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    不同粘土礦物對霉菌毒素和營養(yǎng)物質(zhì)的吸附和解吸效果研究

    2022-01-05 01:11:44王改琴劉春雪耿文靜
    糧食與飼料工業(yè) 2021年6期
    關(guān)鍵詞:凹凸棒赤霉烯酮

    徐 瑞,王改琴,劉春雪,耿文靜,沈 波

    (安佑生物科技集團(tuán)股份有限公司,江蘇 蘇州 215437)

    粘土類礦物質(zhì)主要由水合硅鋁酸鹽組成,顆粒較小,因其獨(dú)特的多面體結(jié)構(gòu)而具有較大的比表面積,表現(xiàn)出較強(qiáng)的吸附能力和陽離子交換能力,同時(shí)還具有良好的物化性能,如良好的流散性、粘結(jié)性等,所以可作為霉菌毒素吸附劑、預(yù)混料載體、顆粒飼料粘合劑等添加使用[1-2]。粘土中可用作霉菌毒素吸附劑的類型主要有蒙脫石、凹凸棒土、高嶺土、沸石粉、云母、海泡石等[3-4],其中蒙脫石、凹凸棒土的應(yīng)用較多,尤其是蒙脫石除具有較強(qiáng)的吸附能力外,還有一定的抗腹瀉能力,被廣泛用作毒素吸附劑外,目前還被開發(fā)為成人用藥。市面上粘土礦物產(chǎn)品的種類較多,結(jié)構(gòu)與成分比例差異較大,對飼料中常見毒素的吸附不一致,對營養(yǎng)物質(zhì)的吸附檢測指標(biāo)不統(tǒng)一,且各種文獻(xiàn)報(bào)道的檢測結(jié)果差異較大,國家和行業(yè)對此類產(chǎn)品的評估目前還沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。我們選擇普通的凹凸棒土、蒙脫石及其他3種以蒙脫石為主要成分的功能性粘土產(chǎn)品進(jìn)行試驗(yàn),首先測定這5種粘土產(chǎn)品對黃曲霉毒素,玉米赤霉烯酮及嘔吐毒素的吸附率,再以飼料中比較常見的營養(yǎng)物質(zhì)如VB1、VB2及賴氨酸的添加為例(以飼料中常見的VB1、VB2及賴氨酸含量:10、20 mg/kg及1.35%為基礎(chǔ)來進(jìn)行試驗(yàn)),進(jìn)行營養(yǎng)物質(zhì)的吸附與解吸的評估,為此類產(chǎn)品的檢測與評估提供參考數(shù)據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    從國內(nèi)市場購買的普通凹凸棒土、蒙脫石及其他3種以蒙脫石為主要成分的功能性粘土:吸附型粘土(坡蒙石)、粘結(jié)型粘土、止瀉型粘土,分別記為樣品1、2、3、4、5。

    1.2 主要試劑

    黃曲霉毒素(AFB1)、玉米赤霉烯酮(ZEN)、嘔吐毒素(DON)標(biāo)準(zhǔn)品購自北京華安麥科生物科技有限公司,色譜級甲醇,色譜級乙腈等,所用化學(xué)試劑均為色譜純,水為去離子水。

    1.3 主要儀器

    精確至0.000 00的分析天平、離心機(jī)、恒溫水浴振蕩器、高效液相色譜分析儀(安捷倫)、移液器等。

    1.4 方法

    1.4.1主要溶液的配制

    (1)配制10 mg/kg AFB1的標(biāo)準(zhǔn)溶液:取黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)品1 mg溶于100 ml甲醇溶液中。

    (2)配制100 mg/kg ZEN的標(biāo)準(zhǔn)溶液:取玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)品1 mg溶于10 ml乙腈溶液中。

    (3)配制100 mg/kg DON的標(biāo)準(zhǔn)溶液:取嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)品1 mg溶于10 ml甲醇溶液中。

    (4)配制260 mg/kg VB1的標(biāo)準(zhǔn)溶液:0.026 g VB1溶于100 ml的0.01 mol/L鹽酸溶液中。

    (5)配制60 mg/kg VB2標(biāo)準(zhǔn)溶液:0.006 07 g VB2溶于100 ml的0.01 mol/L鹽酸溶液中。

    (5)配制人工胃液:取濃鹽酸3.84 ml,加水1 000 ml。

    (6)配制人工小腸液(pH6.8):取磷酸二氫鉀6.8 g,加水500 ml溶解,用0.1 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.8。所有試劑不用時(shí)4℃低溫儲(chǔ)藏。

    1.4.2霉菌毒素吸附率的測定

    稱取待評估的粘土樣品0.02 g于離心管中,加入9.9 ml水,按表1所示添加量依次向離心管內(nèi)先加入一級水,再分別加入相應(yīng)的已配置好的毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液。37℃ 120 r/min孵育1 h后,5 000 r/min離心15 min。轉(zhuǎn)移清液,過0.22 μm膜后HPLC分析毒素含量。

    表1 毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液、一級水的添加量

    1.4.3對營養(yǎng)物質(zhì)VB1、VB2、賴氨酸的吸附率及解吸附率測定

    稱取待評估的粘土樣品0.02 g,按表2所示添加量依次向裝有樣品的離心管,先加入人工胃液,再分別加入相應(yīng)的VB1、VB2溶液及賴氨酸。分別于37℃ 120 r/min孵育1 h后,5 000 r/min離心10 min。取清液過0.22 μm后進(jìn)行HPLC分析。

    表2 樣品、VB1、VB2、氨基酸、人工胃液的添加量

    向離心后的沉淀中加入10 ml人工腸液,充分搖晃分散后,于超聲波水浴中15 min,離心(5 000 r/min,10 min),取清液過0.22 μm后進(jìn)行HPLC分析測定VB1、VB2、賴氨酸的含量,最后計(jì)算解吸的量。

    維生素及賴氨酸的測定方法參考GB/T 14700—2018飼料中維生素B1的測定;GB/T 14701—2019飼料中維生素B2的測定;GB/T 18246—2000飼料中氨基酸的測定。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同樣品對黃曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和嘔吐毒素的吸附率

    不同樣品對黃曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和嘔吐毒素的吸附率見表3。

    表3 不同樣品對黃曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和嘔吐毒素的吸附率

    由表3可看出,與普通的蒙脫石1、凹凸棒土2相比,其他3種以蒙脫石為主要成分的功能性粘土對黃曲霉毒素的吸附率較高。其他的功能性粘土產(chǎn)品之間相比,吸附型粘土3、止瀉型粘土4對黃曲霉毒素吸附率較高;吸附型粘土3對玉米赤霉烯酮和嘔吐毒素的吸附率較高,止瀉型粘土4、粘結(jié)型粘土5對玉米赤霉烯酮及嘔吐毒素的吸附率均較低。

    2.2 不同樣品對營養(yǎng)物質(zhì)B1、B2、賴氨酸的吸附及解吸率

    不同樣品對營養(yǎng)物質(zhì)B1、B2、賴氨酸的吸附及解吸率見表4。

    表4 不同樣品對營養(yǎng)物質(zhì)VB1、VB2、賴氨酸的吸附及解吸率

    由表4可以看出,蒙脫石1對VB1的吸附率高于凹凸棒土2,解吸附率低于凹凸棒土2;對VB2的吸附率凹凸棒土2略高于蒙脫石1,解吸附率數(shù)據(jù)相近。二者相比,蒙脫石對VB1的吸附較多,且不易解吸出來;凹凸棒土對維生素B2的吸附較多。其他粘土產(chǎn)品對VB1、VB2的吸附率從高到低排序均為:吸附型粘土3>止瀉型粘土4>粘結(jié)型粘土5。試驗(yàn)結(jié)果顯示,吸附型粘土3對VB1、VB2的吸附率最高,粘結(jié)型產(chǎn)品5對VB1的吸附率較低(略大于凹凸棒土),吸附型粘土3、止瀉型粘土4對VB1的吸附率均高于蒙脫石;吸附型粘土3、止瀉型粘土4、粘結(jié)型粘土5對VB2的吸附率均高于普通蒙脫石。

    普通蒙脫石和凹凸棒土對賴氨酸的吸附率較低,其他粘土產(chǎn)品對賴氨酸吸附率高于普通蒙脫石和凹凸棒土,但數(shù)值均在10%以下。

    3 討論

    吸附型產(chǎn)品3對三種毒素黃曲霉毒素、玉米赤霉烯酮及嘔吐毒素均有較好的吸附效果,這可能是廠家添加了黑色煤系高嶺土(分散劑)的原因;吸附型粘土3、止瀉型4、粘結(jié)劑型5的黃曲霉毒素吸附率較高,玉米赤霉烯酮和嘔吐毒素吸附率較低。綜上,4、5分別單獨(dú)作為止瀉劑、粘結(jié)劑使用時(shí),同時(shí)對黃曲霉毒素具有一定的吸附作用。

    蒙脫石和凹凸棒土因其特殊的片狀和針狀物理結(jié)構(gòu)對飼料中霉菌毒素有一定的吸附能力,但同時(shí)也會(huì)吸附飼料中的營養(yǎng)物質(zhì)VB1、VB2和賴氨酸。研究結(jié)果表明,不同文獻(xiàn)中蒙脫石或者以蒙脫石為主要成分的粘土對毒素吸附率的差異較大(本試驗(yàn)室測定黃曲霉毒素的吸附率為(70%~94%),營養(yǎng)物質(zhì)吸附的評價(jià)體系相差也較大,這可能是因?yàn)椴煌N類的產(chǎn)品其結(jié)構(gòu)和成分比例差異較大,對霉菌毒素及VB1、VB2的吸附結(jié)果不一致。不同的粘土添加量和維生素底物濃度條件下,吸附和解吸結(jié)果相差較大,如:何萬領(lǐng)等[5]實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)在蒙脫石添加量為0.2%、VB2為6~30 mg/kg的條件下,隨著VB2添加量的增加(6~30 mg/kg),吸附率逐漸增加(0~75%),這種吸附符合Nerset方程[6]。常威等[7]在實(shí)驗(yàn)室條件下模擬胃液(蒙脫石添加量1.5%,VB1含量250 mg/kg,VB2含量100 mg/kg)測定蒙脫石散對VB1的吸附率為97.7%,VB2的吸附率為97%。王虎[8]實(shí)驗(yàn)室檢測不同的霉菌毒素吸附劑(蒙脫石、硅鋁酸鹽型及蒙脫石類,添加量為0.1%)對VB2的吸附率為0.01%~5.65%(0.1%添加量情況下,毒素吸附率也較低)。齊德生等[2]在pH 1~10、維生素含量0~20 mg/kg條件下,測定蒙脫石對對VB2的吸附率為5.0%~18.8%。肖長峰等[9]測定改性硅鋁酸鹽霉菌毒素吸附劑(添加量為0.1%)對仔雞日糧中VB1的吸附率為14.8%~25.14%,VB2的吸附率為9%~13%。本試驗(yàn)中礦土產(chǎn)品的模擬添加量為0.2%,VB1和VB2的終濃度為10、20 mg/kg,止瀉型粘土4對VB2的吸附率與何萬領(lǐng)的研究結(jié)果近似,為67.92%[5]??紤]到止瀉型粘土4對VB1和VB2的解吸附,飼料中添加使用該產(chǎn)品時(shí),可把VB1添加量增加至原來的1.3倍左右,VB2可增加至原來的1.5倍左右。粘結(jié)型粘土5對VB2的吸附率較低,且在胃腸中有一定的解吸附,做飼料粘結(jié)劑使用時(shí),VB1、VB2可直接按原劑量添加,也可略微提高添加量。

    粘土類產(chǎn)品對營養(yǎng)物質(zhì)賴氨酸的吸附與VB1、VB2結(jié)果類似,不同產(chǎn)品和實(shí)驗(yàn)室條件測定結(jié)果相差較大,在不同pH(1~10)和添加量的條件下,吸附率為10%~70%[2,5,10]。本試驗(yàn)與齊德生等的[2]試驗(yàn)條件與結(jié)果相近,對賴氨酸的吸附率較低,這可能是因?yàn)橘嚢彼釋儆趬A性氨基酸,pH 9.9,在大部分溶液中賴氨酸比較容易離解,并大多以正離子的形式存在[11],胃液環(huán)境為酸性,所以對賴氨酸的吸附率不高。飼料中添加使用止瀉型粘土4及粘結(jié)型粘土5時(shí),賴氨酸可直接按原劑量添加,也可略微提高添加量。

    吸附型粘土3對VB1和VB2的吸附率較高,且解吸附較低,這可能是廠家添加了黑色煤系高嶺土(分散劑)的原因。煤系高嶺土是一種煤礦開采時(shí)伴生的一種礦物原料,由高嶺石、蒙脫石、方解石、勃母石、伊利石等多種礦物組分組成一種非金屬礦物,還含有微少的有機(jī)質(zhì),其基本結(jié)構(gòu)單元是由硅氧四面體層和鋁氧八面體層組成的1∶1的層狀結(jié)構(gòu),兩者之間通過共同的O原子相互連接而成[12-15]。煤系高嶺土由于利用率較低,且自燃后產(chǎn)生酸性有害氣體,是工業(yè)固體廢棄物的一種,改性后的煤系高嶺土具備高比表面積和離子交換能力,因此具有較好的反應(yīng)活性及吸附性能,可作為吸附材料使用[14]。但目前還沒有對煤高嶺土解吸附能力的報(bào)道,由本試驗(yàn)的結(jié)果推測,煤系高嶺土與活性炭可能較類似,吸附能力較強(qiáng),且對吸進(jìn)去的物質(zhì)難以脫附,添加到飼料中使用時(shí),在動(dòng)物消化道內(nèi)比較容易吸附營養(yǎng)物質(zhì)且不易解吸,所以不建議長期添加使用。同時(shí),吸附型粘土3的主要成分為坡蒙石[1],能查到的此類產(chǎn)品的相關(guān)文獻(xiàn)較少[16],文獻(xiàn)描述坡蒙石是指凹凸棒土(坡縷石)-蒙脫石的天然混合礦物,主要分布于我國中東部地區(qū)的關(guān)山、盱眙,產(chǎn)量較少,結(jié)構(gòu)為針棒狀體與似鱗片狀體共存,可以達(dá)到吸附霉菌毒素的同時(shí)不吸附營養(yǎng)物質(zhì),但本試驗(yàn)測定該類型產(chǎn)品對黃曲霉毒素、VB1和VB2的吸附率均較高,與文獻(xiàn)的研究結(jié)果不一致。陳天虎等[17]實(shí)驗(yàn)室研究把凹凸棒土與蒙脫石進(jìn)行分散、濕法懸浮后進(jìn)行X射線和電鏡分析,發(fā)現(xiàn)結(jié)合后影響X射線粉末衍射結(jié)果,控制懸浮條件,或許可能形成理想的凹凸棒土-蒙脫石結(jié)構(gòu)體系,根據(jù)該文獻(xiàn)的結(jié)果推測非天然改性坡蒙石的加工或許基于此原理。

    4 結(jié)論

    (1)對毒素和營養(yǎng)物質(zhì)吸附均較多的產(chǎn)品如吸附型粘土3,不建議在飼料中長期添加使用。

    (2)止瀉型粘土4、粘結(jié)型粘土5對黃曲霉毒素的吸附率較高,做止瀉劑、粘結(jié)劑使用時(shí),可同時(shí)考慮其黃曲霉毒素吸附劑的附加價(jià)值。

    (3)幾種粘土產(chǎn)品對營養(yǎng)物質(zhì)VB1、VB2和賴氨酸均有一定的吸附,結(jié)合試驗(yàn)數(shù)據(jù),飼料中添加使用止瀉型粘土產(chǎn)品4時(shí),可根據(jù)該類型產(chǎn)品的吸附率與解吸附率相應(yīng)增加營養(yǎng)物質(zhì)的添加量。粘結(jié)型粘土5對VB1、VB2、賴氨酸的吸附率較低,且有一定的解吸附,使用該類產(chǎn)品時(shí),VB1、VB2、賴氨酸可直接按原劑量或略微提高進(jìn)行添加。

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