灰葡萄孢Bromodomain轉(zhuǎn)錄因子家族成員鑒定及表達分析

鄧思琪，李 白，馬宇馨，曹宏哲，邢繼紅，張 康

（河北農(nóng)業(yè)大學，華北作物改良與調(diào)控國家重點實驗室/河北省植物生理與分子病理學重點實驗室，河北 保定 071000）

灰葡萄孢（Botrytis cinerea）是一種世界性分布的重要植物病原真菌［1］，其寄主范圍廣泛、傳播十分迅速，以菌絲、分生孢子及菌核的形式侵染，常給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成嚴重經(jīng)濟損失［2-3］?；移咸焰叩木z可以在3 ～30 ℃的溫度范圍內(nèi)生長，其最適生長溫度為20 ～25 ℃，且在具有相對較高濕度的環(huán)境下會引起大范圍的灰霉病發(fā)生［4-5］。到目前為止，灰霉病的防治主要為化學防治，通過在作物葉表面噴灑化學藥劑來防控灰霉病。此方法雖然高效，但灰葡萄孢變異頻繁，會產(chǎn)生高抗藥性，導致防治效果逐漸減弱，從而殺菌劑用量不斷增加，嚴重威脅了農(nóng)產(chǎn)品的安全［6］。隨著基因組測序工作的完成，灰葡萄孢已經(jīng)成為發(fā)育生物學、微生物學、植物病理學研究的模式生物之一，也是研究病原微生物與寄主植物互作的一種重要的模式生物。因此，充分挖掘與灰葡萄孢生長發(fā)育和致病相關(guān)基因，探究調(diào)控病菌生長發(fā)育和致病力的分子機制，不僅可以為灰霉病的生物防治提供理論依據(jù)，還可以為其他真菌的相關(guān)研究提供重要參考價值。

組蛋白乙?；潜碛^遺傳研究的重要組成部分，是翻譯后修飾的重要方式之一。Bromodomain (BRD)是一類能夠特異性識別組蛋白中乙?；嚢彼岬谋Ｊ氐鞍捉Y(jié)構(gòu)域，可特異性識別組蛋白末端乙?；馁嚢彼嵛稽c，通過與乙?；嚢彼峤Y(jié)合促使染色質(zhì)重塑因子和轉(zhuǎn)錄因子等相關(guān)蛋白富集于特定的基因轉(zhuǎn)錄位點，改變RNA 聚合酶Ⅱ的活性，從而調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄表達［7］。Bromodomain 亦可通過對轉(zhuǎn)錄因子等非組蛋白的乙酰化修飾廣泛參與細胞周期調(diào)控、細胞分化、信號轉(zhuǎn)導等過程［8］。據(jù)研究報道，所有與組蛋白乙酰化酶有關(guān)的轉(zhuǎn)錄輔激活因子都包括Bromodomains，而BRDs 也是目前已知的唯一能對賴氨酸乙酰化物特異性識別的蛋白。BRD 存在于多種表觀遺傳調(diào)控蛋白中，包括轉(zhuǎn)錄激活因子、組蛋白乙酰化轉(zhuǎn)移酶以及染色質(zhì)等。BRD 蛋白不僅單獨存在，而且常與其他組蛋白密碼解讀蛋白結(jié)構(gòu)域相連［9-10］，例如 PHD 這些結(jié)構(gòu)域通過協(xié)同方式調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄、細胞周期以及細胞凋亡。雖然其大部分功能未知但值得注意的是一種溴結(jié)構(gòu)域蛋白BS69，在基因轉(zhuǎn)錄抑制復合物中起著重要的作用，這表明組蛋白乙?；赡芎卸嘀氐?、不同的功能［11］。

Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子最開始在果蠅的基因中發(fā)現(xiàn)，隨后在人體組織和酵母中發(fā)現(xiàn)。目前的研究表明，Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子在人體中廣泛表達，主要參與染色質(zhì)重塑，具有調(diào)控相關(guān)基因表達、促進細胞分化等功能，這些功能參與了成人造血干細胞的功能維持，Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子表達異常會導致嚴重的造血缺陷，會引起骨髓衰竭和貧血等疾?。?2-15］。擬南芥中含有擬南芥溴多糖的蛋白質(zhì)BRD1、BRD2 和BRD13 可能是真正的SWI/SNF 亞基，與核心SWI/SNF 成分SWI3C 和SWP73B 相互作用，對擬南芥的基因組靶向至關(guān)重要［16-17］。在酵母中發(fā)現(xiàn)的一種溫度敏感的突變體Bromodomain factor 1，在體外可結(jié)合組蛋白H3 和H4，因此被認為在染色質(zhì)重塑中起重要作用［18］。而在禾谷鐮刀菌中首次發(fā)現(xiàn)保守結(jié)構(gòu)域Bromodomain 對研究FgGCN5的調(diào)控機制是必不可少的［19-20］。

目前，有關(guān)灰葡萄孢Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子家族的系統(tǒng)研究尚未見報道。因此，利用生物信息學的方法對灰葡萄孢中Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子家族進行分析，挖掘Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子家族成員的功能，并利用qPCR 技術(shù)分析該家族基因在NaCl 和剛果紅脅迫處理下的表達變化，探究Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子家族在灰葡萄孢生長發(fā)育以及致病力的分子機制，從而為灰葡萄孢防治和Bromodomain 家族基因功能和調(diào)控機制研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

本研究用到的灰葡萄孢（B.cinerea）B05.10 菌株由河北農(nóng)業(yè)大學真菌毒素與植物分子病理學實驗室提供并保存。

1.2 灰葡萄孢Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子家族基因的篩選與鑒定

在Ensembl Fungi（http://fungi.ensembl.org/）和 在Pfam（http://pfam. xfam. org） 中 獲 取 灰葡萄孢基因組相關(guān)數(shù)據(jù)以及隱馬爾可夫模型（HMM model），再利用Hmmsearch 軟件找出其Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子家族蛋白序列。

1.3 灰葡萄孢Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子家族基因的理化性質(zhì)分析

利用ProtParam（https://web. expasy. org/protparam/）在線網(wǎng)頁分析灰葡萄孢Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子家族基因的理化性質(zhì)，包括分子量、氨基酸組成、等電點等。

1.4 灰葡萄孢Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子家族基因染色體定位分析

利用在線工具Gene Structure Dispaly Server (GSDS)，將在Ensembl Fungi(http://fungi.ensembl.org/)查詢的灰葡萄孢染色體長度和灰葡萄孢Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子家族基因位置信息，使用TBtools 軟件繪制成Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子家族基因染色體定位圖。

1.5 灰葡萄孢Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子家族基因的系統(tǒng)進化分析

利用Ensembl 數(shù)據(jù)庫（http://fungi.ensembl.org/）和真菌轉(zhuǎn)錄因子數(shù)據(jù)庫（http://ftfd.snu.ac.kr/index.php?a=view）搜集灰葡萄孢（Botrytis cinerea）、禾谷鐮孢（Fusarium graminearum）、釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）、稻瘟病菌（Magnaporthe oryzae）以及黃曲霉（Aspergillus flavus）中含有Bromodomain 結(jié)構(gòu)域的蛋白序列，并利用MEGA7.0對40 條Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子蛋白序列（其中包含灰葡萄孢蛋白序列8 條、禾谷鐮孢蛋白序列7 條、釀酒酵母蛋白序列10 條、稻瘟病菌蛋白序列9 條、黃曲霉蛋白序列6 條）進行多序列比對，然后用鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，bootstrap 值設(shè)置為1 000。

1.6 灰葡萄孢Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子家族的基因結(jié)構(gòu)分析

在灰葡萄孢B05.10 基因組數(shù)據(jù)庫中找到灰葡萄孢Bromodomain 家族基因DNA 序列，利用IBS 軟件繪制灰葡萄孢Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子家族的基因結(jié)構(gòu)圖。

1.7 灰葡萄孢Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子家族保守結(jié)構(gòu)域分析

利用SMART（http://smart.embl-heidelberg.de/）和Pfam（http://pfam. xfam. org）網(wǎng)站對灰葡萄孢8 個Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子家族蛋白進行保守結(jié)構(gòu)域分析，然后利用IBS1.0.3 軟件繪制8 個Bromodomain轉(zhuǎn)錄因子家族蛋白保守結(jié)構(gòu)域。

1.8 灰葡萄孢Bromodomain 家族基因在分生孢子中的表達分析

利用GEO（http://www. ncbi. nlm. nih. gov/geo/）數(shù)據(jù)庫獲得灰葡萄孢分生孢子發(fā)育時期的表達譜數(shù)據(jù)，然后對Bromodomain 家族基因在不同發(fā)育時間的表達數(shù)據(jù)與對照（0 h）做比值，再取以2 為底的對數(shù)值，使用TBtools 軟件分析灰葡萄孢Bromodomain 家族基因分生孢子萌發(fā)期間的全基因組基因表達水平。

1.9 灰葡萄孢Bromodomain 家族基因在侵染過程中的表達分析

利 用GEO（http://www. ncbi. nlm. nih. gov/geo/）數(shù)據(jù)庫獲得灰葡萄孢侵染葡萄過程中的表達譜數(shù)據(jù)，然后對Bromodomain 家族基因在侵染不同時間的數(shù)據(jù)與對照（0 h）做比值，再取以2 為底的對數(shù)值，使用TBtools 軟件分析灰葡萄孢Bromodomain 家族基因在灰葡萄孢侵染葡萄過程中的表達變化。

1.10 灰葡萄孢Bromodomain 家族基因在脅迫處理下的表達分析

以0.8 mol/LNaCl 和2 mg/mL 剛果紅分別處理灰葡萄孢野生型B05.10 菌株，以未作處理的灰葡萄孢野生型B05.10 菌株為對照，處理7 d 取樣，提取RNA，利用反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA。以灰葡萄孢β-tubulin基因為內(nèi)參，用灰葡萄孢Bromodomain 家族基因的特異性引物進行qPCR 檢測（表1）。利用Primer Premier 5 設(shè)計引物，由北京博邁德基因技術(shù)有限公司合成。每個樣品重復3 次。PCR 反應(yīng)體系：PCR Mix 7 μL、cDNA 2 μL、基因特異性上下游引物各0.5 μL，總體積10 μL；PCR 程序：94 ℃預變性1 min，94 ℃變性30 s，55 ℃退火15 s， 72 ℃延伸30 s，30 個循環(huán)。利用GraphPad Prism 軟件對數(shù)據(jù)進行單因素方差分析，0.01 ＜P＜0.05 為差異顯著，P＜0.01 為差異極顯著。

表1 用于qPCR 的引物Table 1 Primers used for qPCR

2 結(jié)果與分析

2.1 灰葡萄孢Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子家族基因的篩選與鑒定

在Ensembl Fungi 和 在Pfam 中 獲 取 灰葡萄孢基因組相關(guān)數(shù)據(jù)以及隱馬爾可夫模型（HMM model）， 再 利 用hmmsearch 找 出 其Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子家族的蛋白序列。最終鑒定出8 個灰葡萄孢Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子家族 成 員：BCIN_05g00170、BCIN_02g08510、BCIN_14g05240、BCIN_02g06970、BCIN_04g04900、BCIN_13g01660、BCIN_05g01870、BCIN_10g03430（見表2）。

2.2 灰葡萄孢Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子家族基因的理化性質(zhì)分析

通過用保守結(jié)構(gòu)域Bromodomain 對灰葡萄孢進行全基因組檢索，獲得了8 個灰葡萄孢Bromodomain 家族基因（表2）。分析發(fā)現(xiàn)，灰葡萄孢Bromodomain 家族基因編碼區(qū)CDS 長度在1 119 ～4 302 bp 之間變化；編碼蛋白的氨基酸數(shù)目為327 ～1 433 aa；相對分子質(zhì)量在42 755.37 ～163 110.01 D 之間變化；等電點在5.06 ～8.91 之間，其中pI ＜7.0 的Bromodomain 家族基因有3 個，占37.5%，呈弱酸性；62.5%的Bromodomain 家族基因pI ＞7.0，這表明該家族基因編碼的蛋白富含堿性氨基酸。

表2 灰葡萄孢Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子家族基因的理化性質(zhì)Table 2 The physicochemical properties of Bromodomain transcription factor family genes in B. cinerea

2.3 灰葡萄孢Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子家族基因染色體定位分析

利用在線工具GSDS，將在Ensembl Fungi 查詢的灰葡萄孢染色體長度和灰葡萄孢Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子家族基因位置信息，繪制成Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子家族基因染色體定位圖（圖1）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，灰葡萄孢Bromodomain 家族的8 個基因分別處于灰葡萄孢的6 條染色體中。其中，BCIN_02g06970和BCIN_02g08510位于2 號染色體，BCIN_04g04900位于4 號染色體，BCIN_05g00170和BCIN_05g01870位于5 號染色體，BCIN_10g03430位于10 號染色體，BCIN_13g01660位于13 號染色體，BCIN_14g05240位于14 號染色體。

圖1 灰葡萄孢Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子家族基因染色體定位Fig.1 Chromosomal localization of Bromodomain transcription factor family genes in B. cinerea

2.4 灰葡萄孢Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子家族基因的系統(tǒng)進化分析

利用Ensembl 數(shù)據(jù)庫和真菌轉(zhuǎn)錄因子數(shù)據(jù)庫搜集灰葡萄孢（B.cinerea）、禾谷鐮孢（F.graminearum）、釀酒酵母（S.cerevisiae）、稻瘟病菌（M.oryzae）以及黃曲霉（A.flavus）中Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子家族蛋白序列，分別包含8、7、10、9、和6 條。用MEGA7.0 軟件對Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子家族蛋白進行系統(tǒng)發(fā)育分析（圖2）。

圖2 灰葡萄孢Bromodomain 家族蛋白系統(tǒng)發(fā)育樹Fig. 2 Phylogenetic tree of Bromodomain family protein in B. cinerea

結(jié)果發(fā)現(xiàn)40 個Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子家族蛋白 可 以 分 為4 個 亞 家 族：BROMO、BROMOBAH、DEXDc-HELICc-SnAC-BROMO、BROMOAT_hook。在8 個灰葡萄孢Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子家 族 蛋 白 中BCIN_13g01660、BCIN_05g01870、BCIN_14g05240、BCIN_04g04900、BCIN_02g08510屬于BROMO 亞家族，BCIN_02g06970 屬于BROMOBAH 亞 家 族，BCIN_10g03430 屬 于DEXDc-HELICc-SnAC-BROMO 亞家族，BCIN_05g00170 屬于BROMOAT_hook 亞家族。

2.5 灰葡萄孢Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子家族的基因結(jié)構(gòu)分析

利用IBS 軟件繪制灰葡萄孢Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子家族的基因結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)該基因家族的基因結(jié)構(gòu)存在明顯差異。其中BROMO 亞家族基因結(jié)構(gòu)較 為 復 雜，BCIN_13g01660和BCIN_05g01870包含1 個 內(nèi) 含 子，2 個 外 顯 子；BCIN_14g05240和BCIN_02g08510包 含2 個 內(nèi) 含 子，3 個 外 顯 子；而BCIN_04g04900沒有內(nèi)含子，只有1 個外顯子。BROMO-BAH 亞 家 族 的BCIN_02g06970包含3 個 內(nèi) 含 子，4 個 外 顯 子；DEXDc-HELICc-SnAC-BROMO 亞家族的BCIN_10g03430包含2 個內(nèi)含子，3 個外顯子；BROMO-AT_hook亞家族的BCIN_05g00170包含5 個內(nèi)含子，6 個外顯子（圖3）。

圖3 灰葡萄孢Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子家族基因的基因結(jié)構(gòu)分析Fig. 3 Analysis of gene structure of Bromodomain transcription factor family genes in B. cinerea

2.6 灰葡萄孢Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子家族的結(jié)構(gòu)域分析

利 用SMART 和Pfam 網(wǎng) 站 對 灰 葡 萄 孢8 個Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子家族蛋白進行保守結(jié)構(gòu)域分析，并用IBS 軟件繪圖。結(jié)果如圖4 所示，8個Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子家族成員可分為4 類，BCIN_13g01660、BCIN_05g01870、BCIN_14g05240、BCIN_04g04900、BCIN_02g08510 屬 于BROMO 亞家 族， 其 中BCIN_13g01660、BCIN_05g01870、BCIN_04g04900、BCIN_02g08510 僅 有1 個BROMO結(jié)構(gòu)域，BCIN_14g05240 含有2 個BROMO 結(jié)構(gòu)域；BCIN_02g06970屬于BROMO-BAH 亞家族，含有2 個BROMO 和1 個BAH 結(jié) 構(gòu) 域；BCIN_10g03430屬于DEXDc-HELICc-SnAC-BROMO 亞家族，含有4 個 結(jié) 構(gòu) 域DEXDc、HELICc、SnAC 和BROMO；BCIN_05g00170 屬于BROMO-AT_hook 亞家族，包含2 個結(jié)構(gòu)域BROMO 和AT_hook。

圖4 灰葡萄孢Bromodomain 保守結(jié)構(gòu)域分析Fig. 4 Analysis of conserved domains Bromodomain in B. cinerea

2.7 灰葡萄孢Bromodomain 家族基因在分生孢子中的表達分析

利用GEO 數(shù)據(jù)庫獲得灰葡萄孢分生孢子發(fā)育時期的表達譜數(shù)據(jù)，對灰葡萄孢Bromodomain 家族基因在分生孢子發(fā)育時期的表達水平進行分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該家族基因在灰葡萄孢分生孢子發(fā)育過程中的表達水平存在明顯差異，BCIN_10g03430在0 ～2.5 h 呈 下 降 趨 勢、 在2.5 ～4 h表達水平短暫升高、 在4 ～15 h 再次下調(diào)；BCIN_05g00170、BCIN_14g05240、BCIN_05g01870和BCIN_02g08510在0 ～15 h 持續(xù)下調(diào)，下調(diào)程度略有不同；BCIN_02g06970在0 ～15 h 持續(xù)上調(diào)，上調(diào)程度略有不同；BCIN_13g01660在0 ～4 h 呈下降趨勢、在4 ～15 h 上調(diào)表達；BCIN_04g04900在1 ～2.5 h 出現(xiàn)短暫的下調(diào)趨勢，其他時間幾乎無變化（圖5）。上述結(jié)果表明，灰葡萄孢Bromodomain 家族基因在發(fā)育過程中呈現(xiàn)不同的表達規(guī)律，推測其參與灰葡萄孢不同時期的生長發(fā)育過程。

圖5 灰葡萄孢Bromodomain 家族基因在分生孢子發(fā)育過程中的表達Fig. 5 Expression of Bromodomain family genes during conidial development of B. cinerea

2.8 灰葡萄孢Bromodomain 家族基因在侵染過程中的表達分析

利用GEO 數(shù)據(jù)庫獲得灰葡萄孢侵染葡萄過程中的表達譜數(shù)據(jù)，對灰葡萄孢Bromodomain 家族基因在侵染葡萄不同時期的表達水平進行分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)（圖6），BCIN_04g04900、BCIN_02g08510、BCIN_02g06970和BCIN_14g05240在病菌侵染過程中持續(xù)上調(diào)表達；BCIN_13g01660、BCIN_10g03430和BCIN_05g00170在病菌侵染0 ～48 h 過程中持續(xù)下調(diào)表達，下調(diào)程度有所不同；BCIN_05g01870在侵染0 ～16 h 出現(xiàn)短暫上調(diào)、在16 ～48 h 呈下調(diào)趨勢。

圖6 Bromodomain 家族基因在灰葡萄孢侵染不同時期的表達Fig. 6 Expression of Bromodomain family genes at different infection stages of B. cinerea

2.9 灰葡萄孢Bromodomain 家族基因在脅迫處理下的表達分析

利用qPCR 技術(shù)對灰葡萄孢Bromodomain 家族基因在NaCl 和剛果紅處理后的表達水平進行分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，灰葡萄孢Bromodomain 家族基因在NaCl 和剛果紅脅迫處理下的表達水平均呈現(xiàn)下調(diào)趨勢，但下調(diào)程度有所不同（圖7）。以0.8 mol/L NaCl 處理7 d 后，BCIN_04g04900、BCIN_13g01660、BCIN_05g01870以及BCIN_10g03430基因下調(diào)最為顯著，并且BCIN_10g03430幾乎不表達。以2 mg/mL 剛果紅處理7 d 后，BCIN_04g04900、BCIN_05g01870和BCIN_10g03430基因下調(diào)最為顯著。

圖7 脅迫處理對灰葡萄孢Bromodomain 家族基因表達的影響Fig.7 The effect of stress treatment on the gene expression of B. cinerea Bromodomain family

3 結(jié)論與討論

在真核細胞中，組蛋白乙?；饕山M蛋白乙?；负徒M蛋白去乙酰化酶共同調(diào)節(jié)。研究表明，大多數(shù)組蛋白乙?；赶嚓P(guān)的轉(zhuǎn)錄激活因子均存在Bromodomain，它可以與乙?；嚢彼崽禺惤Y(jié)合［21］。Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子家族在動物、植物、病菌中普遍存在，家族成員較多，功能較為復雜，對于病菌的生長發(fā)育及其致病力具有重要影響［22］。目前的研究表明，人體內(nèi)的Brd2 具有激酶活性，在某些白血病中激酶活性上升，它可以通過C 端序列與E2F1 或E2F2 相互作用，影響E2F 調(diào)控的細胞周期基因的轉(zhuǎn)錄［23］；而BRD4 屬于BET 家族的成員，通過結(jié)合乙?；M蛋白并調(diào)節(jié)基因表達從而參與一系列重要的生物學過程，如細胞生長、凋亡、炎癥、免疫抑制等［24］。大鼠中含溴多胺的蛋白4 表達增強，最終導致傷害性神經(jīng)元興奮性增強和熱痛覺過敏［25］。在擬南芥中，組蛋白GTE9 和GTE11 與BT2相互作用，介導擬南芥中的ABA 和糖反應(yīng)［26］。

Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子只有在模式物種酵母中有部分研究，但在其他真菌中研究較少。本研究發(fā)現(xiàn)灰葡萄孢包含了8 個Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子家族基因，系統(tǒng)進化分析將其分為4 個亞家族，不同成員在病菌分生孢子發(fā)育的不同時期、侵染時期和NaCl 以及剛果紅脅迫處理下的表達水平存在明顯差異，因此推測Bromodomain 家族基因在灰葡萄孢分生孢子發(fā)育、侵染過程以及脅迫應(yīng)答過程中具有比較重要的作用。

本研究發(fā)現(xiàn)BCIN_02g06970在灰葡萄孢分生孢子發(fā)育的不同時期持續(xù)上調(diào)表達，推測其在灰葡萄孢分生孢子發(fā)育過程中具有重要作用。BCIN_04g04900、BCIN_02g08510、BCIN_02g06970和BCIN_14g05240在病菌侵染過程中持續(xù)上調(diào)表達，在侵染0 h 時表達水平最低，在16 ～48 h 時表達量明顯上調(diào)，因此推測其在病菌侵染過程中發(fā)揮重要作用。本研究還發(fā)現(xiàn)在NaCl 以及剛果紅脅迫處理下，灰葡萄孢Bromodomain 轉(zhuǎn)錄因子家族不同基因均呈現(xiàn)下調(diào)表達趨勢，因此推測其在病菌脅迫應(yīng)答過程中可能發(fā)揮重要作用。本研究結(jié)果初步確定了灰葡萄孢Bromodomain 家族基因在分生孢子發(fā)育、侵染過程以及NaCl 和剛果紅脅迫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用，但機制尚不明確，還有待進一步探究。