(zhì)以重金屬和黃曲霉毒素為主。

重金屬蓄積會(huì)引起人體暫時(shí)或永久性病理變化，甚至危及生命。朱曉東[21]利用高效液相-電感耦合等離子體質(zhì)譜技術(shù)對(duì)86批土鱉蟲中重金屬進(jìn)行分析檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)土鱉蟲中Pb、As、Cu總體超標(biāo)率達(dá)到56.98%，As殘留水平接近限量值，考慮可能是喂養(yǎng)飼料和地下水通過食物鏈的生物放大效應(yīng)造成土鱉蟲As積累。李耀磊等[22]采用電感耦合等離子體質(zhì)譜對(duì)土鱉蟲中16種無機(jī)元素進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)土鱉蟲中As、Cd和Pb殘留量較高，提示，重金屬超標(biāo)應(yīng)引起關(guān)注。

黃曲霉毒素是含劇毒的真菌毒素，嚴(yán)重威脅患者用藥安全。建立快速的中藥材污染真菌鑒定方法檢出潛在的產(chǎn)毒真菌，意義重大。白玲[23]通過高效液相色譜法對(duì)56批來自五省不同藥材市場(chǎng)的土鱉蟲樣品中4種黃曲霉毒素含量進(jìn)行分析檢測(cè)，均檢出黃曲霉毒素。劉晶晶等[24]采用HPLC柱后光化學(xué)衍生熒光檢測(cè)法對(duì)3種含土鱉蟲中成藥(24批)中黃曲霉毒素進(jìn)行分析檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)其中21批檢出黃曲霉毒素，檢出率為87.5%。提示，以土鱉蟲為例的中藥動(dòng)物藥中黃曲霉毒素污染應(yīng)引起生產(chǎn)企業(yè)和藥品監(jiān)管部門的高度重視。

5.2 毒性

近年來，隨著中藥不良反應(yīng)報(bào)道不斷增多，中藥潛在毒性受到日益關(guān)注。人體服用中藥土鱉蟲后，可能發(fā)生皮膚過敏、腹痛、全身乏力等中毒癥狀。王雨等[25]從106篇不良反應(yīng)/事件的文獻(xiàn)報(bào)道中篩選涉及含動(dòng)物藥組分(土鱉蟲、全蝎與蜈蚣)的中成藥92例，臨床不良反應(yīng)表現(xiàn)為皮膚及其附件、神經(jīng)系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)，提示可能與動(dòng)物藥毒性有關(guān)。

目前關(guān)于中藥土鱉蟲毒性成分的研究報(bào)道很少。傳統(tǒng)中醫(yī)用藥時(shí)，將生土鱉蟲使用文火焙干后得到炒土鱉蟲，可以起到降低毒性、提高藥效的作用。趙明會(huì)等[26]首次制定了炒土鱉蟲規(guī)范化炮制工藝和炒土鱉蟲飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，為推動(dòng)動(dòng)物藥土鱉蟲產(chǎn)業(yè)化、功能化開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。

6 總結(jié)與討論

土鱉蟲作為一種傳統(tǒng)中藥動(dòng)物藥，具有破血逐瘀，續(xù)筋接骨的功效。對(duì)跌打損傷，筋傷骨折，血瘀經(jīng)閉，產(chǎn)后瘀阻腹痛，癥瘕痞塊的患者有顯著的治療效果。筆者對(duì)近年來中藥土鱉蟲的人工養(yǎng)殖技術(shù)、真?zhèn)舞b別、化學(xué)成分、臨床藥理、有害物質(zhì)及毒性等五個(gè)方面的研究進(jìn)行歸納總結(jié)，發(fā)現(xiàn)土鱉蟲的致毒成分和致毒原理尚未明了，關(guān)于土鱉蟲致毒機(jī)理的研究報(bào)道也很少，這將是未來科研學(xué)者需要攻克的重點(diǎn)和難點(diǎn)。此外，吳巧鳳等[4]采用真空冷凍干燥和超微粉碎等現(xiàn)代制藥工程技術(shù)，成功研制出富硒土鱉蟲凍干粉膠囊制劑，開創(chuàng)了土鱉蟲多功能產(chǎn)品的研發(fā)先河。筆者預(yù)測(cè)，開發(fā)土鱉蟲相關(guān)新劑型產(chǎn)品或?qū)⒊蔀槲磥砜蒲袩狳c(diǎn)。