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    染色體微陣列分析技術(shù)在NT異常胎兒中的應(yīng)用價值分析

    2022-01-28 06:30:42何淑鳳肖建平張劍萍蘇靖娜
    關(guān)鍵詞:整倍體拷貝數(shù)核型

    何淑鳳,趙 麗,肖建平,張劍萍,蘇靖娜

    南京醫(yī)科大學附屬無錫婦幼保健院醫(yī)學遺傳與產(chǎn)前診斷科,江蘇 無錫 214000

    隨著技術(shù)的進步,染色體微陣列分析(chromosome microarray analysis,CMA)技術(shù)由外周血逐步應(yīng)用于產(chǎn)前檢測,特別是孕期超聲異常的胎兒病因?qū)W分析。孕早期篩查B超對異常結(jié)果的提示將有助于實施介入性產(chǎn)前診斷。胎兒頸部透明層(nuchal translucency,NT)的測量作為孕早期篩查B 超檢測指標之一,已廣泛應(yīng)用于有篩查資質(zhì)的產(chǎn)篩及產(chǎn)前診斷機構(gòu)。依據(jù)Wright 等[1]判斷標準,根據(jù)胎兒醫(yī)學基金會發(fā)布的NT百分位曲線,在相應(yīng)頭臀長下,NT 值超過第95 百分位則認為NT 異常。本研究回顧性分析無錫市婦幼保健院因NT ≥2.5 mm或相應(yīng)頭臀長下,NT 值超過第95 百分位且接受介入性產(chǎn)前診斷的孕婦資料,分析本地區(qū)NT 異常胎兒染色體核型及CMA結(jié)果,為該地區(qū)臨床咨詢提供數(shù)據(jù)支持。

    1 對象和方法

    1.1 對象

    收集無錫市婦幼保健院2018年1月1日—2019年12 月31 日單胎妊娠、NT 異常并接受介入性產(chǎn)前診斷孕婦資料共341例,孕婦年齡分布在18~43歲,平均年齡(28.80±4.40)歲,取樣孕周為19~24+6周。NT 2.2~9.0 mm,平均(3.31±0.97)mm。按NT異常是否合并其他異常指標進行分組:單純NT 異常212例、NT異常合并高齡36例、NT異常合并不良孕產(chǎn)史8例、NT異常合并超聲異常62例、NT異常合并唐氏綜合征產(chǎn)前篩查指標異常11 例、胎兒頸部水囊瘤7例及孕14 周后胎兒頸部皮膚厚度(nuchal fold,NF)異常12 例。分別對不同組胎兒染色體核型及CMA結(jié)果進行分析,通過圍產(chǎn)檔案調(diào)閱、病例查詢及電話隨訪等對所有病例進行妊娠結(jié)局隨訪,并隨訪新生兒情況。

    1.2 方法

    1.2.1 超聲

    采用英國胎兒醫(yī)學基金會規(guī)定的測量方式,取胎兒矢狀面,將圖像放大到胎兒至少占據(jù)畫面的3/4,測量標尺精確到0.1 mm,多次測量取最大值。孕周限定11~13+6周,頭臀長為45~84 mm。NT測量數(shù)值超過2.5 mm 或超該孕周第95 百分位則定義為NT異常。NF ≥6 mm視為異常。

    1.2.2 羊水染色體核型分析及CMA檢測

    B 超引導(dǎo)下羊膜腔穿刺取羊水30 mL。其中20 mL 羊水標本按照本實驗室標準操作流程進行G顯帶染色體核型分析。另10 mL羊水標本按照試劑盒操作說明進行基因組DNA 提取,應(yīng)用美國Affymetrix 公司的Cytoscan 750k 芯片對全基因組已知的拷貝數(shù)變異進行分析,對檢測結(jié)果進行公共數(shù)據(jù)庫查詢,包括OMIM 基因數(shù)據(jù)庫(https://www.omim.org)、DECIPHER數(shù)據(jù)庫(https://www.deciphergenomics.org/browser)、ClinGen 數(shù)據(jù)庫(https://dosage.clinicalgenome.org)、DGV 數(shù)據(jù)庫(https://dosage.clinicalgenome.org)、CNV Pathogenicity Calculator(http://cnvcalc.clinicalgenome.org/cnvcalc)等。結(jié)合病例的臨床表型及美國醫(yī)學遺傳學與基因組學學會(ACMG)指南,對檢出的拷貝數(shù)變異(copy number variation,CNV)評分定性。

    1.3 統(tǒng)計學方法

    數(shù)據(jù)處理采用SPSS 23.0統(tǒng)計軟件。符合正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標準差()表示。計數(shù)資料以例數(shù)(百分率)表述,組間比較采用χ2檢驗及Fisher確切概率法檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結(jié)果

    2.1 不同分組胎兒染色體核型及CMA檢出關(guān)系

    341例羊水標本,1例核型培養(yǎng)失??;NT異常合并超聲異常62 例,CMA 異常占48.387%(30/62),而NT 異常不合并超聲異常267 例,CMA 異常占16.854%(45/267),兩組微缺失/微重復(fù)比較差異無統(tǒng)計學意義(χ2=2.148,P>0.05),兩組非整倍體比較差異有統(tǒng)計學意義(χ2=4.213,P<0.05)。NT異常合并超聲異常胎兒非整倍體及染色體微缺失/微重復(fù)檢出率明顯高于NT 異常不合并胎兒超聲異常組(非整倍體:27.42%vs.3.75%;染色體微缺失/微重復(fù):20.97%vs.13.11%)。胎兒非整倍體在胎兒頸部水囊瘤組檢出最高,其次為胎兒NT 異常同時合并超聲異常組。NT異常同時伴有超聲異常表現(xiàn)時,胎兒染色體結(jié)構(gòu)異常檢出亦較NT 合并高齡孕婦增加,胎兒染色體微缺失/微重復(fù)在各組檢出中相對均衡(表1)。

    表1 不同分組胎兒染色體核型及CMA結(jié)果 [n(%)]

    2.2 NT異常病例致病性CNV情況及宮內(nèi)超聲表現(xiàn)

    311 例正常核型中,CMA 能多檢出15.434%拷貝數(shù)異常(48/311),其中致病性及可能致病性CNV 12例,占25%(12/48)(表2)。

    表2 NT異常病例致病性CNV情況及宮內(nèi)超聲表現(xiàn)

    2.3 NT異常病例致病性CNV繼續(xù)妊娠隨訪

    3 例22q11.21 微重復(fù)病例中僅1 例咨詢后要求繼續(xù)妊娠,孕期超聲未見明顯異常,驗證片段來源于父親,現(xiàn)已分娩,新生兒隨訪5 個月,暫未見明顯異常。2 例16p11.2 片段缺失病例中,有1 例孕期胎兒系統(tǒng)篩查及四級超聲未見明顯異常,驗證該缺失片段來源胎兒父親后繼續(xù)妊娠,現(xiàn)已分娩,目前10個月,身高72 cm,體重10.5 kg,稍胖,大運動稍遲,短時間坐立會前傾或者后仰,會翻身、不會往前爬,未行胸部X 線及CT 進一步檢測。1 例17p12 片段重復(fù),該微重復(fù)CNV外顯率接近100%,但是發(fā)病年齡和嚴重程度可變,67%~80%是源于遺傳,咨詢后孕婦拒絕驗證,要求繼續(xù)妊娠,于2019 年4 月24 日分娩,男嬰,出生體重3.7 kg,出生后1 個月余電話隨訪無明顯異常,1 歲零8 個月電話隨訪,無明顯肌肉萎縮、肌張力及聽力等異常。1 例Xp21.1 片段缺失,此區(qū)段包含DMD 基因,性別鑒定后要求繼續(xù)妊娠,已分娩,女嬰,現(xiàn)1 歲半,發(fā)音不清楚,不愿說話,10 個月前偶有腿不自主抖動情況,其余未見明顯異常。

    3 討論

    NT異常與多種胎兒異常有關(guān),如胎兒染色體及基因異常、超聲結(jié)構(gòu)異常等。NT篩查作為孕早期胎兒篩查B 超已廣泛應(yīng)用于臨床,Minnella 等[2]指出,在妊娠11~13周時,測量胎兒NT并評估三尖瓣和靜脈導(dǎo)管血流情況,可早期診斷胎兒主要的心臟缺陷,再通過孕中期胎兒系統(tǒng)篩查及四級超聲檢查進一步排查胎兒心臟結(jié)構(gòu)及其他系統(tǒng)畸形。Souka等[3]報道,當NT≥3.5 mm 或NT 值超過第99 百分位時,遺傳疾病患病率在0.5%~6.6%。Grande 等[4]報道,CMA 作為NT 異常胎兒首選遺傳學檢測技術(shù)。NT 異常同時伴有染色體異常或致病性CNV新生兒往往結(jié)局不良,因此,對NT 異常胎兒進行染色體檢查及CMA 檢測,可有效避免此類患兒出生,同時也是對孕期超聲檢查分子檢測水平證據(jù)的補充。

    3.1 不同分組胎兒染色體核型及CMA檢出關(guān)系

    本研究異常染色體核型占8.53%(29/340),胎兒非整倍體占7.35%(25/340),其中胎兒非整倍體占異常核型的86.21%(25/29),胎兒染色體非整倍體中21 三體、45,X、47,XXY 檢出率位于前三,占比分別為5.279%、1.173%、0.587%。因此胎兒染色體非整倍體仍然是NT 異常的主要原因之一。而染色體非整倍體胎兒宮內(nèi)超聲不統(tǒng)一,有時僅表現(xiàn)為超聲軟指標異常,而不是明顯的結(jié)構(gòu)異常,因此不能僅依賴于超聲篩查。對NT 異常就診咨詢孕婦應(yīng)告知除常染色體以外性染色體異常的發(fā)生率及孕期篩查手段局限性,建議介入性產(chǎn)前診斷,盡可能避免缺陷兒出生。杜柳等[5]指出,對于高齡妊娠,將NT≥2.5 mm設(shè)為截斷值時,有助于提高妊娠早期胎兒染色體異常的檢出率。本文高齡在NT異常病例中占10.557%(36/341),其在胎兒非整倍體及染色體微缺失/微重復(fù)檢出率均高于單純NT異常組。兩組非整倍體檢出率比較差異有統(tǒng)計學意義(χ2=5.693,P<0.05),但兩組染色體微缺失/微重復(fù)檢出率比較差異無統(tǒng)計學意義(χ2=0.088,P>0.05)??紤]高齡是胎兒非整倍體發(fā)生的獨立危險因素,同時合并NT 異常,更容易導(dǎo)致胎兒染色體數(shù)目異常。但染色體微缺失/微重復(fù)不會因為高齡而導(dǎo)致其發(fā)生率升高,Rose等[6]研究也提示染色體微缺失/微重復(fù)與年齡相關(guān)性不明顯。本研究數(shù)據(jù)顯示,胎兒非整倍體(占42.857%)及染色體微缺失/微重復(fù)(占28.571%)在胎兒頸部水囊瘤組檢出最高,其次為NT異常合并除此之外的孕期超聲異常。NT 合并超聲異常胎兒染色體異常風險明顯增加,與薛淑雅、Tang等[7-8]結(jié)論相符。Oneda 等[9]建議,對產(chǎn)前實施CMA可以提高診斷率,特別是產(chǎn)前超聲異常的胎兒。孟雁欣等[10]指出胎兒染色體核型及CMA 技術(shù)在超聲結(jié)構(gòu)異常胎兒中的應(yīng)用顯著提高了致病原因的檢出率。因此對NT 異常就診咨詢的孕婦,應(yīng)告知介入性產(chǎn)前診斷及分辨率更高分子檢測手段的優(yōu)勢,加強孕期超聲評估,做好檢測前及檢測后咨詢,為我國降低出生缺陷作出貢獻。

    3.2 CMA檢測技術(shù)在NT異常胎兒中的應(yīng)用

    染色體核型分析技術(shù)在產(chǎn)前細胞遺傳學檢查中固然重要,但不能評估染色體亞顯微結(jié)構(gòu)的異常。本研究12例致病性CNV中,有8例胎兒染色體核型正常,因此CMA檢測技術(shù)的產(chǎn)生可有效彌補染色體核型分析技術(shù)的不足。黃曉莉等[11]指出CMA作為新型遺傳學檢測技術(shù),在產(chǎn)前診斷中,尤其是超聲檢查異常胎兒中已經(jīng)得到了廣泛的應(yīng)用。NT 異常除與胎兒染色體非整倍體相關(guān)外,與其他染色體微缺失/微重復(fù)也密切相關(guān)。本研究將NT≥2.5 mm 作為NT 異常截斷值,對單純NT 異常的胎兒染色體非整倍體的檢出率在1.887%,而CMA檢出率高達13.208%,同時311例正常核型中,CMA能多檢出15.434%拷貝數(shù)異常。在產(chǎn)前咨詢時,應(yīng)對咨詢者告知這種檢測手段,在面臨同樣的取樣風險后,孕婦決定檢測方法。Grande等[4]報道對于NT異常最常見的致病性CNV 是22q11.2 重復(fù)、10q26.12q26.3缺失及12q21q22缺失。本研究NT異常染色體微缺失/微重復(fù)48 例,其中可能致病及致病性拷貝數(shù)變異12 例,占25.0%(12/48),3 例22q11.21 片段重復(fù)綜合征最常見,占25.0%。單純NT 異常孕婦中,致病性拷貝數(shù)變異6 例,占2.8%(6/212),略低于Grande 等[4]報道孤立性NT 異常致病性變異檢出率3.1%~4.0%。CMA 檢測技術(shù)可有效提高染色體微小水平異常檢出率,但不能完全取代染色體核型分析,因此臨床工作中,特別是涉及胎兒去留時,應(yīng)采取至少兩種以上的遺傳學檢測技術(shù)證實,以及盡可能的影像學證據(jù)支持。本文對染色體微缺失/微重復(fù)溯源采用相同的檢測方法,這在一定程度上降低了家屬對溯源檢測的接受度,因此,實驗室采用價格相對低廉的遺傳學檢測技術(shù)對微缺失/微重復(fù)進行溯源,既能降低成本,擴增本地驗證數(shù)據(jù)庫,同時對咨詢也提供了幫助,有助于孕婦及其家庭對胎兒去留做出基于家庭認知的判斷。這對以后的隨訪工作也極其重要。

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