軟棗獼猴桃組培快繁技術(shù)研究進展

郭慧慧 林叢發(fā) 蔣元斌

（寧德市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所 福建福安355017）

軟棗獼猴桃（Actinidia argutaPlaneh.）為獼猴桃科（Actinidiaceae）、獼猴桃屬（Actinidia）多年生落葉藤本植物，俗稱軟棗子、藤瓜、猴梨、藤梨，是我國珍貴的抗寒果樹資源。其果實可食用，維生素C 含量很高，可制成糖果、果醬、果脯、罐頭等多種食品[1]。其根的提取物具有很高的藥用價值，具有抗氧化活性，對胃癌、宮頸癌、肺癌等有一定的治療和抑制作用[2-5]。其花可以提取香料，是豐富的蜜源植物[6]。因而其是獼猴桃品種改良的重要種質(zhì)資源。我國已選育出紅寶石星、魁綠、綠王、龍成2 號、恒優(yōu)1 號、天源紅等多個軟棗獼猴桃品種。傳統(tǒng)的無性繁殖方式增殖系數(shù)低、速度慢，故組培快繁技術(shù)對軟棗獼猴桃種質(zhì)資源的保存及開發(fā)利用具有重要意義。目前未見軟棗獼猴桃組織培養(yǎng)方面的研究進展，筆者將對軟棗獼猴桃組織培養(yǎng)技術(shù)進行總結(jié)，以期為該領(lǐng)域今后的研究提供參考。

1 外植體

我國軟棗獼猴桃組織培養(yǎng)技術(shù)研究始于1991 年，張喜春等以軟棗獼猴桃葉片為試材，成功誘導(dǎo)出適合于建立懸浮細(xì)胞系的愈傷組織[7]。目前，軟棗獼猴桃組織培養(yǎng)主要是器官培養(yǎng)和原生質(zhì)體培養(yǎng)。適宜的外植體有莖段、葉片、葉柄、莖尖、花藥、胚等，但以莖段為主。胡桂珍等用軟棗獼猴桃的胚獲得再生植株[8]。王廣富用軟棗獼猴桃的花藥獲得配子體，發(fā)育單倍體植株[9]。林苗苗等的研究表明，構(gòu)建‘天源紅’軟棗獼猴桃無菌系時，帶芽莖段直接出苗的方法可以較快獲得無菌苗，葉柄愈傷誘導(dǎo)率和出芽率都較高，葉片的相對較低，愈傷獲得苗的方法不如腋芽快捷[10]。張遠記的研究表明，軟棗獼猴桃莖段外植體容易愈傷化，但難以分化；葉片外質(zhì)體不易愈傷化，但容易分化[11]。朱道圩等以軟棗獼猴桃葉片及其愈傷組織為材料，成功分離出原生質(zhì)體，并將GUS基因?qū)朐|(zhì)體，且獲得瞬間表達[12]。采用20%PEG 加熱處理，既能保持較高的基因轉(zhuǎn)化率，又能保持原生質(zhì)體較好的狀態(tài)[13]。在原生質(zhì)體分離上成齡葉片優(yōu)于幼齡葉片[14]。

2 培養(yǎng)條件

2.1 基本培養(yǎng)基

軟棗獼猴桃組織培養(yǎng)常用的基本培養(yǎng)基為MS。鄭小華的研究表明，MS 培養(yǎng)基愈傷組織的發(fā)生率達到89.12%，隨后依次為White、N6、Nitsch；且MS 培養(yǎng)基上愈傷組織出現(xiàn)時間早，長勢旺盛、顏色亮綠、表面疏松；MS 是軟棗獼猴桃莖段愈傷組織誘導(dǎo)的最佳基本培養(yǎng)基[15]。王廣富的研究表明，軟棗獼猴桃（綠王）花藥在MS 培養(yǎng)基上的愈傷誘導(dǎo)率最高，且愈傷組織狀態(tài)較好，質(zhì)地松脆，顏色米白；其次是WPM 培養(yǎng)基，B5 培養(yǎng)基上誘導(dǎo)率最低[9]。朱道圩等的研究表明，改良MS 液體培養(yǎng)基比KM8p 培養(yǎng)基更適合于培養(yǎng)軟棗獼猴桃原生質(zhì)體[14]。

2.2 激素

牛曉林的研究表明，6-BA 對腋芽萌發(fā)的影響最大，其次是NAA；IAA 對莖段誘導(dǎo)愈傷的影響最大，其次是6-BA，2,4-D 丁酯的影響最小[16]。林苗苗等的研究表明，6-BA 0.5 mg/L+IBA 1.0 mg/L 處理腋芽的萌芽率可達到100%[10]。鄭小華的研究表明，6-BA 對愈傷組織的誘導(dǎo)效果最好，ZIP 其次，KT 最差； 生長素中IAA 誘導(dǎo)效果最好，2,4-D 其次，IBA 第三，NAA最差[15]。2,4-D+6-BA 組合的培養(yǎng)基花藥愈傷組織誘導(dǎo)率高于2,4-D+KT 組合[9]。鄭小華等的研究表明，細(xì)胞分裂素與生長素比例高于4:1 時，玻璃化苗的產(chǎn)生率明顯上升[15]。張遠記等的研究表明，玉米素對軟棗獼猴桃愈傷組織的芽分化效果最好，芽分化隨玉米素濃度增加而增加，最佳濃度為2.0 mg/L[11]。郭志欣等的研究表明，軟棗獼猴桃試管苗的生根對植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)具有選擇性，生根所需的植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)主要為6-BA[18]。

2.3 其他

張喜春等的研究表明，適當(dāng)增加肌醇濃度可明顯提高軟棗獼猴桃懸浮細(xì)胞系中圓形細(xì)胞頻率，適當(dāng)提高蔗糖含量可減少細(xì)胞懸浮液褐化率[7]。鄭小華的研究表明，軟棗獼猴桃試管苗玻璃化產(chǎn)生率隨培養(yǎng)基中瓊脂濃度的降低而升高，隨光照強度的增加而減少[17]。賈景明等的研究表明，水解乳蛋白500 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L+6-BA 1.5 mg/L+抗氧化劑能在一定程度上控制軟棗獼猴桃愈傷組織褐化的現(xiàn)象，褐化較輕的細(xì)胞能逐漸恢復(fù)生長活力[19]。劉延吉等的研究表明, 在培養(yǎng)基中加入PVP 能有效的防止軟棗獼猴桃外植體褐化[20]。

3 展望

隨著軟棗獼猴桃栽培產(chǎn)業(yè)化的逐步興起和引種工作的進行，對良種苗的需求急劇增加。其是雌雄異株植物，倍性復(fù)雜，雜交上存在困難，可能獲得未成熟的種子。同時種子繁殖周期長，給育種造成一定的瓶頸。因而研究軟棗獼猴桃組織培養(yǎng)技術(shù)是十分有必要的，其是生理生化和遺傳研究必需的基礎(chǔ)技術(shù)，有望成為軟棗獼猴桃良種繁育的重要途徑。目前軟棗獼猴桃組織快繁技術(shù)研究主要集中在莖段培養(yǎng)、愈傷組織誘導(dǎo)分化、再生苗增殖及誘導(dǎo)生根方面，有關(guān)原生質(zhì)體培養(yǎng)及愈傷組織代謝物質(zhì)分析方面的研究較少。軟棗獼猴桃不光是一種果樹，其還具有很高的藥用價值，如果能夠通過組織培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)有效的藥用物質(zhì)，將大大的減少藥物開發(fā)的時間。因此對其組織培養(yǎng)技術(shù)繼續(xù)研究仍有必要，具有極大的研究前景。