氣相色譜法測(cè)定大米中多種有機(jī)氯和擬除蟲菊酯殘留的方法優(yōu)化

孟慶順，孫 麗，卜媛媛

(淮安市食品藥品檢驗(yàn)所，江蘇 淮安 223300)

隨著人們生活水平的提高，對(duì)食品中的有毒有害成分尤其是農(nóng)藥殘留也提出了更高的要求。百菌清，是廣泛使用的殺菌劑，丙溴磷、狄氏劑、甲氰菊酯、氯氟氰菊酯、氯菊酯、氟氰戊菊酯、氟胺氰菊酯、溴氰菊酯農(nóng)藥是一類高效廣譜的殺蟲劑，主要用于防治植物病和蟲害的發(fā)生，我們主要對(duì)大米中上述9種農(nóng)殘檢測(cè)方法進(jìn)行研究探討。根據(jù)GB 2763—2019《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量》標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，百菌清、丙溴磷、狄氏劑、甲氰菊酯、氯氟氰菊酯、氯菊酯、氟氰戊菊酯、氟胺氰菊酯、溴氰菊酯9種農(nóng)藥殘留量涉及到約10個(gè)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，主要是氣相法和氣質(zhì)法如SN/T 2234—2008《進(jìn)出口食品中丙溴磷殘留量檢測(cè)方法 氣相色譜法和氣相色譜-質(zhì)譜法》、GB 23200.113—2018《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 植物源性食品中208種農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測(cè)定 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法》、GB/T 5009.146—2008《植物性食品中有機(jī)氯和擬除蟲菊酯殘留類農(nóng)藥多種殘留量的測(cè)定》等標(biāo)準(zhǔn)，而氟胺氰菊酯在大米中沒有相應(yīng)的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。在實(shí)驗(yàn)中利用氣相色譜儀(ECD)檢測(cè)9種農(nóng)藥殘留，檢測(cè)結(jié)果重現(xiàn)性好，樣品前期處理簡(jiǎn)單，樣品用有機(jī)試劑提取，凈化(SPE氟羅里硅土固相萃取柱)，氮吹濃縮，用正己烷定容，最后用氣相專用小柱凈化，干擾物質(zhì)少，適合實(shí)驗(yàn)室定量檢測(cè)大米中9種有機(jī)氯和擬除蟲菊酯殘留量。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

7890B氣相色譜儀(配有ECD檢測(cè)器,7693液體自動(dòng)進(jìn)樣器和150位進(jìn)樣盤)，安捷倫科技有限公司；XW-80A旋渦混合器，上海弛唐電子有限公司；XIR高速低溫離心機(jī)，賽默飛世爾科技有限公司；ME204T/02分析天平，梅特勒儀器有限公司。

丙酮、正己烷，色譜純；氯化鈉，分析純；9種農(nóng)藥(標(biāo)樣均為100 μg/ml)，北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司；有機(jī)相相針式濾器(尼龍)，100只/罐，13 mm，0.22 μm；固相萃取柱SPE弗羅里硅柱，1 g/6 ml，30只/盒，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技有限公司。

1.2 色譜條件

色譜柱：HP-5毛細(xì)管柱(30 m×0.32 mm×0.25 μm)；ECD檢測(cè)器：300℃，進(jìn)樣口：270℃，柱溫箱：70℃保持1 min，以15℃/min升溫至270℃，以1℃/min升溫至285℃，柱溫箱在300℃時(shí)對(duì)毛細(xì)管柱進(jìn)行吹掃，避免影響下一針進(jìn)樣；載氣：高純氮；柱流速：1.0 ml/min。進(jìn)樣模式：分流比20∶1，進(jìn)樣量：1 μl。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線

準(zhǔn)確吸取0.01、 0.02、 0.04、0.08、0.10 ml的百菌清、丙溴磷、狄氏劑、甲氰菊酯、氯氟氰菊酯、氯菊酯、氟氰戊菊酯、溴氰菊酯，0.01、 0.02、 0.03、0.04、0.05 ml的氟胺氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液于10 ml的容量瓶中，以正己烷稀釋定容，配成質(zhì)量濃度為0.1、0.2、0.4、0.8、1.0 μg/ml的百菌清、丙溴磷、狄氏劑、甲氰菊酯、氯氟氰菊酯、氯菊酯、氟氰戊菊酯、溴氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液和質(zhì)量濃度為0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 μg/ml的氟胺氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液混標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制線性回歸標(biāo)準(zhǔn)曲線，由于標(biāo)準(zhǔn)曲線過多，以百菌清和溴氰菊酯為代表，見圖1。

1.4 試樣制備及測(cè)定

準(zhǔn)確稱取混合均勻大米樣品5.0 g(精確至0.001 g)于50 ml離心管中，加入5 ml氯化鈉和20 ml一級(jí)水，浸泡30 min，10 000 r/min離心5 min，再加入20 ml丙酮+正己烷(1∶1)混合溶劑，渦旋混勻2 min，10 000 r/min離心3 min，將上層有機(jī)相轉(zhuǎn)入蒸發(fā)皿中，殘?jiān)性偌尤?0 ml丙酮+正己烷(1∶1)混合溶劑，重復(fù)提取一次，合并上層有機(jī)相，在50℃水浴鍋上濃縮近干，用正己烷定容至5.0 ml，待凈化。將弗羅里硅土固相萃取小柱依次用5.0 ml丙酮+正己烷(10∶90)、5.0 ml正己烷預(yù)淋洗，保持柱體濕潤(rùn)，當(dāng)溶劑表面到達(dá)柱吸附層表面時(shí)，將提取液以1滴/s速度過弗羅里硅土固相萃取小柱，用離心管接收洗脫液，再用5.0 ml丙酮+正己烷(10∶90)沖洗蒸發(fā)皿后過洗弗羅里硅柱，并重復(fù)一次，將離心管氮吹至近干，用正己烷定容至1.0 ml，最后用0.22 μm氣相濾頭過濾于進(jìn)樣瓶中，待測(cè)。同時(shí)做空白試驗(yàn)，樣品的提取需在通風(fēng)櫥中進(jìn)行，操作時(shí)注意：上樣和洗脫流速不大于5 ml/min(1滴/s)以及水浴時(shí)的溫度。在試驗(yàn)條件下，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品色譜圖見圖2、圖3。

圖2 標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

圖3 實(shí)際樣品的色譜圖

2 結(jié)果與分析

2.1 實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化

氣相色譜條件的選擇和優(yōu)化主要涉及到儀器的檢測(cè)器、進(jìn)樣口和毛細(xì)管柱及其升溫程序、柱流速，目前實(shí)驗(yàn)室常用的氣相檢測(cè)器有4種，分別是FPD、NPD、ECD、FID，經(jīng)過試驗(yàn)和查找相關(guān)資料，F(xiàn)ID、FPD、NPD檢測(cè)器對(duì)其響應(yīng)值很低，而ECD檢測(cè)器對(duì)9種標(biāo)樣響應(yīng)值很高。

考察了DB-FAAP(50 m×0.32 mm×0.50 μm)、HP-5(30 m×0.32 mm×0.25 μm)、HP-5(30 m×0.32 mm×1.00 μm)、HP-5(30 m×0.25 mm×0.25 μm)、HP-5(30 m×0.32 mm×0.50 μm)、DB-1701(30 m×0.32 mm×0.25 μm等毛細(xì)管柱的分離效果，結(jié)果表明選擇極性柱和中極柱時(shí)，9種組分基本不出峰或峰形很差，HP-5(30 m×0.32 mm×0.25 μm)毛細(xì)管柱峰形更尖銳，分離效果更好。樣品中檢測(cè)出農(nóng)藥殘留，還需用DB-17毛細(xì)管柱(30 m×0.32 mm×0.25 μm)進(jìn)行確認(rèn)。

利用正交試驗(yàn)法對(duì)色譜柱、進(jìn)樣口、檢測(cè)器溫度進(jìn)行優(yōu)化設(shè)計(jì)，找出最佳溫度和程序升溫。選擇檢測(cè)器溫度260、300、330℃和進(jìn)樣口溫度220、270、290℃進(jìn)行多次試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)檢測(cè)器溫度300℃和進(jìn)樣口溫度270℃時(shí)9種物質(zhì)峰形最佳且分離效果最好。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線、相關(guān)性及檢出限、定量限

9種農(nóng)藥混標(biāo)百菌清、丙溴磷、狄氏劑、甲氰菊酯、氯氟氰菊酯、氯菊酯、氟氰戊菊酯、氟胺氰菊酯、溴氰菊酯的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)及方法檢測(cè)限和定量限，見表1。

表1 線性測(cè)定結(jié)果

由表1中可見，該方法靈敏度高，線性良好，完全滿足標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的要求。

2.3 方法的回收率和精密度試驗(yàn)

準(zhǔn)確稱取大米(已測(cè)得此大米中含有丙溴磷，其余本底值為空白)5 g共5份于50 ml離心管中，迅速加入0.1、0.2、0.5 ml混合標(biāo)樣(氟胺氰菊酯濃度為0.5 μg/ml,其它為1.0 μg/ml)。按1.4試驗(yàn)方法進(jìn)行分析，平行測(cè)定5次，被測(cè)樣品加標(biāo)回收率和精密度見表2。

表2 回收率測(cè)定結(jié)果(n=5)

在做回收率試驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn)，若將溶劑濃縮至干后再定容或水浴鍋溫度過高(高于60℃)，固相萃取小柱上樣和洗脫流速過大，都可能導(dǎo)致結(jié)果有偏差、回收率偏低，所以操作時(shí)要注意。對(duì)于同一陽性樣品，按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)SN/T 2234—2008《進(jìn)出口食品中丙溴磷殘留量檢測(cè)方法 氣相色譜法和氣相色譜-質(zhì)譜法》檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果在0.021 4～0.022 3 mg/kg,平均0.021 8 mg/kg,氣相法檢測(cè)結(jié)果在0.022 8～0.023 6 mg/kg，平均值0.023 2 mg/kg,2種方法測(cè)定結(jié)果相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差約為6%，未超過10%。

3 結(jié)論

采用該方法對(duì)大米中9種農(nóng)藥殘留量進(jìn)行測(cè)定，30 min內(nèi)可以完成一次進(jìn)樣分析，方法檢出限為0.6～4.0 μg/kg，滿足GB 2763—2019《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的要求。