HPLC法測定不同產(chǎn)地黃芪中黃芪甲苷的含量

鄒傳宗 吳秋鈺

摘要 [目的]比較不同產(chǎn)地黃芪中黃芪甲苷含量的大小。[方法]采用高效液相-蒸發(fā)光散射檢測法（HPLC-ELSD）測定黃芪中黃芪甲苷的含量，色譜柱為Agilent C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）;流動(dòng)相為乙腈-水（40∶60）;流速為1.0 mL/min;柱溫為30 ℃;進(jìn)樣量為5 μL。ELSD檢測器漂移管溫度為100 ℃;載氣壓力為200 kPa。[結(jié)果]不同產(chǎn)地黃芪中黃芪甲苷含量分別為甘南0.147%、隴西0.117%、岷縣0.205%、山西0.182%、張掖0.067%、武威0.045%、慶陽0.097%、渭源0.114%、內(nèi)蒙古0.087%、新疆0.046%。[結(jié)論]不同產(chǎn)地黃芪中黃芪甲苷的含量差異較大，4個(gè)黃芪主產(chǎn)省（自治區(qū)）中甘肅產(chǎn)的黃芪中黃芪甲苷含量最高，山西、陜西產(chǎn)的黃芪中黃芪甲苷含量相對較高，新疆產(chǎn)的黃芪中黃芪甲苷含量較低。同一省份中隴西、甘南、岷縣、慶陽、渭源縣產(chǎn)黃芪中黃芪甲苷的含量較高，而武威和張掖產(chǎn)黃芪中黃芪甲苷的含量偏低。

關(guān)鍵詞 黃芪;黃芪甲苷;HPLC;含量測定

中圖分類號 R 284? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A? 文章編號 0517-6611（2022）01-0208-02

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2022.01.056

Determination of Astragaloside in Astragalus membranaceus from Different Habitats by HPLC

ZOU Chuan-zong， WU Qiu-yu

（Department of Pharmacy， Gansu Medical College， Pingliang， Gansu 744000）

Abstract [Objective]To determine the content of astragaloside in Astragalus membranaceus from different habitats. [Method]HPLC-ELSD was used to determine the content of astragaloside. The analysis was performed on Agilent C18（4.6 mm×250 mm，5 μm） column with the mixture of acetonitrile-water（40∶60）as mobile phase， and the flow rate was 1.0 mL/min;the column? temperature was 30 ℃; the temperature of drift tube in ELSD was 100 ℃ and the gas pressure was 200 kPa.[Result] The astragaloside contents in Astragalus membranaceus from Gannan， Longxi， Minxian， Shanxi，Zhangye， Wuwei， Qingyang， Weiyuan， Inner Mongolia and Xinjiang were 0.114%， 0.117%， 0.205%， 0.182%，0.067%， 0.045%， 0.097%， 0.114%， 0.087% and 0.046%. [Conclusion]The content of astragaloside in Astragalus membranaceus from different production areas is quite different. Among them， the content of astragaloside in Gansu is the highest， the content of astragaloside in Astragalus membranaceus produced in Shanxi and Shaanxi is relatively higher， and the content of astragaloside in Astragalus membranaceus produced in Xinjiang is lower.In the same province， the content of astragaloside in Astragalus membranaceus in Longxi， Gannan， Minxian， Qingyang and Weiyuan counties was higher， while the content of astragaloside in Wuwei and Zhangye was low.

Key words Astragalus membranaceus;Astragaloside;HPLC;Content determination

基金項(xiàng)目 ?甘肅省教育廳項(xiàng)目（2019B-199）。

作者簡介 鄒傳宗（1975—），男，湖北羅田人，副教授，碩士，從事天然藥物活性成分研究。

收稿日期 2021-05-17

黃芪為常用中藥材，是豆科植物蒙古黃芪[Astragalus membranaceus（Fisch.）Bunge var.mongholicus（Bunge）Hsiao]或膜莢黃芪[Astragalus membranaceus（Fisch.）Bunge]的干燥根，具有補(bǔ)氣固表、利水消腫、托毒排膿、斂瘡生肌等功效[1]。黃芪中的主要化學(xué)成分有黃芪多糖、皂苷類、黃酮類和氨基酸等[2]。黃芪甲苷與血漿蛋白結(jié)合率高，在肝肺中分布較高，在腦中含量較低，并且具有正性肌力、舒張血管、保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞、抗炎和抗病毒等作用[3]。眾多的研究表明黃芪甲苷是黃芪的主要活性物質(zhì)[4]，通常將其作為黃芪中藥材及其制劑質(zhì)量控制的主要指標(biāo)。目前市場上銷售的黃芪中藥材多為人工栽培品，野生黃芪藥材較少，不同來源的黃芪之間黃芪甲苷的含量差異較為顯著，從而影響黃芪藥材的質(zhì)量。目前，對黃芪中黃芪甲苷的含量進(jìn)行定量測定的方法有薄層掃描法（TLCS法）、高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法（HPLC-ELSD法）、高效液相色譜-紫外法（HPLC-UV法）[5]、高效液相色譜-示差折光檢測法（HPLC-RI法）、高效液相色譜-質(zhì)譜檢測法（HPLC-MS法）、比色法、熒光法、超高效液相色譜（UPLC法）[6]、薄層色譜-分光光度法、紫外分光光度法[7]等。由于HPLC-ELSD法具有步驟簡單、重現(xiàn)性好、靈敏度高、適用性廣、干擾因素少等特點(diǎn)，同時(shí)也滿足了黃芪甲苷的紫外末端吸收沒有特征吸收波長的要求[6，8]，因此《中國藥典》從2005年開始均采用該法測定黃芪中黃芪甲苷的含量。該試驗(yàn)采用HPLC-ELSD法來測定不同產(chǎn)地蒙古黃芪中黃芪甲苷的含量，為規(guī)范黃芪中藥材市場提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 儀器。高效液相色譜儀（Waters e2695型，美國Waters公司）;蒸發(fā)光散射檢測器（ELSD6000型，埃文森科技有限公司）;微型植物試樣粉碎機(jī)（FZ102型，天津泰斯特儀器有限公司）;萬分之一電子天平（BSA224S型，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）;超純水機(jī)（UPL-1-20T型，成都超純科技有限公司）;電熱恒溫水浴鍋（DK-98-ⅡA型，天津市泰斯特儀器有限公司）;冷卻液循環(huán)水機(jī)（AS600型，北京華澳維科技有限公司）;無油真空泵（HPD-25型，天津市恒奧科技發(fā)展有限公司）。

1.1.2

試劑。乙腈（默克股份兩合公司，色譜純）;甲醇（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，分析純）;正丁醇（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，分析純）;氨水（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，分析純）;95%乙醇（天津市大茂化學(xué)試劑廠，分析純）;超純水（自制）;D101大孔吸附樹脂（東鴻化工有限公司）。黃芪甲苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為110781-201717）。

1.1.3 藥材。供試驗(yàn)用的10批黃芪飲片分別購于甘肅、內(nèi)蒙古、山西、新疆等地，均為蒙古黃芪，藥材名稱及編號分別為甘肅甘南黃芪（001）、甘肅岷縣黃芪（002）、內(nèi)蒙古黃芪（003）、山西黃芪（004）、甘肅隴西縣黃芪（005）、甘肅武威黃芪（006）、新疆黃芪（007）、甘肅渭源黃芪（008）、甘肅張掖黃芪（009）、甘肅慶陽黃芪（010）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1

色譜條件。色譜柱為Agilent C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）;流動(dòng)相為乙腈-水（40∶60）;流速1.0 mL/min;檢測器為ELSD6000;漂移管溫度100 ℃;載氣壓力200 kPa。

1.2.2 對照品溶液的制備。精密稱取16.23 mg的黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)品，置于50 mL容量瓶中，加甲醇適量溶解后，稀釋定容至刻度，搖勻，即得0.314 5 mg/mL的黃芪甲苷對照品溶液。

1.2.3

供試品溶液的制備。取黃芪藥材粉末約4 g，精密稱定，用濾紙包裹置索氏提取器中，加甲醇40 mL冷浸過夜，再加甲醇適量，80 ℃水浴加熱回流4 h，提取液回收溶劑并濃縮至干，加水10 mL微熱使溶解，轉(zhuǎn)移入分液漏斗中。分別用40 mL水飽和的正丁醇振搖萃取4次，合并正丁醇液，分別用40 mL氨試液充分洗滌2次，棄去氨試液，正丁醇液蒸干，加水5 mL使溶解，放冷，通過D101型大孔吸附樹脂柱（內(nèi)徑為1.5 cm，柱高為12.0 cm），以水50 mL洗脫（先加5 mL水，靜置15 min，再加45 mL水進(jìn)行洗脫），棄去水液，再用新配40%乙醇30 mL洗脫，棄去洗脫液，繼用新配70%乙醇80 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，即得[1]。

1.2.4

樣品含量測定。取10批黃芪中藥材，按照“1.2.3”方法制備供試品溶液。分別精密吸取經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過的供試品溶液5 μL，按照“1.2.1”色譜條件進(jìn)行黃芪甲苷含量的測定，每批樣品進(jìn)樣3份取平均峰面積。

2 結(jié)果與分析

2.1 精密度試驗(yàn)

取“1.2.2”制備的0.314 5 mg/mL的黃芪甲苷對照品溶液，分別以5 μL（圖1a）和10 μL（圖1b）重復(fù)進(jìn)樣5次，測得各次峰面積，計(jì)算RSD值，進(jìn)樣5 μL時(shí)，峰面積的RSD為2.0%，進(jìn)樣10 μL時(shí)，峰面積的RSD為1.3%。

2.2 樣品含量測定

依照2015年版《中國藥典》，用外標(biāo)兩點(diǎn)法對數(shù)方程計(jì)算黃芪中黃芪甲苷的含量，結(jié)果見表1。2015年版《中國藥典》規(guī)定黃芪中黃芪甲苷的含量不得少于0.040%[1]。由表1可知，此次試驗(yàn)用到的10批黃芪中黃芪甲苷的含量均符合要求。甘肅岷縣所產(chǎn)的黃芪中黃芪甲苷的含量最高，為0.205%;甘肅武威所產(chǎn)的黃芪中黃芪甲苷的含量最低，為0.045%。

3 結(jié)論

黃芪甲苷被《中國藥典》作為衡量黃芪質(zhì)量優(yōu)劣的一個(gè)標(biāo)志性成分。目前，市場上的黃芪中藥材產(chǎn)地較為混雜，主要來源地有甘肅、內(nèi)蒙古、新疆和山西等[9]。該試驗(yàn)對10個(gè)不同產(chǎn)地黃芪中黃芪甲苷的含量進(jìn)行了研究，結(jié)果表明，不同產(chǎn)地黃芪中黃芪甲苷的含量差異較明顯，4個(gè)黃芪主產(chǎn)省（自治區(qū)）中甘肅產(chǎn)的黃芪中黃芪甲苷含量最高，山西、陜西產(chǎn)的黃芪中黃芪甲苷含量較高，新疆產(chǎn)的黃芪中黃芪甲苷含量較低。這一研究結(jié)果與孫娟娟等[10-11]對不同產(chǎn)地黃芪中黃芪甲苷含量的結(jié)果一致。就甘肅省同一省份而言，隴西縣、甘南、岷縣、慶陽、渭源縣產(chǎn)的黃芪中黃芪甲苷含量較高，武威和張掖產(chǎn)的黃芪中黃芪甲苷含量偏低。這說明即使是同一省份，黃芪中黃芪甲苷的含量也會(huì)有較大差異。該研究可為規(guī)范中藥黃芪中藥材市場提供依據(jù)。

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