UPLC-Q-TOF-MS聯(lián)用研究不同廠(chǎng)家前列癃閉通片指紋圖譜

崔 璐，褚 征，康廷國(guó)，趙慶春，康 燁*

UPLC-Q-TOF-MS聯(lián)用研究不同廠(chǎng)家前列癃閉通片指紋圖譜

崔 璐1，褚 征1，康廷國(guó)2，趙慶春1，康 燁1*

1. 北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院，遼寧 沈陽(yáng) 110023 2. 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 大連 116600

通過(guò)建立前列癃閉通片（Qianlielong Bitong Tablets，QBT）的UPLC指紋圖譜，考察了9個(gè)廠(chǎng)家58批次QBT的質(zhì)量，為完善該制劑的質(zhì)量控制奠定基礎(chǔ)。采用UPLC法，色譜柱Eclipse Plus C18RRHD（50 mm×2.1 mm，1.8 μm）；流動(dòng)相為乙腈-0.1%甲酸水溶液，梯度洗脫，采用全時(shí)段多波長(zhǎng)融合技術(shù)，體積流量0.3 mL/min；柱溫30 ℃。建立QBT的指紋圖譜，并對(duì)各樣品的指紋圖譜進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)，結(jié)合聚類(lèi)分析評(píng)價(jià)58批樣品的質(zhì)量，指認(rèn)了指紋圖譜中主要共有峰的化學(xué)成分并確定了其藥材歸屬。首次建立QBT的UPLC指紋圖譜，對(duì)其中16個(gè)共有峰進(jìn)行了化學(xué)成分鑒定，分別是辛弗林（1號(hào)峰）、虎杖苷（2號(hào)峰）、金絲桃苷（3號(hào)峰）、新圣草苷（4號(hào)峰）、柚皮苷（5號(hào)峰）、橙皮苷（6號(hào)峰）、新橙皮苷（7號(hào)峰）、枸橘苷（8號(hào)峰）、朝藿定A（9號(hào)峰）、朝藿定B（10號(hào)峰）、朝藿定C（11號(hào)峰）、淫羊藿苷（12號(hào)峰）、芒柄花素（13號(hào)峰）、寶藿苷（14號(hào)峰）、大黃素（15號(hào)峰）、大黃素甲醚（16號(hào)峰），確定了16個(gè)特征峰來(lái)源于方中4味中藥，峰1、4～8歸屬枳殼藥材，峰2、3、15、16歸屬虎杖藥材，峰9～12、14歸屬淫羊藿藥材，峰13歸屬黃芪藥材。對(duì)9個(gè)生產(chǎn)企業(yè)58批次樣品進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)，相似度分布在0.600～0.912，通過(guò)聚類(lèi)分析大致可聚為4類(lèi)。建立QBT的指紋圖譜，該方法簡(jiǎn)便、可靠，為進(jìn)一步評(píng)價(jià)和監(jiān)測(cè)QBT的質(zhì)量提供參考。

UPLC-Q-TOF-MS；前列癃閉通片；質(zhì)量評(píng)價(jià)；指紋圖譜；相似度；聚類(lèi)分析；全時(shí)段多波長(zhǎng)融合技術(shù)；辛弗林；虎杖苷；金絲桃苷；新圣草苷；柚皮苷；橙皮苷；枸橘苷；朝藿定；淫羊藿苷；芒柄花素；寶藿苷；大黃素；枳殼；虎杖；淫羊藿；黃芪

前列癃閉通片（Qianlielong Bitong Tablets，QBT）收載于《國(guó)家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編》內(nèi)科腎系分冊(cè)，是在復(fù)方前列癃閉膠囊的基礎(chǔ)上改劑型而成的現(xiàn)代中藥制劑。本方以黃芪為君藥，桂枝、土鱉蟲(chóng)、冬葵果、桃仁、淫羊藿為臣藥，柴胡、茯苓、枳殼、虎杖、川牛膝為佐藥，共11味藥材經(jīng)水煎煮、濃縮等工藝精制而成，具有益氣溫陽(yáng)、活血利水的功效，臨床用于治療腎虛血瘀所致的癃閉，癥見(jiàn)尿頻、排尿延緩、費(fèi)力、尿后余瀝、腰膝酸軟，亦可用于具有上述癥候的慢性前列腺炎[1-2]和良性前列腺增生[3-4]的患者。

目前全國(guó)有11家生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)QBT，生產(chǎn)企業(yè)較多且無(wú)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，雖各生產(chǎn)企業(yè)的處方以及生產(chǎn)工藝相同，但是各生產(chǎn)企業(yè)的藥品質(zhì)量有較大差別，可能是受到原料藥來(lái)源、生產(chǎn)工藝參數(shù)等眾多因素影響。為了評(píng)價(jià)該藥質(zhì)量的一致性，并最大限度地表征QBT的特征成分，本實(shí)驗(yàn)以抽檢的9個(gè)生產(chǎn)企業(yè)共58批不同批號(hào)的QBT為對(duì)象，首次建立其UPLC指紋圖譜，并對(duì)指紋圖譜中的主要特征峰進(jìn)行化學(xué)成分的指認(rèn)，以及組方中藥來(lái)源的初步確定。通過(guò)計(jì)算相似度和聚類(lèi)分析，對(duì)各生產(chǎn)企業(yè)各批次樣品進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，為完善QBT的質(zhì)量控制奠定基礎(chǔ)，保證該藥的臨床療效。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Agilent 1290超高效液相色譜儀、二極管陣列檢測(cè)器（DAD）、Agilent 6550精確質(zhì)量四極桿飛行時(shí)間（Q-TOF）LC/MS系統(tǒng)，美國(guó)安捷倫公司；HS6150型超聲波清洗器，天津恒奧科技發(fā)展有限公司；Milli-Q超純水處理裝置，美國(guó)Millipore公司；Sartorius CP225D型電子分析天平，北京賽多利斯天平有限公司；SHZ-DⅢ型循環(huán)水式真空泵，鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司。

1.2 試藥與試劑

對(duì)照品辛弗林（批號(hào)110727-201107）、虎杖苷（批號(hào)111575-200502）、金絲桃苷（批號(hào)111521-201406）、柚皮苷（批號(hào)110722-201312）、橙皮苷（批號(hào)110721-201316）、新橙皮苷（批號(hào)111857-201102）、朝藿定C（批號(hào)111780-201302）、淫羊藿苷（批號(hào)110737-200415）、芒柄花素（批號(hào)111703-200603）、寶藿苷（批號(hào)111852-201102）、大黃素（批號(hào)110756-200110）、大黃素甲醚（批號(hào)110758-201013）均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院，質(zhì)量分?jǐn)?shù)均≥98%；對(duì)照品朝藿定A（批號(hào)GZDD-0477）、朝藿定B（批號(hào)GZDD-0478）均購(gòu)自貴州迪大生物科技有限責(zé)任公司，質(zhì)量分?jǐn)?shù)均≥98%；對(duì)照品新圣草苷（批號(hào)A0032）購(gòu)于成都曼斯特生物有限公司，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%；對(duì)照品枸橘苷（批號(hào)p114052）購(gòu)于A(yíng)laddin-阿拉丁試劑（上海）有限公司，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%。

藥材黃芪為豆科黃芪屬植物蒙古黃芪(Fisch.) Bge. var.(Bge.) Hsiao的干燥根（批號(hào)120974-201311）、虎杖為蓼科虎杖屬植物虎杖Sieb. et Zucc.的干燥根莖和根（批號(hào)120980-201005）、桃仁為薔薇科桃屬植物桃(L.) Batsch的干燥成熟種子（批號(hào)120953-201106）、川牛膝為莧科杯莧屬植物川牛膝Kuan的干燥根（批號(hào)121065-201105）、枳殼為蕓香科植物酸橙L.的干燥未成熟果實(shí)（批號(hào)120981-201104）、桂枝為樟科樟屬植物肉桂Presl的干燥嫩枝（批號(hào)121191- 201304）、茯苓為多孔菌科茯苓屬真菌茯苓(Schw.) Wolf的干燥菌核（批號(hào)121117- 201308）、柴胡為傘形科柴胡屬植物柴胡DC.的干燥根（批號(hào)120992-201108）、淫羊藿為小檗科淫羊藿屬植物淫羊藿Maxim.的干燥葉（批號(hào)121632-201101）、土鱉蟲(chóng)為鱉蠊科昆蟲(chóng)地鱉Walker的雌蟲(chóng)干燥體（批號(hào)121533-200702），均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；冬葵果采摘于本溪懷仁縣，為錦葵科甜菜屬植物冬葵L. 的干燥成熟果實(shí)；以上藥材均由遼寧省檢驗(yàn)檢測(cè)認(rèn)證中心中藥室王維寧主任中藥師鑒定。

供試品覆蓋全國(guó)26個(gè)省共9個(gè)生產(chǎn)企業(yè)的58批QBT，分別是吉林百琦藥業(yè)有限公司（BQ）、長(zhǎng)春新安藥業(yè)有限公司（CC）、吉林吉爾吉藥業(yè)有限公司（JEJ）、沈陽(yáng)神龍藥業(yè)有限公司（SL）、陜西華西制藥有限公司（SX）、武漢健民藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司（WH）、江蘇萬(wàn)高藥業(yè)有限公司（WG）、藥圣堂（湖南）制藥有限公司（YST）、江蘇頤海藥業(yè)有限公司（YH），見(jiàn)表1。

表1 QBT樣品的信息

乙腈，質(zhì)譜級(jí)，德國(guó)默克集團(tuán)；甲醇，色譜級(jí)，F(xiàn)isher公司；甲酸，質(zhì)譜級(jí)，賽默飛世爾公司；娃哈哈純凈水，杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液制備

2.1.1 供試品溶液的制備 取QBT 20片，除去薄膜衣，稱(chēng)定質(zhì)量，研細(xì)，取0.5 g，精密稱(chēng)定，精密加入50%甲醇溶液25 mL，稱(chēng)定質(zhì)量，超聲處理（功率300 W、頻率50 kHz）45 min，放冷，再稱(chēng)定質(zhì)量，用50%甲醇溶液補(bǔ)足減失的質(zhì)量，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備 取辛弗林、金絲桃苷、虎杖苷、新圣草苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、枸橘苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、芒柄花素、寶藿苷、大黃素、大黃素甲醚對(duì)照品適量，加50%甲醇溶液1 mL，超聲10 min，濾過(guò)，即得混合對(duì)照品溶液。

2.1.3 各藥材供試溶液的制備 取黃芪、土鱉蟲(chóng)、冬葵果、虎杖、枳殼、柴胡、川牛膝、桂枝、淫羊藿、桃仁、茯苓藥材粉末，分別按照其在處方中的投料量折算后取樣，按“2.1.1”項(xiàng)下方法制備，作為各原料藥材對(duì)照溶液。

2.2 UPLC色譜條件

色譜柱為Eclipse Plus C18RRHD（50 mm×2.1 mm，1.8 μm）；流動(dòng)相為乙腈-0.1%甲酸水溶液，梯度洗脫：0～5 min，2%乙腈；5～9 min，2%～10%乙腈；9～12 min，10%～15%乙腈；12～19 min，15%乙腈；19～30 min，15%～26%乙腈；30～36 min，26%～36%乙腈；36～43 min，36%～50%乙腈；43～48 min，50%～80%乙腈；48～49 min，80%～95%乙腈；49～51 min，95%乙腈；檢測(cè)波長(zhǎng)248、270、283、290、306 nm，體積流量0.3 mL/min；柱溫30 ℃；進(jìn)樣量3.5 μL。理論板數(shù)按淫羊藿苷色譜峰計(jì)算應(yīng)不低于1500。

2.3 MS分析條件

2.3.1 一級(jí)質(zhì)譜條件 電噴霧離子源，采用正離子模式檢測(cè)，干燥氣體體積流量為11 L/min，干燥氣體溫度為250 ℃，毛細(xì)管電壓為4000 V，霧化器壓力為0.30 MPa，碎裂電壓為365 V，質(zhì)量掃描范圍為/100～1500。

2.3.2 二級(jí)質(zhì)譜條件 電噴霧離子源，正離子模式檢測(cè)，干燥氣體氣溫為325 ℃，干燥氣體體積流量為6 L/min，霧化器壓力0.30 MPa，鞘氣氣體溫度400 ℃，鞘氣氣體體積流量為12 L/min，毛細(xì)管電壓4000 V，Q-TOF碎裂電壓365 V，質(zhì)量掃描范圍/50～2500。

2.4 全時(shí)段多波長(zhǎng)指紋圖譜融合方法

采用DAD二極管陣列檢測(cè)器對(duì)QBT在200～400 nm對(duì)混合對(duì)照品進(jìn)行掃描，選擇能夠滿(mǎn)足所有活性成分的峰面積最大值，經(jīng)過(guò)掃描得到波長(zhǎng)確定為248、270、283、290、306 nm。根據(jù)文獻(xiàn)采用全時(shí)段多波長(zhǎng)融合技術(shù)[5]，分別從Agilent 1290色譜工作站中導(dǎo)出248、270、283、290、306 nm的dif格式數(shù)據(jù)文件，使用Matlab軟件編程，對(duì)dif格式數(shù)據(jù)進(jìn)行全時(shí)段多波長(zhǎng)融合，得到同時(shí)反映5個(gè)波長(zhǎng)信息的色譜圖。

2.5 指紋圖譜方法學(xué)考察

根據(jù)上述“2.2”項(xiàng)下方法對(duì)9個(gè)生產(chǎn)企業(yè)58批次QBT進(jìn)行測(cè)定，并對(duì)其精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性進(jìn)行考察。以相對(duì)獨(dú)立的12號(hào)峰（淫羊藿苷）作為參比峰，對(duì)其他峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積進(jìn)行計(jì)算。

2.5.1 精密度考察 取BQ-D樣品按照“2.1.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定并記錄色譜圖，以12號(hào)峰為參照峰，該峰為所有樣品共有且峰面積較大、分離較好，考察各主要色譜峰與參比峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的一致性，計(jì)算相應(yīng)RSD值，各色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間的RSD＜1.0%，相對(duì)峰面積的RSD＜3.0%，表明儀器精密度良好。

2.5.2 穩(wěn)定性考察 取BQ-D供試品溶液，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件，分別在供試品溶液制備后的0、2、4、6、12、24 h重復(fù)進(jìn)樣6次，結(jié)果各共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD在0.03%～0.67%，相對(duì)峰面積的RSD在0.29%～3.33%，說(shuō)明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5.3 重復(fù)性考察 按“2.1.1”項(xiàng)下方法制備6份BQ-D供試品溶液，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果各共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD在0.30%～2.30%，相對(duì)峰面積的RSD在0.30%～2.81%，說(shuō)明方法重復(fù)性良好。

2.6 指紋圖譜的建立及相似度的計(jì)算

將58批QBT樣品按照“2.1.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果16個(gè)峰為QBT的共有峰，且這些峰的峰面積總和占總峰面積的90%以上。對(duì)所得出的58批樣品指紋圖譜數(shù)據(jù)導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)2012A版”進(jìn)行分析，9個(gè)生產(chǎn)企業(yè)樣品的指紋圖譜以BQ-D樣品圖譜作為相似度計(jì)算校正的參照譜，采用中位數(shù)法生成對(duì)照?qǐng)D譜（R），各廠(chǎng)家部分代表性批次樣品的指紋圖譜見(jiàn)圖1，計(jì)算各廠(chǎng)家各批次與對(duì)照指紋圖譜的相似度，結(jié)果見(jiàn)表2。

圖1 58批次QBT UPLC指紋圖譜

表2 各樣品UPLC指紋圖譜的相似度

2.7 QBT共有峰確認(rèn)和歸屬

2.7.1 指紋圖譜藥材歸屬分析 根據(jù)QBT的生產(chǎn)工藝，將處方中的11味藥材均經(jīng)水煎，濃縮。再分別根據(jù)“2.1.3”項(xiàng)各藥材對(duì)照品溶液制備方法制備，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。根據(jù)紫外光譜信息，對(duì)全方與藥材指紋圖譜中的相關(guān)峰進(jìn)行歸屬，確認(rèn)峰1、4～8歸屬枳殼藥材，峰2、3、15、16歸屬虎杖藥材，峰9～12、14歸屬淫羊藿藥材，峰13歸屬黃芪藥材（圖2）。其余原料藥材的色譜圖在此檢測(cè)條件下信息量較少，有待進(jìn)一步研究。

2.7.2 對(duì)照品法指認(rèn)各共有峰 取“2.1.2”混合對(duì)照品進(jìn)樣，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)圖2。通過(guò)與樣品色譜圖比較對(duì)照品的保留時(shí)間并掃描對(duì)比其紫外吸收光譜，從而初步猜測(cè)1號(hào)峰為辛弗林，2號(hào)峰為虎杖苷，3號(hào)峰為金絲桃苷，4號(hào)峰為新圣草苷，5號(hào)峰為柚皮苷，6號(hào)峰為橙皮苷，7號(hào)峰為新橙皮苷，8號(hào)峰枸橘苷，9號(hào)峰為朝藿定A，10號(hào)峰為朝藿定B，11號(hào)峰為朝藿定C，12號(hào)峰為淫羊藿苷，13號(hào)峰為芒柄花素，14號(hào)峰為寶藿苷I，15號(hào)峰為大黃素，16號(hào)峰為大黃素甲醚。

1-辛弗林 2-虎杖苷 3-金絲桃苷 4-新圣草苷 5-柚皮苷 6-橙皮苷 7-新橙皮苷 8-枸橘苷 9-朝藿定A 10-朝藿定B 11-朝藿定C 12-淫羊藿苷 13-芒柄花素 14-寶藿苷I 15-大黃素 16-大黃素甲醚

2.7.3 UPLC-Q-TOF-MS指認(rèn)各色譜峰 為進(jìn)一步闡明QBT指紋圖譜表征的化學(xué)成分，采用UPLC-Q- TOF-MS技術(shù)對(duì)色譜峰進(jìn)行確認(rèn)。由于QBT的處方藥味多，化學(xué)成分差別較大，故同時(shí)采用正、負(fù)離子模式進(jìn)行掃描見(jiàn)圖3，從圖3中可以看出負(fù)離子流圖離子峰較少，正離子流圖都能涵蓋，所以最終采用正離子模式。通過(guò)質(zhì)譜中分子離子峰和碎片離子峰的信息，結(jié)合紫外吸收光譜特征，與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道以及對(duì)照品進(jìn)行對(duì)照，鑒定了QBT指紋圖譜中16個(gè)色譜峰，結(jié)果見(jiàn)表3。

圖3 QBT樣品的總離子流圖

表3 QBT的UPLC-MS分析結(jié)果

2.8 樣品數(shù)據(jù)聚類(lèi)分析

將各生產(chǎn)企業(yè)QBT樣品指紋圖譜的16個(gè)共有峰相對(duì)于參照峰12號(hào)，采用SPSS 19.0軟件對(duì)所有QBT樣品進(jìn)行系統(tǒng)聚類(lèi)分析。采用組間連接法，利用平方Euclidean距離（squared Euclidean distance）為測(cè)度，計(jì)算不同樣品間相似程度，結(jié)果見(jiàn)圖4。

圖4 QBT的聚類(lèi)分析圖

聚類(lèi)分析將不同廠(chǎng)家的樣品大致分為4類(lèi)：一類(lèi)包括生產(chǎn)企業(yè)為BQ、SL、SX、YST的樣品，其相似度較高，一般大于0.8；二類(lèi)包括生產(chǎn)企業(yè)WG、WH、CC、YH的樣品，該類(lèi)相似度相對(duì)較低在0.6～0.7；三類(lèi)包括生產(chǎn)企業(yè)JEJ、CC的樣品，該類(lèi)樣品相似度不高且較分散，質(zhì)量差異性較大；四類(lèi)包括生產(chǎn)企業(yè)有WH、WG、SL、BQ、SX的個(gè)別的樣品，該類(lèi)為個(gè)別生產(chǎn)企業(yè)相似度較低的分為這一組。WG、WH、CC的各批次樣品較分散，表明這些企業(yè)的生產(chǎn)工藝不是十分穩(wěn)定。同廠(chǎng)家的樣品基本聚在同一類(lèi)中，也有個(gè)別的生產(chǎn)企業(yè)分為幾類(lèi)，分類(lèi)基本與不同的生產(chǎn)批號(hào)一致。聚類(lèi)分析得到的樣品之間的相關(guān)性，與相似度計(jì)算得到的樣品之間的相關(guān)性，結(jié)果較一致。聚類(lèi)分析更能直觀(guān)地看出各生產(chǎn)企業(yè)之間的區(qū)別。

3 討論

3.1 實(shí)驗(yàn)條件的選擇

本實(shí)驗(yàn)比較了回流和超聲2種提取方法；提取溶劑考察了50%乙醇、乙醇、50%甲醇、70%甲醇、甲醇5種提取溶劑；溶劑用量考察了25、50 mL；以及超聲時(shí)間15、30、45、60 min進(jìn)行了考察，結(jié)果表明采用25 mL 50%甲醇超聲處理45 min即可完全提取。分別考察了甲醇-水系統(tǒng)，乙腈-水系統(tǒng)，乙腈-0.1%甲酸水，乙腈-0.5%甲酸水4個(gè)溶液系統(tǒng)，最終選擇乙腈-0.1%甲酸水系統(tǒng)。指紋圖譜的檢測(cè)波長(zhǎng)選用248、270、283、290、306 nm 5個(gè)波長(zhǎng)進(jìn)行全時(shí)段融合。

3.2 相似度及聚類(lèi)分析

對(duì)所測(cè)9個(gè)生產(chǎn)企業(yè)樣品的UPLC指紋圖譜進(jìn)行比較，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，指紋圖譜相似度結(jié)果與聚類(lèi)分析的結(jié)果基本一致。BQ、SL、SX、YST 4個(gè)生產(chǎn)企業(yè)樣品相似度較高，質(zhì)量一致性較好；WG、WH、CC 3個(gè)生產(chǎn)企業(yè)樣品指紋圖譜的相似度較分散，主要考慮與樣品的生產(chǎn)工藝參數(shù)不穩(wěn)定或原料藥材的質(zhì)量穩(wěn)定性相關(guān)，導(dǎo)致生產(chǎn)批號(hào)較遠(yuǎn)的樣品質(zhì)量差異明顯。而另有JEJ、YH生產(chǎn)企業(yè)樣品指紋圖譜的相似度低也有分散，與其他廠(chǎng)家的樣品指紋圖譜比較發(fā)現(xiàn)，其色譜圖中來(lái)源于枳殼中的柚皮苷和新橙皮苷的含量較低。

3.3 化學(xué)成分指認(rèn)分析

本實(shí)驗(yàn)采用UPLC-Q-TOF-MS技術(shù)對(duì)QBT進(jìn)行定性的分析。通過(guò)對(duì)一級(jí)、二級(jí)質(zhì)譜中分子離子峰和碎片離子峰的信息進(jìn)行分析，結(jié)合紫外吸收光譜特征，并與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[6-11]以及對(duì)照品進(jìn)行對(duì)照，鑒定出了QBT指紋圖譜中16個(gè)色譜峰。如總離子流色譜圖中的6號(hào)峰橙皮苷（R＝19.039 min）和7號(hào)峰新橙皮苷（R＝21.182 min）在正離子模式下顯示出相同的準(zhǔn)分子離子峰/633.2 [M＋Na]+峰，二級(jí)質(zhì)譜均產(chǎn)生/487.1離子，應(yīng)該為黃酮類(lèi)苷元[Y1＋Na]+碎片離子峰，/331.1離子，應(yīng)該為[B2＋Na]+碎片離子峰，但是7號(hào)峰新橙皮苷還存在/179.1離子，應(yīng)該為[A0＋H2＋H]+碎片離子峰，通過(guò)結(jié)合對(duì)照品對(duì)比以及查閱相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[9]，故確認(rèn)6號(hào)峰為橙皮苷，7號(hào)峰為新橙皮苷。用類(lèi)似方法其余14個(gè)色譜峰經(jīng)UPLC-Q-TOF-MS分析均與對(duì)照品的質(zhì)譜裂解規(guī)律一致，并且化學(xué)物質(zhì)組主要包含4類(lèi)有效組分，分別為①黃酮類(lèi)化合物：1、4～14號(hào)峰依次為辛弗林、新圣草苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、枸橘苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、芒柄花素、寶藿苷；②二苯乙烯化合物：2號(hào)峰虎杖苷；③黃酮醇苷類(lèi)：3號(hào)峰金絲桃苷；④蒽醌類(lèi)化合物：15號(hào)峰大黃素和16號(hào)峰大黃素甲醚。QBT的有效成分以黃酮類(lèi)化合物為主要成分。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)以QBT為研究對(duì)象，首次建立其UPLC指紋圖譜，指認(rèn)了其中16個(gè)峰的化學(xué)成分，并確定了這16個(gè)化學(xué)成分的歸屬藥材。將建立的指紋圖譜應(yīng)用于9個(gè)生產(chǎn)廠(chǎng)家58批次樣品的質(zhì)量評(píng)價(jià)，通過(guò)相似度計(jì)算，發(fā)現(xiàn)不同廠(chǎng)家QBT的質(zhì)量差異較大，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)的質(zhì)量控制內(nèi)容難以保證臨床療效穩(wěn)定，而UPLC指紋圖譜[12-15]更全面表征不同廠(chǎng)家藥品的質(zhì)量信息，較常規(guī)檢驗(yàn)和單個(gè)成分定量測(cè)定，更能全面反映該制劑質(zhì)量的一致性和穩(wěn)定性[16-18]，對(duì)QBT的質(zhì)量比較與評(píng)價(jià)有更積極的意義，為保證臨床用藥的安全性、有效性和穩(wěn)定性提供了方法和依據(jù)。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Fingerprint of Qianlie Longbitong Tablets from different manufacturers by UPLC-Q-TOF-MS

CUI Lu1, CHU Zheng1, KANG Ting-guo2, ZHAO Qing-chun1, KANG Ye1

1. General Hospital of Northern Theater Command, Shenyang 110032, China 2. Liaoning University of Traditional Chinese Medicine, Dalian 116600, China

To establish an UPLC fingerprint of Qianlielong Bitong Tablets (前列癃閉通片, QBT) for quality evaluation of 58 batches of QBT from nine different manufacturers, so as to support the foundation of quality control system of the tablets.The method was performed by UPLC with Eclipse Plus C18RRHD (50 mm × 2.1 mm, 1.8 μm) column; acetonitrile-0.1% formic acid aqueous as the mobile phase for gradient elution, with the all-time multi-wavelength fusion. The flow rate was 0.3 mL/min, column temperature was 30℃. The HPLC fingerprint was established and evaluated by the similarity evaluation system of QBT, the quality of 58 batches of samples was evaluated by cluster analysis. The chemical constituents of the main common peaks were identified in the fingerprint and attributed to raw materials.The UPLC fingerprint of QBT was developed firstly, the chemical constituents of 16 common peaks were identified, including synephrine (peak 1), polydatin (peak 2), hyperoside (peak 3), neoeriocitrin (peak 4), naringin (peak 5), hesperidin (peak 6), neohesperidin (peak 7), poncirin (peak 8), epimedin A (peak 9), epimedin B (peak 10), epimedin C (peak 11), icariin (peak 12), formononetin (peak 13), baohuoside (peak 14), emodin (peak 15), physcion (peak 16), and the 16 characteristic peaks were determined from four traditional Chinese medicines. The peaks 1, 4—8 were attributed to Zhiqiao (), the peaks 2, 3, 15, 16to Huzhang (et), the peaks 9—12, 14to Yinyanghuo (), the peak 13to Huangqi (). The analyzed samples were geographically classified into four classes with the similarities between 0.600—0.912.The fingerprint of QBT was developed, the method is simple and reliable. It provides reference for further evaluation and monitoring the quality of QBT.

UPLC-Q-TOF-MS; Qianlielong Bitong Tablets; quality evaluation; fingerprint; similarity; cluster analysis; all-time multi-wavelength fusion; synephrine; polydatin; hyperoside; neoeriocitrin; naringin; hesperidin; poncirin; epimedin; icariin; formononetin; baohuoside; emodin;;et;;

R286.02

A

0253 - 2670(2021)24- 7493 - 08

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.24.011

2021-06-28

崔 璐，女，碩士，主管中藥師，研究方向中藥鑒定與品質(zhì)評(píng)價(jià)。E-mail: 1031706465@qq.com

康 燁，女，碩士，主管藥師，研究方向臨床藥理。E-mail: liushixun0822@163.com

[責(zé)任編輯 鄭禮勝]