基于ERK/NF?κB 通路探討益腎散結(jié)化瘀復(fù)方對(duì)IgA 腎病大鼠腎內(nèi)小動(dòng)脈病變的防治作用

劉 璐，張曉東，田 耘

（1. 陜西中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，陜西咸陽(yáng) 712046；2. 寶雞市第三醫(yī)院腎內(nèi)科，陜西寶雞 721000；3. 陜西省中醫(yī)醫(yī)院腎病一科，陜西西安 710003）

IgA 腎病（IgAN）是以IgA 為主的循環(huán)免疫復(fù)合物在腎臟沉積的疾?。?］，是我國(guó)最常見(jiàn)的原發(fā)性腎臟病之一，約1/3 的患者于10～20 年發(fā)展為終末期腎臟病［2］，對(duì)我國(guó)人民身心健康造成極大負(fù)擔(dān)，因此積極防治IgA 腎病成為研究重點(diǎn)之一。目前，研究發(fā)現(xiàn)腎內(nèi)小動(dòng)脈病變與IgA 腎病預(yù)后密切相關(guān)，其中細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶/核轉(zhuǎn)錄因子-κB（ERK/NF-κB）信號(hào)通路可通過(guò)介導(dǎo)血小板源性生長(zhǎng)因子、胰島素樣生長(zhǎng)因子等細(xì)胞因子及白介素-6、腫瘤壞死因子-α 等炎癥因子的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，引起血管內(nèi)皮功能受損、內(nèi)皮細(xì)胞增殖及外基質(zhì)增加，導(dǎo)致血管壁增厚［3-7］。同時(shí)可調(diào)控轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1 對(duì)平滑肌的刺激，產(chǎn)生人基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）進(jìn)而引起腎間質(zhì)損傷［8］。因此阻斷ERK/NF-κB 信號(hào)通路可減輕IgA 腎病腎內(nèi)動(dòng)脈及腎組織的病變，進(jìn)而延緩IgAN 的進(jìn)展。

益腎散結(jié)化瘀復(fù)方（腎復(fù)康Ⅱ號(hào)膠囊）是我院自產(chǎn)藥劑［批準(zhǔn)文號(hào)：陜藥管字（2001）第1168 號(hào)，陜西省中醫(yī)醫(yī)院制劑中心提供］，主要由山萸肉、菟絲子、熟地黃、金櫻子、淫羊藿、丹參、赤芍、姜黃、黃芪、山藥、王不留行、鱉甲（醋）等組成，具有補(bǔ)腎散結(jié)，活血化瘀的功效，目前已廣泛應(yīng)用于慢性腎小球腎炎等疾病。既往的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明［9-11］其可介導(dǎo)白介素1（IL-1）、血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）及Ⅳ型膠原的表達(dá)，抑制系膜細(xì)胞的增殖，同時(shí)還能夠緩解免疫復(fù)合型腎炎大鼠的高凝狀態(tài)，減少TGF-β1 在腎組織的表達(dá)，抑制腎臟纖維化。故本研究以IgAN大鼠為模型，通過(guò)研究益腎散結(jié)化瘀復(fù)方干預(yù)ERK/NF-κB 信號(hào)通路，探討該方防治IgAN 腎內(nèi)小動(dòng)脈病變的機(jī)制，為進(jìn)一步治療IgAN 提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SD 健康清潔雄性大鼠55 只，6～8 周齡，體重180～200 g，購(gòu)買(mǎi)于西安交通大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。本研究所有方案和操作手段已獲得陜西省中醫(yī)醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物

腎復(fù)康Ⅱ號(hào)膠囊為陜西省中醫(yī)醫(yī)院院內(nèi)制劑[批準(zhǔn)文號(hào)：陜藥管字(2001)第1168 號(hào),陜西省中醫(yī)醫(yī)院制劑中心提供]；氯沙坦鉀,50 mg (批準(zhǔn)文號(hào)：H20000371，杭州默沙東制藥有限公司生產(chǎn))。

1.3 試劑

四氯化碳（CCl4，天津富宇精細(xì)化工有限公司）、10%鹽酸（國(guó)藥集團(tuán)）、蓖麻油（天津富宇精細(xì)化工有限公司）、脂多糖（LPS，北京索萊寶公司）、牛血清白蛋白（BSA，北京索萊寶公司）、10%水合氯醛溶液（上海山浦化工有限公司）、MMP-9 抗體（小鼠抗人）（英國(guó)Abcam）、ERK1/2 抗體（兔抗大鼠,武漢三鷹生物技術(shù)有限公司）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）抗體（兔抗人,Santa）、增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）抗體（兔抗人,博士德）、NF-κB 抗體（兔抗大鼠,武漢三鷹生物技術(shù)有限公司）、濃縮型正常山羊血清(封閉)（武漢博士德生物工程有限公司）、熒光（FITC）標(biāo)記羊抗小鼠IgG（武漢博士德生物工程有限公司）、抗熒光淬滅封片劑（southernbiotech）。

1.4 儀器

OlympusCX 41 熒光顯微鏡及光學(xué)顯微鏡（日本奧林巴斯公司）、HMIAS-2000 圖像采集分析系統(tǒng)（北京中科）、全自動(dòng)凝膠成像系統(tǒng)（美國(guó)伯樂(lè)公司）、酶標(biāo)儀（美國(guó)伯樂(lè)公司）YABO 石蠟自動(dòng)包埋機(jī)（江蘇常州）醫(yī)用離心機(jī)（江蘇康捷醫(yī)療器械有限公司）、RM2235 輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)（德國(guó)徠卡公司）醫(yī)用離心機(jī)（江蘇康捷醫(yī)療器械有限公司）恒溫水浴鍋（金壇市城東新瑞儀器廠(chǎng)）超低溫冰箱（日本三洋）。

1.5 實(shí)驗(yàn)方法

1.5.1 動(dòng)物模型的建立及分組 將55 只雄性SD 大鼠用苦味酸標(biāo)記，適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周，然后按照隨機(jī)數(shù)字表法分為4 組，即空白組、模型組、腎復(fù)康Ⅱ號(hào)膠囊組、氯沙坦鉀片組，其中空白組10 只大鼠，其余各組15 只大鼠。造模方法按照BSA+ CCl4+ LPS 聯(lián)合方案［12］并加以改進(jìn)，在實(shí)驗(yàn)第2 周除空白組其余各組大鼠予牛血清白蛋白鹽酸酸化水2 mL/只（約400 mg/kg）隔日灌胃，持續(xù)12 周；同時(shí)用CCl4皮下注射（劑量：0.5 mL 蓖麻油+0.1 mL CCl4/只），1 次/周，連續(xù)12 周；并聯(lián)合應(yīng)用LPS（分別在第6、8、10周，0.05 mg/只）尾靜脈注射，共3 次。以造模大鼠腎小球系膜區(qū)檢測(cè)出以IgA 為主的免疫熒光顆粒或團(tuán)塊狀為造模成功的標(biāo)準(zhǔn)。

1.5.2 給藥方案 將腎復(fù)康Ⅱ號(hào)膠囊及氯沙坦鉀片碾成粉末并分別溶解為1.12 g/kg 及25 mg/kg 的混懸液，于實(shí)驗(yàn)第3 周開(kāi)始進(jìn)行灌胃治療，治療共持續(xù)11 周。腎復(fù)康Ⅱ號(hào)膠囊組：造模成功后，腎復(fù)康Ⅱ號(hào)膠囊混懸液每天2 mL/只灌胃；氯沙坦鉀片組：造模成功后，氯沙坦鉀混懸液每天2 mL/只灌胃；空白組及模型組均以等量蒸餾水灌胃。

1.6 指標(biāo)檢測(cè)

1.6.1 24 h 尿蛋白檢測(cè) 分別于實(shí)驗(yàn)第4、8、12 周采集大鼠24 h 尿量，并進(jìn)行記錄，應(yīng)用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定24 h 尿蛋白水平。

1.6.2 血清生化指標(biāo)檢測(cè) 在12 周末用10%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，腹主動(dòng)脈取血5 mL 至促凝管中，4 ℃冰箱冷藏，3 000 r/min，離心10 min 后分離上清液，采用全自動(dòng)生化分析儀用酶法檢測(cè)血肌酐（SCr）及尿素氮（BUN），采用放射免疫分析法檢測(cè)醛固酮（ADS）、AngⅡ。

1.6.3 腎小球及腎小管病變程度觀察 12 周末將大鼠處死，迅速摘取大鼠腎皮質(zhì)與腎髓質(zhì)，然后切片放入3 個(gè)清潔的離心管中，分別為光鏡5 mL 清潔小管［裝有FFA 固定液（配方為10%甲醛10 mL+冰醋酸5 mL+90%乙醇溶液85 mL）］、熒光5 mL清潔小管（裝有5 mL 生理鹽水，并用無(wú)菌紗布進(jìn)行包裹），電鏡1 mL 清潔小管（裝有2%戊二醛液），其中光鏡小管和電鏡小管放在4 ℃水箱冷藏；熒光小管-70 ℃放在冰箱冷凍。然后取0.5 μm 腎組織切片進(jìn)行梯濃度酒精脫水、透明、浸蠟、包埋，做HE、Massion 及PASM 染色，放置在光鏡下觀察病變程度。

1.6.4 腎組織及小動(dòng)脈相關(guān)因子的表達(dá) 將石蠟切片依次放入二甲苯，無(wú)水乙醇，蒸餾水浸洗2 min進(jìn)行脫蠟；然后用微波進(jìn)行抗原修復(fù)，用磷酸鹽緩沖液（pH7.4）沖洗3 遍；在切片組織滴入過(guò)氧化氫進(jìn)行孵育，隨后用磷酸鹽緩沖液再次沖洗3 次，每次3 min，接著進(jìn)行血清封閉并加入一抗（VEGF 抗體1∶100、PCNA 抗體1∶100、MMP-9 抗體1∶50、ERK1/2 抗體1∶100、NF-κB 抗體1∶100）、二抗（過(guò)氧化物酶標(biāo)記羊抗小鼠IgG，原液不稀釋?zhuān)?、顯色劑，上述步驟完成后在進(jìn)行復(fù)染、脫水及封片，最后在多功能顯微鏡下進(jìn)行拍照，對(duì)腎組織及小動(dòng)脈區(qū)域VEGF、MMP-9、PCNA、ERK 1/2、NF-κB 的灰度值（以陽(yáng)性單位表示）進(jìn)行測(cè)量。

1.6.5 腎臟動(dòng)脈厚度的檢測(cè) 將Masson 染色的大鼠腎臟病理標(biāo)本放置在電子顯微鏡下，截取腎動(dòng)脈近正中矢狀位橫截面，使用醫(yī)學(xué)圖像分析管理系統(tǒng)依次檢測(cè)內(nèi)膜厚度/血管外徑、中膜厚度/血管外徑、管壁厚度/血管外徑，分別反映內(nèi)膜、中膜及管壁增厚程度。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

使用SPSS23.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。正態(tài)分布數(shù)據(jù)用（±s）表示，組間比較方差齊性時(shí)采用單因素分析(one-way ANOVA)，方差不齊時(shí)采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較，組間兩兩比較時(shí)采用LSD檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠24 h 尿蛋白定量

各組24 h 尿蛋白定量檢測(cè)結(jié)果顯示：與同時(shí)期空白組比較，模型組大鼠24 h 尿蛋白定量明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），在4、8、12 周時(shí)，腎復(fù)康Ⅱ號(hào)膠囊組與模型組相比，24 h 尿蛋水平明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；在4、8 周時(shí)，腎復(fù)康Ⅱ號(hào)膠囊組與氯沙坦鉀片組相比，差異明顯（P＜0.05）；但12 周時(shí)，腎復(fù)康Ⅱ號(hào)膠囊組與氯沙坦鉀片組相比，24 h 尿蛋白水平無(wú)明顯差異（P＞0.05），見(jiàn)表1。

表1 各組尿蛋白定量的比較（mg/24 h，±s）Tab1 Quantification of urine protein in each group（m g/2 4 h，±s）

表1 各組尿蛋白定量的比較（mg/24 h，±s）Tab1 Quantification of urine protein in each group（m g/2 4 h，±s）

注：與同時(shí)期空白組比較，*P＜0.05；與同時(shí)期模型組比較，#P＜0.01；與同時(shí)期氯沙坦鉀片組比較，△P＜0.05。

12 周6.84±2.54#11.65±3.13*8.24±1.77#9.20±2.20#*組別空白組模型組氯沙坦鉀片組腎復(fù)康Ⅱ號(hào)膠囊組n 10 15 15 15 4 周5.82±2.29#12.52±2.54*9.90±2.77#*7.20±2.72#△8 周6.90±1.94#11.27±2.28*9.82±2.26*6.88±1.80#△

2.2 各組大鼠ADS、AngⅡ、Cr、BUN

腎復(fù)康Ⅱ號(hào)膠囊組與氯沙坦鉀片組ADS 相比，無(wú)明顯差異（P＜0.05）；腎復(fù)康Ⅱ號(hào)膠囊組與氯沙坦鉀片組AngⅡ相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。BUN 方面，與模型組相比，腎復(fù)康Ⅱ號(hào)膠囊組和氯沙坦鉀片組兩組數(shù)值均明顯下降（P均＜0.05），Scr方面，腎復(fù)康Ⅱ號(hào)膠囊組與氯沙坦鉀片組相比，無(wú)明顯差異（P＞0.05），兩組與空白組相比無(wú)明顯差異（P＞0.05）。見(jiàn)表2。

表2 各組ADS、AngⅡ、BUN、Scr 比較（±s）Tab 2 Comparison of ADS，AngⅡ，BUN，Scr among rats in each group（±s）

表2 各組ADS、AngⅡ、BUN、Scr 比較（±s）Tab 2 Comparison of ADS，AngⅡ，BUN，Scr among rats in each group（±s）

注：與空白組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.01；與氯沙坦鉀片組比較，△P＜0.05。

Scr（μmol/L）33.56±10.13 53.10±9.59*37.55±6.47#39.55±9.00#組別空白組模型組氯沙坦鉀片組腎復(fù)康Ⅱ號(hào)膠囊組n 10 15 15 15 ADS（ng/L）172.37±20.05 203.12±18.82*179.53±15.35 178.53±18.97 AngⅡ（ng/L）227.88±25.46 269.46±15.73*230.15±25.57#255.33±24.92*△BUN（mmol/L）6.26±2.38 12.13±2.47*6.75±1.80#8.58±1.77#*

2.3 腎小球及腎小管病變程度評(píng)價(jià)

空白組大鼠腎小球形態(tài)基本正常，腎間質(zhì)未見(jiàn)增寬，系膜基質(zhì)基本正常，系膜細(xì)胞未見(jiàn)增殖；模型組大鼠腎小球系膜細(xì)胞彌漫性增生，基質(zhì)增多，部分腎小球皺縮。氯沙坦鉀片組大鼠可見(jiàn)中度系膜細(xì)胞增殖和基質(zhì)硬化，少數(shù)腎小球硬化，系膜細(xì)胞增殖，基質(zhì)增多，腎小球局灶節(jié)段性增生。腎復(fù)康Ⅱ號(hào)膠囊組大鼠多數(shù)腎小球基本正常，輕度系膜基質(zhì)增寬。各組腎臟病理學(xué)PAS、H & E 及Masson染色表現(xiàn)見(jiàn)圖1～3。

圖1 PAS 染色各組大鼠腎組織變化（×400）Fig 1 Changes of rat kidney tissues in each group by PAS staining（×400）

2.4 腎組織及小動(dòng)脈VEGF、MMP-9、PCNA、ERK1/2、NF-κB 的表達(dá)

與模型組比較，腎復(fù)康Ⅱ號(hào)膠囊組及氯沙坦鉀片組的VEGF、MMP-9、PCNA、ERK1/2、NF-κB 表達(dá)均有明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。但腎復(fù)康Ⅱ號(hào)膠囊組與氯沙坦鉀片組進(jìn)行組間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表3 及圖4～8。

表3 各組腎內(nèi)VEGF、MMP?9、PCNA、ERK1/2、NF?κB 表達(dá)（±s）Tab 3 Expression of VEGF，MMP?9，PCNA，ERK1/2，NF?κB in the kidney of each group of rats（±s）

表3 各組腎內(nèi)VEGF、MMP?9、PCNA、ERK1/2、NF?κB 表達(dá)（±s）Tab 3 Expression of VEGF，MMP?9，PCNA，ERK1/2，NF?κB in the kidney of each group of rats（±s）

注：與空白組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05。

組別空白組模型組氯沙坦鉀片組腎復(fù)康Ⅱ號(hào)膠囊組NF-κB 10.18±1.63 44.78±4.13*36.02±3.08*#37.96±2.51*#n 10 15 15 15 VEGF 3.50±1.99 16.17±2.53*11.34±1.70*#12.19±2.09*#MMP-9 10.55±3.50 22.47±2.95*16.22±3.09*16.80±3.40*#PCNA 11.15±3.41 46.63±8.08*27.19±8.11*#32.75±4.14*#ERK1/2 3.25±1.95 21.54±6.05*16.82±2.80*#15.34±2.35*#

圖4 各組VEGF 表達(dá)（免疫組化染色，×200）Fig 4 VEGF expression in each group（IHC，×200）

圖2 H & E 染色各組大鼠腎組織變化（×400）Fig 2 Changes of rat kidney tissues in each group by H &E staining（×400）

圖3 Masson 染色各組大鼠腎組織變化（×400）Fig 3 Changes of rat kidney tissues in each group by Masson staining（×400）

圖5 各組MMP-9 表達(dá)（免疫組化染色，×200）Fig 5 MMP?9 expression in each group（IHC，×200）

2.5 腎內(nèi)小動(dòng)脈的病變

與模型組相比，腎復(fù)康Ⅱ號(hào)膠囊組及氯沙坦鉀片組的內(nèi)膜/血管外徑、管壁/血管外徑有明顯差異（P＜0.05），而中膜/血管外徑與模型組相比較，兩組無(wú)明顯差異（P＞0.05），見(jiàn)表4。

表4 各組腎內(nèi)小血管厚度值（mm，±s）Tab 4 The thickness of small blood vessels in the kidney of each group（mm，±s）

表4 各組腎內(nèi)小血管厚度值（mm，±s）Tab 4 The thickness of small blood vessels in the kidney of each group（mm，±s）

注：與空白組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05。

n組別空白組模型組氯沙坦鉀片組腎復(fù)康Ⅱ號(hào)膠囊組管壁/血管外徑0.430±0.018#0.646±0.034*0.559±0.030*#0.563±0.038*#10 15 15 15內(nèi)膜/血管外徑0.095±0.021#0.171±0.034*0.126±0.028*#0.130±0.029#中膜/血管外徑0.435±0.031 0.426±0.030 0.433±0.033 0.446±0.022

圖6 各組PCNA 表達(dá)（免疫組化染色，×200）Fig 6 PCNA expression in each group（IHC，×200）

圖7 各組ERK1/2 表達(dá)（免疫組化染色，×200）Fig 7 ERK1/2 expression in each group（IHC，×200）

圖8 各組NF-κB 表達(dá)（免疫組化染色，×200）Fig 8 NF?κB expression in each group（IHC，×200）

3 討論

近年來(lái)，多個(gè)研究表明腎內(nèi)小動(dòng)脈的病變可能與IgA 腎病的進(jìn)展相關(guān)，吳杰等［13］對(duì)1 005 例IgA 腎病患者進(jìn)行回顧性分析發(fā)現(xiàn)，腎小球動(dòng)脈病變可占54.6%，而血管病變則與患者血壓、肌酐、尿蛋白水平密切相關(guān)。周素晗等［14］分析1 699 例IgA 腎病患者發(fā)現(xiàn)，血管病變的患者更容易發(fā)生腎臟終點(diǎn)事件?？总姷龋?5］對(duì)北京大學(xué)人民醫(yī)院就診的20 例IgA 腎病患者及10 例非IgA 腎病輕度系膜增生或局灶增生的腎小球腎炎患者比較研究發(fā)現(xiàn)，IgA 腎病組腎內(nèi)小動(dòng)脈的管壁厚度及內(nèi)膜厚度均高于非IgA腎病組，而且IgA 腎病組的腎內(nèi)小動(dòng)脈管壁的厚度與AngⅡ呈正相關(guān)。這提示了腎素-血管緊張素系統(tǒng)的過(guò)度激活可能在IgA 腎病發(fā)揮了一定的作用。蘭小梅［16］對(duì)100 例IgA 腎病患者進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，在大量蛋白尿的患者中，腎血管病變可占61.5%，在肌酐異常的36 例患者中，腎血管病變可占69.4%，這表明腎血管病變與大量蛋白尿及腎功能狀態(tài)密切相關(guān)，腎血管病變可加速腎臟進(jìn)展，并可作為反映IgA 腎病預(yù)后的一項(xiàng)重要指標(biāo)。

研究表明，細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（ERK）在調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、凋亡或各種基因的表達(dá)中起關(guān)鍵作用［3］，也在腎臟疾病發(fā)揮重要作用，激活ERK 通路可介導(dǎo)腎小球系膜細(xì)胞的增殖等，導(dǎo)致腎臟組織發(fā)生慢性病變［17］。同時(shí)在多種因素的介導(dǎo)下，ERK 磷酸化后被激活，導(dǎo)致細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)至核內(nèi)，促進(jìn)NF-κB 的磷酸化，介導(dǎo)了機(jī)體炎癥反應(yīng)的發(fā)生［18，19］。而NF-κB通路可調(diào)節(jié)各種粘附因子、細(xì)胞因子、趨化因子等參與血管損傷的過(guò)程［20］，同時(shí)也促進(jìn)炎癥因子如TNF-α、IL-1、IL-6 等的產(chǎn)生，TNF-α 可加重腎組織的損傷，IL-1 與IgA 腎病患者的預(yù)后密切相關(guān)［21］，而且這些炎癥因子又可上調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）的活性，進(jìn)一步加重血管內(nèi)膜的增生［22］。同時(shí)VEGF 可增加細(xì)胞內(nèi)皮的通透性，誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞的有絲分裂，李小莉［23］研究發(fā)現(xiàn)，IgAN 患者血清VEGF 水平相較于健康人群明顯增加，與腎小球?yàn)V過(guò)率呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)性。本研究中以氯沙坦鉀組為標(biāo)準(zhǔn)藥物對(duì)照組，腎復(fù)康Ⅱ號(hào)膠囊組為實(shí)驗(yàn)組，在給藥12 周處死大鼠后檢測(cè)兩組相關(guān)標(biāo)志物，兩組大鼠在Scr、ADS、BUN 與模型組相比，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但兩組之間比較差異并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在大鼠腎臟病理指標(biāo)檢測(cè)中，VEGF、MMP-9、PCNA、ERK1/2、NF-κB 等相關(guān)蛋白因子表達(dá)在腎組織中含量模型組顯著高于空白組，而腎復(fù)康Ⅱ號(hào)膠囊組及氯沙坦鉀片組較模型組均有下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。本實(shí)驗(yàn)在大鼠腎組織腎內(nèi)血管厚度值測(cè)量上，模型組大鼠內(nèi)膜、中膜、管壁厚度顯著高于空白組，而腎復(fù)康Ⅱ號(hào)膠囊組大鼠在內(nèi)膜及中膜厚度上明顯低于模型組，管壁厚度與模型組無(wú)明顯差異。

傳統(tǒng)中醫(yī)學(xué)雖然對(duì)腎內(nèi)小動(dòng)脈病變沒(méi)有具體的描述，但根據(jù)病理特征，可表現(xiàn)為血管壁增厚、玻璃樣病變等，同時(shí)具有固定不移、經(jīng)久不愈等特點(diǎn)，可以辯證為中醫(yī)學(xué)中“癥積”，而且IgA 腎病患者經(jīng)常出現(xiàn)乏力，腰痛等脾腎虧虛癥候，因此，我們將其病理的微觀辯證與整體辯證相結(jié)合，將其準(zhǔn)確辯證為“脾腎虧虛，痰瘀互結(jié)證”［24］，治療上采用益腎散結(jié)化瘀的治法。既往的研究證實(shí)［9-11］，益腎散結(jié)化瘀復(fù)方可延緩腎臟間質(zhì)纖維化，其機(jī)制可能是通過(guò)抑制炎癥反應(yīng)，下調(diào)TGF-β1 及纖溶酶原激活劑抑制劑-1（PAI-1）的表達(dá)，減少細(xì)胞外基質(zhì)的積聚等。本動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，益腎散結(jié)化瘀復(fù)方可能抑制了IgA 腎病大鼠ERK/NF-κB 信號(hào)通路，降低了相關(guān)因子在腎組織的表達(dá)，抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞及平滑肌細(xì)胞增殖，防止腎內(nèi)小血管的病變，同時(shí)還降低了大鼠的尿蛋白水平，減輕了腎組織損傷。